肾衰方及其拆方对UUO模型大鼠周细胞中PDGF/PDGFR-β信号通路表达的影响

目的通过观察中药复方肾衰方及其拆方对周细胞中PDGF/PDGFR-β信号通路的表达影响,阐述肾衰方抗肾间质纤维化的机理。方法将108只SD雌性大鼠随机分为:假手术组、模型组(UUO模型)、肾衰方组、袪邪方组、补虚方组、贝那普利组,每组18只,各组大鼠分别于术后第7、14、21天给药2h后各处死6只。检测大鼠肾功能;取肾脏组织行HE、Masson染色,并测定大鼠术侧肾脏肾小管损伤程度评分及肾小管间质纤维化指数;Western blot、RT-PCR法测定肾脏组织中α-SMA、PDGF、PDGFR-β的表达情况。结果同时期模型组与假手术组相比,模型组大鼠血尿素氮、血清肌酐均比模型组升高(P0.05);同时期各治疗组与模型组相比,各治疗组大鼠血尿素氮、血清肌酐均较模型组下降,且以肾衰方组下降更明显(P0.05)。通过HE、Masson染色,从不同时间段观察各组大鼠肾脏病理组织的变化,发现术后7d多以炎症和坏死病变为主,术后14d多以纤维化和炎症病变为主,21d纤维化程度更加明显,模型组病理表现最为明显。经Western blot法测定发现,各治疗组的α-SMA、PDGF、PDGFR-β蛋白阳性表达均低于同时期模型组,以肾衰方组降低更明显(P均0.05);RT-PCR法检测结果显示,模型组及各治疗组大鼠α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达量均高于假手术组(P均0.05),各治疗组α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达较同时期的模型组降低明显(P均0.05),以肾衰方组降低更明显。结论中药复方肾衰方可通过调节周细胞上PDGF/PDGFR-β信号通路的传导,同时下调α-SMA蛋白的表达,达到抗肾间质纤维化的作用。     

苦楂合剂对大鼠梗阻性肾间质纤维化的保护作用

目的:探讨中药复方苦楂合剂对梗阻性大鼠肾间质纤维化的影响。方法:40只雄性SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,洛汀新组,中药复方大剂量组和中药复方小剂量组。以单侧输尿管结扎术建立输尿管梗阻的动物模型。术后第14d取术侧肾组织做HE、Masson染色及TGF-1β、-αSMA和Ⅲ型胶原蛋白免疫组化检测并运用图像分析系统作半定量分析。结果:苦楂合剂可以显著改善梗阻侧肾组织病理变化,下调TGF-1β表达,减少-αSMA及Ⅲ型胶原沉积。结论:苦楂合剂对梗阻性大鼠肾间质纤维化具有保护作用。     

健脾补肾、和解泄浊法抑制肾间质纤维化的实验研究

目的 观察补肾排毒合剂对单侧输尿管梗阻（UUO）后大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）表达的影响及对肾间质纤维化的保护作用。方法 采用UUO诱导肾间质纤维化的动物模型，将48只Wistar大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（UUO）和补肾排毒合剂治疗组（REM），每组分别于造模后3、10、20、30d各处死4只，取左肾组织行HE染色，动态观察肾脏病理学变化，评定各组肾小管间质损害程度，以免疫组化方法测定肾组织中α—SMA、Col Ⅳ。结果 与UUO组比较，REM组大鼠肾间质病变程度明显减轻，α-SMA、Col Ⅳ在肾间质中的表达也有明显降低。结论 补肾排毒合剂可通过降低α—SMA、Col Ⅳ的表达，减少肾间质细胞外基质合成，延缓肾间质纤维化的进展。     

加味溺毒清合剂对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨加味溺毒清合剂治疗单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的机制。方法 SD雄性大鼠50只,除假手术组10只外,其余大鼠建立单侧输尿管结扎模型。造模后大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组10只。分别采取相应的干预措施。检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG酶)、尿β_2微球蛋白(β_2-MG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)及肾组织中的转化生长因子β_1(TGF-β_1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并检查肾脏病理。结果 (1)尿β_2-MG含量:各组比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)尿NAG酶含量:14 d、28 d时模型组、中药低剂量组、中药高剂量组与假手术组比较均增高,差异有统计学意义(P0.05);28 d时中药高剂量组与模型组比较明显减低,差异有统计学意义(P0.05)。(3)血Scr水平:15 d时中药高剂量组与模型组、厄贝沙坦组比较降低并差异有统计学意义(P0.05);29 d时,中药高剂量组与模型组比较,血Scr含量降低,差异有统计学意义(P0.05);(4)血BUN水平:中药高剂量组与厄贝沙坦组比较,血BUN含量降低,差异有统计学意义(P0.05)。29 d时,各组血BUN含量差异均无统计学意义(P0.05)。(5)肾组织α-SMA、TGF-β_1表达:与假手术组比较,厄贝沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组、模型组差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,厄贝沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组差异均有统计学意义(P0.05)。结论加味溺毒清合剂能够降低尿NAG酶,同时通过抑制肾组织中α-SMA及TGF-β_1表达,从而减轻肾间质纤维化的程度。     

肾衰Ⅱ号方对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织NF-κB/TNF-α信号通路表达的影响

目的观察肾衰Ⅱ号方对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织NF-κB/TNF-α信号通路表达的影响,探讨其改善慢性肾功能衰竭微炎症状态、延缓慢性肾脏病进展的作用机制。方法采用5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除法制作慢性肾功能衰竭动物模型。实验大鼠随机分为模型组、西药对照组、肾衰Ⅱ号方组,每组14只,另设假手术组14只,各给药组给予相应药物。测定大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、内生肌酐清除率(CCr),采用Western blot测定磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)p65、NF-κB p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达,RT-PCR测定TNF-αm RNA表达。结果与假手术组比较,模型组SCr、BUN水平明显升高,CCr明显降低(P0.01),左肾质量/体质量明显增加(P0.05),肾脏皮质、髓质p-NF-κB p65、NF-κB p65及TNF-α表达均明显升高(P0.01);与模型组比较,肾衰Ⅱ号方组、西药对照组SCr、BUN水平明显降低(P0.05,P0.01),CCr明显升高(P0.01),左肾质量/体质量明显降低(P0.05),肾衰Ⅱ号方组在改善肾功能方面优于西药对照组(P0.05);肾衰Ⅱ号方组、西药对照组肾脏皮质、髓质p-NF-κB p65、NF-κB p65及TNF-α表达均明显降低(P0.01),肾衰Ⅱ号方组下调NF-κB/TNF-α信号通路表达作用优于西药对照组(P0.01)。结论肾衰Ⅱ号方可能通过下调NF-κB/TNF-α信号通路的表达,改善慢性肾功能衰竭微炎症状态,减轻肾间质纤维化,达到延缓肾功能减退的作用。     

肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响

目的观察肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法体内实验以5/6(A/I)手术构建慢性肾衰竭大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,进行相应干预8周后,取肾组织行PAS染色观察肾脏病理变化,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达,免疫组化检测α-SMA、己糖激酶(HK)2蛋白定位,紫外法检测肾组织HK活性,比色法检测肾组织乳酸、丙酮酸浓度;体外实验以白细胞介素(IL)-1β刺激大鼠肾成纤维细胞NRK-49F构建NRK-49F增殖活化模型,细胞分为空白组、IL-1β组、IL-1β+肾衰Ⅱ号方低剂量组(200μg/mL)、IL-1β+肾衰Ⅱ号方高剂量组(400μg/mL)、IL-1β+2-脱氧-D-葡萄糖组(10 mmol/L),Western blot检测NRK-49F细胞α-SMA、增殖细胞核抗原(PCNA)、纤维连接蛋白(FN)、HK2蛋白表达,比色法检测细胞培养基乳酸浓度,葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基葡萄糖浓度,免疫荧光检测HK2蛋白表达。结果体内实验:与假手术组比较,模型组PAS染色提示肾间质糖原含量增加,肾小球、肾小管形态异常;α-SMA蛋白表达明显升高(P0.01),肾组织乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显升高(P0.01)。与模型组比较,中药组和西药组肾组织病理变化改善,α-SMA蛋白表达、乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显降低(P0.05,P0.01)。体外实验:与空白组比较,IL-1β组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);细胞培养基p H值、葡萄糖浓度明显降低(P0.05),乳酸浓度明显升高(P0.01);与IL-1β组比较,各干预组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01);细胞培养基p H值、葡萄糖浓度升高(P0.05,P0.01),乳酸浓度明显降低(P0.01)。结论肾衰Ⅱ号方可通过抑制NRK-49F细胞有氧糖酵解反应,从而阻止成纤维细胞增殖活化,实现其抗肾间质纤维化的作用。     

肾衰Ⅱ号方对5/6肾切除大鼠肾组织形态及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察肾衰Ⅱ号方对5/6(A/I)肾切除慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠残肾组织病理形态及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法制备5/6(A/I)肾切除CRF大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、西药组和中药组,各给药组给予相应药物。给药60 d后,测定大鼠血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血红蛋白(Hb)、内生肌酐清除率(Ccr),观察残肾组织病理形态,免疫组化检测残肾组织TNF-α的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠SCr和BUN水平显著降低、Hb和Ccr显著升高(P0.05,P0.01),各给药组大鼠残肾组织病理改变均有改善,各给药组大鼠TNF-α水平显著降低(P0.01),且中药组均优于西药组。结论肾衰Ⅱ号方可改善CRF大鼠肾功能及肾组织病理改变,其抗肾间质纤维化机制可能与其改善肾组织缺血缺氧、调节TNF-α的表达有关。     

益肾保真方对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化干预作用的实验研究

目的探讨益肾保真方对慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾纤维化的干预作用及其机制。方法采用两步分肾切除法复制5／6肾切除大鼠慢性。肾衰竭模型,随机分为假手术组、模型组、益。肾保真方高剂量组、益肾保真方低剂量组及尿毒清组。各组均干预6周,观察大鼠的血肌酐、尿素氮、尿蛋白定量及肾组织病理变化情况,检测肾小球硬化指数、肾组织Ⅳ型胶原含量及结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果与模型组比较,益肾保真方组尿蛋白、血肌酐、尿素氮、肾组织IV型胶原含量均显著降低,与尿毒清组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;与模型组比较,益肾保真方组大鼠肾小球硬化指数降低,肾组织CTGF、α-SMA表达下调,与尿毒清组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论益肾保真方能延缓肾衰竭进展,干预肾纤维化进程,其机制可能与下调肾组织CTGF、α—SMA的表达,抑制肾脏固有细胞的转分化,从而减少细胞外基质成分的合成和积聚有关。     

肾衰泄浊汤及组方对UUO大鼠Wnt4/β-catenin信号通路作用的影响

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨肾衰泄浊及组方抗肾间质纤维化的作用机制及肾间质纤维化中医本虚标实的病机。方法:将72只SD大鼠根据体质量随机分为模型组、假手术组、肾衰泄浊汤组、祛邪方组、补虚方组及贝那普利组,每组12只,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型。模型复制成功后,肾衰泄浊汤组、祛邪方组、补虚方组分别按照肾衰泄浊汤及其组方比例配制,浓缩剂灌胃给药,贝那普利组大鼠给贝那普利灌胃,模型组及空白组大鼠均予生理盐水灌胃,分别于术后7、14 d处死大鼠。检测24 h尿蛋白定量,血清肌酐、尿素氮水平,免疫组化检测Wnt4、β-catenin、E-cadherin含量,原位杂交检测Wnt4、β-catenin mRNA表达。结果:与假手术相比,同时期模型组大鼠24 h尿蛋白定量升高(P0.05),与模型组相比,经各组治疗后24 h尿蛋白定量减少(P0.05);与假手术相比,模型组血尿素氮、血清肌酐均升高(P0.05),与模型组相比,经各组治疗后血尿素氮、清肌酐均有所下降(P0.05);与假手术组相比,同时期模型组Wnt4、β-catenin表达升高(P0.05),E-cadherin表达下降。与同时期模型组相比,各治疗组Wnt4、β-catenin表达下降(P0.05),E-cadherin表达升高(P0.05),肾衰泄浊汤组优于其他组(P0.05)。与假手术组相比,同时期模型组及各治疗组Wnt4mRNA、β-cateninmRNA表达升高(均P0.05),与模型组相比,各治疗组Wnt4mRNA、β-cateninmRNA表达下降(均P0.05),尤以肾衰泄浊汤组效果最好。结论:肾衰泄浊汤及其组方可能是通过抑制Wnt4/β-catenin信号通路,达到改善肾功能,延缓肾间质纤维化的进展,且肾间质纤维化中医病机为本虚标实。     

肾衰方及其拆方对MMP7、α-SMA调节作用的探讨

目的:观察中药肾衰方及其拆方对大鼠肾间质纤维化肾组织基质金属蛋白酶7(MMP7)、α平滑肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的调节及其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:将72只大鼠随机分为假手术组、模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、苯那普利组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,术后第7天、第14天分别观察梗阻侧大鼠肾组织病理改变,以及肾组织MMP7、α-SMA蛋白的表达。结果:第7天、第14天,模型组与假手术相比大鼠肾组织MMP7表达下降,α-SMA表达增强,而经治疗后,肾衰方及其拆方组和苯那普利组大鼠较模型组大鼠肾组织MMP7蛋白表达提高,α-SMA蛋白表达下降;第14天肾衰方组大鼠较苯那普利组大鼠肾组织MMP7表达更强,且MMP7表达与α-SMA蛋白表达呈明显负相关。结论:肾衰方可能是通过诱导MMP7蛋白表达,抑制α-SMA蛋白表达,抑制肾间质纤维化进展,且肾间质纤维化属于本虚标实之证。