小鼠肺腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物的纯化

目的　探索肿瘤热休克蛋白 70抗原肽复合物 (HCA70 )分离、纯化的方法。方法　采用低渗、反复冻融匀浆、ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析 ,从体外培养的小鼠肺腺癌细胞 (LA - 795)中纯化HAC70 ;通过SDS -PAGE电泳、Westernblot检测、小鼠移植瘤动物实验证实所获得蛋白是否为HAC70。结果　获得蛋白分子量为 70kD左右 ,与抗HSP70特异单抗结合 ,用此蛋白主动免疫的小鼠可抵抗LA795细胞的攻击 ,获得了高纯度的HAC70。结论　采用ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析可获得高纯度的HAC70。     

热休克蛋白—肽复合物（HSP—PCs）肿瘤疫苗的研究进展

在过去的几十年中 ,人们一直在努力寻找肿瘤的免疫治疗途径 ,结果导致了热休克蛋白 (ＨＳＰ)家族的发现。ＨＳＰ是广泛存在于原核和真核生物细胞中的一类高度保守的蛋白质 ,在细胞生长、发育、分化、基因转录等方面发挥重要作用。在肿瘤细胞中 ,一些ＨＳＰ家族成员表达增强 ,用从中提取的ＨＳＰ—ＰＣｓ免疫机体 ,可在体内诱导多个肿瘤特异的细胞毒Ｔ细胞 (ＣＴＬ)活性 ,特异地杀伤肿瘤细胞。许多动物实验〔1〕及初步的临床实验〔2〕表明 ,肿瘤来源的ＨＳＰ—ＰＣｓ可作为疫苗来阻止肿瘤的生长或治疗肿瘤。因此 ,ＨＳＰ—ＰＣｓ有可能成为新…     

脑胶质瘤热休克蛋白抗原肽复合物抑瘤作用的研究

目的　提纯大鼠脑胶质瘤C6细胞热休克蛋白抗原肽复合物(HAC) ,免疫大鼠,观察HAC的抑瘤作用。方法　采用免疫亲和层析方法提纯鼠脑胶质瘤C6细胞HAC ,免疫2 0只大鼠为实验组,以另2 0只大鼠作为对照组,于免疫后一周,采用立体定向脑内接种方法,以C6细胞攻击两组大鼠,于肿瘤细胞攻击后第二周,进行外周静脉血淋巴细胞计数,和血清IFN、IL 2、TNF的浓度测定,并于正常对照。观察四周后动物的存活率。进行HE染色,并用免疫组化方法分析脑胶质瘤浸润区T淋巴细胞分布情况。结果　实验组大鼠外周血淋巴细胞计数和IFN、IL 2、TNF浓度均显著高…     

热休克蛋白与抗肿瘤免疫及其应用

热休克蛋白 (heatshockprotein ,HSP)是一类在生物进化中高度保守、广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质。根据分子量大小 ,可将HSP分为HSP10 0、HSP90、HSP70、HSP6 0、小分子HSP(2 2 0 0 0～ 32 0 0 0 )及泛素 (70 0 0～ 80 0 0 )等几个家族。当生物细胞受到应激因素 (如高温、紫外线、缺氧、重金属、病毒感染等 )作用或处于疾病引发的体内病理生理状态下 (如低氧、感染性炎症、缺血等 )均可诱发热休克蛋白基因表达模式的改变而导致一系列热休克蛋白合成增加。热休克蛋白在体内具有多种功能 ,它可在应激状态下保护细胞内蛋白质的…     

热休克蛋白70与肝细胞肝癌的研究进展

热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)是一组广泛存在于微生物和动、植物体内的生物进化中高度保守的多肽蛋白.它主要作为分子伴侣参与蛋白质的合成、折叠、积聚、装配、运输和降解,在细胞的生长发育、代谢分化、基因转录、维持组织细胞的自稳和环境适应性方面有很重要的作用.     

非液相等电聚焦蛋白质分离技术获取人热休克蛋白-多肽复合物

目的：利用非液相等电聚焦蛋白质分离技术（FS-IEF）从肝细胞癌（HCC）患者的癌组织的裂解液内提纯热休克蛋白多肽复合物（HSP-PCs）。制备热休克蛋白（HSP）肿瘤疫苗。方法：制备HCC细胞蛋白,经等电聚焦蛋白质分离获得目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western-Blot鉴定为热休克蛋白多肽复合物。利用紫外吸收法测定其浓度。结果：利用FS-IEF从HCC肿瘤细胞裂解液中成功分离提纯出HSP-PCs,分离的富含分子伴侣的细胞裂解物（CRCL）经鉴定为CRT、HSgpP96、HSP90和HSP70。这些分子伴侣蛋白沿pH梯度集中分布于4～7号收集管中,pH跨度为4.4～5.2。1g肝癌组织经液相等电聚焦分离后可产生1000μg的热休克蛋白疫苗。结论：通过非液相等电聚焦蛋白质分离技术可获得纯化的所需量的HSP-PCs。     

热休克蛋白70多肽复合物与肿瘤免疫

热休克蛋白（HSP）与肿瘤免疫治疗的关系是近年来肿瘤免疫治疗的热点之一。许多研究结果均证实，从肿瘤组织中提取HSP能诱导机体产生对该肿瘤细胞的免疫应答，达到治疗肿瘤的目的。HSP分子实际上是分子量大小不同的一组蛋白，根据HSP的同源程度及分子量的大小差异，可分为HSP110家族、HSP90家族、HSP70家族、HSP60家族及小HSP家族，其中HSP70在肿瘤免疫中发挥重要的作用。     

热休克蛋白70-H22肽刺激DC诱导特异性抗肝癌免疫

目的 探讨热休克蛋白70(TB.HSP70)-H22肽是否能促进树突状细胞(DC)活化成熟并诱导H22特异性抗肿瘤免疫.方法 取小鼠骨髓于培养第7天分为A、B、C 3组,分别给予未刺激、TB.HSP70-H22肽(10μg/mL)、TB.HSP70-H22肽(20μg/mL)干预24h,取上清液用ELISA法检测IL-12、IL-10,用FACS法检测CD40、CD80,用混合淋巴细胞反应检测淋巴细胞增殖,用MTT法检测DC活化淋巴细胞对H22和B16肿瘤细胞杀伤率.结果 与A组比较,B、C组除对B16细胞杀伤率差异无统计学意义外,B、C组IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组对B16细胞杀伤率差异无统计学意义,IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TB.HSP70-H22肽能明显促进DC活化成熟,诱导H22特异性抗肿瘤免疫,为该疫苗用于肝癌免疫治疗提供了理论基础.     

结核杆菌热休克蛋白70刺激表位在融合基因疫苗中的佐剂作用

目的：探讨结核杆菌热休克蛋白70（mtHSP70）的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661（HCA661）融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法：18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组,每组6只,分别肌肉注射100μg空质粒pCI-neo、重组质粒pCI-HCA661-mtHSP70C和pCI-HCA661-mtHSP70E,流式细胞术分析小鼠脾T细胞亚群变化;ELISA法检测体外培养脾细胞上清中干扰素γ(IFNγ)的含量及免疫小鼠血清中HCA661特异性抗体的滴度;体外特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤试验观察融合基因疫苗对肿瘤细胞的抑制作用。 结果：pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+T淋巴细胞的百分比和CD4+/CD8+比值与pCI-neo组比较差异有统计学意义（P<0.05）;pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值均高于pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组,差异有统计学意义（P<0.05）;在抗原肽刺激下,pCI-HCA661-HSP70E免疫组小鼠脾细胞培养上清中IFNγ含量较pCI-mtHCA661-HSP70C免疫组明显提高（P<0.05）;pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组IFNγ含量均高于pCI-neo组(P<0.05)。pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组诱导的HCA661特异性抗体水平较pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组显著增高（P<0.05）;pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组可以产生更强的CTL抗肿瘤效应。结论：mtHSP70刺激表位可以诱导机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答,发挥更强的佐剂作用。     

术中B超引导下行肝癌切除术35例临床分析

目的 评价术中B超引导下行肝癌切除术在预防肝癌术后复发的应用价值.方法 35例肝癌患者在术中B超引导下行肝癌切除术(A组),另35例行常规肝癌切除术(B组),术后定期复查肝功能、AFP、CT及MRI等,并随访.结果 术中B超对直径小于3cm肿瘤检出阳性率为93.1%,直径大于3cm肿瘤检出阳性率为100%.应用术中B超使34.3%(12/35)患者改变了原手术方案.术后5年局部复发率A组为54.3%,B组为88.6%(P<0.05).结论 术中B超对肝癌定位准确,能够提高手术安全性、彻底性和合理性,降低肝癌术后复发率,明显优于常规肝癌切除术.     

Surgical Treatment of Recurrent Hepatocellular Carcinoma (A report of 112 cases)

GreatprogresshastakenplaceinthetreatmentofHCC.Hepaticresection,asamaintreatment,makespatientssurvivalmarkedlyimproved,butpostoperationrecurrenceisstillaproblemtobesolved.Inourdepartment,among112patientswithrecurrenthepatocellularcarcinomatreatedsurgically,58patientshadsecondaryhepaticresection.Theaimofthisstudywastoevaluatethelong-termresultsoftreatmentandprognositicfactorsinpatientswithrecurrenthepatocellularcarcinomaaftercurativeresectionofhepatocellularcarcinomaandtoclarifytheoptimaltreatm…     

Immunogenicity and tumor-inhibiting effects of HSP-antigen peptide complex in melanoma B16 cells in mice

目的 :黑色素瘤 B1 6细胞热休克蛋白 -抗原肽复合物 (HACs)及其粗提物 (HAC- CEs)的制备 ,以及它们的免疫原性和抑瘤效应的研究。方法 :应用 Sephacryl S- 2 0 0凝胶过滤制备HAC- CEs,应用亲和层析纯化 HACs,并测其免疫功能和抑瘤效应。结果 :应用凝胶过滤制备的HAC- CE3、HAC- CE4、HAC- CE5和应用亲和层析纯化的 HAC60 ,HAC75和 HAC97均不同程度地降低肿瘤发生率、延迟肿瘤发生时间和减少移植黑色素瘤 C57BL/6J小鼠死亡率 ;同时 ,伴有小鼠脾细胞 IFN-γ和 IL- 2分泌活性及 CTL杀伤率的增加。结论 :分子量为 60 0 0 0～ 970 0 0的 HACs具有免疫原性和抑瘤效应 ,本研究为制备肿瘤疫苗提供重要的实验依据。     

肝细胞肝癌患者术后早期复发情况

目的观察肝细胞肝癌(HCC)患者术后准确的复发时间,进一步探讨影响肝癌术后复发的危险因素。方法将我院肝脏外科收治的肝癌肝切除术患者94例根据数字减影血管成像技术(DSA)确诊的术后复发时间分为1~6月复发组、7~12月复发组和1年内无复发组;肝内复发病例予栓塞治疗,并应用栓塞后CT、造影超声、磁共振成像等检查手段予以验证。结果半年复发率为30.9%,1年复发率为36.2%,半年和1年复发率比较差异无显著性。复发组有多发性肿瘤病例9例(26.5%),无复发组5例(8.3%),两组比较差异具有显著性(P=0.032)。通过其他检查手段验证DSA的诊断准确性为87.2%。结论HCC术后复发的高峰时间在术后半年内,肿瘤多发性是导致进展期肝癌术后早期复发的重要因素。DSA是早期发现HCC术后肝内复发的重要手段,同时还可以给予早期治疗、控制复发肿瘤进展并为以后的积极治疗创造条件。     

乳腺癌术后单纯胸壁局部复发20例临床分析

目的 总结乳腺癌术后单纯胸壁局部复发的临床特点及治疗方法.方法 回顾性分析20例乳腺癌术后胸壁局部复发而无远处转移患者的临床资料.结果 20例患者术后2例局部再发,其余控制良好.3例发生远处转移,1、3、5年生存率分别为95.0%、57.9%、50.0%.结论 乳腺癌术后单纯胸壁复发灶,经积极局部及全身综合治疗可获较好疗效.     

Efficacy of postoperative antiviral combined transcatheter arterial chemoembolization therapy in prevention of hepatitis B-related hepatocellular carcinoma recurrence

Background  Recurrence of hepatitis B-related hepatocellular carcinoma (HCC) after curative resection is the leading factor influencing the prognosis of the disease. Therefore, further improvement of long-term survival may depend on the prevention and treatment of the recurrent tumor. The aim of this research was to investigate the role of antiviral therapy and postoperative transcatheter arterial chemoembolization (TACE) in the prevention and treatment of hepatitis B-related HCC recurrence.

Methods  One hundred and twenty patients who underwent curative resection of hepatitis B-related HCC between January 2005 and June 2008 at our hospital were enrolled. Patients were divided into four groups according to the post-operative adjuvant therapy they received, i.e., control, antiviral therapy group, TACE group, and combined group. The disease-free survival (DFS) and the 12-, 24-, 36-month cumulative recurrence rates were studied.

Results  There was no significant difference between isolated postoperative antiviral therapy group and control in terms of disease-free survival (P=0.283), while it was significantly higher in the TACE group compared to control (P=0.019). In all patients, however, viral prophylactic therapy combined with/without TACE brought a favorable result compared to those only with/without TACE (P <0.001). Similarly, no matter combined with or without antiviral treatment, postoperative TACE prolonged DFS (P=0.015). Naturally, a combination of viral prophylactic therapy on the baseline TACE significantly benefited patients’ postoperative DFS (P=0.047) and vice verse (P=0.002). The 24-month cumulative recurrence rates of combined group were significantly lower than that of isolated control group and antiviral therapy (P <0.001 and P=0.011 respectively). However, 36-month recurrence rate was significantly different in the control group compared to the TACE group and combined group (P=0.040 and 0.002 respectively); same as the antiviral group compared to the combined group (P=0.034).

Conclusions  Post-operative TACE prevents early recurrence while antiviral therapy prevents late recurrence of HCC. Combination of antiviral therapy and TACE are suggested for prevention in HCC patients with high risk of recurrence.

     

CyclinD1、p27在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理特征、术后复发的关系

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p27蛋白的表达,探讨其与临床病理特征、术后复发的关系。方法回顾性分析125例NSCLC患者的临床资料。125例患者均手术切除,术后以免疫组织化学SP法检测癌组织与癌旁组织CyclinD1、p27蛋白的表达;比较不同临床病理特征患者癌组织CyclinD1、p27蛋白的阳性表达率;随访并统计复发率,对比复发者和未复发者癌组织CyclinD1、p27蛋白表达;采用Cox逐步回归分析探讨癌组织CyclinD1、p27蛋白表达与术后复发的关系。结果癌组织CyclinD1蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),p27蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);Ⅲa期、低分化患者癌组织CyclinD1蛋白阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期,中高分化患者,p27蛋白阳性表达率低于Ⅰ、Ⅱ期、中高分化患者(P<0.05);术后复发率为63.20%,复发患者癌组织CyclinD1蛋白阳性表达率高于未复发患者(P<0.05),p27蛋白阳性表达率低于未复发患者(P<0.05);复发NSCLC患者临床Ⅲa期...     

小鼠肝癌细胞系Hepa1-6 B7.1瘤苗抗肿瘤免疫的实验研究

目的：研究小鼠肝癌细胞系Hepal-6转染B7.1基因后在体内外抗肿瘤免疫的作用。方法：采用脂质体介导的方法用pLXSNB7.1转染PA317包装细胞,经G418筛选出高滴度阳性的细胞克隆,以流式细胞仪检测B7.1分子的表达情况;用所获病毒上清进一步感染Hepal-6细胞,观察转染B7.1基因后Hepal-6细胞作为肿瘤疫苗在体内外诱发抗肿瘤免疫的情况。结果：Hepal-6/B7.1高表达B7.1分子,其致瘤性明显降低。接种小鼠后成瘤率为20%,而亲代Hepal-6细胞成瘤率为100%,转B7.1基因肿瘤细胞疫苗可抑制肿瘤生长速度,延长荷瘤小鼠生存期;且转B7.1基因肿瘤细胞疫苗具有保护性免疫反应。结论：转B7.1基因的肿瘤细胞作为肿瘤疫苗可有效地激发机体的抗肿瘤免疫反应。