非小细胞肺癌患者功能性驱动基因突变的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者功能性驱动基因表皮生长因子受体(EGFR)、间变淋巴瘤激酶(ALK)、Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)和B-Raf原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BRAF)基因的突变状况。 方法选择2009年1月至2016年6月安徽省铜陵市人民医院及安徽省立医院呼吸科、胸外科、肿瘤科诊治的经病理诊断为NSCLC患者,共203例(其中铜陵市人民医院117例,安徽省立医院86例),收集患者的外科手术肿瘤组织标本和淋巴结活检、肺穿刺活检、气管镜活检和胸腔积液沉渣标本,应用突变扩增阻滞系统(ARMS)进行EGFR、KRAS和BRAF基因突变检测和免疫组化法进行ALK基因分析,采用χ²检验分析基因的突变率及其与临床特征的关系。 结果NSCLC患者EGFR、ALK、KRAS和BRAF基因的突变率分别为51.23%(104/203),4.88%(8/164),10.69%(17/159)和1.26%(2/159)。EGFR基因阳性突变率女性组66.67%(58/87)高于男性组36.21%(42/116),腺癌组48.80%(81/166)高于鳞癌组33.33%(7/21),非吸烟组63.38%(90/142)高于吸烟组16.39%(10/61),差异有统计学意义(χ²＝18.45,113.13,37.69;均P<0.05)。而EGFR基因突变状况与标本来源类型如手术、淋巴结活检、肺穿刺活检、气管镜活检和胸腔积液沉渣标本间差异无统计学意义(χ²＝3.91,P>0.05)。ALK基因突变状况与性别、病理类型、吸烟状态之间均差异无统计学意义(χ²＝0.00,0.86,0.55;均P>0.05)。KRAS基因突变状况与性别、病理类型、吸烟状态之间均差异无统计学意义(χ²＝3.63,2.13,2.36;均P>0.05)。此外BRAF基因突变均为男性、吸烟患者。检测中发现3例19,21外显子EGFR双突变;1例EGFR和ALK双突变。 结论NSCLC患者EGFR基因突变率最高,其次为KRAS、ALK、BRAF基因。EGFR基因突变以女性、不吸烟、腺癌为优势人群,EGFR与ALK双突变可共存。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR和KRAS基因突变的 分子病理检测分析

目的:探讨非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR和KRAS基因各亚型突变情况。方法:应用直接测序方法检测非小细胞肺癌石蜡组织中1 273例EGFR基因和1 062例KRAS基因突变情况。结果:非小细胞肺癌肿瘤组织中EGFR基因总突变率为36.68%(467/1 273),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.02%(13/1 273)、18.93%(241/1 273)、2.59%(33/1 273)和15.95%(203/1 273);EGFR基因各外显子之间双重突变共17例(1.34%),其中18外显子与20外显子双重突变3例(0.24%),19外显子与20外显子双重突变7例(0.55%),19外显子与21外显子双重突变4例(0.31%)和20外显子与21外显子双重突变3例(0.24%);EGFR基因各外显子内双重突变共2例(2.18%),均为21外显子双重突变。KRAS基因总突变率为3.01%(32/1 062),外显子2的密码子5、12、13和25的突变率分别为0.09%(1/1 062)、2.64%(28/1 062)、0.18%(2/1 062)和0.09%(1/1 062),外显子3密码子61的突变率为0.09%(1/1 062)。结论:非小细胞肺癌患者中EGFR基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导EGFR-TKI的肿瘤靶向治疗,KRAS基因突变率虽低但不容忽视,其基因突变预示着EGFR-TKI原发耐药。     

江西地区非小细胞肺癌EGFR基因突变分析

目的探讨江西地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变类型、突变率及其与临床特征的关系。方法收集2014年3月至2015年6月南昌大学第一附属医院非小细胞肺癌患者石蜡包埋组织78例,采用等位基因特异性扩增-聚合酶链反应(ARMS-PCR)方法,对非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR基因18~21外显子突变进行检测,并分析其突变类型、突变发生率及其与临床特征之间的关系。结果在78例非小细胞肺癌患者中,共有27例发生EGFR基因突变,总突变率为34.6%。其中,第18、19、20、21号外显子突变率分别2.6%(2/78),12.8%(10/78),3.9%(3/78),14.1%(11/78)。一例既有21号外显子突变,又有20号外显子突变,其中,19号外显子的突变均为第746~750密码子的碱基缺失,21号外显子突变类型以L858R为主,且19号外显子的突变率与21号外显子的突变率无统计学差异(P0.05),女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者,腺癌患者显著高于鳞癌患者(P0.05),而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期无相关性(P0.05)。结论江西地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21号外显子为主,常见于女性、不吸烟、腺癌的非小细胞肺癌患者。     

内蒙古包头地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变检测分析

目的分析内蒙古包头地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者EGFR基因突变的情况。方法采用等位基因特异PCR(allele specific PCR,ASPCR)荧光探针法检测内蒙古包头地区506例NSCLC患者EGFR基因的突变情况,并分析该突变与患者临床相关参数的关系。结果 506例NSCLC患者中检出EGFR基因突变197例,总体突变率为38.93%,突变发生以单一位点为主,在总体突变中占92.39%(182/197),共检出EGFR基因第18～21号4个外显子上7个位点的突变,其中突变率发生最高的2个为21-L858R和19-del位点,分别占总体突变的38.07%(75/197)和30.96%(61/197);检出两位点发生突变者14例,占总体突变的7.11%(14/197),其中19-del+20-T790M位点突变6例、21-L858R+20-T790M位点突变5例;发现1例三位点突变者,为20-Ins+20-T790M+21-L861Q;男性患者的突变率明显低于女性(32.87%vs 47.00%,χ~2=10.412,P0.05);病理类型为腺癌患者的突变率明显高于鳞癌患者(42.20%vs 18.57%,χ~2=14.166,P0.05)。结论内蒙古包头地区NSCLC患者EGFR基因突变以单一位点为主,且存在2个以上多位点同时突变的个体;可作为指导NSCLC患者使用抗EGFR靶向药物治疗的重要指标。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因的分子病理检测分析

目的:探讨非小细胞肺癌患者肿瘤组织中驱动基因EGFR、KRAS、ALK、ROSI、c-Met和Her-2基因各亚型改变情况。方法:应用Taqman-ARMS方法检测273例非小细胞肺癌石蜡组织中EGFR基因、KRAS基因、ALK基因、ROSI基因、c-Met基因和Her-2基因改变情况。结果:非小细胞肺癌肿瘤组织中EGFR基因总突变率为36.26%(99/273),外显子18、19、20和21的突变率分别为0(0/273)、16.12%(44/273)、4.49%(15/273)和17.95%(49/273);EGFR基因各外显子之间双重突变共12例(4.40%);KRAS基因总突变率为4.76%(13/273);ALK融合基因总阳性率为9.16%(25/273);ROSI融合基因总阳性率为2.20%(6/273);c-Met基因总扩增率为3.66%(10/273);Her-2基因总突变率为0.73%(2/273);各驱动基因双突变共存型11例(4.03%),其中EGFR基因突变与ALK融合基因阳性共存型2例(0.73%),EGFR基因突变与KRAS基因突变共存型3例(1.10%),EGFR基因突变与c-Met基因扩增共存型6例(2.20%)。结论:非小细胞肺癌患者中EGFR基因19和21外显子突变和ALK融合基因均存在较高的突变率,基因突变亚型分类能指导精准医学的个体化靶向治疗,KRAS、ROSI、c-Met、Her-2基因改变以及驱动基因双突变共存型基因突变率虽低但不容忽视。     

基于高通量靶向测序的常见实体肿瘤基因突变图谱研究

目的采用含有50个基因组合的高通量靶向测序技术检测多种实体肿瘤的基因突变情况,分析实体肿瘤的基因突变情况,了解实体肿瘤的基因突变图谱,为临床诊疗提供理论依据。方法收集367例多种类型实体肿瘤样本,采用BES 4000平台检测50个基因状态,分析各种肿瘤中的基因突变情况。结果 367例样本中,64.03%的样本至少存在1种基因的突变;共检测到28种基因突变,突变率从高到低的前9个基因分别为EGFR(32.15%)、TP53(15.53%)、K-ras(8.17%)、c-kit(5.72%)、APC(3.00%)、PTEN(3.00%)、B-raf(2.72%)、ERBB2(2.72%)和PIKC3CA(2.72%)。在非小细胞肺癌中突变率最高的基因为EGFR(40.10%),该基因突变在本研究其他恶性实体肿瘤中未被发现。在非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、胃癌和卵巢癌中均检测到TP53的突变,突变率分别为13.61%、34.38%、33.30%和50.00%。在结直肠癌中突变率最高的基因为K-ras(42.86%),胃肠间质瘤中突变率最高的基因为c-kit(53.13%)。在被检测到突变的样本中,28.97%(68/235)的样本存在基因的共突变,TP53的共突变率最高为16.60%(39/235)。统计学分析结果显示,是否发生基因突变与患者性别和年龄无关,但TP53基因突变在≥58岁患者明显高于58岁患者(P0.001)。在非小细胞肺癌中,女性(P0.01)、肺腺癌(P0.001)患者EGFR突变率较高;ERBB2在58岁患者中突变率较高(P=0.001)。结论不同肿瘤中存在不同基因突变图谱,TP53基因突变发生多种实体肿瘤中并且与年龄相关,高通量靶向测序技术可同时检测多种基因的突变情况,为临床治疗决策提供全面指导。     

深圳地区103例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分析

目的了解深圳地区非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变情况,为NSCLC患者药物靶向治疗提供科学依据。方法收集2013年3月~2015年11月深圳地区3家三级区属医院的103例NSCLC肺癌组织,分别提取DNA,采用突变特异性扩增系统(ARMS)扩增检测EGFR基因外显子18、19、20及2l的突变情况,并统计分析EGFR基因突变率。结果 103例NSCLC患者中EGFR基因总突变率为38.8%(40/103),其中第18、19、20及21外显子突变分别占总突变的2.5%(1/40)、35.0%(14/40)、5.0%(2/40)及57.5%(23/40);腺癌患者EGFR基因突变率为48.7%(37/76),高于非腺癌患者的11.1%(3/27),差异有统计学意义(χ~2=25.617,P0.01);不吸烟的NSCLC患者EGFR基因突变率为56.1%(32/57),明显高于吸烟患者的17.4%(8/46),差异有统计意义(χ~2=20.195,P0.01);女性患者突变率为52.4%(22/42),高于男性患者的29.5%(18/61),差异有统计意义(χ~2=5.127,P0.05);≤56岁的NSCLC患者EGFR基因突变率为39.5%(17/43),56岁的患者为38.3%(23/60),差异无统计学意义(χ~2=0.618,P0.05)。结论深圳地区NSCLC患者EGFR基因突变主要以21外显子为主,其次为19外显子;腺癌、女性及不吸烟NSCLC患者EGFR基因突变率较高,可接受EGFR-TKIs治疗。     

宁夏某医院225例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变检测结果分析

目的分析宁夏某医院非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测结果。方法选择2014年1月至2017年12月在宁夏医科大学总医院住院的NSCLC患者225例进行回顾性分析,用扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测EGFR基因突变情况。结果 EGFR基因总突变率50.22%(113/225),最常见突变位点为19外显子19-del及21外显子L858R,突变率分别为21.33%及17.78%,20外显子T790M耐药突变率及20-Ins插入突变(非敏感突变)的突变率分别为3.56%及1.33%;EGFR各外显子双突变共10例;EGFR基因突变率在性别、年龄、民族、季节、标本类型之间差异无统计学意义(P>0.05),在年份、病理类型之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ARMS-PCR可有效应用于临床病理石蜡标本基因突变检测,EGFR基因在19和21外显子存在较高的突变率,其突变亚型能指导小分子表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)的肿瘤靶向治疗。     

表皮生长因子受体基因主要外显子突变与肺腺癌临床病理特征的关系

目的探讨肺腺癌患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)基因主要外显子突变与临床病理特征的关系。方法 EGFR基因突变的肺腺癌患者172例,提取DNA后采用二代测序法检测EGFR基因外显子突变,分析主要外显子突变与临床特征的关系。结果 172例中,EGFR基因第19外显子突变75例(43.6%),第21外显子突变77例(44.8%),第20外显子突变10例(5.8%),第18外显子突变4例(2.3%),第18+20外显子突变1例(0.6%),第19+21外显子突变1例(0.6%),第20+21外显子突变1例(0.6%),第21+25外显子突变2例(1.2%),第12+21外显子突变1例(0.6%)。吸烟者EGFR基因第19外显子突变率(70.8%)高于第21外显子(29.2%),不吸烟者EGFR基因第19外显子突变率(45.3%)低于第21外显子(54.7%)(P0.05);AJCC分期Ⅰ期患者第19外显子突变率(43.1%)低于第21外显子(56.9%),ⅢA期患者第19外显子突变率(70.8%)高于第21外显子(29.1%)(P0.05)。结论 EGFR基因突变的肺腺癌患者以第19、21外显子突变较常见,其突变与吸烟、肿瘤分期有关。     

表皮生长因子受体基因在非小细胞肺癌中的突变情况及蛋白表达情况

目的本研究旨在探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的情况,分析EGFR蛋白表达情况对吉非替尼治疗的指导意义。方法收集140例非小细胞肺癌患者新鲜组织,采用荧光定量PCR法检测EGFR基因突变的状态;同时采用免疫组化SP法检测EGFR蛋白的表达。结果 140例患者中,46例患者发生了EGFR基因突变,其基因突变率为33%,主要发生在19号外显子(20例,43.5%)和21号外显子(23例,50.0%)。腺癌突变发生率为50.6%,腺鳞癌突变发生率为87.5%,鳞癌突变发生率为2.5%,大细胞癌突变发生率为5.3%(P=0.000),无吸烟史患者突变率为50%,有吸烟史患者的突变率为20.0%(P=0.005),女性患者突变率为50.0%,男性患者突变率为23.3%(P=0.001)。EGFR蛋白表达阳性组患者的中位无疾病进展生存时间为9个月(95%CI:7.3¹0.6个月),EGFR蛋白表达阴性组患者的中位无疾病进展生存时间为5个月(95%CI:3.510.6个月),EGFR蛋白表达阴性组患者的中位无疾病进展生存时间为5个月(95%CI:3.5⁶.4个月)。结论 EGFR基因突变和EGFR蛋白表达情况联合检测对于筛选EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗敏感人群有帮助,并且也能够帮助预测吉非替尼对于晚期NSCLC的疗效及预后。     

非小细胞肺癌组织EGFR/ALK/ROS1基因联合检测的临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR),间变性淋巴瘤激酶(ALK)和肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶(ROS1)三种基因突变联合检测的临床意义。方法 收集2017年1月～2018年7月患者NSCLC组织标本146例,采用过柱法提取DNA和RNA,突变检测采用RT-PCR法和扩增阻滞突变系统(ARMS)法。结果 EGFR/ALK/ROS1三联检的突变频率为41.8%(61/146),明显高于单基因检测突变率:EGFR(33.6%,49/146),ALK(6.8%,10/146)和ROS1(2.7%,4/146)。EGFR的不同突变类型的检出率如下:19Del 52.9%(27/51),L858R 41.2%(21/51),G719X,L861Q 5.9%(3/51); 其中还检出四例双突变标本:19Del+ L858R(1例),19Del+G719X,L861Q(1例),ALK+19Del(1例),ROS1+L858R(1例)。EGFR/ALK/ROS1阳性标本中女性(56.7%,30/53)明显高于男性(33.3%,31/93),两者比较差异有统计学意义(χ²=7.516,P=0.006),肺腺癌(47.9%,58/121)明显高于鳞癌(4.8%,1/21),差异具有统计学意义(χ²=13.733,P=0.000)。不同来源组织突变检出率为:手术切除肿瘤组织标本41.0%(32/78),细针穿刺活检及支气管镜刷检细胞学等标本43.4%(23/53),胸腔积液标本40.0%(6/15),三者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 在NSCLC基因突变中:EGFR/ALK/ROS1三联检的突变频率明显高于EGFR,ALK和ROS1单基因检测。EGFR常见突变基因为19Ex Del和21Ex L858R。女性突变率明显高于男性。EGFR/ALK/ROS1的联合检测可一次获得更多基因突变信息,为靶向用药提供更多选择,尤其是对于临床稀有标本意义更大。     

酶切富集联合DHPLC检测肿瘤患者外周血EGFR和KRAS基因突变及其临床应用

目的 建立一种REDE-DHPLC检测外周血肿瘤游离核酸EGFR、KRAS基因突变的方法,并探讨其临床应用价值.方法 采用限制性内切酶Mse Ⅰ、Msc Ⅰ、BstN Ⅰ和BglⅠ分别切断EGFR基因第19、21号外显子和KRAS基因第12、13号密码子的野生型片段以富集突变片段,建立检测血浆EGFR和KRAS基因突变的REDE-DHPLC法,并采用50%、10%、5%、1%和0.1%稀释度的质粒标准品评价REDE-DHPLC法和传统DHPLC法的检测灵敏度.然后,采用REDE-DHPLC法检测120例NSCLC和120例结直肠癌患者血浆和石蜡组织标本中的EGFR和KRAS基因突变.同时,用传统DHPLC法和测序法进行平行检测,以评价REDE-DHPLC法检测NSCLC和结直肠癌患者血浆中2个基因突变的诊断效能.结果 REDE-DHPLC法对EGFR和KRAS基因4个突变位点检测的灵敏度均达0.1%,传统DHPLC法检测灵敏度均为1.0%,REDE-DHPLC法对含0.1%突变的质粒标准品重复2～3次检测均为阳性.REDE-DHPLC法、传统DHPLC法和测序法检测120例NSCLC患者血浆EGFR基因总突变率分别为27.5%、16.7%和12.5%,检测120例结直肠癌患者血浆KRAS基因总突变率分别为38.3%、25.8%和16.7%.REDE-DHPLC法检测EGFR和KRAS基因总突变率均高于传统DHPLC法(x2值分别为4.092、4.301,P均＜0.05)和测序法(x2值分别为8.438、14.127,P均＜0.05);将REDE-DHPLC法检测EGFR和KRAS基因突变与传统DHPLC法相比,敏感度均为100%(20/20,31/31),特异度分别为87.0%(87/100)和83.2%(74/89);与测序法相比,敏感度均为100%(15/15,20/20),特异度分别为82.9%(87/105)和74.0%(74/100).REDE-DHPLC法与传统DHPLC法检测EGFR、KRAS基因突变的符合率分别为89.2%(107/120,Kappa=0.690,P＜0.05)和87.5%(105/120,Kappa=0.718,P＜0.05).REDE-DHPLC检测血浆与组织标本中EGFR和KRAS基因总突变符合率分别为91.7%(33/36,Kappa=0.939,P＜0.05)和90.2%(46/51,Kappa=0.914,P＜0.05).结论 REDE-DHPLC法灵敏度和特异性高,结果易判读,且可有效避免纯合点突变漏检,有望成为临床实验室外周血EGFR和KRAS基因突变检测的推广方法.

Abstract：

Objective To establish a REDE-DHPLC method for detecting the EGFR and KRAS mutations in plasma DNA from tumor patients, and investigate its clinical significance. Methods Restriction endonucleases Mse Ⅰ , Msc Ⅰ , BstN Ⅰ and Bgl Ⅰ were used to digest the wild type fragments of exon 19,exon 21 of EGFR gene and coden 12, 13 of KRAS gene for enriching the mutation fragments, and REDE-DHPLC method was established to detect EGFR and KRAS mutations. The sensitivities of REDE-DHPLC and conventional DHPLC were analyzed by using a series of plasmids containing 50%, 10%, 5%, 1% and 0. 1% mutation genes. Then, Plasma samples and paraffin-embedded tissue samples of 120 NSCLC patients and 120 colorectal cancer patients were detected by REDE-DHPLC. Compared with conventional DHPLC and sequencing, the diagnostic efficiency of REDE-DHPLC method was evaluated by detecting the mutation status of 2 genes in plasma of NSCLC and colorectal cancer patients. Results The sensitivity values of REDE-DHPLC and conventional DHPLC for detecting mutations in 4 loci were 0. 1% and 1%respectively. Plasmid DNA containing 0.1% mutation gene was detected to be positive continually for 2 to 3 times by REDE-DHPLC. EGFR mutation rates of 120 plasma from NSCLC patients detected by REDE-DHPLC, conventional DHPLC and sequencing methods were 27. 5%, 16. 7% and 12.5% respectively, and KRAS mutation rates of 120 plasma from colorectal cancer patients were 38. 3%, 25. 8% and 16. 7%,respectively. The positive rates of EGFR and KRAS mutation detected by REDE-DHPLC were significantly higher than conventional DHPLC(x2 = 4. 092, 4. 301, all P ＜ 0. 05 ) and sequencing method (x2= 8. 438,14. 127,all P ＜ 0. 05 ). In comparison with conventional DHPLC, the sensitivities of REDE-DHPLC for detecting EGFR and KRAS mutation were 100% (20/20,31/31), the specificities were 87. 0% (87/100)and 83. 2% (74/89). In comparison with sequencing method, the sensitivities of REDE-DHPLC were 100%( 15/15,20/20), the specificities were 82.9% (87/105)and 74. 0% (74/100). The coincidence rate of the two methods for detecting EGFR and KRAS mutation were 89. 2% ( 107/120, Kappa = 0. 690, P ＜ 0. 05 ) and 87.5% ( 105/120, Kappa= 0. 718, P ＜ 0. 05 ). The Consistency of EGFR and KRAS mutation status in plasma and tissues detected by REDE-DHPLC were 91.7% (33/36, Kappa =0. 939,P ＜0. 05)and 90. 2 %(46/51, Kappa = 0. 914, P ＜ 0. 05 ), respectively. Conclusions The REDE-DHPLC method is highly sensitive and specific for detecting EGFR and KRAS mutations in plasma DNA from tumor patients. The results are easy to be interpreted without missing homozygous point mutation, which indicate that the detection of EGFR and KRAS mutations in plasma DNA by REDE-DHPLC could therefore extend to be usedin clinical laboratory.     

肝门部胆管癌患者癌组织中淋巴增强因子1的表达及P53蛋白突变的临床意义

目的分析淋巴增强因子1(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)与P53蛋白在肝门部胆管癌组织中的表达及临床意义。方法回顾性分析2010年3月至2017年12月唐山市人民医院就诊的50例肝门部胆管癌患者的临床资料,采用免疫组织化学方法检测P53蛋白突变情况,同时检测LEF1蛋白在胆管癌癌组织及癌旁正常组织中的表达,分析LEF1的表达情况及与临床病理参数的相关性,同时探讨P53蛋白突变情况与LEF1蛋白表达的相关性及与患者预后的关系。结果LEF1蛋白在癌组织的阳性表达率为62.00%(31/50),高于癌旁正常组织的阳性表达率36.00%(18/50),两者比较差异有统计学意义(χ^(2)=6.763,P=0.016);P53蛋白突变型的胆管癌患者28例,野生型22例,在P53蛋白突变型的患者中LEF1阳性率为75.00%(21/28),明显高于P53野生型组(45.45%,10/22),两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=4.565,P=0.03)。LEF1表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移以及P53蛋白突变有关(P均<0.05),LEF-1的表达与P53蛋白突变表达呈正相关(r=0.295,P=0.042)。P53蛋白突变型患者1年累计生存率明显低于P53蛋白野生型患者(60%与81%,P=0.042),LEF1阳性表达患者的1年累计生存率亦明显低于阴性表达患者(53%与82%,P=0.018)。结论LEF-1在肝门部胆管癌组织中高表达,且高表达患者的预后较差。P53蛋白突变的肝门部胆管癌患者LEF-1阳性表达增高,且P53蛋白突变患者预后差。     

新疆维吾尔族非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体及KRAS基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨新疆维吾尔族非小细胞肺癌（NSCLC）患者组织中表皮生长因子受体（EGFR）及KRAS基因突变与临床病理特征的关系。方法应用探针扩增阻滞突变系统（ARMS）检测50例NSCLC组织中EGFR基因第18、19、20和21外显子及KRAS基因12、13密码子上7种热点体细胞的突变情况,分析EGFR及KRAS基因突变与维吾尔族NSCLC患者临床病理特征之间的相关性。结果50例标本中,EGFR总检出率为12．0％,其中4例为19外显子缺失突变,2例为21外显子L858R点突变;KRAS总检出率为10％,均位于12密码子Glyl2Ala突变;无1例发生EGFR与KRAS同时突变。腺癌、鳞癌、大细胞癌EGFR及KRAS基因突变检出率分别为27．8％、3．5％、0％和22．2％、3．5％、0％。腺癌患者EGFR基因突变率（27．8％）明显高于非腺癌者（3．1％）,差异有统计学意义。腺癌与非腺癌患者KRAS基因突变比较,差异有统计学意义。维吾尔族患者EGFR及KRAS基因突变与年龄、性别、吸烟状况、TNM分期及ECOG评分均无关。结论与汉族人群相比,新疆维吾尔族NSCLC患者EGFR突变率较低,KRAS突变率较高,类似于欧美高加索人群的突变特点。     

表皮生长因子受体基因突变与肺腺癌亚型关系的研究

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变类型与肺腺癌亚型的相关性。方法收集2011~2015年该院3 028例非小细胞肺腺癌(NSCLC)患者的肿瘤组织,提取DNA后采用突变阻滞扩增系统(ARMS)检测EGFR基因突变。结果 3 028例NSCLC患者标本中,EGFR基因突变率为39.7%,其中第19号外显子缺失突变543例,第21号外显子L858R点突变535例,共占89.8%;新分类中浸润前病变与微浸润性腺癌、浸润性腺癌的EGFR基因突变比较,差异有统计学意义(P0.05);中分化肺腺癌有较高的EGFR突变率,不同分化程度的EGFR突变率比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论新分类表现出与分子诊断的相关性,不同亚型EGFR突变率有差异,EGFR基因突变与腺癌组织分化程度存在一定的相关性。     

高通量测序在非小细胞肺癌基因突变研究中的应用

目的对非小细胞肺癌(NSCLC)精准化诊疗相关的28种肿瘤驱动基因进行高通量测序,分析多基因突变与疾病临床特征的关系。方法收集重庆大学附属肿瘤医院2017年1月至2018年10月396例NSCLC患者标本,对EGFR、ALK、ROS1、KRAS、NRAS、HRAS、PIK3CA、TP53、PTEN、BRAF、HER2、RET、MET等28种基因进行高通量测序分析。结果EGFR基因突变占基因突变总检出例数的35.35%,且基因突变频率最高的前5个基因占总突变的63.89%,表现出明显的肿瘤主基因突变聚集现象。EGFR基因亚型同样呈明显的主次分布规律,其中最常见的突变亚型是19del、L858R,分别占45.00%、41.43%。EGFR基因的19del、L858R和20ins 3个亚型多为单突变,而T790M、G719X、S768I、L861Q等亚型则常表现为共突变。T790M伴随L858R突变常常是原发性突变,T790M与19del共突变则常常是获得性突变。EGFR突变标本发生其他多基因突变的检出率显著低于无EGFR突变标本,可能是因为EGFR基因突变抑制了其他基因发生突变。结论高通量测序可高效检测NSCLC患者与靶向治疗相关驱动基因的突变情况,可为研究多基因突变的内在关系及突变负荷提供有效工具,为临床医生制订NSCLC患者的精准诊疗方案提供有力支撑。     

非小细胞肺癌患者不同类型样本中表皮生长因子受体基因突变的差异研究

目的 检测238例非小细胞肺癌(NSCLC)患者不同类型样本中表皮生长因子受体(EGFR)基因的突变情况,探讨不同类型样本在EGFR基因突变中的应用价值。方法 采用扩增阻碍突变系统(ARMS)检测238例NSCLC中EGFR基因18～21外显子的突变情况,探讨不同样本类型、不同性别、不同年龄、不同病理分型和不同临床分期的EGFR突变频率的差异及临床意义。结果 238例NSCLC患者EGFR总的突变率为44.5%(106/238),其中组织、血浆和胸腔积液样本分别为105例,115例和18例,其突变率分别为52.4%(55/105),34.8%(40/115)和61.1%(11/18),与组织样本相比,血浆样本的EGFR突变检出率明显低于组织样本,差异具有统计学意义(χ2=6.93,P<0.05),但组织与胸腔积液样本相比其检出率差异无统计学意义(χ2=0.471,P>0.05)。女性NSCLC患者的EGFR突变的检出率明显高于男性患者,差异有统计学意义(55.3% vs 36.3%,χ2=8.58,P<0.01)。>65岁患者与≤65岁患者的突变检出率差异无统计学意义(44.4% vs 44.6%,χ2=0,P>0.05)。肺腺癌的EGFR突变检出率明显高于其他类型的NSCLC,差异有统计学意义(47.7% vs 29.3%,χ2=4.68,P<0.05)。临床I～II期患者的EGFR突变检出率与III～IV期的相比差异无统计学意义(35.0% vs 45.7%,χ2=0.79,P>0.05)。结论 组织样本EGFR基因突变的检出率与胸腔积液样本相比无统计学差异,但明显高于血浆样本,提示临床选择送检的样本类型时,可优先选择组织和胸腔积液样本。EGFR基因突变的检出率与性别和肿瘤的病理类型相关。