同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱快速测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的研究

  目的  建立尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱的快速测定方法。  方法  离心后的尿样上清液加入15N₅-8-羟基脱氧鸟苷、D₃-可替宁两种内标,以3 mmol/L甲酸铵水溶液稀释5倍,经0.22 μm水系滤器过滤后,引入液相色谱-串联质谱法（ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）分析。以ACQUITY UPLC? BEH HILIC色谱柱（50 mm×3.0 mm, 1.7 μm）分离,3 mmol/L甲酸铵水溶液与乙腈为流动相(10∶90) 等度洗脱,柱温40 ℃,流速0.3 mL/min;质谱以电喷雾电离源（electrospray ionization, ESI）+扫描多反应监测模式检测,内标法定量。  结果  8-羟基脱氧鸟苷和可替宁在各自线性范围内线性良好,方法检出限分别为0.064 μg/L和0.035 μg/L;定量限分别为0.21 μg/L和0.12 μg/L;加标回收率分别为92.6%～102.0%和102.0%～106.0%。采用所建立的方法测定实际尿样,并通过40例样本统计分析发现,主、被动吸烟者的烟草烟气暴露量、烟草特有亚硝胺摄入量存在差异（P<0.05）,NNAL和可替宁含量在主动吸烟者尿样中含量更高;主、被动吸烟者的烟草烟气暴露与烟草特有亚硝胺暴露呈正相关（其相关系数r分别为0.487和0.786,P<0.05）。  结论  本研究成功建立同时测定尿液中8-羟基脱氧鸟苷和可替宁含量的同位素稀释-亲水作用色谱串联质谱法,该方法前处理简单、快速,通过同位素内标校正,定量灵敏准确,能够满足批量分析的需求。     

毛细管气相色谱法测定头发中尼古丁及其代谢产物可的宁

目的建立毛细管气相色谱同时测定头发中尼古丁及其主要代谢产物可的宁的方法。方法头发样品经1.5mol/L NaOH溶液消解,二氯甲烷/甲醇(V/V,3∶1)溶剂萃取,氮气吹干,甲醇定容后直接进样。经SPB-5毛细管柱分离,火焰离子化检测器(FID)检测。结果在优化发样提取和色谱分析条件下,尼古丁和可的宁在4.3ng/mL~1mg/mL和10ng/mL~2mg/mL浓度范围内线性良好(r均为0.9996),方法检出限(S/N=3)分别为4.3ng/mL和10ng/mL。发样中尼古丁和可的宁的加标回收率分别为90.33%~113.1%和92.92%~117.4%,相对标准偏差为2.1%~7.0%和4.4%~8.9%。结论本方法灵敏度高,选择性好,操作简便、快速,易于推广,可用于控烟流行病调查研究批样的检测。     

香烟烟雾暴露对雄性大鼠血浆尼古丁、可替宁的影响

目的 通过对吸烟大鼠血浆尼古丁、可替宁含量的测定,探讨香烟在体内的内暴露水平。方法 清洁级SD雄性大鼠160只,随机分为2、4、6、8、12周的低、中、高染毒剂量组及对照组,每组10只。采用呼吸道静式染毒,每日染毒一次,染毒周期为2、4、6、8、12周。观察大鼠的一般毒性效应,运用气相色谱-质谱联用法检测吸烟大鼠血浆中尼古丁、可替宁的含量。结果 香烟烟雾暴露组大鼠在第3周后逐渐开始出现间歇咳嗽,腹式呼吸加剧,鼻噪音等症状,暴露时间越长,症状越明显;染毒剂量越高,染毒周期越长,大鼠体重减少越明显,与空白对照组相比,差异有显著性（P < 0.01）;大鼠血浆尼古丁的保留时间为7.5~8.5 min,随暴露时间的延长,暴露剂量的增加,大鼠血浆中尼古丁含量较空白对照组（155±56.65）ng/mL有所增加;大鼠血浆可替宁的保留时间为11.5~12.5 min;随暴露时间的延长,暴露剂量的增加,大鼠血浆中可替宁含量较空白对照组（340±41.97）ng/mL有所增加,且呈现剂量-反应关系,不同暴露周期间可替宁含量的差异有显著性（P < 0.05）,且暴露时间与暴露剂量存在交互效应（P < 0.05）。结论 香烟烟雾暴露可造成大鼠机体不同程度的损伤,大鼠血浆可替宁浓度能够有效反映香烟烟雾内暴露情况,且呈现较好的剂量-反应关系。     

高效液相色谱串联电喷雾质谱法测定大鼠血浆中水苏碱

目的 应用LC/ESI-ITMS检测大鼠血浆中水苏碱的含量.方法 取血浆样品0.2mL,经3 mL乙腈-甲醇(90:10)混合液沉淀蛋白并萃取后,以甲醇-水-甲酸(70:30:1,pH 3.5)为流动相,用Agilent zorba Extend-C18色谱柱分离,通过电喷雾离子阱质谱,以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测检测.用于定量分析的离子反应分别为m/z 144→m/z 84(水苏碱)和m/z166→m/z 148(内标,麻黄碱).结果 水苏碱线性范围为0.02～5.00 mg&#183;L-1,定量限20 μg&#183;L-1,最低检测限为1 μg&#183;L-1,日内、日间测定值RSD小于5.4%.在大鼠体内药动学研究中,应用此法测定了6只大鼠给予盐酸水苏碱后血浆中水苏碱的浓度.结论 该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内水苏碱的药动学研究.     

液相色谱串联质谱法同时测定化妆品中溴甲酚绿与溴百里酚蓝

目的：建立液相色谱串联质谱同时测定化妆品中溴甲酚绿与溴百里酚蓝的定性、定量方法。方法样品经甲醇超声提取,HLB固相萃取柱分离,再通过C18色谱柱(Kinetex C182.6μm 100A 100×2.10 mm)分离,采用电喷雾离子源及多反应监测模式(MRM)对目标化合物进行测定。结果溴甲酚绿与溴百里酚蓝的方法检出限分别是0.82 mg/kg、0.84 mg/kg。溴甲酚绿与溴百里酚蓝的线性范围均为0.02~4μg/mL,相关系数均大于0.9995(rBG=1.0000,rBB=0.9999),在不同剂型的化妆品中平均回收率在98.0%~109%范围内。结论该方法具有前处理简单,结果准确等特点,适用于化妆品中溴甲酚绿与溴百里酚蓝的测定。     

分散液-液微萃取结合气相色谱质谱测定尿液中的尼古丁和可替尼

目的 探讨建立溶剂去乳化分散液-液微萃取（dispersive liquid-liquid microextraction,DLLME）结合气相色谱-质谱法（gas chromatography-mass,GC/MS）测定尿液中尼古丁和可替尼的方法。方法 考察GC/MS检测和DLLME条件。取5 mL尿样,用NaOH调节pH至9.0,加入氯化钠振荡溶解后,取100 μL三氯甲烷（含内标物喹啉）和1 000 μL甲醇分别作为萃取剂和分散剂并混合,注入样液中使乳化分散,4 000 r/min离心5 min,弃上清,取1 μL下层有机相进GC/MS分析。以DB-5毛细管色谱柱为分离柱,程序升温分离样液中的尼古丁和可替尼,离子监测(SIM)模式质谱检测和内标工作曲线法进行定量。结果 尼古丁和可替尼在0.2~100 ng/mL范围内线性良好,方法检出限分别为0.010 ng/mL和0.022 ng/mL,方法精密度(相对标准偏差)分别为8.2%和9.6%,加标回收率分别为92.0%~108.0%和83.0%~110.0%。结论 本方法简单快速、灵敏准确,适用于尿液中尼古丁和可替尼的测定,能满足人群烟草暴露评价的需要。     

高效液相色谱串联电喷雾质谱法测定大鼠血浆中山茛菪碱

目的建立大鼠血浆中山莨菪碱的测定方法,并研究山莨菪碱的大鼠药动学。方法采用液相色谱串联电喷雾离子阱质谱法测定大鼠血浆中山莨菪碱。大鼠血浆样品经甲醇2次沉淀蛋白并萃取后,以甲醇-2mmol/L醋酸铵缓冲液(用甲酸调pH3.5)(70:30)为流动相,用AgilentZorbaxEclipseXDB-C_(18)色谱柱分离,通过电喷雾离子阱质谱,以选择离子反应监测方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z306→140(山莨菪碱)和m/z290→124(内标,阿托品)。结果山莨菪碱线性范围为10-5000μg/L,r=0.9990,最低检测限为2μg/L,日内、日间测定值RSD小于4.2%。结论该法快速灵敏,准确度高,适用于大鼠体内山莨菪碱的药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定原发性肝癌患者血清中7种甾类激素

目的 建立高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法,用于测定原发性肝癌患者血清中7种甾类激素的含量.方法 血清样品采用乙酸乙酯液-液萃取,经丹磺酰氯衍生化后测定.色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18柱(2.1 mm×150mm,2.7μ.m),流动相为乙腈-0.1％(V∶V)甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,质谱检测采用动态多反应离子监测模式(MRM).结果 7种甾类激素(雌二醇、雌三醇、雌酮、氢化可的松、睾酮、雄烯二酮和黄体酮)在8 min内达到基线分离.在相应浓度范围内线性关系良好,相关系数均＞0.99,日内及日间精密度RSD均＜15％,提取回收率为80％～119％,基质效应为85％～112％,样品在放置6h后处理、处理后室温放置24 h、3个冻融循环以及-80℃保存30 d等测定过程中均稳定性良好.结论 该方法操作简便、结果准确、灵敏度高、重现性好,适用于原发性肝癌患者体内甾类激素水平检测.     

气相色谱串联质谱法测定苦参碱微乳中苦参碱的含量

目的 建立苦参碱微乳中苦参碱含量的气相色谱串联质谱(GC-MS)测定方法.方法 Agilent HP-5MS(30m,0.25mm×0.5μm)色谱柱,正二十三烷为内标,初始柱温为130℃,程序升温至280℃;EI离子源,正二十三烷和苦参碱的选择检测离子分别为m/z 324.1和248.2.结果 苦参碱含量在40～800 μg/L范围内线性关系良好(r=0.999 5),低(40μg/L)、中(160μg/L)、高(800 μg/L)浓度的平均加样回收率分别为98.81%、100.20%和100.73%.结论 GC-MS法操作简便,结果准确,灵敏度高,重现性好,可用于苦参碱微乳制剂的质量控制.     

液相色谱-串联质谱法测定家兔血浆中倍他米松

目的:建立液相色谱-串联质谱法测定家兔血浆中倍他米松含量.方法:血浆样品经乙醚-正己烷(4:1,V/V)液-液萃取,以乙腈-5 mmol/L醋酸铵-甲酸(80:20:0.1,V/V/V)为流动相,Zorbax Eclipse XDB-C18柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 393m/z 373和m/z 393m/z 355 (倍他米松)和m/z 406m/z 247 (内标,A0).结果:测定血浆中倍他米松方法的线性范围为15.0～1 000 pg/ml,定量下限为15.0 pg/ml,日内、日间精密度(RSD)均小于13.0%,准确度(RE)在-1.4%～-0.6%以内.应用本法对家兔经皮给予二丙酸倍他米松乳膏后的药动学进行研究,结果显示Tmax为(11.0±5.3) h,Cmax为(167±28) pg/ml,AUC0-t为(4.24±1.68) ng·h·ml-1.结论:该法选择性强、灵敏度高,适用于二丙酸倍他米松乳膏剂的药代动力学研究.     

HPLC-MS/MS测定人体血浆中利多卡因及其代谢物浓度

目的 建立高效液相-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定人体血浆中利多卡因(lidocaine,LDC)及其代谢物单乙基甘氨二甲基苯酰胺(MEGX)和甘氨二甲基苯酰胺(GX)的浓度.方法 采用API3000型HPLC-MS/MS液质联用系统,Ultimate C18分析柱(50×4.6mm,5μm),甲氧苄啶作为内标,流动相为甲醇:5mmol/L醋酸铵=50:50(甲酸调pH5.0),流速0.2mL/min.样品在碱性条件下用乙酸乙酯提取浓集后进样,选择性离子监测模式检测.结果 LDC的线性范围为15.625～2000ng/mL,MEGX和GX的线性范围均为1.5625～200ng/mL.LDC、MEGX和GX的最低定量限分别为:15.625、1.5625和1.5625 ng/mL.结论 该方法具有快速简便、灵敏准确等特点,可满足利多卡因及其代谢物临床药物浓度测定的需要.     

HPLC-MS/MS测定血浆中甜菜碱和游离胆碱及其稳定性研究

【目的】 建立高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定血浆甜菜碱和游离胆碱水平,并研究血浆中两种物质的稳定性。【方法】 以d9-氯化胆碱&#65380;d9-甜菜碱为内标,血浆经乙腈除蛋白后,采用SiO2柱(2.1 mm × 100 mm, 5 μm)乙腈-甲酸铵缓冲液(15 mmol/L,pH = 3.5)等度洗脱,经电喷雾电离,选择多反应监测模式(MRM)同时测定血浆中甜菜碱和游离胆碱。【结果】 血浆中甜菜碱和游离胆碱得到良好分离,最低定量限均为0.62 μmol/L,线性范围均为0.62 ~ 400 μmol/L。对游离胆碱的测定,日内相对标准差(RSD)为5.10% ~ 5.85%,日间RSD为4.54% ~ 13.26%,回收率94.15% ~ 103.70%;对甜菜碱的测定,日内RSD为3.60% ~7.30%,日间RSD为2.70% ~ 8.10%,回收率90.03% ~ 103.88%。稳定性研究中,游离胆碱和甜菜碱浓度随保存时间及温度增加,游离胆碱在血浆分离48 h内变化小于15%,甜菜碱超过3 h后变化即大于15%。3个反复冻融循环内游离胆碱浓度稳定;甜菜碱变化明显,第一个冻融循环后即增加至原始浓度3倍。【结论】 高效液相色谱串联质谱法同时检测血浆中甜菜碱和游离胆碱是一种快速、准确且灵敏的方法。血浆保存时应注意保存温度、时间及反复冻融对血浆中甜菜碱和游离胆碱浓度的影响。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定蜂蜜中甲硝唑、二甲硝咪唑和洛硝哒唑残留

目的采用高效液相色谱串联质谱（HPLCMS／Ms）技术,建立同时检测蜂蜜中甲硝唑（MNZ）、二甲硝咪唑（DMZ）和洛硝哒唑（RNZ）残留量的方法。方法样品加入水均质后,采用乙腈-氯仿-异丙醇（3：57：40,V／V／V）的混合液提取,亲水／亲油平衡（HLB）固相萃取柱净化,高效液相色谱-串联质谱-电喷雾正离子多反应监测方式（MRM）进行测定。结果3种药物在检测范围内线性良好,相关系数r均大于0．999。在0．2～100ng／g范围内,加样回收率在90．78％～101．61％之间,相对标准偏差均小于9．4％。结论此方法具有灵敏、准确、简便、快速等优点,适用于蜂蜜中硝基咪唑类药物残留的同时确证检测。     

新型液相色谱-串联质谱法快速测定水产品中孔雀石绿及其隐色代谢物残留

目的采用液相色谱-串联质谱（LCMS／MS）建立水产品中孔雀石绿及其隐色代谢物残留的检测方法。方法均质后的水产品样品，用乙腈和乙酸铵缓冲液提取，合并提取液，用二氯甲烷反提取，经中性氧化铝柱和丙磺酸（PRS）柱固相萃取净化，没有使用氧化铅柱在线氧化，色谱分离后直接进入串联质谱检测器。采用电喷雾（ESI）正离子扫描模式，多反应监控（MRM）方式检测，外标法定量。结果孔雀石绿和隐色孔雀石绿的检出限为0．5ng／g，线性方程的相关系数r〉0．99，在添加浓度0．5～2．0ng／g范围内，孔雀石绿回收率为78．4％～92．1％。隐色孔雀石绿回收率为82．4％～98．1％，相对标准偏差（RSD）均小于5．7％。结论此方法高效快速，结果准确，重现性好，适合于对水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿的残留检测。     

UPLC-MS/MS测定五味消炎灵含片中5种成分的含量

目的建立一种快速同时测定五味消炎灵含片中丹参酚酸、黄芩苷、葛根素、绿原酸、咖啡酸含量的方法。方法采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS),色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为0.4mL/min,采取MRM检测模式进行检测。结果所检测的各色谱峰分离度良好,方法学实验结果符合要求。结论建立了同时测定五味消炎灵含片中5种成分的方法,为该制剂的质量控制提供依据。     

超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱快速分析复方守宫散化学成分及血中移行成分

目的 采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱（ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight-tandem mass spectrometry, UPLC-Q-TOF/MS）对复方守宫散中化学成分及其血中移行成分进行定性分析,为该制剂的体内有效物质研究提供参考。方法 采用沃特世超高效液相色谱仪（ACQUITY UPLC）和沃特世高分辨质谱仪（Waters Synapt G2-Si QTOF）获得复方守宫散原药样品溶液、混合对照品溶液、空白血浆和含药血浆的液相色谱-质谱信息,再通过比对UNIFI（沃特世科学信息平台）质谱数据库中化合物信息以及部分对照品的提取离子流色谱图、质谱碎片裂解信息,鉴定出目标化合物。结果 共识别出复方守宫散中77个化学成分（主要有皂苷类25个、黄酮类13个、醌类12个）,采用对照品对其中6个成分进行了验证;通过比对空白血浆和含药血浆,发现复方守宫散中绿原酸、槲皮素、虎杖苷、人参皂苷Re等27个成分为入血成分。结论 具有高分辨率、高灵敏度的UPLC-QTOF/MS能够快速分析复方守宫散化学成分及其血中移行成分。     

液质联用技术在乌头类生物碱定性定量研究中的应用

为了更好地控制乌头类生物碱的药品质量,阐明该类成分在体内的代谢转化及药动学特征,综述了液质联用技术在乌头类生物碱的裂解、成分鉴别、炮制配伍前后成分变化、药物的体内代谢转化、药物代谢动力学及药材、饮片、成药质量控制等方面的应用。     

生物检材中34种常见毒品及代谢物的液相色谱轨道阱质谱筛查方法研究

目的 建立高效液相色谱轨道阱质谱对生物检材中34种常见毒品及代谢物的筛查方法。方法 尿样和血样经乙酸乙酯提取后,氮吹浓缩和复溶;毛发样品依次用水和丙酮振荡洗涤、晾干后剪成约1 mm,置冷冻研磨仪中粉碎,甲醇提取,过滤后,滤液供仪器分析。色谱分析采用Hypersil Gold PFP色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm)分离,甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液作为流动相,梯度洗脱,流速为400μL/min。质谱分析采用电喷雾正负离子交替模式,使用一级母离子全扫描和数据依赖的二级子离子扫描(Full MS/dd-MS²)模式,采用Xcalibur4.0软件分别对仪器和数据进行控制和采集,利用TraceFinder3.3软件进行筛查识别。结果 血样、尿样和发样的34种常见毒品及其代谢物方法检出限分别为3.30～10 700 ng/L、4.43～5 440 ng/L和0.035 0～4.21μg/kg。在5.0、10、20μg/L加标水平下,日内精密度为3.50%～6.00%,日间精密度为4.18%～9.90%。采集了尿样、血样和发样共1 125份生物检材,采用该方法...