肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷可诱导小鼠自发性慢性肝纤维化

目的 探究肝细胞线粒体NDUFA13蛋白表达缺失在诱导小鼠肝脏纤维化发生中的作用及可能机制。方法 以肝脏特异性NDUFA13杂合敲除小鼠品系（NDUFA13fl/-;Alb-Cre）作为研究对象,以同窝NDUFA13fl/fl小鼠作为对照,8只/组,进行长达两年的实验观察,分别在实验早期和晚期处死小鼠获取肝组织样本。采用HE染色、Masson染色观察不同时期小鼠的肝组织病理变化及纤维化表型。Western blot检测肝组织中NDUFA13蛋白表达水平。免疫荧光分析巨噬细胞标志物F4/80与转化生长因子TGF-β1、肿瘤坏死因子TNF-α与白介素IL-1β的表达。免疫组化分析肝星型细胞活化标志物α-SMA、基质金属蛋白酶MMP-9与基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、胶原纤维Collagen-Ⅰ与Collagen-Ⅲ的表达情况。结果 HE染色、Masson染色发现4周 龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织炎症浸润明显但未出现纤维化表型;2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织严重损伤且伴大量胶原纤维产生。Western Blot结果显示2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织中NDUFA13蛋白表达水平较对照小鼠明显降低（P<0.05）。免疫荧光与免疫组化结果显示,NDUFA13fl/-小鼠肝组织中巨噬细胞F4/80聚集增多并伴随大量TGF-β1产生（P<0.05）,以及TNF-α、IL-1β等炎症因子大量分泌（P<0.05）;同时,α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ表达明显增多（P<0.05）,基质金属蛋白酶MMP-9表达降低（P<0.05）,而其抑制剂TIMP-1表达明显增加（P<0.05）。结论 肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷能够诱导小鼠自发的慢性肝纤维化病理表型,可能与巨噬细胞/炎症因子信号诱导的肝星状细胞异常活化有关。     

蓝莓对酒精性脂肪肝小鼠肝组织 HO-1表达及抗氧化能力的影响

目的：研究蓝莓对酒精性脂肪肝（AFLD）小鼠肝组织中血红素氧化酶-1（HO-1）表达水平及抗氧化能力的影响,探讨蓝莓对AFLD的保护作用及可能机制。方法：40只C57/6J小鼠随机均分为对照组、蓝莓组、蓝莓+HO-1抑制剂（锌原卟啉,ZnPPIX）组及模型组,NIAAA法建立AFLD动物模型,油红O染色法检测模型建立情况及各组小鼠肝组织病理学变化;取眼眶血检测各组小鼠血清谷丙转氨酶（ ALT）,谷草转氨酶（ AST）,甘油三脂（ TG）,胆固醇（ TC）含量;酶联免疫吸附法（ ELISA）测定各组小鼠肝组织中超氧化物歧化酶（ SOD）活性及谷胱甘肽（ GSH）、丙二醛（ mDA）的含量;Western blot法检测各组小鼠肝组织中HO-1蛋白的表达。结果：蓝莓组肝组织脂肪沉积较模型组及蓝莓+ZnPPIX组明显减少,血清中ALT、AST、TG及TC含量降低（ P<0.05）,肝组织中SOD活性和GSH含量升高（ P<0.05）,mDA含量降低（ P<0.05）;蓝莓组HO-1蛋白表达量高于蓝莓+Zn-PPIX组及模型组。结论：蓝莓可减轻AFLD,其机制可能与上调小鼠肝脏HO-1的表达,增强机体抗氧化能力有关。     

Klotho对缺血再灌注急性肾损伤的影响研究

目的探讨基因Klotho对缺血再灌注急性肾损伤的影响及可能的作用机制。方法60只BALB/c小鼠按随机数字表法分为假手术+0.9%氯化钠注射液组（Sham+veh组）、假手术+Klotho补充组（Sham+kl组）、缺血再灌注急性肾损伤+0.9%氯化钠注射液组（I/R+veh组）、缺血再灌注急性肾损伤+Klotho补充组（I/R+kl组）,每组各15只。各组小鼠再按不同的处死时相（术后第1、2、7天）随机分为D1（5只）、D2（5只）、D7（5只）3个亚组。采用双侧肾蒂夹闭法建立缺血再灌注急性肾损伤模型。Sham+veh组和Sham+kl组小鼠定位肾蒂但不夹闭,其余操作同上。Sham+kl组和I/R+kl组予再灌注后30min腹腔注射360ngKlotho蛋白注射液,Sham+veh组和I/R+veh组腹腔注射0.2ml0.9%氯化钠注射液。于造模术后第1、2、7天收集小鼠血、尿、肾脏标本。分别检测血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）值,HE染色观察肾小管损伤程度,免疫组化法观察肾脏组织炎症细胞浸润情况及Klotho表达情况,ELISA法检测血Klotho和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）水平,real-timePCR及Westernblot法分别检测肾脏组织Klotho、凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、裂解的半胱氨酸蛋白酶（cleavedCaspase）-3的mRNA及蛋白表达。结果I/R+veh组小鼠遭受缺血再灌注损伤后肾功能显著下降,肾小管上皮细胞变性、坏死,至术后第7天明显好转。与Sham+veh组比较,I/R+veh组小鼠血Klotho蛋白水平于术后第1天明显降低,至术后第7天仍未能恢复正常,肾脏组织KlothomRNA及蛋白表达水平于术后第1天同样明显降低（均P＜0.05）。I/R+veh组小鼠肾脏组织Bax/Bcl-2mRNA及蛋白、cleavedCaspase-3蛋白表达水平均于术后第1天较Sham+veh组明显升高（均P＜0.05）,CD68+细胞浸润增多。外源性补充Klotho蛋白后,I/R+kl组肾脏组织Bax/Bcl-2mRNA及蛋白、cleavedCaspase-3蛋白表达水平分别较I/R+veh组下降30%、45%、62%（均P＜0.05）,CD68+细胞浸润减少。结论缺血再灌注急性肾损伤时Klotho表达下调;外源性补充Klotho蛋白可能通过抑制细胞凋亡及炎症细胞浸润等途径发挥肾脏保护作用。     

Maresin1对肝缺血再灌注损伤的影响及机制研究

目的探讨Maresin1（MaR1）对肝缺血再灌注损伤的影响及机制。方法将24只Wistar大鼠采用随机数字表法分为假手术组（Sham组）、肝缺血再灌注损伤组（I/R组）、MaR1治疗组（I/R+MaR1组）、抗磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）抑制剂LY294002组（I/R+MaR1+LY294002组）,每组6只。I/R组、I/R+MaR1组及I/R+MaR1+LY294002组大鼠通过阻断肝左叶及中叶血流60min,再灌注6h建立肝缺血再灌注损伤模型。Sham组仅开腹和关腹,不阻断血流,I/R+MaR1组在肝缺血再灌注前1h腹腔注射4mg/kgMaR1,I/R+MaR1+LY294002组在肝缺血再灌注前30min腹腔注射LY2940020.5mg/kg,其余处理同I/R+MAR1组。检测各组小鼠肝组织病理学改变,血肝功能、炎性反应和氧化应激反应的指标。Westernblot法检测肝组织磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）蛋白表达。结果与Sham组比较,I/R组肝损伤明显,而I/R+MaR1组肝损伤明显减轻。与Sham组比较,I/R组血清中ALT、AST、乳酸脱氢酶（LDH）、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平均升高,肝组织中丙二醛（MDA）水平升高,而超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）水平均降低（均P＜0.05）。与I/R组比较,I/R+MaR1组血清中ALT、AST、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6水平均降低（均P＜0.05）,肝组织MDA水平均降低,而IL-10、SOD、CAT、GSH水平升高（均P＜0.05）。与Sham组比较,I/R组p-PI3K、p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达均升高（均P＜0.05）,而I/R+MaR1组p-PI3K、p-Akt、Nrf2、HO-1蛋白表达进一步增加（均P＜0.05）。然而,上述MaR1的治疗作用被PI3K抑制剂LY294002逆转。结论MaR1通过上调PI3K/Akt/Nrf2/HO-1通路抑制炎性反应及氧化应激反应,进而减轻肝缺血再灌注损伤。     

芪参益气滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制研究

探讨芪参益气滴丸（QS）对大鼠心肌缺血再灌注时,心肌细胞尿路上皮癌胚抗原1（UCA1）长链非编码RNA、凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法结扎SD大鼠冠状动脉左前降支,造成心肌缺血40 min后剪断结扎线,再灌注120 min,复制实验性心肌缺血再灌注模型,将36 只大鼠随机分为假手术组（只穿刺不结扎,Control 组）、缺血再灌注组（I/R 组）、QS 干预组（QS+I/R 组）,术后采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡指数,采用荧光定量聚合酶链反应分析并检测3 组大鼠心脏组织中UCA1 的表达,Western blot 检测p27 蛋白表达水平。结果QS+I/R组的细胞凋亡数与I/R 组比较,差异有统计学意义（p <0.05）;与I/R 组比较,QS+I/R 组UCA1 整体表达水平上升,而p27 蛋白减少（ p<0.05）;并且UCA1 与p27 蛋白的表达呈负相关。结论QS 能降低大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡率,其可能通过上调UCA1 水平,减少p27 蛋白表达,保护损伤的心肌细胞。     

抑肝散提取物对环境内分泌干扰物神经毒性的抑制作用

目的:考察抑肝散提取物抑制环境内分泌干扰物（EEDs）双酚A（BPA）和邻苯二甲酸（2-乙基己基）酯（DEHP）神经毒性的作用并分析其机制。方法:小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2a细胞经BPA（0.1 mmol/L）+DEHP（0.1 mmol/L）与3 mg/mL（低剂量组）和6 mg/mL（高剂量组）抑肝散乙醇/氯仿提取物共培养72 h,观察细胞凋亡和氧化损伤（活性氧簇,ROS）的变化。按照暴露剂量为25 μg/（kg·d） BPA和50 μg/（kg·d） DEHP给予初断乳雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠BPA连续灌胃暴露90 d,同时将抑肝散乙醇/氯仿提取物按300 mg/kg（低剂量组）和600 mg/kg（高剂量组）给大鼠灌胃给药,通过Y迷宫实验观察大鼠短期记忆能力（自发交替正确率）的变化。取大鼠海马组织后,检测海马组织总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、游离脂肪酸（FFAs）葡萄糖含量和线粒体膜电位（MMP）的变化,分析星形胶质细胞胶质纤维状酸性蛋白（GFAP）和巢蛋白（nestin）、caspase-3以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路活性的变化。结果:Neuro-2a细胞经BPA+DEHP暴露后,24、48、72 h细胞增殖均受到抑制（t=3.951、8.823、7.060,均P<0.05）,早期和晚期凋亡率均上调（t=14.072、6.590,均P<0.05）,抑肝散提取物可促进细胞增殖（与暴露组相比,低剂量组t=2.963、5.814、2.101,均P<0.05,高剂量组t=3.796、10.370、5.311,均P<0.05）,抑制早期和晚期细胞凋亡（与暴露组相比,低剂量组t=0.770、1.475,均P<0.05,高剂量组t=6.187、4.368,均P<0.05）。大鼠经BPA+DEHP暴露后,短期记忆能力显著下降（t=2.123,P<0.05）,其海马组织氧化应激、GFAP表达和caspase-3活性上调（t=3.634、5.043、8.914,均P<0.05）,nestin表达、线粒体膜电位、MDA、GSH、T-AOC和mTOR磷酸化水平下调（t=8.398、9.979、3.754、9.621、7.193、25.982,均P<0.05）,抑肝散提取物可缓解BPA+DEHP暴露后大鼠短期记忆能力损伤（与暴露组相比,低剂量组t=1.339,P>0.05,高剂量组t=2.293,P<0.05）以及海马组织的上述表型改变（与暴露组相比,低剂量组t=1.147、1.683、1.594、1.611、4.469、2.070、5.346、5.499、6.124,除MDA外均P<0.05,高剂量组t=2.642、3.385、3.728、4.899、8.083、3.719、4.707、5.761、12.252,均P<0.05）。结论:抑肝散提取物可通过调节氧化应激和糖代谢紊乱,抑制EEDs的神经毒性。     

PBEF对缺氧/复氧处理的非小细胞肺癌细胞生长及AQP1和ENaCα表达的影响

目的研究前B细胞克隆增强因子（PBEF）对缺氧/复氧（H/R）处理的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞生长及水通道蛋白1（AQP1）和钠通道蛋白α（ENaCα）表达的影响。方法将NSCLC A549细胞分为4组:对照组（C组）、H/R处理模型组（M组）、H/R处理+pCAGGS空载组（pCAGGS NC组）、H/R处理+pCAGGS PBEF组（pCAGGS PBEF组）;通过构建pCAGGS PBEF质粒并转染到细胞中建立H/R A549细胞培养实验模型。采用qPCR和Western blot（WB）检测PBEF的表达;采用WB检测AQP1和ENaCα的表达;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果 M组细胞凋亡率显著高于C组（P<0.05）,pCAGGS PBEF组细胞凋亡率显著高于pCAGGS NC组（P<0.05）,M组和pCAGGS NC组细胞凋亡率比较差异无统计学意义（P>0.05）。pCAGGS PBEF组细胞中AQP1和ENaCα的蛋白表达水平显着低于pCAGGS NC组（P<0.05）,而C组、M组、pCAGGS NC组3组细胞中AQP1和ENaCα的蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 PBEF过表达促进了H/R处理的NSCLC A549细胞凋亡,并抑制AQP1和ENaCα蛋白的表达,提示PBEF在低氧环境中可能具有辅助治疗作用。     

炎症促进CCl4诱导的小鼠肝细胞脂质集聚与SREBP-1-HMGCR通路活化有关

目的：探讨炎症促进四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）所致的小鼠单纯性脂肪变性进一步脂肪集聚的分子机制。方法：12只6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组（n=6）和炎症组（n=6）。2组均CCl4皮下注射2周后,再分别给予皮下注射生理盐水或酪蛋白16周,18周后处死小鼠,收集血清及肝组织标本,称量小鼠体质量及肝质量计算肝指数评估肝脏受损情况,ELISA法检测血清炎症因子白介素-6（interleukin-6,IL-6）,使用化学酶促比色法检测小鼠肝组织的脂质水平,油红O染色观察小鼠肝组织的脂质集聚情况,real-time PCR检测小鼠固醇调节元件结合蛋白1（sterol regulatory element binding proteins-1,SREBP-1）和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase,HMGCR）的基因表达水平,Western blot检测SREBP-1和HMGCR的蛋白表达水平。结果：炎症组IL-6的表达比对照组明显升高（t=8.434,P=0.000）。与对照组相比,炎症组的SREBP-1 和HMGCR基因的表达明显上调（t=10.612,P=0.000;t=12.749,P=0.000）,Western blot显示SREBP-1和 HMGCR的蛋白表达趋势与基因一致。肝脏脂质检测显示炎症组比对照组的肝脏脂质明显升高（t=6.148,P=0.000;t=7.288,P=0.000）。肝指数提示与对照组相比,炎症组的肝指数明显升高（t=8.452,P=0.000）,油红O染色显示炎症组的脂质集聚明显高于对照组。结论：炎症因子可能通过促进SREBP-1-HMGCR表达使CCl4所致的小鼠脂肪变性肝细胞胆固醇内源性合成增加,加重肝脏脂质的异常集聚。     

锌预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤的预防作用

目的：探讨锌预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤(RIRI)的预防作用,为RIRI的防治提供实验依据。方法：50只雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸锌预处理高剂量组（高锌组,60 mg•kg^-1）、硫酸锌预处理中剂量组（中锌组,30 mg•kg^-1）和硫酸锌预处理低剂量组（低锌组,15 mg•kg^-1）,每组10只。各剂量锌处理组小鼠每日灌胃给予硫酸锌1次,连续2周。模型组和假手术组给予等体积生理盐水。2周后制备RIRI模型。缺血30 min再灌注24 h后取出肾脏组织,固定、包埋,HE染色观察病理组织学表现,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测c-Fos表达。结果：病理组织学表现,模型组小鼠肾脏组织中肾皮质可见肾小管管腔扩张,内可见管型,肾小管上皮细胞空泡变性和坏死,皮髓交界处髓质损伤较重,可见充血及成片坏死区。高锌组病理改变无改善,中锌和低锌组病理组织改变较轻,小鼠肾切片可见肾小管上皮细胞部分肿胀,皮髓交界处肾小管充血、细胞坏死较少,低锌组好于中锌组。TUNEL法结果,模型组凋亡细胞较多,显著高于低锌和中锌组（P<0.05）,低锌组凋亡细胞显著低于中锌组（P<0.05）。免疫组化结果,与假手术组相比较,模型组和锌预处理组c- Fos阳性细胞率显著增加 (P<0.05);与模型组比较,中锌和低锌组c- Fos阳性细胞率显著减少(P<0.05);低锌组c-Fos阳性细胞率显著低于中锌组（P<0.05）。结论：在一定剂量范围内,硫酸锌对RIRI所导致的肾功能损害具有保护作用,其机制可能与凋亡细胞减少、c-Fos表达降低有关。     

复方保肝宁减轻小鼠肝纤维化的机制:抑制肝脏组织中的IDO1进而促进树突状细胞表型成熟

目的 观察中药复方保肝宁对肝纤维化模型小鼠的保护作用并探讨其作用机制。方法 本研究分为两部分,第1部分：按 0.6 mL/（kg·d）予以腹腔注射25% CCl4（CCl4∶橄榄油=1∶3）的方式诱导野生型小鼠建立肝纤维化病理模型,随机分为对照组、模型组、阳性对照组及保肝宁低、中、高浓度组,10只/组。造模给药8周后处死小鼠,取小鼠血清检测AST、ALT水平。另取肝组织做HE、天狼星红染色及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色并检测吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）的表达水平。流式细胞仪检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的数量和表型变化。第2部分：按3×1011 v.g/只尾静脉注射IDO1过表达腺相关病毒,取正常野生型小鼠随机分为腺相关病毒阴性对照（AAV9-NC）干预组、IDO1过表达腺相关病毒（AAV9-IDO1）干预组及高浓度保肝宁+IDO1过表达腺相关病毒联合干预组,6只/组。干预4周后,取肝组织做IDO1免疫组化染色并检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的表型变化。结果 与模型组比较,保肝宁高浓度组能有效降低肝纤维化小鼠血清中AST、ALT水平（P< 0.01）;改善肝组织病理损伤,减少肝纤维组织的形成及α-SMA和IDO1的沉淀（P<0.05）。保肝宁高浓度治疗组肝纤维化小鼠肝脏中CD11C+DCs、CD11C+CD80+DCs、CD11C+CD86+DCs、CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs细胞和CD3+T、CD3+CD4+T细胞比例与模型组相比均呈不同程度的升高（P<0.05）。高浓度保肝宁干预后可显著降低IDO1过表达腺相关病毒干预小鼠肝脏中IDO1的表达水平及上调CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs和CD3+CD4+T细胞比例（P<0.05）。结论 保肝宁对CCl4所致小鼠肝纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与降低肝组织中IDO1的表达水平继而促进肝脏中DCs表型成熟使DCs刺激T细胞增殖能力增强有关。     

氯丙嗪对膀胱癌BT-B细胞迁移功能的影响

目的:探讨盐酸氯丙嗪对膀胱癌BT-B细胞迁移功能的影响及其机制。方法:用不同浓度的氯丙嗪处理膀胱癌BT-B细胞,通过MTT、细胞划痕和Transwell迁移实验验证氯丙嗪对细胞生长和迁移功能的影响。蛋白印迹实验和RT-qPCR实验验证氯丙嗪对Yes相关蛋白1（YAP1)和Ras相关蛋白1A（RAP1A）蛋白表达水平和mRNA表达水平的影响。免疫荧光实验验证氯丙嗪对YAP1细胞亚定位的影响。质粒转染实验验证YAP1和RAP1A与上皮间质转化（EMT）的调控关系。结果:氯丙嗪可抑制膀胱癌BT-B细胞的生长（t=11.53,P<0.001;t=35.83,P<0.000 1;t=36.1,P<0.000 1;t=194.6,P<0.000 1）和迁移（t=5.80,P<0.01;t=7.43,P<0.01;t=5.13,P<0.01;t=6.61,P<0.01;t=18.51,P<0.000 1;t=19.04,P<0.000 1）;与对照组相比,氯丙嗪作用于BT-B细胞后,YAP1（t=6.12,P<0.05;t=7.64,P<0.05）和RAP1A（t=4.87,P<0.05;t=8.30,P<0.05）的蛋白表达水平和mRNA表达水平（t=21.13,P<0.001;t=40.59,P<0.001）均显著降低;与对照组相比,氯丙嗪给药处理2 h后YAP1的荧光表达明显变弱;与对照组相比,YAP1表达增加后RAP1A蛋白（t=9.05,P<0.05）和EMT相关分子N-cadherin蛋白、Slug+snail蛋白（t=7.24,P<0.05;t=5.57,P<0.05）表达均显著增加,而YAP1敲低后RAP1A蛋白（t=4.36,P<0.05）、N-cadherin蛋白和Slug+snail蛋白（t=4.50,P<0.05;t=4.49,P<0.05）表达均显著降低。结论:氯丙嗪可通过 YAP1调节RAP1A抑制膀胱癌的迁移,可能是治疗膀胱癌的一种新选择。     

大鼠肝缺血预处理过程中诱导型一氧化氮合酶的转录及表达

目的 :研究大鼠肝脏缺血预处理 (IP)过程中肝脏诱导型一氧化氮合酶 (NOS2 )转录及表达的改变 ,以探讨大鼠肝脏IP过程中NO合成通路的作用及意义。方法 :131只SD大鼠随机分为缺血再灌注 (I/R)组 (5 2只 )、IP组 (4 1只 )及假手术 (S)组 (38只 ) ,术后 2h ,2 4h及 1周时检测血浆NO浓度及肝组织NOS2的转录及表达。结果 :①血浆NO浓度 :IP组在术后 2h ,2 4h ,1周时均升高 ,均显著高于S组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 1) ,于 2h及2 4h时均显著高于I/R组 (均P <0 .0 1) ;I/R组在 2h时显著低于S组 (P <0 .0 5 ) ,2 4h与S组无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,1周时显著高于S组 (P <0 .0 5 )。②肝脏NOS2的转录 :IP组在 2h及 2 4h时较I/R组显著增强 (均P <0 .0 5 ) ,1周后差异无显著性 (P >0 .0 5 )。③肝脏NOS2的表达 :在 2h及 2 4h时IP组均显著高于I/R组及S组 (均P<0 .0 5 ) ,I/R组与S组之间差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;1周时 ,IP组及I/R组呈弱阳性表达 ,两组间差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;S组NOS2显色呈阴性。结论 :大鼠肝脏IP过程中NOS2的转录及表达增强 ,其高转录与表达时相的提前可能与IP的早期保护效应有关。     

电针对中枢Stat5敲除所致肥胖小鼠瘦素水平和下丘脑Kctd15、Sh2b1 mRNA的影响

目的 观察电针对中枢Stat5条件性敲除Stat5 Nestin-Cre (Stat5NKO)肥胖小鼠下丘脑Kctd15、Sh2b1基因表达的影响。方法 20只肥胖的Stat5NKO小鼠随机分为肥胖组和电针组,每组10只;10只Stat5fl/fl小鼠作为正常组。其中电针组选取单侧后三里、内庭穴进行针刺治疗,每日1次,双侧交替进行,每次30 min,韩氏电针仪频率2/15 Hz,疏密波,6 d为1个疗程,共治疗4个疗程。运用ELISA法检测血清中瘦素（Leptin）含量,qPCR技术检测下丘脑中肥胖相关基因Kctd15、Sh2b1 mRNA的表达。结果 与正常组小鼠比较,肥胖组小鼠体质量明显增加(P<0.01)伴随血清Leptin含量升高(P<0.05),下丘脑Leptin水平下降(P<0.05),同时下丘脑Kctd15、Sh2b1 mRNA表达下调(P<0.05~0.01);与肥胖组小鼠比较,电针组小鼠的体质量明显下降(P<0.01),血清Leptin含量降低(P<0.01),且下丘脑Leptin水平回升(P<0.01),Kctd15、Sh2b1 mRNA表达水平上调(P<0.01)。结论 电针可能通过调节Leptin水平并促进Kctd15、Sh2b1表达,实现对Stat5NKO小鼠的减肥效应。      

曲美他嗪预处理对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制及机制研究

目的:探讨曲美他嗪预处理对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其可能机制。方法: 实验大鼠60只被随机分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I/R)及预处理缺血再灌注组（T+I/R）各20只,除Sham组外各组缺血45 min,再灌注180 min建模,后用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡;免疫组化检测p-CREB蛋白表达,免疫荧光检测Bcl-2与Caspase3蛋白表达;RT-PCR法检测CREB、Bcl-2及Caspase-3基因表达,比较各组结果。结果: (1)I/R组细胞凋亡最多,T+I/R组细胞凋亡明显减少,但仍多于Sham组（P均<0.05);(2) I/R组表达CREB最少、T+I/R组最高、Sham组居中（P均<0.05);(3) Sham组p-CREB少量表达、I/R组增加、T+I/R组显著增加（P均＜0.05）;(4)Sham组Bcl-2高表达、I/R组低表达、而T+I/R组居中（P均＜0.05）;(5)I/R组Caspase-3表达显著上调、T+I/R组显著下调、Sham组最低（P均<0.05）。结论: 曲美他嗪预处理能显著抑制缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与其活化CREB,上调p-CREB及Bcl-2的表达,下调Caspase-3的表达有关。     

磷脂酰肌醇3激酶调节亚基基因对HepG2细胞增殖的影响

目的：初步探讨磷脂酰肌醇3激酶调节亚基（PIK3R1）在肝癌发生发展中的生物学作用及其机制。方法：首先通过蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测p85α（PIK3R1所编码的蛋白）在肝癌组织标本中的表达情况;接着利用脂质体转染法将PIK3R1的小分子干扰RNA（siRNA）和含有PIK3R1 cDNA的重组质粒转染入HepG2细胞中,并利用实时定量PCR检测其干扰效率和过表达效率;采用MTT法和集落形成实验检测PIK3R1 对细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析PIK3R1对细胞周期的影响;最后蛋白质印迹法检测PI3K/AKT信号通路下游效应分子的表达变化。结果：p85α在肝癌组织中的表达高于其癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）;PIK3R1被干扰后,HepG2细胞增殖速度减慢,集落形成率减少,差异有统计学意义（均P<0.05）;PIK3R1过表达后,HepG2细胞增殖速度加快,集落形成率增多,差异有统计学意义（均P<0.05）;PIK3R1提高了HepG2细胞中S期细胞的比例（P<0.01）;且PIK3R1可提高PI3K/AKT通路下游效应分子p-AKT的水平,并降低p53的水平。结论：PIK3R1在肝癌组织中表达上调,PIK3R1可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进HepG2细胞的增殖。     

法舒地尔减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤机制

目的 探讨盐酸法舒地尔减轻大鼠急性心肌缺血再灌注损伤,抑制细胞凋亡,发挥药物后适应作用的可能机制.方法 将90只SD大鼠随机均分为五组：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血后适应组（IPost组）、盐酸法舒地尔组（FH组）、盐酸法舒地尔＋PI3K抑制剂（LY294002）组（FH ＋Ⅰ组）.测定各组大鼠心肌细胞Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Akt、P-Akt的表达.结果 与I/R组（ROCK1：2.94±0.13）相比,IPost组（ROCK1：2.79±0.11）、FH组（ROCK1：2.83 ±0.10）、FH ＋Ⅰ组（ROCK1：2.85 ±0.26）的ROCK1表达无明显变化;与I/R组（Bcl-2：1.11±0.12,P-Akt：1.09±0.06,Bax：1.74 ±0.06,Caspase-3：1.32±0.12）相比,FH组（Bcl-2：1.76±0.08,P-Akt：1.73±0.05,Bax：0.98±0.14,Caspase-3：0.97±0.06）与IPost组（Bcl-2：1.74±0.06,P-Akt：1.37±0.05,Bax：0.97±0.11,Caspase-3：1.07±0.08）的Bcl-2、P-Akt升高（P＜0.05）,Bax及Caspase-3降低（P＜0.05）;与FH组相比,FH＋Ⅰ组（Bcl-2：1.05±0.12,P-Akt：1.21±0.06,Bax：1.61 ±0.11,Caspase-3：1.42±0.11）的Bcl-2、P-Akt表达降低,Bax及Caspase-3表达升高（P＜0.05）.结论 盐酸法舒地尔后适应效应机制可能与抑制ROCK活性及激活PI3 K-Akt通路有关.     

高压氧对家兔肝脏缺血再灌注损伤能量代谢的影响

[目的]探讨高压氧对家兔肝脏缺血再灌注损伤（IRI）能量代谢的影响。[方法]家兔30只肝脏IRI造模后随机分为：对照组和高压氧治疗组。对照组采用吸氧、维持水电解质平衡、消炎、护肝等常规治疗;治疗组在此基础上从术后d1开始采取高压氧治疗,动态检测血清谷丙转氨酶（ALT ）、动脉血酮体比值（AKBR）、肝细胞线粒体呼吸活性、肝组织三磷酸腺苷（ATP）含量变化。[结果]家兔肝脏IRI后能量代谢明显受损。治疗组术后d5 ALT较对照组下降快（t ＝9．13,P ＜0．05）。治疗组肝脏能量代谢指标术后 d3显著升高（t ≥12．45,P ＜0．05）,术后d5进入稳定期,且在术后d3、d5与对照组同时相比较统计学意义（ t ≥8．19,P＜0．05）。对照组肝脏能量代谢指标术后d3开始缓缓上升,术后d5才显著升高（ t ≥7．93, P ＜0．05）,术后d7进入稳定期。[结论]高压氧治疗可以使家兔肝脏IRI后的能量代谢指标较快恢复。     

心肌缺血预适应大鼠循环血微囊泡中miRNAs 表达谱分析

目的:分离提取心肌缺血预适应（IPC）模型大鼠循环血中的细胞微囊泡（MVs）,探究IPC处理对循环血MVs中microRNAs （miRNAs）表达的影响。方法:健康雄性Wistar 大鼠8只,随机分为IPC-MVs组和假手术对照（Sham-MVs）组,每组4 只。建立 大鼠心肌IPC 模型,提取循环血IPC-MVs,采用Microarray 分析两组循环血MVs 中的miRNAs,利用生物信息学进行靶基因预 测及功能分析。结果: 与Sham-MVs组比较,IPC-MVs组中循环血差异表达显著上调的miRNAs 共3 个（P<0.01,FER<0.05）: miR-1-3p、miR-133a-3p 和miR-133b-3p（t=3.194、3.002、3.389,均P<0.05）。基因本体研究会数据库（GO）和京都基因与基 因组百科全书（KEGG）分析显示,这些miRNAs 可能通过调节心肌细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路和Ras信号 通路,发挥抗心肌缺血/再灌注（I/R）损伤的保护作用,可能参与调控的核心靶基因包括Ntrk2、Igf1、Gnai3 和Bcl2l1。结论:IPC 处 理可使大鼠循环血MVs中miR-1-3p、miR-133a-3p 和miR-133b-3p表达显著上调。