骨关节炎治疗中疗效观察指标的相关性分析

<正>骨关节炎(OA)是严重危害人们健康的关节常见病。本课题组的前期研究表明,脉冲式关节机械加载可以抑制MMP-13等因子的表达从而减轻OA的炎症反应,但其对OA的疗效和保护机制尚不清楚。因此,我们提出脉冲式关节机械加载能否通过抑制异常的骨吸收,纠正异常骨重建、促进软骨的修复,从而治疗OA。本实验用C57BL/6雌性小鼠30只,随机分为3组,假手术组、创伤性OA组、机械加载治疗组(n=10)。手术构建创伤性骨关节炎小鼠模型,以1N,5Hz的条件进行脉冲性关节机械加载,每天加载5min,共治疗2     

创伤性骨关节炎的物理康复治疗

<正>骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是世界范围内最常见的关节疾病,是以关节软骨的变性、及骨质增生为特征的慢性关节病。我们前期的工作已证实关节机械加载可以抑制OA小鼠的MMP-13等相关分子的表达,但是关节加载对OA软骨作用尚不清楚。本实验用C57BL/6雌性小鼠30只,随机分为假手术组、创伤性模型组、机械加载治疗组。验证关节机械加载可以减轻关节软骨损伤,并促进病变软骨的修复。通过切断前交叉韧带、内侧副韧带及切除内侧半月板,制备右膝关节创伤性骨关节炎的小鼠模型。右侧膝关节机械加载     

构建高效载体OPEI沉默TRAF6促进骨关节炎软骨再生的研究

目的·构建低毒性的关节滑膜高效率siRNA转染载体OPEI,抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6 (tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6),观察其对骨关节炎（osteoarthritis,OA）模型骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成软骨能力的影响。方法·通过内侧半月板切除术建立SD大鼠OA模型（OA组,n=20）;另设假手术组（n=10）,半月板保持完好。造模后3个月后采集手术部位软骨和滑膜,免疫组织化学法检测TRAF6的表达,Western blotting方法检测白介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠原代滑膜细胞中MMP13、TRAF6、p-p65的表达。在无水厌氧环境中合成小分子聚乙烯亚胺（polyethylenimine,PEI）衍生物OPEI,琼脂糖凝胶电泳检测OPEI包裹siRNA的能力,动态光散射测量形成的OPEI/siRNA复合物的粒径和Zeta电位,MTT法检测形成的复合物对大鼠原代滑膜细胞的细胞毒性,...     

骨关节炎中骨桥蛋白表达及意义

目的:探讨细胞因子-骨桥蛋白(OPN)在骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者中的表达情况及意义。方法:选取接受膝关节置换手术治疗的骨性关节炎患者软骨标本42例,按Mankin评分分为轻度退变、中度退变、重度退变3组,取正常膝关节软骨10例作为对照组;对标本进行免疫组织化学染色,测定OPN表达情况。结果:OA组OPN吸光度明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);OPN在轻、中、重度退变组的表达差异有统计学意义(P<0.05);OPN平均灰度值与Mankin病理评分呈显著负相关(r=-0.872,P<0.01)。结论:OPN在骨关节炎软骨中高表达,且与病变程度相关,与骨关节炎发生发展也有密切关系。     

白细胞介素-18在小鼠缺血性脑卒中的损伤作用及其机制

目的:探讨白细胞介素（IL）-18在小鼠缺血性脑卒中的损伤作用及其机制。方法:采用C57BL/6J成年雄性小鼠构建光化学法诱导局灶性大脑皮层缺血性脑卒中模型,随机分为对照组、脑梗死组、IL-18分泌型结合蛋白（IL-18BP）治疗组,每组18只。术后14 d进行神经功能评分并进行HE染色测量小鼠脑梗死面积。术后3 d实时荧光定量PCR检测小鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-6和IL-10的表达,流式细胞术检测小鼠脑组织中小胶质细胞表型。结果:与脑梗死组相比,IL-18BP治疗组神经功能显著改善并且脑梗死面积显著降低（t=2.750、2.235,均P<0.05）。IL-18BP治疗组脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达显著降低（t=3.091、2.328、3.443,均P<0.05）,IL-10的表达升高（t=4.997,P<0.05）。与脑梗死组相比,IL-18BP治疗组脑组织中M1型小胶质细胞数量明显降低（t=4.779,P<0.05）,M2型小胶质细胞数量明显升高（t=2.619,P<0.05）。结论:在缺血性脑卒中,IL-18可介导免疫炎性损伤并发挥调节作用。     

Notch信号通路在骨性关节炎软骨干细胞迁移及分化中的作用

目的：探究炎症环境下Notch信号通路对软骨干细胞（CSPCs）迁移及成软骨分化能力的影响。方法：取5日龄SD大鼠CSPCs,利用IL-1β刺激大鼠CSPCs模拟骨性关节炎（osteoarthritis,OA）炎症微环境,通过划痕实验检测CSPCs迁移能力,RT-PCR检测Notch信号通路及成软骨分化相关基因的变化。结果：炎症环境下CSPCs迁移能力减弱,成软骨分化相关基因COL2A 1及SOX 9的表达明显下降,同时Notch信号通路受体Notch 1、配体Jagged 1以及下游分子HES 1的表达均显著上升。DAPT抑制Notch信号通路后可恢复CSPCs迁移和成软骨分化能力,激活Notch信号通路可抑制正常CSPCs迁移和成软骨分化能力。结论：Notch信号通路异常激活与CSPCs功能失调及骨关节炎的发生发展密切相关。     

机械应力促进炎性环境中软骨修复的机制研究

目的: 探索在炎性环境中施加机械应力对软骨修复的影响及机制。方法: 提取骨关节炎（OA）患者膝关节软骨中的软骨前体细胞（CPC）,培养扩增后在海藻酸构建的支架上三维培养,在IL-1β塑造的炎症环境中施加周期性静水压（IHP）,蛋白免疫印迹法检测MAPK信号通路的变化,CCK-8法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶13（MMP-13）和解聚素与金属蛋白酶5（ADAMTS-5）基因表达的变化。切断大鼠的前交叉韧带构建膝关节OA模型,通过外固定支架牵开关节腔构建合适的机械应力,观察关节牵引能否促进软骨的修复及其机制。结果: 0.01 ng/mL IL-1β可以抑制CPC增殖,施加IHP后可以减少MAPK信号通路蛋白的表达,减少MMP-13、ADAMTS-5基因表达,促进炎性环境下的CPC增殖。切断前交叉韧带4周后,膝关节OA模型成功构建。OA大鼠经关节牵引后软骨的Mankin评分更低（P < 0.01）,软骨修复较对照组更佳。软骨标本的免疫组织化学染色发现关节牵引可减少P-p38、MMP-13及X型胶原的表达,减少细胞凋亡,促进OA软骨的修复。结论: 机械应力可以通过抑制MAPK信号通路,促进CPC增殖,减少基质降解酶表达,促进OA软骨修复。     

骨关节炎关节滑液中IL-18与PGE2含量的测定及意义

目的:检测膝关节滑液(synovialfluid,SF)中细胞因子白介素-18(interleukin-18,IL-18)和炎症介质前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)含量,探讨IL-18和PGE2在骨关节炎(osteoarthritis,OA)发病机制中的作用。方法:提取54例膝OA患者(OA组)的关节滑液,9例对照组(正常组)膝关节液,用ELISA酶联免疫吸附法和酶联免疫竞争法分别检测IL-18和PGE2含量,并对IL-18和PGE2两指标作线性相关与回归分析。结果:OA组膝关节滑液中IL-18和PGE2含量与正常组比较,有增高的趋势,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组IL-18浓度值为(28.768±13.575)×10-9ng/L,OA组IL-18浓度值为(72.303±40.130)×10-9ng/L(P<0.01)。对照组PGE2浓度值为(24.697±7.814)×10-9ng/L,OA组PGE2浓度值为(42.302±23.818)×10-9ng/L(P<0.01)。分析表明IL-18与PGE2有较强正相关关系(对照组r=0.76,P<0.001;OA组r=0.94,P<0.001)。结论:本研究表明OA组关节滑液中IL-18与PGE2的含量明显高于对照组,说明IL-18与PGE2可能参与了骨关节炎的发病机制。IL-18的增高可能引起PGE2含量的增高,从而在OA的发病机制中发挥重要作用。     

p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系研究

目的:研究p53在骨关节炎软骨组织中的表达及与关节软骨细胞自噬的关系。方法:对20例骨关节炎患者(OA组)及10例正常膝关节软骨组织(对照组),用实时定量PCR(real-time PCR)、免疫组化等方法检测p53及Beclin1在膝关节软骨中的表达与分布,并对两者进行相关性分析。结果:p53在OA组的表达明显高于正常对照组(P0.05),OA组关节软骨组织中Beclin1的表达量明显低于正常对照组(P0.01),p53与Beclin1在软骨组织中表达呈负性相关(r=-0.629,P0.05)。结论:骨关节炎中p53的高表达能够抑制软骨细胞自噬,从而减弱软骨细胞对凋亡抵抗能力,促进软骨细胞凋亡。     

大骨节病与骨关节病软骨组织死亡相关因子表达的比较

目的观察大骨节病软骨组织中程序化细胞死亡分子5（programmed cell death 5, PDCD5）和早期生长反应蛋白1（early
growth response protein-1, EGR-1）表达的变化及其在大骨节病软骨损伤中的作用。方法收集来自大骨节病患者关节软骨（KBD
组）10例,同时收集15例骨关节炎病人关节软骨（OA组）作为疾病对照,收集6例正常软骨作为健康对照（正常组）。采用免疫组化
染色法检测3组关节软骨组织中死亡受体调节因子PDCD5和EGR-1表达变化,并在显微镜下计数和分析3组关节软骨不同分层
间阳性表达率的显著性差异。结果（1）KBD软骨中层PDCD5阳性细胞表达率（41.35±2.97）%显著高于OA组（26.48±2.04）%和
正常组（19.02±1.88）%（P=0.001和P=0.000）,KBD软骨深层显著高于正常组和OA组（P=0.000和P=0.029）,OA组也高于正常组
（P=0.038）,而3组间的表层软骨细胞PDCD5阳性率无差异（P>0.05）;（2）在KBD软骨表层,EGR-1表达显著高于OA软骨和正常
软骨表层（P=0.000和P=0.000）,3组软骨的阳性表达率分别为（27.94±3.09）%、（3.20±1.49）%和（12.66±1.06）%,KBD软骨中层
EGR-1阳性细胞表达率显著低于OA组软骨（P=0.002）,而高于正常软骨（P=0.017）,KBD软骨和OA软骨深层阳性率均明显高于
正常组（P=0.000和P=0.001）,而KBD组和OA组的平均阳性率无统计学差异（P=0.187）;（3）KBD组与正常组的PDCD5和EGR-1
分别在3个软骨细胞层的表达均无相关性,而PDCD5和EGR-1在OA关节软骨表层呈强正相关。结论KBD软骨深层PDCD5显
著上调,而软骨表层和深层EGR-1显著高表达,提示这两种重要的细胞死亡相关因子在大骨节病软骨破坏过程中发挥重要作用。
     

人皮下和髌下脂肪垫干细胞治疗大鼠骨关节炎的疗效比较

 目的 比较人皮下和髌下脂肪垫干细胞体外增殖、成软骨分化潜能以及体内治疗大鼠骨关节炎的疗效差异。方法 获取上海市东方医院未患代谢性相关疾病患者的皮下和髌下脂肪垫组织,从髌下脂肪垫中分离原代脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ASCs）,体外诱导成脂、成骨、成软骨方向分化。EdU检测人皮下脂肪干细胞（subcutaneous ASCs,Sc-ASCs）和髌下脂肪垫干细胞（infrapatellar fat pad derived stem cells,IPFP-ASCs）体外增殖能力,流式细胞术检测干细胞表面标记蛋白CD34、血管相关标记蛋白CD31的表达。阿尔新蓝染色及Western blot检测Sc-ASCs和IPFP-ASCs体外成软骨潜能。体内实验采用8周SD大鼠随机分为对照（control,CON）组、内侧半月板不稳术（destabilisation of the medial meniscus,DMM）组和DMM手术后Sc-ASCs治疗组,DMM手术后IPFP-ASCs治疗组,通过大体观察、番红固绿染色及OARSI评分比较体内治疗效果。结果 人髌下脂肪垫组织中分离获得ASCs,形态呈长梭形,在体外具有成脂、成骨、成软骨分化潜能。Sc-ASCs和IPFP-ASCs表面标记蛋白CD34和血管相关标记蛋白CD31表达无显著性差异,但人IPFP-ASCs体外增殖能力较强。阿尔新蓝染色及Western blot显示IPFP-ASCs体外成软骨能力较强。体内大鼠实验大体形态学观察显示DMM组骨赘增多,软骨表面缺损,Sc-ASCs治疗组骨赘减少,IPFP-ASCs治疗组表面较光滑,无明显骨赘生成;番红固绿染色显示DMM组软骨层出现垂直裂缝且到达钙化软骨,Sc-ASCs治疗组关节面纤维化且软骨浅表层存在垂直裂隙,IPFP-ASCs治疗组软骨层较为连续,仅存在轻微纤维化;OARSI评分显示IPFP-ASCs治疗骨关节炎疗效更好。结论 人IPFP-ASCs体外增殖能力、成软骨分化潜能以及体内治疗大鼠骨关节炎的效果优于Sc-ASCs。     

骨关节炎髌下脂肪垫与软骨缺损的相关性研究

目的 探讨膝骨关节炎( OA )患者髌骨下脂肪垫( IPFP)大小与软骨缺损之间的关系. 方法 收集174例膝OA患者,对患者一般情况行问卷调查,在核磁共振3D脂肪抑制T1加权回波序列上利用Osirix软件测量IPFP容积,在核磁共振T2加权质子密度加权快速自旋回波序列上对软骨缺损进行评级(0~4级),分析IPFP容积与软骨缺损之间的关系. 结果 放射性OA与非放射性OA患者IPFP体积差异无统计学意义;不同严重程度OA患者的IPFP体积差异有统计学意义(P<0. 05);OA患者IPFP体积与性别呈负相关性,与身高、体重呈正相关性,差异有统计学意义(P <0. 05);IPFP体积与膝关节内外侧股骨、外侧胫骨以及髌骨软骨缺损呈负相关性,差异有统计学意义( P<0. 05 ). 结论IPFP体积与软骨缺损及OA的病情严重程度相关, IPFP在OA发生发展中可能起保护作用.     

髌下脂肪垫对全膝关节置换术后髌骨高度的影响

目的:研究保留或切除髌下脂肪垫对全膝关节置换术(total knee arthroplasty,TKA)术后髌骨高度的影响。方法:将86例骨性关节炎患者(116膝)分为A、B两组。A组为保留髌下脂肪垫组(59膝),B组为切除髌下脂肪垫组(57膝)。应用屈膝30°的侧位X线片,测量术前及术后随访时的Insall-Salvati比值以反映髌骨高度。结果:A组术前及术后随访时的Insall-Salvati比值差异无统计学意义(P>0.05),B组术前及术后随访时的Insall-Salvati比值差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在TKA术中切除髌下脂肪垫会造成TKA术后髌骨高度下降,导致低位髌骨及髌腱短缩。     

退行性膝骨关节炎的影像学对比分析

目的探讨X线、B超、CT检查方法在退行性膝骨关节炎检查应用中的价值对比。方法以41例膝骨关节炎住院患者为研究对象,观察其X线、B超和CT检查的图像,分别对比骨质增生、骨质疏松、滑膜增厚、半月板变性、韧带病变、关节间隙狭窄、关节软骨、关节积液和髌下脂肪垫等的变化在不同检查方法中的显示情况。结果 X线平片对膝关节间隙改变26例、骨赘生成30例和胫骨髁间棘增生37例显示最好;B超对于关节积液24例、滑膜改变38例、髌下脂肪垫的改变34例、关节软骨变性15例、半月板变性16例较敏感;CT检查对关节面下假囊肿35例、关节骨质疏松21例、关节积液22例显示良好。结论综合各种影像检查技术的优势,恰当地选择最简便的检查方法。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589抑制基底样乳腺癌生长和转移

目的：探究组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对基底样乳腺癌（BLBC）生长和转移的抑制作用。方法：通过MTT法和平板克隆实验检测LBH589对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和小鼠乳腺癌细胞系4T1增殖能力的影响;Transwell实验检测LBH589对细胞迁移和侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测LBH589对细胞上皮-间质转化的作用;构建4T1乳腺癌细胞Balb/c小鼠脂肪垫成瘤模型,腹腔注射LBH589,观察4T1细胞成瘤和转移能力。结果：体外实验结果显示,与对照组相比,LBH589显著抑制MDA-MB-231和4T1细胞的增殖能力（t=11.37,P<0.05;t=18.18,P<0.05）、克隆形成能力（t=7.76,P<0.05;t=15.22,P<0.05）、迁移（t=8.8,P<0.05;t=18.0,P<0.05）和侵袭能力（t=8.24,P<0.05;t=15.99,P<0.05）;与对照组相比,LBH589上调细胞的上皮标志物CDH1的mRNA(t=7.33,P<0.05)表达水平,抑制细胞的...     

丹参注射液对C57小鼠脂肪源性干细胞成软骨的促进作用

目的:探索丹参注射液对脂肪源性干细胞(ASCs)成软骨的促进作用。方法:①获取C57小鼠ASCs并培养传代,取第4代用于体外实验。分为空白组、诱导组与丹参注射液组,分别予常规培养液、成软骨诱导液及成软骨诱导液加丹参注射液干预,培养14 d后采用定量PCR检测ASCs体外Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)的表达。②取2月龄裸鼠15只,在髌股关节面用克氏针造成软骨缺损。随机分为模型组、诱导细胞复合纤维蛋白胶植入组和丹参注射液干预细胞复合纤维蛋白胶植入组,术后12周切取膝关节缺损处,行HE染色。结果:①通过体外对CollagenⅡmRNA表达的研究证实,诱导组和丹参注射液组均可促进ASCs向软骨细胞分化,尽管两者数值相比没有统计学差异(P0.05),但与诱导组相比丹参注射液组可以提高CollagenⅡmRNA的表达水平。②体内修复的HE染色表明,丹参注射液组和诱导组与纤维蛋白胶复合后均具有促进软骨再生,其中丹参注射液干预细胞组的再生软骨优于诱导组。结论:丹参注射液具有促进ASCs向软骨细胞分化的功能,与支架材料复合后可以较好地修复软骨缺损,这将为中药应用软骨组织工程的发展奠定基础。     

高频彩色多普勒超声对髌下脂肪垫损伤的诊断价值

目的通过对髌下脂肪垫损伤超声诊断价值的研究对其声像图特点及其相关性病变进行探讨。方法应用ATL-3000型、ALOKA-4000型彩色多普勒超声诊断仪,5～10 MHz线阵高频探头和选用骨骼肌肉软件系统对髌下脂肪垫损伤患者进行超声诊断。结果 108例患者中,96例表现为单膝髌下脂肪垫损伤,12例为双膝髌下脂肪垫损伤,合并膝关节滑膜炎63例（占58.3%）、膝关节骨性关节炎21例（占19.4%）。髌下脂肪垫损伤声像图表现为患侧髌韧带深面脂肪垫肿胀、增厚,内部回声减低;彩色多普勒血流显像（CDFI）特点是患膝髌下脂肪垫内部及周边无明显血流信号。结论高频彩色多普勒超声对髌下脂肪垫损伤及其相关性病变有很大诊断价值,可为临床诊断及治疗提供可靠的信息。     

低强度不同频率全身震动治疗对兔膝骨关节炎的影响

目的研究不同频率低强度全身震动治疗（WBV）对于兔膝骨关节炎软骨下骨微结构、软骨降解、骨/软骨转换以及关节功能的影响。方法成年新西兰兔96只,随机分为膝关节前交叉韧带切断术组（ACLT组,16只）和WBV＋ACLT组（80只）。各组行左侧ACLT,制备膝骨关节炎模型。术后2个月,ACLT组不行WBV治疗,WBV＋ACLT组分别以频率5 Hz、10 Hz、20 Hz、30 Hz、40 Hz进行WBV治疗（每亚组16只）,震动幅度2~4 mm,40 min/d,5 d/周,持续治疗8周。治疗8周后采用负重不对称法检测关节疼痛度;尾静脉血液及尿液采集检测骨/软管转换标记物血清软骨寡聚基质蛋白（COMP）,骨转换标记物1型/2型胶原羧基末端肽（CTX-Ⅰ、CTX-Ⅱ）,运用Micro-CT仪扫描各组模型左侧膝关节,并分析软骨体积和骨微结构;关节软骨采用大体形态学和组织学评分分析。结果治疗8周,与ACLT组相比, 10 Hz （P<0.05）和20 Hz （P<0.01）亚组疼痛改善明显,而40 Hz （P<0.05）亚组则疼痛加重;大体评分和组织学评分,仅40 Hz亚组内侧髁与ACLT组相比评分增加（P<0.05）,病变更重;Micro-CT结果显示,关节软骨体积随着频率的改变呈现先增加后减少的变化趋势,以20 Hz亚组与ACLT组相比增加最为明显（P<0.05）;骨小梁厚度、骨小梁数量和骨体积分数随频率的增加而增加（P<0.05);CTX-Ⅰ随频率上升表达下降（P<0.05）,而COMP和CTX-Ⅱ的表达随频率增加先降低后升高,以20 Hz亚组最低（P<0.05）。结论较低频率（20 Hz）WBV可有效改善关节功能和软骨下骨微结构,增加骨转换,延缓软骨降解,为较优治疗参数。     

吲哚美辛对大鼠骨关节炎模型关节软骨中IL-6表达的影响

目的研究环氧合酶-2(COX-2)抑制剂对大鼠骨关节炎模型关节软骨中白介素-6(IL-6)表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、骨性关节炎组(OA组)和COX-2抑制剂(吲哚美辛)处理组,每组10只。利用膝关节注射4%的木瓜蛋白酶溶液的方法制作骨关节炎模型。采用关节炎评分法评定各组大鼠平均关节炎指数,Western blot方法检测关节软骨中IL-6蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测关节软骨中IL-6 mRNA的表达变化。结果 OA模型组随着造模时间的延长,关节出现了重度红肿现象,对照组关节无任何异常变化;与OA模型组比较,吲哚美辛组的关节炎症反应呈现消退现象。术后8周检测关节软骨中IL-6蛋白及mRNA表达的变化,结果发现IL-6蛋白及mRNA在对照组大鼠关节软骨中仅有微量表达,而在OA组大鼠关节软骨表达则显著升高(P0.01);与OA组相比,吲哚美辛组大鼠关节软骨中IL-6蛋白表达显著降低(P0.01)。结论吲哚美辛可通过下调IL-6蛋白的表达参与骨关节炎的发病机制。