电针对抑郁大鼠海马组织CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响

目的：探讨电针对抑郁大鼠海马组织CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响。方法：采用孤养结合慢性不可预知应激（CUMS）方法建立抑郁大鼠模型,随机分为空白组、模型组、电针组、氟西汀组,每组10只。电针组选取“百会”、“神庭”、“合谷”、“太冲”,每日造模前1 h针刺,留针20 min,1次/d,持续21 d;氟西汀组：每日造模前1 h氟西汀（10 mg/kg, 1 mg/mL）灌胃给药,持续21 d。观察大鼠的体质量变化、旷场实验的站立次数和运动距离、强迫游泳实验的不动时间,ELISA法检测血清5-HT、DA、NE的含量;Western blot检测海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达;实时荧光定量PCR检测海马组织中BDNF、CREB mRNA的表达。结果：造模干预后：与空白组比较,模型组大鼠体质量、站立次数、运动距离、血清5-HT、DA、NE的含量、海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达显著下降（均P<0.01）,不动时间显著升高（P<0.01）;与模型组比较,电针组、氟西汀组大鼠体质量、站立次数、运动距离、血清5-HT、DA、NE的含量、海马组织中BD...     

淫羊藿次苷II抗慢性脑低灌注诱导的大鼠学习记忆减退及机制研究

目的：观察淫羊藿次苷II（ICS II）对慢性脑低灌注诱导的大鼠学习记忆减退模型的作用,并探索其可能的作用机制。方法：成年雄性Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为6组：假手术组、假手术给ICS II高剂量组、模型组、ICS II低剂量组、ICS II中剂量组、ICS II高剂量组,每组13只。模型组大鼠经双侧颈总动脉结扎诱导慢性脑低灌注,制备大鼠学习记忆减退模型,假手术组同法操作,但不结扎双侧颈总动脉。手术后第十天开始给药,ICS II低、中、高剂量组每日分别灌胃ICS II 4、8、16 mg/kg,假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续给药28天。制模后第33天Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,连续5天。水迷宫检测结束后,取材,HE、Nissl染色观察海马神经元的形态及存活情况;ELISA检测海马PDE 4、PDE 5蛋白水平;Western blot检测海马Aβ1-40、 Aβ1-42蛋白水平,APP、BACE1、ADAM10、IDE、TGF-β1、PPAR-α、PPAR-β、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达,Smad2、Akt、CREB 磷酸化水平。结果：模型组较假手术组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长,目标象限停留时间百分比和目标象距离百分比明显降低;海马区神经元排列紊乱,细胞变性,尼氏体数量明显减少;海马PDE 4、PDE 5、Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平及APP、BACE1、TGF-β1蛋白表达明显增高,ADAM10、IDE、PPAR-α、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达明显降低,PPAR-β无明显变化,Smad2磷酸化水平明显增加,Akt、CREB 磷酸化水平明显减少。然而,ICS II中、高剂量组较模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显缩短,目标象限停留时间百分比和目标象距离百分比明显增高;海马神经元排列较整齐,细胞少有变性,尼氏体数量增加;海马PDE 4、PDE 5、Aβ1-40、Aβ1-42蛋白水平及APP、BACE1、TGF-β1蛋白表达明显降低,ADAM10、IDE、PPAR-α、PPAR-γ、BDNF、TrkB蛋白表达明显增高,PPAR-β无明显变化,Smad2磷酸化水平明显减少,Akt、CREB 磷酸化水平明显增加。假手术给ICS II高剂量组较假手术组大鼠上述指标没有明显差异。结论：ICS II明显减轻慢性脑低灌注大鼠模型的空间学习记忆减退及海马神经元的形态学损伤,其机制可能与下调APP、BACE1的蛋白表达和上调ADAM10、IDE的蛋白表达从而抑制Aβ产生和促进Aβ代谢,阻遏TGF-β1的过度表达和Smad2磷酸化,激活PPAR-α和PPAR-γ,上调BDNF、TrkB蛋白表达和抑制Akt、CREB 磷酸化有关。     

基于BDNF/TrkB/CREB通路研究六味地黄丸对丙戊酸钠诱导的孤独症谱系障碍模型仔鼠的作用机制

目的 基于脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）/酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)/cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein, CREB）通路,探讨六味地黄丸对丙戊酸钠（sodium valproate, VPA）诱导的孤独症谱系障碍（autism spectrum disorder, ASD）仔鼠的作用机制。方法 将13只SD孕鼠随机分为两组,其中10只孕鼠在第12.5天时腹腔注射VPA溶液（600 mg·kg-1）为VPA组,另外3只孕鼠注射等体积生理盐水为对照组。第21天对两组雄性仔鼠开展行为学检测,筛选出符合ASD疾病模型的仔鼠30只,随机分为模型组（等体积生理盐水）,维生素D组（1 480 IU·kg-1）,六味地黄丸高（3 g·kg-1）、中（1.5 g·kg-1）、低（0.75 g·kg-1）剂量组,每组6只。正常雄性仔鼠6只,设为空白组（等体积生理盐水）。各组仔鼠连续灌胃14 d,1次/d,给药后再次...     

远志寡糖酯对β淀粉样蛋白25～35诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤及AKT / CREB / BDNF 信号通路的影响

目的 观察远志寡糖酯对β淀粉样蛋白25～35(Aβ_25～35)诱导的人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤及蛋白激酶B/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子(AKT/CREB/BDNF)信号通路关键凋亡蛋白的影响。方法 将培养的SH-SY5Y细胞分为对照组、Aβ_25～35 损伤模型组、远志寡糖酯(50、100、200、400 mg/L)组和Aβ_25～35 损伤+远志寡糖酯(50、100、200、400 mg/L)组。对照组和远志寡糖酯组分别给予等体积完全培养液和不同浓度的远志寡糖酯溶液后与细胞共孵育24 h; Aβ_25～35 损伤模型组和Aβ_25～35 损伤+远志寡糖酯组分别给予等体积完全培养液和不同浓度的远志寡糖酯溶液2 h后,加入25μmol/L Aβ_25～35的溶液与细胞共孵育24 h。采用MTT法检测SH-SY5Y细胞存活率;Hoechst 33258染色观察细胞凋亡;Western Blot检测SH-SY5Y细胞内pAKT/AKT、pC...     

淫羊藿苷通过核转录因子KappaB通路减轻大鼠椎间盘退变

【目的】探讨淫羊藿苷对椎间盘退变大鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只大鼠采用纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型。将存活的48只大鼠随机分为模型组、淫羊藿苷组、激动剂组、激动剂+淫羊藿苷组,每组12只,另取10只作为假手术组。激动剂+淫羊藿苷组给予淫羊藿苷6.0 g/kg灌胃、尾静脉注射脂多糖5 mg/kg,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷6.0 g/kg灌胃,激动剂组给予尾静脉注射脂多糖5 mg/kg,每日1次,连续2周。给药过程中,激动剂组和激动剂+淫羊藿苷组各死亡1只大鼠。给药结束后,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测血清白细胞介素（IL）-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,苏木素-伊红（HE）染色法观察椎间盘组织病理学改变,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测髓核细胞凋亡率,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测椎间盘组织核转录因子kappaB(NF-κB)p65、p-p65、B淋巴细胞瘤2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达水平,免疫组织化学法检测椎间盘组织p-p65蛋白阳性表达。【结果】模型组大鼠椎间盘髓核与纤...     

ANA-12通过靶向阻断BDNF/TrkB信号通路降低大鼠的脊髓炎症和缓解病理性疼痛

目的 探讨ANA-12靶向阻断脑源性神经营养因子（BDNF）/原肌球蛋白受体激酶B（TrkB）信号对炎症痛的抑制作用及机制。方法 将42只大鼠随机分为7组（6只/组）：BDNF处理下的对照组、ANA-12处理组、BDNF处理组以及BDNF和ANA-12联合处理组（BDNF+ANA-12）;炎症痛模型下的对照组、CFA处理组以及CFA和ANA-12联合处理组（CFA+ANA-12）。给药完毕后,对各组大鼠进行痛觉行为学检测,记录ANA-12处理对BDNF-急性痛和CFA-慢性炎症痛大鼠痛觉行为的影响;采用免疫印迹法检测各组大鼠脊髓组织TrkB信号、小胶质细胞标记蛋白Iba1和促炎细胞因子TNF-α以及炎症因子IL-1β、Caspase-1、NLRP3的表达水平。结果 与对照组相比,BDNF增加自发缩足次数（P<0.05）;与BDNF组相比,ANA-12降低自发缩足次数（P<0.05）。与对照组相比,CFA增加同侧机械刺激敏感性（P<0.05）;与CFA组相比,ANA-12增加同侧缩足阈值（P<0.05）。与对照组相比,BDNF和CFA增加磷酸化TrkB（Y705）水平（P<0.05）;与BDNF或CFA组相比,ANA-12降低TrkB（Y705）磷酸化水平（P<0.05）。与对照组相比,BDNF和CFA上调Iba1、TNF-α以及炎症因子表达（P<0.05）;与BDNF或CFA组相比,ANA-12降低Iba1、TNF-α以及炎症因子表达水平（P<0.05）。结论 ANA-12靶向阻断BDNF/TrkB信号可降低脊髓炎症并缓解急性痛和慢性痛。     

BDNF/TrkB通路活化星形胶质细胞对大鼠神经病理性痛的影响

目的 观察外源性脑源性神经营养因子(BDNF)对大鼠机械痛阈和星形胶质细胞的影响,探讨BDNF参与疼痛调控的可能机制.方法 将30只鞘内置管成功的大鼠随机分为空白对照组、安慰剂组、BDNF组、BDNF+星形胶质细胞抑制剂组(BDNF+氟代柠檬酸组)及BDNF+酪氨酸激酶受体B(TrkB)抑制剂组(BDNF+ K252a组),每组6只.予鞘内注入药物,1次/d×7 d.每次注药前1h测定50％机械缩爪阈值(50％ PWT);末次给药后1h取脊髓腰膨大,Western blotting法测定胶质细胞纤丝酸性蛋白(GFAP)及磷酸化TrkB的蛋白表达.结果 BDNF组大鼠后肢50％ PWT较空白对照组显著下降(P＜0.05);给药后第7天,BDNF组大鼠脊髓腰膨大GFAP和磷酸化TrkB的蛋白表达较空白对照组显著升高(P＜0.01).BDNF+氟代柠檬酸组和BDNF+K252a组50％ PWT和GFAP蛋白表达水平与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).BDNF+ K252a组磷酸化TrkB的蛋白表达与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BDNF可能通过磷酸化TrkB受体使脊髓星形胶质细胞活化,进而参与神经病理性痛的发生和发展过程.     

淫羊藿苷通过PERK/CHOP信号通路抑制视锥细胞内质网应激诱导的线粒体损伤的研究

目的 探讨在细胞内质网应激状态下,淫羊藿苷保护光感受器细胞的作用机制。方法 以毒胡萝卜素(0.2μmol/L)诱导小鼠视锥细胞(661W细胞)内质网应激模型,采用阿尔玛蓝染色法检测细胞活性,蛋白免疫印迹法检测未折叠蛋白效应相关蛋白——磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达水平,荧光成像和钙比例法检测Ca²⁺含量,荧光染色法评价线粒体功能(线粒体通透性转换孔和膜电位)。以体外分子对接技术分析淫羊藿苷与内质网钙-ATP酶的结合及相互作用。结果 毒胡萝卜素可诱导661W细胞死亡;淫羊藿苷(2.22～20.00 nmol/L)能够抑制毒胡萝卜素引起的661W细胞死亡(P<0.01)。毒胡萝卜素促进661W细胞PERK磷酸化(P<0.01)、上调转录因子CHOP的蛋白表达(P<0.01);淫羊藿苷(2.0μmol/L)能够抑制模型组细胞CHOP蛋白表达(P<0.01),有抑制PERK(Thr980)磷酸化的趋势。毒胡萝卜素作用于661W细胞的10 min内,引起胞...     

淫羊藿苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对早发性卵巢功能不全大鼠卵巢结构及功能的保护作用及机制

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢结构、功能的影响及可能作用机制。方法 从55只SPF级雌性SD大鼠中随机选取10只动情周期正常的大鼠作为对照组,剩余大鼠经腹腔注射环磷酰胺制备POI模型,成模大鼠随机分为模型组、ICA低(15 mg·kg^-1)、中(30 mg·kg^-1)、高(60 mg·kg^-1)剂量组,对照组及模型组大鼠每日灌胃等量生理盐水,连续28 d。计算各组大鼠卵巢湿重和卵巢指数;HE染色观察卵巢组织结构;TUNEL染色检测颗粒细胞凋亡率;ELISA法检测血清促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;RT-qPCR技术检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体S6蛋白激酶1(S6k1)mRNA相对表达量;Western blot法检测PI3K、Akt、mTOR和S6k1蛋白活性水平及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)和C...