祛痰通络汤对糖尿病大鼠肾组织内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响

目的:观察祛痰通络汤对糖尿病大鼠肾组织中内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响。方法:高糖高脂饲料联合腹腔注射STZ制备糖尿病模型,随机分为4组,分别为正常对照组、模型组、祛痰通络汤组、四苯基丁酸组,治疗8周。观察各组24 h尿蛋白定量、肾脏病理学变化;免疫组化和western-blot检测肾组织内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP的表达。结果:祛痰通络汤降低尿蛋白,减轻病理改变;模型组肾组织的GRP78、CHOP表达明显升高(P0.05),祛痰通络汤组GRP78、CHOP表达明显低于模型组(P0.05)。结论:糖尿病大鼠肾脏中GRP78、CHOP表达明显增强,祛痰通络汤降低内质网应激,可能是其肾脏保护作用的重要机制。     

低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸细胞内质网应激及PERK-CHOP信号通路的激活

目的:探讨低剂量电离辐射与小鼠睾丸细胞内质网应激的发生以及PERK-CHOP通路激活的相关性。方法:健康雄性昆明小鼠随机分成时程-效应(75 mGy照射后0、3、6、12和24 h)和剂量-效应(0、50、75、100和200 mGy照射后12 h)组,每组动物10只。采用H2O2和MDA试剂盒比色法检测其含量;利用实时定量逆转录PCR(quantitative RT-PCR)检测GRP78、PERK和CHOP mRNA;Western印迹和图像分析技术检测GRP78、PERK、磷酸化PERK(phosphorylated PERK,pho-PERK)和CHOP蛋白表达。结果:小鼠经75 mGy全身照射后,睾丸组织中H2O2含量随时间延长而增加,MDA含量在3和6 h稍有降低,而后随时间延长而增加,二者在12和24 h较0 h时显著增加(P<0.05,P<0.01);除了GRP78 mRNA(3和24 h)和蛋白表达(6 h)分别在照射后有降低趋势外,GRP78(12 h)、PERK(3、6、12和24 h)和CHOP(12和24 h)的mRNA表达较0 h显著增加(P<0.05,P<0.01),GRP78(12和24 h)、pho-PERK(3、12和24 h)和CHOP(3、6、12和24 h)的蛋白表达也都较0 h显著增加(P<0.05,P<0.01),PERK蛋白表达则无明显变化规律。小鼠经50～200 mGy全身照射后12 h,睾丸组织中H2O2含量在50～100 mGy照射后随剂量增加而增加,200 mGy照射后则稍有降低,MDA含量随剂量增加而增加,而且H2O2含量(75和100 mGy)和MDA含量(75、100和200 mGy)显著高于0 mGy组(P<0.05,P<0.01);除了GRP78mRNA表达在50和200 mGy照射后有降低趋势外,GRP78(75和100 mGy)、PERK(75、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的mRNA表达都显著高于0 mGy组(P<0.05,P<0.01),GRP78(100和200 mGy)、pho-PERK(50、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的蛋白表达也都显著高于0 mGy组(P<0.05,P<0.01),而PERK蛋白表达则无明显变化规律。结论:低剂量电离辐射能够诱导小鼠睾丸细胞发生内质网应激,并且激活PERK-CHOP信号通路。     

对比剂肾病大鼠eIF2α的表达及羟苯磺酸钙的保护性作用研究

目的:观察对比剂肾病(contrast-induced nephropathy,CIN)大鼠真核翻译起始因子2α(eukaryotic initiation factors,e IF2α)的表达情况,探讨羟苯磺酸钙在对比剂肾病大鼠中的作用。方法:将42只大鼠随机分为3组:对照组(A组),模型组(B组),羟苯磺酸钙组(C组)。建立模型后24 h、48 h分批处死大鼠,观察各组大鼠肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、Cys C水平及肾脏病理改变,了解各组大鼠肾脏e IF2α的表达情况。结果:A组Scr、BUN、Cys C及e IF2α表达最低,且肾脏组织无明显病理变化。B组大鼠Scr、BUN、Cys C、e IF2α表达明显升高,差异有统计学意义(P 0.05),肾脏细胞凋亡显著。C组Scr、BUN、Cys C、e IF2α表达较B组明显降低(P 0.05),肾脏细胞凋亡明显减轻,但仍重于A组。结论:大鼠CIN的发生发展可能与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)有关,羟苯磺酸钙在改善微循环的同时,可减轻内质网应激产生的不利影响。     

牛磺熊去氧胆酸对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）抗大鼠肝脏缺血再灌注（HIRI）损伤的作用及机制。 方法：将20只雄性SD大鼠随机均分为假手术组、TUDCA组、HIRI组、TUDCA+HIRI组,分别行假手术、TUDCA+假手术、HIRI造模,TUDCA+HIRI造模;TUDCA（250 mg/kg）于术前1 h灌胃给予,HIRI造模采用Pringle法（缺血60 min,再灌注12 h）。再灌注12 h后处死各组大鼠取材,观察肝组织病理学改变,检测血清谷丙转氨酶（ALT）水平,TUNEL法检测肝细胞凋亡,Western blot技术检测肝组织内质网应激分子糖调节蛋白78（GRP78）、p-真核细胞翻译起始因子2α（p-eIF2α）和C-EBP同源蛋白（CHOP）的表达。 结果：除假手术组与TUDCA组外,HIRI组与TUDCA+HIRI组大鼠肝组织均出现明显肝损伤病理改变,但TUDCA+HIRI组的损伤程度明显轻于HIRI组。与假手术组比较,HIRI组与TUDCA+HIRI组大鼠血清ALT水平明显升高,肝细胞凋亡和内质网应激分子GRP78、p-eIF2a和CHOP蛋白水平均明显升高（均P<0.05）,但TUDCA+HIRI组各项指标升高幅度均明显低于HIRI组（均P<0.05）;TUDCA组各项指标未见改变（均P>0.05）。 结论：TUDCA有抗大鼠肝HIRI的作用,其机制可能与抑制内质网应激反应有关。     

阿托伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾组织中JAK/STAT信号通路及其抑制因子SOCS-1表达的影响

目的：观察糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织中JAK-STAT-SOCS负反馈调节机制的变化,以期阐明阿托伐他汀对DN炎症发病机制及其防治措施。方法：60只Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组（对照组）、DN模型组（模型组）、阿托伐他汀治疗组（治疗组）,每组20只,利用单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素（50mg/kg）建立DN大鼠模型,治疗组每日每只灌胃阿托伐他汀（8mg·kg-1·d-1）,正常对照组及模型组每日每只给予等量蒸馏水,连续给药12周。记录大鼠体重;观察尿微量白蛋白（MALB-U）、24h尿蛋白定量（24hUpr）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）变化;取肾组织行PAS、HE染色观察病理组织学变化;用免疫组织化学染色方法检测肾组织中p-STAT3,p-JAK2,SOCS-1表达水平的变化。结果：12周末,模型组大鼠MALB-U、24hUpr、Scr、BUN显著升高,与对照组比较（P〈0.05）;阿托伐他汀治疗后,各指标显著降低,与模型组比较（P〈0.05）。12周时模型组大鼠肾组织中p-STAT3、p-JAK2、SOCS-1表达水平升高,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;经阿托伐他汀治疗12周后,大鼠肾组织SOCS-1表达水平较同期模型组明显上调（P〈0.05）,而p-STAT3、p-JAK2的表达受到抑制,低于同期模型组（P〈0.05）。结论：JAK-STAT-SOCS负反馈调节机制可能参与DN的发病过程;阿托伐他汀可能通过调节肾组织p-STAT3、p-JAK2、SOCS-1的表达,减轻DN大鼠的炎症反应,对肾脏有一定保护作用。     

乳化异氟醚对大鼠肺缺血-再灌注内质网应激的影响

目的探索乳化异氟醚预处理对大鼠肺缺血-再灌注损伤诱导内质网应激的影响。方法雄性SD大鼠32只随机分成四组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、乳化异氟醚预处理(EI组)、脂肪乳组(IL组)。S组腹腔注射生理盐水10.5ml/kg,24h后仅开胸游离左肺门,不进行阻断左肺门;IR组、EI组和IL组分别腹腔注射生理盐水、8%乳化异氟醚10.5 ml/kg、30%脂肪乳10.5ml/kg,24h后通过阻断左肺门1h后再灌注2h建立大鼠原位肺缺血-再灌注损伤模型。于再灌注2h即刻经左心室采集血样检测PaO2、PaCO2值;取左肺组织测湿重/干重比(W/D),通过HE染色评估肺组织病理损伤程度;通过RT-PCR和Western blot检测肺组织中GRP78和CHOP的表达水平。结果与S组比较,IR组、EI组和IL组PaCO2、肺组织GRP78、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显升高,PaO2明显降低(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义;与IR组比较,EI组、IL组PaCO2、肺组织GRP78mRNA、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显降低、PaO2明显升高(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义。与IL组比较,EI组PaCO2、肺组织W/D、GRP78、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显降低、PaO2明显升高(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义。病理显示EI组和IL组肺损伤轻于IR组,EI组肺损伤轻于IL组。结论乳化异氟醚和脂肪乳预处理均可减轻大鼠术后肺缺血-再灌注损伤引起的过度内质网应激,并且乳化异氟醚的保护效果更显著。     

益肾汤经结肠透析对慢性肾衰竭大鼠肾组织GRP78、CHOP表达的影响

目的:观察益肾汤经结肠透析对慢性肾衰竭(CRF)模型肾组织内质网应激(ERS)标志物GRP78、CHOP表达的影响。方法:随机从60只雄性SD大鼠中选15只为正常组,余45只采用腺嘌呤灌胃制作CRF模型,造模成功后随机分为:模型组、结肠透析组及益肾汤经结肠透析组。正常组和模型组予自由饮食,结肠透析组予单纯结肠透析,益肾汤经结肠透析组系结肠透析组治疗基础上予益肾汤灌肠,实验周期为4周。实验过程中观察大鼠一般状况、监测体重变化,4周末腹主动脉采血检测Scr、BUN、TGF-β、IL-6,免疫组化检测肾组织GRP78及CHOP的表达情况。结果:(1)治疗4周后观察,与正常组相比,模型组体重增长减慢;而益肾汤结肠透析组与模型组及结肠透析组相比,大鼠体重有所增加(P0.05)。(2)与正常组比较,模型组Scr、BUN水平明显升高(P0.01);与模型组比较,结肠透析组及益肾汤结肠透析组均明显下降(P0.05);与正常组相比,模型组TGF-β、IL-6水平明显升高(P0.01);与模型组相比,结肠透析组、益肾汤结肠透析组TGF-β、IL-6水平明显降低,益肾汤结肠透析组降低更明显;模型组大鼠肾组织中GRP78、CHOP表达明显升高,结肠透析组、益肾汤结肠透析组与模型组比较,GRP78、CHOP表达有所降低(P0.05)。结论:CRF大鼠肾组织存在ERS;益肾汤经结肠透析可通过抑制ERS,从而起到肾脏保护作用。     

阿托伐他汀对心肌梗死后大鼠基质金属蛋白酶-2及微小RNA-21的作用

目的 观察阿托伐他汀对心肌梗死后大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-2、微小RNA(miRNA,miR)-21表达的影响.方法 选取140只Wistar大鼠建立急性心肌梗死模型,分为假手术组、对照组、阿托伐他汀低剂量组和高剂量组,进行左室重量指数、心肌胶原容积分数、miRNA-21及MMP-2 mRNA表达测定.结果 阿托伐他汀治疗组左室重量指数、心肌胶原容积分数、梗死周边区miR-21 、MMP-2 mRNA的表达均降低(P＜0.05);各组梗死周边区miR-21表达量与MMP-2 mRNA水平呈正相关(r对照组=0.611,P＜0.05;r阿托伐他汀低剂量组=0.502,P＜0.05;r阿托伐他汀低剂量组=0.541,P＜0.05).结论 阿托伐他汀能降低梗死周边区MMP-2和miR-21的表达,发挥减轻心室重构的作用.     

阿托伐他汀联合替米沙坦治疗2型糖尿病肾病的疗效观察

目的：观察阿托伐他汀联合替米沙坦治疗2型糖尿病肾病的疗效。方法将收治的80例2型糖尿病肾病患者随机分为观察组和对照组,每组各40例,两组患者均严格执行糖尿病饮食及常规降糖药物和（或）降压药物治疗,对照组予替米沙坦80mg/d,口服,观察组同时联合阿托伐他汀20mg/d,口服,疗程4个月。比较两组患者治疗前后TG、TC、BUN、UAER、Scr值。结果观察组患者治疗后TG、TC、BUN、UAER、Scr水平较对照组降低更明显,差异具有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。结论阿托伐他汀联合替米沙坦治疗2型糖尿病肾病能够显著改善血脂水平及肾功能,且不良反应发生率低,值得临床广泛推广和应用。     

阿托伐他汀钙对成骨前体细胞（3T3-E1）增殖与分化的影响及其与内质网应激的联系

目的观察不同浓度阿托伐他汀钙对成骨前体细胞(3T3-E1细胞)增殖与分化影响,分析该过程与内质网应激相关基因Bip、PERK、Eif2a表达的关系。方法 3T3-E1细胞培养至对数期,加入含不同浓度阿托伐他钙0、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)mol/L培养液继续培养细胞,24 h后利用CCK-8比色法检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶测定试剂盒测定ALP活力,实时定量PCR技术检测内质网应激标志性基因Bip、PERK、Eif2a表达水平。结果镜下观察3T3-E1细胞呈梭形或多角形等形态,生长状态良好。(2)与对照组相比,不同浓度的阿托伐他汀钙作用于细胞24 h后,均可促进3T3-E1细胞增殖并增加ALP活性(P0.05),其中以10~(-6)mol/L阿托伐他钙浓度增殖最明显。(3)实时定量PCR结果显示,阿托伐他汀钙组Bip、PERK、Eif2a表达均高于对照组(P0.05)。结论阿托伐他汀钙可促进3T3-E1细胞增殖,促进细胞ALP活性增加,提高内质网应激标志性基因表达,提示阿托伐他汀促进增殖的作用可能与内质网应激通路相关,为骨质疏松的临床治疗及药物研发提供新的思路。     

对比剂肾病大鼠肾脏GRP78与caspase-12表达及胰激肽原酶干预研究

目的:研究对比剂肾病大鼠肾脏中葡萄糖调节蛋白(glucose-regulated protein 78,GRP78)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达情况,探讨内质网应激在对比剂肾病发生发展中的作用,及胰激肽原酶的干预效果。方法:将84只大鼠随机分为3组:假手术组(D组),模型组(Z组),胰激肽原酶干预组(Y组)。自造模前3 d至处死日当天,Y组每天给予胰激肽原酶(15 U/kg)灌胃,D组及Z组每天给予等量生理盐水灌胃。分别于造模后12 h,24 h,48 h,72 h处死部分大鼠,观察各组大鼠血清尿素氮、肌酐水平变化;HE染色观察肾脏病理改变;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾脏细胞凋亡情况;RT-PCR检测肾脏GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA的表达情况;免疫组化和Western-blot观察各组大鼠肾脏GRP78及caspase-12蛋白表达情况。结果:D组GRP78 mRNA、caspase-12 mRNA及GRP78、caspase-12几乎无表达,且肾组织无明显病理损伤及细胞凋亡;Z组病理变化明显,细胞凋亡较重,且以上指标均明显升高;Y组病理变化、细胞凋亡及GRP78 mRNA、caspase-12 mRNA、GRP78、caspase-12升高均较Z组明显减轻(P0.05),但仍高于D组(P0.05)。结论:内质网应激参与大鼠对比剂肾病的发生发展,胰激肽原酶可能通过减少caspase-12表达减轻内质网应激,发挥肾脏保护作用。     

Klotho抑制内质网应激反应减轻UUO大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的:观察可溶性Klotho蛋白对UUO模型大鼠肾脏内质网应激的影响。方法:24只清洁级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组。模型组大鼠采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)方法建立肾间质纤维化模型;治疗组在UUO的基础上,给予可溶性KL蛋白腹腔注射,对照组及模型组给予等剂量生理盐水腹腔注射。14 d后检测各组大鼠的肾功能、肾脏病理改变;Western Blot检测肾组织Klotho、GRP78、CHOP、caspase-3的表达情况。结果:模型组大鼠肾功能恶化,肾脏病理损害明显,肾组织KL蛋白的表达明显下降,内质网相关蛋GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、caspase-3的表达明显上升;治疗组大鼠肾功能好转,肾脏病理损害缓解,同时内质网应激相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达明显下降。结论:KL可通过抑制ERS发挥肾脏保护作用。     

益肾汤经结肠透析对慢性肾衰竭大鼠肠上皮细胞IRE1α、GRP78表达的影响

目的:观察益肾汤经结肠透析对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肠上皮细胞IRE-1α、GRP78表达的影响。方法:随机在60只健康雄性SD大鼠中抽取45只，腺嘌呤灌胃诱导建立CRF大鼠模型，其余15只为正常组。将造模成功大鼠随机分为CRF组、尿毒清结肠透析组和益肾汤结肠透析组，尿毒清结肠透析组予尿毒清结肠透析，益肾汤结肠透析组予益肾汤结肠透析，实验周期为4周。实验过程中记录大鼠一般状况、体重、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)的变化，4周末取肾组织、结肠组织行HE染色观察组织学改变，免疫组化检测各组结肠组织IRE1α、GRP78的表达及分布情况，实时荧光定量PCR法测定IRE1α、GRP78 mRNA表达情况。结果:(1) CRF组大鼠一般情况较正常组差，体重增长减慢(P <0.05)，而尿毒清结肠透析组及益肾汤结肠透析组与CRF组相比有所改善，体重增加(P <0.05);(2)与正常组比较，CRF组Scr、BUN值升高(P <0.05)，免疫组化示肠上皮细胞IRE1α、GRP78表达均明显上调(P <0.05),PCR结果显示GRP78、IRE1α mRNA相对表达量...     

丹参酮ⅡA对慢性肾衰竭大鼠肾组织内质网应激相关分子GRP78、CHOP和Caspase-12表达的影响

目的:探究丹参酮ⅡA对慢性肾衰竭大鼠肾功能的保护作用机制。方法:60只SD雄性大鼠,随机分成5组,分别为:A正常组,B假手术组,C模型组,D模型+丹参酮ⅡA低剂量组,E模型+丹参酮ⅡA高剂量组。4周、8周、12周检测各组肌酐、尿素氮水平。12周时Tunel法检测细胞凋亡,Western blot法检测GRP78、CHOP和Caspase-12表达。结果:(1)C组较A组4周、8周、12周时肌酐、尿素氮升高(P0.05);D组、E组分别与C组比较:8周、12周时较模型组肌酐、尿素氮水平下降(P0.05);E组较D组12周时肌酐、尿素氮水平下降(P0.05)。(2)C组凋亡细胞较A组、B组增多(P0.05)。D组、E组凋亡细胞较C组减少(P0.05),E组较D组凋亡细胞减少(P0.05)。(3)C组与A组相比,GRP78、CHOP和Caspase-12表达均明显升高(P0.05);D组、E组与C组相比:GRP78、CHOP和Caspase-12表达均下降(P0.05);E组与D组比较:GRP78、CHOP和Caspase-12表达进一步下降(P0.05)。结论:TanⅡA能够改善CRF大鼠肾功能,抑制细胞凋亡,其机制可能是通过调节内质网应激相关分子GRP78、CHOP和Caspase-12表达水平实现。     

内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响研究

目的探讨内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响。方法以2016年10月—2018年10月25例接受椎间盘摘除术的颈椎间盘突出症患者为研究对象,分为吸烟组(14例)和非吸烟组(11例)。两组患者年龄、性别、突出节段、Pfirrmann分级比较,差异均无统计学意义(P0.05)。将术中获取的髓核组织,行TUNEL染色和Western blot检测,观察细胞凋亡情况。然后,采用酶序贯消化法分离培养髓核细胞并传代,取第3代细胞行ELISA检测炎性因子IL-1β和TNF-α含量,免疫荧光染色观察细胞中P65核转移情况,Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达,透射电镜观察细胞内质网超微结构。最后,为验证内质网调控作用,采用特异性抑制剂4-PBA处理吸烟组髓核细胞后,Western blot检测GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α及P65蛋白相对表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率;并以吸烟组未作处理的髓核细胞作对照。结果髓核组织观测显示,吸烟组细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP相对表达量均明显高于非吸烟组(P0.05)。髓核细胞观测显示,吸烟组髓核细胞分泌IL-1β、TNF-α水平以及GRP78、CHOP蛋白相对表达量均明显高于非吸烟组(P0.05);免疫荧光染色示吸烟组细胞P65主要表达在细胞核,而非吸烟组在细胞质;透射电镜观察显示,与非吸烟组相比,吸烟组内质网处于应激损伤状态。吸烟组髓核细胞经4-PBA处理后,GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α及P65蛋白相对表达量以及细胞凋亡率均较处理前明显降低(P0.05)。结论吸烟可通过内质网应激导致髓核细胞凋亡和炎性反应加剧,抑制内质网应激有望成为延缓吸烟导致椎间盘退变的新靶点。     

当归补血汤对糖尿病肾病大鼠GRP78的影响

目的:研究当归补血汤对糖尿病肾病大鼠的内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)治疗中的作用机制。方法:实验设空白组(NC组)、模型组(DN组)、当归补血汤高剂量组(7.14 g·kg~(-1)·d~(-1),DH组)、当归补血汤低剂量组(1.79 g·kg~(-1)·d~(-1),DL组)、格列奇特组(2.68 mg·kg~(-1)·d~(-1),GT组),链脲佐菌素(STZ)结合高脂高糖饮食建立大鼠糖尿病肾病模型(T2DM),连续喂养8周,观察大鼠的一般状态;检测生化指标(血糖、血脂、肾功能);光镜、电镜观察其肾脏病理变化;免疫组化、western Blot及RT-PCR检测GRP78的蛋白及mRNA表达水平。结果:DN组大鼠空腹血糖、血总胆固醇较NC组明显升高;治疗组血生化相关指标均低于DN组;DH组最为明显。形态学观察可见DN组小鼠肾小球细胞水肿,系膜基质增多,肾小管上皮细胞胞浆出现空泡;经治疗病变减轻;DN组的GRP78的表达高于空白;治疗组的GRP78的表达降低;DH组尤为明显。结论:当归补血汤能保护肾脏,减少尿蛋白,其对DN大鼠的肾脏保护作用可能与调控GRP78表达抑制ERS反应有关。     

膀胱出口梗阻后大鼠逼尿肌细胞内质网形态及GRP78表达的研究

目的观察膀胱出口部分梗阻后膀胱重构中,逼尿肌平滑肌细胞内质网形态及内质网应激标志性蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达情况,探讨内质网应激在膀胱重构机制中可能的作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为假手术组10只,梗阻2周组15只,梗阻4周组15只,采用经会阴途径球部尿道部分结扎的方法建立膀胱出口部分梗阻模型。采用透射电子显微镜观察逼尿肌平滑肌细胞的超微结构,通过免疫组化和Real-time PCR分别检测逼尿肌中GRP78蛋白及mRNA表达变化。结果假手术组、梗阻2周组和梗阻4周组大鼠膀胱逼尿肌细胞GRP78蛋白阳性表达率分别为(3.37±0.38)%、(51.22±0.27)%、(27.02±1.85)%,梗阻2周组大鼠膀胱逼尿肌中GRP78阳性表达明显增多,与假手术组相比有明显差异(P0.01),梗阻4周组大鼠逼尿肌中GRP78阳性表达增多,与假手术组相比有明显差异(P0.01),但比梗阻2周组表达量减少(P0.01)。各组GRP78mRNA表达量分别为(22.21±1.58)、(30.62±2.49)、(24.52±2.24),梗阻2周组大鼠膀胱逼尿肌细胞GRP78mRNA表达较假手术组明显增加(P0.01);与梗阻2周组相比,梗阻4周组大鼠膀胱逼尿肌细胞GRP78mRNA表达量下降,有显著性统计学意义(P0.01),梗阻4周组与假手术组相比无统计学意义。结论在梗阻后膀胱重构过程中,逼尿肌平滑肌细胞内质网形态有明显损伤性变化,GRP78蛋白及mRNA表达水平明显增加,提示内质网应激参与膀胱重构的进展。     

益气清热膏通过内质网应激途径保护氨基核苷嘌呤霉素大鼠模型足细胞损伤的机制研究

目的:研究益气清热膏对氨基核苷嘌呤霉素大鼠模型(PAN)蛋白尿水平、足细胞损伤的作用,并从调节内质网应激途径的主要分子伴侣:糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)和GRP94的表达探讨益气清热膏的作用机制。方法:24只雄性Wistar大鼠按随机数字表分为假手术组、PAN模型组、益气清热膏组、蒙诺组,每组各6只。除假手术组予等量生理盐水外,其余各组均采用颈静脉插管注射嘌呤霉素氨基核苷(PA)(40 mg/kg)法制备PAN肾病大鼠模型。分别于造模前(0天)、造模后第9天和第14天检测大鼠24 h尿蛋白定量,第15天处死各组大鼠,取肾组织行电镜检查;Western Blot和实时定量逆转录多聚酶链反应(real time-PCR)法检测大鼠肾组织中GRP78和GRP94表达。结果:(1)与假手术组比较,益气清热膏可以降低造模后第9天和第14天大鼠24 h尿蛋白定量(P0.01)。(2)超微病理:模型组出现广泛足突融合、消失,足突基底部肿胀,足细胞内线粒体肿胀,内皮窗孔凌乱。益气清热膏可以明显改善大鼠足细胞损伤。(3)real-time PCR法和Western blot检测肾皮质GRP78和GRP94的表达。模型组GRP78和GRP94的mRNA水平和蛋白水平显著升高,益气清热膏可以显著降低两者mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。结论:益气清热膏可显著降低PAN模型大鼠尿蛋白水平,修复足细胞损伤,其机制可能与益气清热膏降低肾组织GRP78和GRP94表达,从而抑制内质网应激,修复肾组织蛋白质合成有关,具体机制需要进一步研究证实。     

鸡尾酒神经保护剂降低急性脊髓损伤大鼠的内质网应激水平并促进运动功能恢复

[目的]观察鸡尾酒神经保护剂N6对SD大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达量的影响以及运动功能恢复情况,探讨鸡尾酒制剂对损伤脊髓的保护作用机制。[方法]60只雌性SD大鼠被随机分为5组(n=12),假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)、甲强龙30 mg/kg腹腔给药组(MP-a组)、甲强龙20μl蛛网膜下腔给药组(MP-b)和鸡尾酒神经保护剂20μl蛛网膜下腔给药组(Cocktail组)。采用NYU打击器建立大鼠急性脊髓损伤模型,给药组造模成功后10 min即给予相应药物治疗。各组大鼠于治疗后72 h,提取损伤段脊髓蛋白,用Western-blot方法检测GRP78和CHOP相对表达量,灌注后取损伤段脊髓做CHOP免疫荧光染色。各组剩余大鼠每7d进行后肢运动功能BBB评分,28 d时取损伤段脊髓,Luxol Fast Blue染色后观察髓鞘再生情况。[结果]与SCI组、MP-a和MP-b组相比,Cocktail组GRP78表达水平明显升高(P0.05)、CHOP表达水平明显降低(P0.05),BBB评分在第14、21、28 d有明显升高(P0.05),髓鞘存留面积较大。[结论]采用鸡尾酒神经保护剂N6蛛网膜下腔给药的方法治疗大鼠急性损伤,可有效降低脊髓组织CHOP表达量,抑制内质网应激水平,促进髓鞘再生和运动功能恢复。