组蛋白去乙酰化酶抑制剂Chidamide抑制C2C12骨骼肌细胞分化及其机制

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达苯胺（Chidamide）对C2C12小鼠骨骼肌细胞分化作用及其分子机制。方法:CCK-8（cellcountingKit-8）法检测0、0.5、1、2、4μmol/LChidamide处理后C2C12细胞的活力;将C2C12骨骼肌细胞分为对照组（control）和Chidamide组,Western印迹检测Chidamide处理后组蛋白H3乙酰化（Pan-acetylH3）水平,细胞免疫荧光染色肌管细胞分化成熟标志蛋白肌球蛋白重链（MyHC）,检测肌细胞分化,Western印迹和qPCR检测MyHC、成肌分化抗原（MyoD）、肌细胞生成素（MyoG）的表达及肌原纤维Ⅰ型（Myh7）、Ⅱa型（Myh2）、Ⅱb型（Myh4）和Ⅱx型（Myh1）的表达。结果:0、0.5、1、2、4μmol/L的Chidamide均不影响细胞活力。Chidamide升高Pan-acetylH3蛋白水平（t=3.22,P<0.05）。细胞免疫荧光结果显示,与对照组相比,Chidamide处理后肌细胞融合受损,分化程度降低。Western印迹和qPCR结果显示,与对照组相比,Chidamide下调MyHC、MyoD和MyoG蛋白水平（t=5.71、6.05、7.37,均P<0.01）和mRNA水平（t=26.87、5.81、4.86,均P<0.01）;降低Myh7蛋白（t=3.93,P<0.01）和mRNA水平（t=4.85,P<0.01）;降低Myh1、Myh2蛋白（t=14.13、5.05,均P<0.01）和mRNA水平（t=15.48、16.82,均P<0.001）,但不影响Myh4的蛋白（t=2.19,P>0.05）和mRNA水平（t=1.50,P>0.05）。结论:Chidamide可能通过下调MyoD和MyoG的表达抑制C2C12骨骼肌细胞分化,且主要抑制Ⅰ型、Ⅱa和Ⅱx型肌原纤维,不影响Ⅱb型肌原纤维。     

达格列净促进小鼠骨骼肌细胞系C2C12分化的作用及机制的研究

目的 探讨达格列净(DAPA)在促进骨骼肌细胞分化中的作用及机制.方法 将小鼠成肌细胞系C2C12分为未分化组以及分化组(DAPA 0、5、10、50μmol/L).使用含2％马血清分化培养基诱导C2C12细胞分化,观察肌管形成情况,计算细胞分化指数,测定肌酸激酶(CK)活性.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测生肌决定因子1(MyoD)、生肌素(Myogenin)、肌球蛋白重链(MyHC)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及p-AMPK mRNA表达水平,Western blot检测MyoD、Myogenin、MyHC、AMPK及p-AMPK蛋白表达水平.结果 随DAPA浓度增加,C2C12细胞分化指数明显增加,CK活性也明显增加;但DAPA 50μmol/L组C2C12细胞分化指数、CK活性与DAPA 10μmol/L组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C2C12细胞分化过程中DAPA(10μmol/L)使MyoD、Myogenin、MyHC在mRNA和蛋白水平表达均明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05).DAPA促进C2C12细胞AMPK磷酸化,而AMPK抑制剂——Compound C可阻断DAPA对C2C12细胞的促分化作用.结论 DAPA可通过激活C2C12细胞AMPK活性,促进细胞分化.     

不同生长基质对骨骼肌成肌干细胞分化融合的影响及初步分析

目的探讨骨骼肌成肌干细胞C2C12在体外分化为肌管的最佳生长条件。方法把C2C12细胞接种于基质胶（matrigel）、I型胶原（collagenI）、多聚赖氨酸（PLL）预包被的24孔板,观察细胞生长情况并刺激分化5天后进行免疫荧光染色,分别计算肌球蛋白（myosin）阳性肌管的融合率。结果基质胶组和多聚赖氨酸组肌管融合率明显高于I型胶原组（P〈0．01）,但是多聚赖氨酸组肌管相对较小且多核肌管数（≥3个核）相对较少。结论在3种基质中,基质胶是促进C2C12细胞分化融合的最佳基质,对于C2C12成肌提供了可靠保证。     

二甲双胍联合间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注后内质网应激的影响

目的:探究二甲双胍联合间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤后内质网应激的影响。方法:10周龄SPF级健康KM小鼠,体重25~28 g,采用随机数字表法将100只小鼠分为5组：假手术组、局灶性脑缺血组（I/R组）、间歇性禁食组（IF组）、二甲双胍组（Met组）、二甲双胍+间歇性禁食组（Met+IF组）,每组20只。IF组：每...     

脓毒症通过抑制AKT/GSK3β磷酸化导致骨骼肌细胞膜nAChRs聚集障碍

目的 探究蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）介导的信号通路在脓毒症导致骨骼肌细胞膜上烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）聚集障碍中的作用。方法 小鼠源性C2C12肌原细胞经2%马血清诱导分化为肌管后随机分为4组：Sham组：假手术小鼠血清处理;Sepsis组：脓毒症小鼠血清处理;Sepsis+D组：脓毒症小鼠血清和二甲基亚砜（DMSO）处理;Sepsis+SB组：脓毒症小鼠血清和GSK3β抑制剂SB216763处理,各组在作相应处理前均加入Agrin蛋白诱导nAChRs聚集。血清处理 5.5 h后采用 Alexa Fluor 594-conjugated α-bungarotoxin（α-BTX）标记肌管膜上 nAChRs聚集簇,采用 Western blotting检测AKT、磷酸化AKT（p-AKT）、GSK3β、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）、细胞质连接蛋白相关蛋白2（CLASP2）的表达水平,采用免疫共沉淀（Co-IP）检测磷酸化CLASP2（p-CLASP2）以及CLASP2与微管蛋白α-tubulin的结合水平。结果 与Sham组相比,Sepsis 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均降低,p-AKT、p-GSK3β水平下降,p-CLASP2 水平升高,CLASP2 与 α-tubulin 的结合减少;与 Sepsis+D 组相比,Sepsis+SB 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均增加,p-CLASP2水平降低,CLASP2与α-tubulin的结合水平增加。结论 脓毒症小鼠血清通过抑制Akt/GSK3β磷酸化导致下游信号分子CLASP2与α-tubulin结合减少,引起C2C12肌管膜上nAChRs聚集障碍。     

二甲双胍抑制酸性环境下的调节性T细胞增殖及功能

目的 探讨二甲双胍对酸性环境下的调节性T细胞（Treg）的调控及二甲双胍的抗肿瘤作用。 方法 经磁珠分选得到CD4+CD25+ Treg细胞。在pH 7.4或pH 6.7环境加入二甲双胍干预的条件下,培养Treg或T细胞（Tcon）24~72 h后,采用流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及Foxp3表达情况,采用Real-time PCR检测糖代谢相关基因水平。动物实验中,将32只C57BL/6雄性小鼠单次皮下注射RM-1细胞建立小鼠前列腺癌模型,随机分为PBS对照组、二甲双胍治疗组、疫苗治疗组及联合治疗组（各组n=8）。于接种后第4天开始,按100 mg· kg-1· d-1给予二甲双胍治疗组及联合治疗组小鼠腹腔注射二甲双胍,给予疫苗治疗组及联合治疗组小鼠每4 d一次肌注疫苗。PBS注射作为对照。连续监测肿瘤大小,在植瘤后第25天处死小鼠获取肿瘤及血液样本。采用流式细胞术检测瘤内及外周血内CD4+、CD8+、CD4+Foxp3+细胞亚群的变化。 结果 较中性缓冲条件,酸性环境下Treg细胞活性增强（P<0.05）,而Tcon细胞增殖受到抑制（P<0.001）。QPCR结果显示,酸性环境较正常酸碱环境下,Treg细胞OXPHOS相关基因pgc1a（P<0.001）及cox5b（P<0.01）水平增高,而Tcon细胞内相关基因水平变化不显著。酸性环境下Treg细胞凋亡显著减少（P<0.01）、Foxp3+细胞比例增加（P<0.001）、胞内pH值偏碱性（P<0.001）,加入二甲双胍,逆转了Treg细胞的酸性耐受。但是,二甲双胍对Tcon细胞影响不显著。动物实验中,二甲双胍（P<0.05）或疫苗（P<0.01）单独治疗均可减小肿瘤体积,而联合治疗组肿瘤体积减小最多（P<0.001）。二甲双胍单独治疗对肿瘤内CD4+细胞、CD8+细胞影响不明显,但可显著降低CD4+Foxp3+细胞比例（P<0.05）,而疫苗单独治疗显著提高肿瘤内CD4+细胞、CD8+细胞（P<0.001）,但CD4+Foxp3+细胞也升高（P<0.05）。联合治疗组肿瘤内CD4+细胞、CD8+细胞增高最多（P<0.01）,CD4+Foxp3+细胞比例较疫苗单独治疗组下降（P<0.01）。结论 二甲双胍抑制酸性环境下的调节性T细胞增殖及功能,并且在体内通过减少Treg细胞比例提高肿瘤疫苗效果,发挥抗肿瘤功能。     

热休克蛋白70对骨骼肌细胞纤维类型分化的影响

目的：探讨高表达热休克蛋白70（heat shock protein 70,Hsp70）对骨骼肌细胞（C2C12细胞）纤维类型分化的影响。方法：通过构建重组pTRE2 hyg-Hsp70质粒稳定转染C2 C12细胞系,建立Hsp70高表达的C2C12细胞系。经过诱导分化形成骨骼肌纤维,观察不同时间点（0、3、7 d）C2C12细胞的分化情况,并检测骨骼肌类型标志肌球蛋白重链（ myosin heavy chain ,MHC）的表达情况。结果：与对照组相比,高表达Hsp70的C2C12细胞系分化后的3、7 d,MHCⅠmRNA及蛋白的表达明显增高（P＜0．05）,而在分化后7 d,MHCⅡb mRNA及蛋白的表达明显下降（ P＜0．05）。结论：高表达Hsp70的骨骼肌细胞C2 C12可以诱导MHCⅠ的表达,促进骨骼肌细胞向Ⅰ型肌纤维转化。     

二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及机制研究

目的 探讨二甲双胍预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤模型的影响及可能的机制。方法 健康清洁级成年雄性SD大鼠体重220~250g,共30只,采用数字表法将其随机分为3组（n=10）：假手术组（Sham组）,缺血再灌注组（I/R组）和二甲双胍组（metformin+I/R组）。metformin+I/R组在建立I/R模型前给予二甲双胍0.125mg/（kg·d）腹腔注射,共14天,Sham组和I/R组给予等容量生理盐水连续14天。给药结束后I/R组和metformin+I/R组采用切除右肾、夹闭左肾动静脉45min后恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注模型,Sham组切除右肾、不夹闭左肾动静脉。分别于再灌注24h时抽取下腔静脉血测定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）浓度;然后处死大鼠取肾,光镜下观察肾组织形态学变化,免疫组化法测定Bcl-2、Bax、caspase-3表达,并行Tunel染色评估肾小管上皮细胞凋亡程度。结果 跟Sham组比较,I/R和metformin+I/R组的BUN、Cr均明显升高;同时,相比I/R组,metformin+I/R组的BUN和Cr均明显降低,且差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检测结果显示,跟Sham组比较,I/R组和metformin+I/R组Bcl-2、Bax、caspase-3表达明显增高;跟I/R组比较,metformin+I/R组Bax、caspase-3表达明显降低,同时Bcl-2的表达明显强于I/R组。Tunel结果显示,相比Sham组,I/R和metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显增多;同时,metformin+I/R组肾小管上皮细胞凋亡数目明显少于I/R组,且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 二甲双胍预处理能改善大鼠肾缺血再灌注损伤过程中肾功能损害,其机制可能与抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。     

二甲双胍通过调控PARP-1活性对Ⅱ型糖尿病肾脏的保护作用

  目的  研究二甲双胍通过调控多聚（ADP-核糖）聚合酶1（PARP-1）的活性，对Ⅱ型糖尿病肾脏的保护作用及其机制。  方法  Wistar大鼠分为正常组（n = 12），DN组（n = 12），DN+DPQ组（n = 12），DN+二甲双胍组（n = 12）以及DN+二甲双胍+DPQ组（n = 12）。建模后检测各组大鼠空腹血糖含量，尿素氮含量，肌酐含量以及尿蛋白浓度等生化指标，HE染色和TUNEL染色观察肾脏病理情况，Western blot 检测PARP-1，iNOS，NF-κB及caspase-3的蛋白表达，ELISA检测炎性因子TNF-α及IL-1β的表达，免疫组化测定3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine，3-NT）的表达。  结果  （1）3组治疗组大鼠的各项生化指标相较于DN组均有下降，其中DN + 二甲双胍 + DPQ组大鼠生化指标改变最为明显（P < 0. 01）；（2）3组治疗组大鼠PARP-1的表达较于DN组下降，其中DN + 二甲双胍 + DPQ组的表达下降最为明显（P < 0.05）；（3）3组治疗组大鼠肾脏组织的病理变化及肾脏细胞的凋亡较于DN组减缓，其中DN + 二甲双胍 + DPQ组的改善最为明显；（4）3组治疗组大鼠炎性因子的表达以及NF-kB，iNOS及3-NT的表达较于DN组下降，其中DN + 二甲双胍 + DPQ组的表达下降最为明显（P < 0.05）。  结论  二甲双胍通过调控PARP-1的表达，下调DN模型中NF-kB的表达，抑制NF-kB/iNOS/NO通路，抑制氧化损伤，减轻炎症反应，从而起到在糖尿病导致的高糖环境下，对肾脏的保护作用。     

瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍通过调控葡萄糖转运蛋白4表达发挥对糖尿病大鼠肾脏的保护作用研究

背景 瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍对糖尿病肾损伤具有保护作用,然而其机制尚不十分明确。 目的 探讨瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍在链脲佐菌素（STZ）诱导的2型糖尿病（T2DM）大鼠肾损伤中的保护作用及机制。 方法 于2021年7—10月将40只清洁级Wistar大鼠随机分为对照组（C组）、二甲双胍组（M组）、二甲双胍+瑞舒伐他汀钙低剂量组（M+RL组）和二甲双胍+瑞舒伐他汀钙高剂量组（M+RH组）,每组各10只。M组、M+RL组、M+RH组大鼠腹腔注射STZ,建立T2DM模型。各组药物灌胃：C组：10 mg·kg-1·d-1 0.9%氯化钠溶液;M组：二甲双胍（200 mg·kg-1·d-1）;M+RL组：二甲双胍（200 mg·kg-1·d-1）混悬液+瑞舒伐他汀钙（0.42 mg·kg-1·d-1）;M+RH组：二甲双胍（200 mg·kg-1·d-1）混悬液+瑞舒伐他汀钙（0.83 mg·kg-1·d-1）。干预6周后处死大鼠,并留取血液及肾脏组织标本。以苏木素-伊红（HE）染色、高碘酸-无色品红（PAS）染色、Masson染色观察各组大鼠肾组织损伤程度;以实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测各组大鼠肾脏组织葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA的表达情况;以Western-blotting法检测各组大鼠肾脏组织GLUT4蛋白的表达情况。 结果 与C组相比,M组、M+RL组、M+RH组大鼠肾小球结构均出现明显损伤,伴有炎性细胞浸润及间质纤维化。M组、M+RL组、M+RH组大鼠肾脏组织GLUT4 mRNA表达水平均低于C组,M组、M+RL组大鼠肾脏组织GLUT4蛋白表达水平均低于C组,M+RL组、M+RH组大鼠肾脏组织GLUT4 mRNA、GLUT4蛋白表达水平均高于M组,M+RH组大鼠肾脏组织GLUT4 mRNA、GLUT4蛋白表达水平高于M+RL组（P<0.05）。 结论 瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍可减轻T2DM大鼠肾小球及肾小管炎性细胞浸润,缓解肾小球基底膜增厚、肾小管空泡变性及肾间质纤维化进程,增加GLUT4 mRNA与GLUT4蛋白表达,且高剂量瑞舒伐他汀钙效果优于低剂量瑞舒伐他汀钙。提示瑞舒伐他汀钙联合二甲双胍可能通过调控GLUT4 mRNA与蛋白的表达,实现对T2DM大鼠肾脏的保护作用,其肾脏保护作用可随瑞舒伐他汀钙剂量增加而增强。     

Axin1调节骨骼肌GLUT4蛋白表达的作用研究

目的：探讨体轴发育抑制因子（Axin1）调节骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达的作用及其机制。方法：利用RNAi干扰的Axin1腺病毒（Ad-siAxin1）感染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低Axin1,荧光显微镜和MTS实验明确Ad-siAxin1最佳感染浓度和时间。分别用携带绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-GFP）、Ad-siAxin1、载体质粒（vector）和Axin1质粒转染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低或过表达Axin1蛋白,Western印迹检测Axin1、端锚聚合酶蛋白（TNKS）和GLUT4蛋白水平。结果：荧光显微镜和MTS实验结果显示,在C2C12小鼠骨骼肌细胞中Ad-siAxin1作用的最佳浓度和时间分别为160μL和48 h。Western印迹结果显示,与Ad-GFP组相比,Ad-siAxin1组中Axin1蛋白降低（t=6.746,P<0.01）。Ad-siAxin1组TNKS蛋白水平降低（t=4.019,P<0.05）,GLUT4蛋白水平下调（t=3.248,P<0.05）。与vector组相比,转染Axin1质粒后,Axin1蛋白水平上...     

重症肺炎肺泡灌洗液miR-127-5p、miR-3686、sTREM-1的表达及与病情、预后的关系

目的:探讨重症肺炎（SP）肺泡灌洗液微小RNA-127-5p（miR-127-5p）、微小RNA-3686（miR-3686）、可溶性髓系细胞触发受体-1（sTREM-1）表达及与病情、预后关系。方法:选取2017年3月—2019年8月68例SP患者为观察组，同期68例肺炎患者为对照组。比较两组、观察组不同预后（28 d重症肺炎全因死亡、28 d生存）患者肺泡灌洗液miR-127-5p、miR-3686、sTREM-1表达，肺泡灌洗液各指标不同表达（高表达、低表达）SP患者急性生理和慢性健康评分Ⅱ（APACHEⅡ）、临床肺部感染（CPIS）评分，应用Pearson相关分析探讨肺泡灌洗液各指标表达与APACHEⅡ、CPIS评分的关系，绘制受试者工作特征（ROC）曲线及ROC下面积（AUC）探究肺泡灌洗液各指标单一、联合检测对SP重症肺炎全因死亡的预测价值，多元Logistic回归分析SP重症肺炎全因死亡的影响因素。结果:观察组肺泡灌洗液miR-127-5p水平（0.58±0.26）低于对照组（1.23±0.42）（t=10.851，P<0.001），miR-3686水平（1.98±0.46）高于对照组（0.96±0.31）（t=15.163，P<0.001），sTREM-1水平（195.37±48.62）ng/mL高于对照组（26.35±8.20）ng/mL（t=28.268，P<0.001）。肺泡灌洗液miR-127-5p高表达SP患者APACHEⅡ、CPIS评分均低于低表达患者，肺泡灌洗液miR-3686或sTREM-1高表达SP患者APACHEⅡ、CPIS评分均高于低表达患者（均P＜0.05）。肺泡灌洗液miR-127-5p表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈负相关（r=-0.735，P<0.001；r=-0.727，P<0.001），miR-3686表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈正相关（r=0.569，P<0.001；r=0.679，P<0.001），sTREM-1表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈正相关（r=0.694，P<0.001；r=0.667，P<0.001）。观察组28 d重症肺炎全因死亡患者肺泡灌洗液miR-127-5p表达低于生存患者，miR-3686、sTREM-1表达高于生存患者（均P＜0.05）。预测SP重症肺炎全因死亡的AUC:miR-127-5p为0.757，miR-3686为0.782，sTREM-1为0.816，miR-127-5p+miR-3686+sTREM-1为0.862（均P＜0.05）。肺泡灌洗液miR-127-5p为SP 28 d重症肺炎全因死亡的重要保护因素，肺泡灌洗液miR-3686、sTREM-1为SP 28 d重症肺炎全因死亡的重要危险因素（均P＜0.05）。结论: SP患者肺泡灌洗液miR-127-5p表达降低，miR-3686、sTREM-1表达升高，与病情、预后密切相关，检测三者表达能为临床评估患者病情程度、预后情况提供参考。     

氯丙嗪对膀胱癌BT-B细胞迁移功能的影响

目的:探讨盐酸氯丙嗪对膀胱癌BT-B细胞迁移功能的影响及其机制。方法:用不同浓度的氯丙嗪处理膀胱癌BT-B细胞,通过MTT、细胞划痕和Transwell迁移实验验证氯丙嗪对细胞生长和迁移功能的影响。蛋白印迹实验和RT-qPCR实验验证氯丙嗪对Yes相关蛋白1（YAP1)和Ras相关蛋白1A（RAP1A）蛋白表达水平和mRNA表达水平的影响。免疫荧光实验验证氯丙嗪对YAP1细胞亚定位的影响。质粒转染实验验证YAP1和RAP1A与上皮间质转化（EMT）的调控关系。结果:氯丙嗪可抑制膀胱癌BT-B细胞的生长（t=11.53,P<0.001;t=35.83,P<0.000 1;t=36.1,P<0.000 1;t=194.6,P<0.000 1）和迁移（t=5.80,P<0.01;t=7.43,P<0.01;t=5.13,P<0.01;t=6.61,P<0.01;t=18.51,P<0.000 1;t=19.04,P<0.000 1）;与对照组相比,氯丙嗪作用于BT-B细胞后,YAP1（t=6.12,P<0.05;t=7.64,P<0.05）和RAP1A（t=4.87,P<0.05;t=8.30,P<0.05）的蛋白表达水平和mRNA表达水平（t=21.13,P<0.001;t=40.59,P<0.001）均显著降低;与对照组相比,氯丙嗪给药处理2 h后YAP1的荧光表达明显变弱;与对照组相比,YAP1表达增加后RAP1A蛋白（t=9.05,P<0.05）和EMT相关分子N-cadherin蛋白、Slug+snail蛋白（t=7.24,P<0.05;t=5.57,P<0.05）表达均显著增加,而YAP1敲低后RAP1A蛋白（t=4.36,P<0.05）、N-cadherin蛋白和Slug+snail蛋白（t=4.50,P<0.05;t=4.49,P<0.05）表达均显著降低。结论:氯丙嗪可通过 YAP1调节RAP1A抑制膀胱癌的迁移,可能是治疗膀胱癌的一种新选择。     

锌转运体ZIP13在小鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨锌转运体ZIP13（SLC39A13）在肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法:通过结扎肝左叶和肝中叶的门静脉及肝动脉共干,建立小鼠在体肝脏缺血再灌注模型,将小鼠分组如下:（1）ZIP13fl/fl-Sham组、ZIP13fl/fl+I1R12组和ZIP13LKO+I1R12组。（2）ZIP13fl/fl-Sham组、ZIP13fl/fl+I1R24组和ZIP13LKO+I1R24组。（3）Vector-Sham组、Vector+I1R12组和ZIP13OE+I1R12组。（4）Vector-Sham组、Vector+I1R24组和ZIP13OE+I1R24组,上述每组小鼠3～4只。采用电感耦合离子发射光谱仪（ICP-OES）测量肝组织的锌含量;试剂盒检测丙氨酸转氨酶（ALT）和门冬氨酸转氨酶（AST）水平;HE染色观察病理学改变;原位末端转移酶标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡;Western印迹检测CHOP、GRP78和凋亡蛋白表达。结果:与ZIP13fl/fl小鼠相比,ZIP13LKO小鼠肝脏中ZIP13表达明显下降（t=6.26,P<0.01）,而与Vector感染对照小鼠相比,ZIP13OE小鼠肝脏ZIP13蛋白表达明显增加（t=4.17,P<0.05）。与ZIP13fl/fl-Sham组相比,ZIP13fl/fl+I1R12组血清ALT、AST水平升高（t= 11.43、13.70,均P<0.001）,ZIP13fl/fl+I1R24组小鼠肝组织锌含量明显降低（t=13.49,P<0.001）,内质网应激蛋白CHOP和GRP78表达增强（t=4.76、4.54,均P<0.05）,凋亡蛋白Cleaved Caspase9和Cleaved Caspase3表达升高（t=4.56、3.73,均P<0.05）。与相应的ZIP13fl/fl缺血再灌注组相比,ZIP13LKO+I1R12组血清ALT、AST水平进一步升高（t=2.95、3.20,均P<0.05）,ZIP13LKO+I1R24组肝组织中锌含量显著降低（t=3.29,P<0.05）,内质网应激蛋白表达上调（t=2.60、2.98,均P<0.05）,凋亡蛋白表达也明显升高（t=3.44、2.49,均P<0.05）。与相应的Vector感染缺血再灌注组相比,ZIP13OE+I1R12组血清ALT、AST水平明显下降（t=3.69、4.26,均P<0.05）,ZIP13OE+I1R24组小鼠肝组织中锌含量增加（t=3.88,P<0.05）,内质网应激蛋白表达下降（t=3.47、2.88,均P<0.05）,凋亡蛋白的表达水平也呈现降低（t=3.02、2.96,均P<0.05）。结论:肝脏缺血再灌注时,ZIP13通过维持肝脏锌稳态,减轻内质网应激和细胞凋亡。     

多囊卵巢综合征外周血中miR-132和SMAD4的表达对颗粒细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨多囊卵巢综合征（PCOS）外周血中miR-132和SMAD4的表达水平及对卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法：收集2019年5月—2021年3月接受治疗的PCOS患者（PCOS组,85例）,同时期来院就诊的月经规律的健康女性40名设为对照组。采用全自动生化分析仪检测黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雄烯二酮和卵泡刺激素（FSH）的水平,qRT-PCR检测miR-132、SMAD4 mRNA相对表达水平,分析以上指标在两组间的差异及PCOS组中miR-132和SMAD4的相关性。分别将siNC质粒、si-miR-132质粒、miR-NC质粒、SMAD4 mimic质粒和SMAD4 mimic+miR-132 mimic质粒转至KGN细胞中,MTT和流式细胞术分别检测转染细胞的增殖和凋亡。双荧光素酶报告实验检测miR-132和SMAD4靶向关系。结果：PCOS组LH、T、雄烯二酮和miR-132相对表达水平高于对照组,FSH和SMAD4 mRNA相对表达水平低于对照组（t=3.618、4.253、15.412、30.921、5.207、24.194,均P<0.05）。PCOS...     

NAMPT基因对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT) 在肾癌中的表达情况及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过TCGA在线数据库ualcan分析NAMPT在肾癌组织和正常肾组织中的表达,通过Kaplan-Meier plotter数据库分析NAMPT对肾癌预后的影响。qPCR检测NAMPT基因在肾癌细胞769P、A704、786-O及正常化肾小管上皮细胞HK2中的表达。分别设计NAMPT特异性shRNA（shNAMPT组）和对照序列（scramble组）转染肾癌细胞786-O,用NAMPT抑制剂FK866及对照试剂DMSO处理肾癌细胞786-O,分别采用CCK-8法、平板克隆实验及流式细胞术检测NAMPT对肾癌细胞786-O增殖、克隆形成及凋亡的影响,NAD+/NADH检测试剂盒检测细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的含量,Western印迹检测NAMPT的表达及干扰NAMPT对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路的影响。结果:生物信息学分析显示NAMPT在肾癌中的表达高于正常肾组织（P＜0.05）,NAMPT高表达组总生存率较低表达组明显降低（P<0.01）;肾癌细胞769P、A704、786-ONAMPT的表达均高于肾小管上皮细胞HK2（t=6.680,P=0.0026,t=14.12,P=0.001,t=13.43,P=0.002）;细胞学实验结果显示,与DMSO组相比,FK866组肾癌细胞786-O的增殖能力减弱（t=2.625,P<0.05）,克隆形成能力明显受抑制（t=5.687,P<0.01）,凋亡细胞比例增高（t=6.325,P＜0.01）,NAD+生成明显下降（t=17.62,P<0.001）。与scramble组相比,shNAMPT组肾癌细胞786-O的增殖能力减弱（t=3.959,P<0.05）,克隆形成能力明显受抑制（t=8.684,P<0.05）,凋亡细胞比例增高（t=14.05,P＜0.01）,NAD+生成明显下降（t=10.93,P<0.001）,Akt通路关键蛋白p-PI3K及p-Akt的表达明显下调（t=7.721,P＜0.01,t=14.78,P＜0.001）。结论:NAMPT在肾癌中高表达,且与患者预后差相关,干扰NAMPT的表达,可以通过减少NAD+的生成,抑制PI3K/Akt通路的激活,从而降低肾癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

机械加载通过促进髌下脂肪垫干细胞迁移及软骨分化治疗骨关节炎

目的:探究机械加载对骨关节炎小鼠髌下脂肪垫干细胞（IFP-SCs）的动员作用。方法:54只雌性C57BL/6小鼠通过随机数字表法分为对照组（Sham组,n=18）、骨关节炎组（OA组,n=18）、骨关节炎机械加载组（OAL组,n=18）。采用DMM手术建立OA模型,OAL组进行2周的机械加载治疗（条件为1 N,5 Hz,6 min/d）。HE和番红O染色评估小鼠OA模型的软骨损伤程度。免疫荧光、细胞迁移实验、Western印迹等方法检测干细胞的迁移和软骨形成能力。结果:机械加载降低了OA小鼠的国际骨关节炎研究学会（OARSI）评分（t=4.025,P<0.01）。与OA组相比,OAL组IFP-SCS的迁移能力增加（t=-5.142,P<0.001）,同时软骨中基质细胞衍生因子（SDF-1）和IFP-SCs中C-X-C趋化因子受体4（CXCR4）的表达增加（t=-4.403,P<0.01）。此外,机械加载使软骨分化中重要的转录因子SRY相关高迁移率族盒蛋白9（SOX9）上调,促进了IFP-SCs软骨分化（t=-11.170,P<0.01）。结论:机械加载通过促进IFP-SCs迁移和软骨分化,促进骨关节炎小鼠软骨修复。     

MIR-138-5p 通过靶向组蛋白去乙酰化酶调节心脏 肥大

目的:探究MIR-138-5p 对心脏肥大的影响及其机制。方法:首先构建体外心脏肥大的模型,HE 染色、α-肌动蛋白染色 和RT-PCR 方法,分别检测模型大鼠心脏的横断面积和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）处理的心肌细胞（H9c2）的表面积和心肌细胞中 MIR-138-5p mRNA 表达情况;MIR-138-5p-mimic 转染AngⅡ处理过的H9c2 细胞,α-肌动蛋白染色和Western 印迹分别检测 心肌细胞的表面积和心肌肥大标志物的蛋白表达水平;采用TargetScan 在线软件筛选miR-138-5p 的潜在靶基因,并进一步验 证。MIR-138-5p-mimic、pcDNA- HDAC4共转染AngⅡ处理过的H9c2 细胞,α-肌动蛋白染色和Western 印迹法分别检测心肌 细胞的表面积和心肌肥大标志物的蛋白表达水平。结果:相对于Sham 组,模型大鼠的心脏体积及心脏横截面均明显增大,心肌 细胞中的MIR-138-5p mRNA 表达水平明显降低（F=21.578,P<0.001）;相对于Con 组,AngⅡ组心肌细胞的表面积明显增大,且 MIR-138-5p mRNA 表达水平明显降低（F=23.790,P<0.001）。相对于AngⅡ+miR-NC 组,AngⅡ+miR-mimic 组心肌细胞的表面 积（F=8.325,P<0.01）、心肌肥大标志蛋白表达水平（F=9.532,P<0.01）和心肌细胞中HDAC4 mRNA表达水平明显降低（F=25.530, P<0.001）; 相对于MIR-138-5p-mimic+pcDNA-Con 组,MIR-138-5p- mimic+pcDNA-HDAC4 组心肌细胞的表面积明显减小 （F=10.134,P<0.01）,心肌肥大标志蛋白表达水平明显升高。结论:MIR-138-5p 通过靶向组蛋白脱乙酰基酶-8（HDAC4） 调节心脏肥大反应。