实验动物视网膜神经节细胞的定量研究方法

尼氏染色、逆行标记和免疫标记是目前对视网膜神经节细胞(RGCs)进行定量研究的基本方法。尼氏染色是用碱性染料与神经元细胞内的尼氏体结合,使RGCs染色,并行计数,记数时需要排除非神经元的干扰。逆行标记是将荧光染液注射或贴附到上丘、外侧膝状体或视神经,染液通过神经元细胞轴突内的逆行轴浆运输,向视网膜神经节细胞的胞体内移行,并使其染色。免疫标记是使用特异性的Brn-3b或者Thy-1抗体与视网膜神经节细胞上的抗原结合标记,再行染色和计数。本文综述尼氏染色,逆行标记及免疫标记3种方法对RGCs进行定量计数的研究进展。     

青光眼视网膜神经节细胞凋亡的实验研究

目的 研究兔的实验性青光眼视网膜神经节细胞的死亡是否有凋亡参与。方法 前房注入固定的红细胞悬液使免眼压升高,分别在术后７,１４,２１,２８天处死动物,取视网膜组织,ＴＵＮＥＬ标记染色,电镜观察。结果 电镜下可见视网膜神经节细胞死亡特征为典型的凋亡早期特征－核浓染。免疫组ＴＵＮＥＬ法实验组发现神经节细胞凋亡,而正常对照组没有发现。结论 实验性青光眼的视网膜神经节细胞死亡有凋亡参与。这为通过调探凋亡而治疗青光眼的视网膜视神经损伤提供可能。     

视网膜神经节细胞多种培养方法的实验研究

目的探讨视网膜神经节细胞（ＲＧＣｓ）的多种培养方法。方法（１）在涂有鼠尾胶原的器皿上通过调整培养液培养：①乳鼠混合及纯化的ＲＧＣｓ；②单层星型胶质细胞上种植纯化的乳鼠ＲＧＣｓ；③引产胎儿混合ＲＧＣｓ。（２）检验鼠尾胶原及中脑顶盖提取液（Ｔｅ）对培养的乳鼠ＲＧＣｓ的影响。结果（１）混合培养的乳鼠及引产胎儿ＲＧＣｓ大多能存活２周以上；（２）纯化的乳鼠ＲＧＣｓ大多能存活４８ ｈ；（３）单层星型胶质细胞上种植的纯化乳鼠ＲＧＣｓ能存活４周以上；（４）鼠尾胶原及Ｔｅ对培养的乳鼠ＲＧＣｓ的贴壁及生长有明显的促进作用。结论通过调整培养液及改善微环境能用多种方法培养ＲＧＣｓ。     

兔视神经挫伤的实验研究

目的 研究兔视神经挫伤后视网膜、视神经结构及功能变化.方法 建立兔视神经挫伤模型,于不同时间作视网膜节细胞(RGC)、轴突染色记数,并检测闪光视诱发电位(FVEP).结果 伤后RGC数目持续下降并伴有轴突变性、坏死,4周时RGC平均记数为12.67±4.12/mm,轴突密度为36,085±285/mm2,均明显少于正常对照(P＜0.01).在伤后4小时FVEP下降至对照眼的54%,并持续至8周.结论 兔视神经挫伤后RGC、视神经出现渐进性退变,伴有视神经功能即刻下降.     

糖尿病视网膜病变病理机制研究中的模式动物选择

Diabetic retinopathy (diabetic retinopathy, DR) is characterized by retinal micro-vasculopathy and neuronal degeneration. At present, a variety of animal models have been developed for DR research through drug and diet induction and genome editing. Among the animals, rodents are the most commonly used mammals for studies of pathogenesis of DR, especially in the fields of genetic research, drug intervention (especially gene therapy, stem cell transplantation) and others. Due to the specific structure of macular which cannot be found in other animals, the non-human primates animal model has become significant important for DR research because its pathophysiological characteristics are very similar to those of human beings. In addition, dogs, pigs, cats, zebrafish ect are also utilized for establishing models of DR. Whether the DR model was induced or spontaneous established, most of them can only be found to show the lesions of early stage of DR, such as retinal microaneurysm, hard exudate, punctate and macular retinal hemorrhage, retinal vein dilatation, abnormality of retinal micro-vessels and so on. Only a few of them can be induced to show some late clinical features of DR, these typical clinical sign usually can be induced by local ischemia or injection of vascular endothelial growth factor. (Int Rev Ophthalmol, 2021, 45：449-454)     

雷帕霉素对缺氧损伤视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

背景 研究表明雷帕霉素(Rapa)可延缓人大脑细胞的衰老,改善大鼠局灶性脑缺血时脑组织代谢活动,对中枢神经细胞具有保护作用.视神经和视网膜神经节细胞(RGCs)属于中枢神经组织,但Rapa是否可对外伤后RGCs具有保护作用尚不清楚. 目的 探讨Rapa对氯化钴(CoCl2)诱导的缺氧损伤大鼠RGCs的保护作用,并探讨其可能的作用机制,为外伤性视神经病变(TON)的治疗提供新的思路.方法 用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养基培养大鼠RGC-5细胞,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态学变化.将细胞分为正常对照组及50、100、200、400和600 μmol/L CoCl2组,于细胞培养后24 h和48 h采用细胞生长分析系统检测各组细胞存活率.采用200 μmol/L CoCl2处理细胞以诱导建立RGC-5细胞缺氧损伤模型,然后将培养的细胞分为正常对照组、模型对照组和不同浓度Rapa干预组,Rapa干预组在缺氧模型细胞培养液中添加Rapa使其终浓度分别为0.1、0.4、1.6和6.4μmol/L,处理细胞24 h.采用细胞生长分析系统检测各组细胞的存活率;采用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用JC-1染色技术检测各组细胞线粒体跨膜电位(△ψm)的变化;采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞促凋亡基因bax mRNA的相对表达量. 结果 200 μmol/L CoC12作用RGC-5细胞后24 h细胞相对存活率为(70.51±5.00)％,与正常对照组的(100.00±3.29)％比较,差异有统计学意义(P＜0.01),成功构建细胞缺氧损伤模型.正常对照组、模型对照组和0.1、0.4、1.6、6.4 μmol/L Rapa干预组细胞存活率的总体比较差异有统计学意义(F=167.904,P=0.000),其中0.1μmol/L Rapa干预组细胞存活率明显高于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).正常对照组、模型对照组和0.1μmol/L Rapa干预组细胞凋亡率分别为25.4％、37.7％和25.3％,细胞线粒体膜电位分别下降了0.4％、6.3％和1.4％.正常对照组、模型对照组和0.1 μmol/L Rapa干预组细胞中baxmRNA相对表达量分别为1.01±0.21、3.52±0.30和1.66±0.20,总体比较差异有统计学意义(F=88.034,P=0.000),其中模型对照组细胞中bax mRNA相对表达量均明显高于正常对照组和0.1μmol/L Rapa干预组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 Rapa可对CoC12诱导的缺氧RGC-5细胞发挥保护作用,其主要作用机制是下调细胞中促凋亡分子bax的表达,并提高RGC-5细胞存活率.     

应当重视糖尿病视网膜神经损伤及保护的研究

糖尿病视网膜病变包括视网膜微血管病变和视网膜神经病变.临床上对前者的研究较多,包括视网膜微血管损伤及其并发症的诊断和治疗;而对后者则重视不够,文献报道也较少.近几年的研究结果显示,糖尿病患者视网膜神经元和胶质细胞的功能损害常较微血管改变更早,加强对糖尿病视网膜神经损伤和视网膜神经保护的研究将有利于正确认识其疾病的本质,对预防和逆转早期糖尿病视网膜神经病变有十分重要的意义.     

青光眼视神经保护治疗的实验研究

视网膜神经节细胞死亡是青光眼视神经损伤的最终共同通路，阻断或延缓神经节细胞原发性和（或）继发性损伤的治疗方法称为青光眼视神经保护治疗。目前这一领域的研究包括谷氨酸拮抗剂、钙通道阻滞剂、抗氧化剂、NO合成酶抑制剂、神经营养、凋亡抑制剂、疫苗等。在未来的青光眼治疗中视神经保护治疗很可能成为一种重要的辅助治疗措施，将和包括降眼压药在内的其他手段一起来减少各种原发性和（或）继发性致病因素对视网膜神经节细胞的损伤。     

杞贞胶囊对视网膜神经节细胞保护作用及其作用机制的实验研究

目的 探索杞贞胶囊对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞的保护作用及其作用机制。设计 实验研究。研究对象 SPF级SD大鼠72只。方法 72只SD大鼠随机分为2组：用药组36只;对照组36只。两组大鼠右眼行视神经夹伤,于球后2 mm处用40 g微型视神经夹夹伤视神经60 s。左眼作为正常对照。夹伤后2小时及此后每日予以灌胃给药一次。用药组给予20%杞贞溶液2.5 ml/kg,对照组给予生理盐水2.5 ml/kg。给药第28天取眼球标本,用药组和对照组各取24只行HE染色﹑Tunel试剂盒染色﹑Caspase-3免疫组化染色;剩余每组12只分离视网膜提取mRNA,测定Bax和Bcl-2基因的表达量。主要指标 视网膜厚度﹑Bax和Bcl-2基因表达量。结果 用药组视网膜厚度平均为（109.0±4.4）μm;对照组视网膜厚度为（101.8±7.6）μm（F=29.497,P=0.028）。两组间Bax基因表达差异具有统计学意义（t=1.089,P=0.028）;Bcl-2基因表达差异未见统计学意义（t=0.553,P=0.692）。结论 杞贞胶囊对大鼠视神经夹伤后的视网膜神经节细胞具有保护作用,可能通过下调Bax基因表达和抑制Caspase蛋白活性从而减少视网膜神经节细胞凋亡。     

经上丘逆行标记法视网膜神经节细胞定量的实验研究

目的　建立一种视网膜神经节细胞 (RGCs)定性及定量的研究方法 ,并了解大鼠RGCs密度分布情况。方法　暴露大鼠双上丘后将饱含 3 0 %辣根过氧化物酶 (HRP)溶液的明胶海绵片贴附于双上丘表面 ,大鼠存活 2 4h后 ,取出视网膜行HRP组织化学反应 ,计算机图像分析系统对RGCs进行分类及计数。结果　左右眼RGCs密度分别为 14 66±3 76/mm2 及 14 5 7± 40 4/mm2 ,左眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 90± 3 71/mm2 及 14 4 2± 3 82 /mm2 ,右眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 67± 410 /mm2 及 14 4 6± 40 0 /mm2 。结论　成功地建立了直接上丘HRP逆行标记RGCs定量计数法 ,正常大鼠双眼RGCs密度基本相同 ,颞侧及鼻侧RGCs密度基本相同。     

应当密切关注由颈动脉阻塞引起的视网膜血循环障碍

临床上可以见到越来越多的人发生颈动脉阻塞，据统计大约 69% 的颈动脉阻塞的患者的临床首发症状是眼缺血综合征。但是由于眼缺血综合症的症状较为隐蔽，因此临床上经常发生漏诊、误诊。诊断眼缺血综合征的最佳手段是眼底荧光素血管造影，密切注意观察眼底荧光素血管造影的早期像，可以帮助早期发现、诊断由颈动脉阻塞引起的眼缺血综合征。 （中华眼底病杂志，2008，24：79-81）     

颅咽管瘤患者的视功能损害研究

目的探讨颅咽管肿瘤患者视功能检查的重要意义及眼科医生对于颅咽管瘤患者的早期诊断的重要性。方法回顾性分析2010．7—2013．6在我院南区神经外科手术证实的73名颅咽管瘤患者的临床资料包括术前的视力、视野检查结果。结果73名颅咽管瘤患者男女比例一致,41—60岁患者所占比例最高。52％患者首发症状为视功能障碍,视力下降的患者中有71％双眼视力均低于0.3。偏盲性视野占68．6％。结论重视颅咽管瘤患者的视功能损害情况,有助于眼科医生早期诊断颅咽管瘤,有助于神经外科医生的术前、术后评估,达到控制肿瘤、降低复发率的目的。     

Frequency transfer properties of the spike generating mechanism of cat retinal ganglion cells

The dynamic properties of the spike generating (SG) mechanism of retinal ganglion cells have been studied from intracellular recordings in the cat eye. Intracellularly recorded light flicker responses were separated by computer into spike trains and corresponding generator potentials. Both the spike train and the generator potential responses to temporally modulated light spots were analysed in terms of amplitude and phase plots. The differences in dynamic properties between the two response measures reveal that the SG-mechanism affects the temporal frequency transfer properties of retinal ganglion cells to a considerable extent. With respect to the transfer of the amplitude of the first harmonic the SG-mechanism has differentiating (or high-pass) properties. This means that the responses to high temporal stimulus frequencies are amplified relatively much more than are the responses to lower frequencies. Furthermore, the SG-mechanism causes a phase lead of the spike train response relative to the generator potential by, on average, 37 degrees. The measured frequency responses, among other things, have been used to verify and to quantify the SG-model that we proposed in a previous paper (Lankheet, Molenaar & van de Grind, 1989). With this model it proved possible to reproduce the spike train responses as model output from the corresponding measured generator potentials as model input. A good qualitative and quantitative correspondence between model output and the measured spike trains was obtained for a wide range of stimulus frequencies and with fixed values of the model parameters. With parameter values that optimized this correspondence the model allowed us to investigate the dynamic behaviour of the SG-mechanism in more detail. It also provides a reliable and validated method to predict the shape of the generator potential from the spike train (the "inversion problem").     

重视角膜基质细胞的作用

位于角膜基质胶原纤维板层之间的角膜基质细胞处于静息状态,可以分泌胶原以及硫酸角质素,对角膜透明性的维持发挥着重要作用。当角膜受到损伤时,角膜基质细胞可发生凋亡,向成纤维细胞以及肌成纤维细胞等修复细胞表型转化,进而促进细胞再生,诱导角膜纤维瘢痕形成。此外,大量角膜基质细胞还具有干细胞特性。目前已知角膜基质细胞是多种机体功能的积极参与者,应重视角膜基质细胞的作用。     

Association of visual function and ganglion cell layer thickness in patients with diabetes mellitus type 1 and no or minimal diabetic retinopathy

Diabetic retinopathy (DR) classically presents with micro-aneurysms, small haemorrhages and/or lipoprotein exudates. Several studies have indicated that neural loss occurs in DR even before vascular damage can be observed. This study evaluated the possible relationship between structure (spectral domain-optical coherence tomography) and function (Rarebit visual field test) in patients with type 1 diabetes mellitus and no or minimal diabetic retinopathy (DR). Results demonstrated loss of macular visual function and corresponding thinning of the ganglion cell layer (GCL) in the pericentral area of the macula of diabetic patients (Rs = 0.65, p < 0.001). In multivariable logistic regression analysis, GCL thickness remained an independent predictor of decreased visual function (OR 1.5, 95% CI 1.1-2.1). Early DR seems to include a neurodegenerative component.     

关注糖尿病黄斑水肿的光学相干断层扫描分型及相关影像特征

糖尿病性视网膜病变(DR)是目前成人第一致盲眼病。其中,糖尿病性黄斑水肿(DME)是导致糖尿病患者中心视觉功能严重障碍的主要原因。DME不同表现及分型对确定其严重程度及选择治疗方式至关重要。光学相干断层成像(OCT)是目前测量视网膜厚度,评估DME形态及微细结构的主要检查手段。DME的OCT检查有多种形态表现及伴随影像,各种表现反映不同的病理基础。为此,笔者强调通过DME形成机制,理解DME病理基础上的OCT分型方法,掌握相关影像特征及其临床意义,为判断疾病严重程度、选择治疗方案及疾病的预后提供更明确的信息。     

学龄前儿童常用视力表的研究进展

学龄前期(3-6岁)是视觉发育的关键时期，及早发现并治疗学龄前儿童视觉问题至关重要。视力表是筛查儿童视觉问题的重要工具，国内常采用标准对数视力表和儿童图形视力表，而国外则常用Lea、HOTV和ETDRS视力表。已经有很多研究报道了这三种视力表在儿童视力检查中的可测性、可重复性及诊断视觉相关问题的敏感性。然而，在国内这三种视力表的应用较为有限，本文就这三种视力表的设计原理、临床中的应用及各自的特点进行综述，以便更好地了解它们在学龄前儿童中的适用性和局限性，从而为未来视力检查方法的选择和改进提供参考。     

Distribution and soma size of ganglion cells in the retina of the eastern chipmunk (Tamias sibiricus asiaticus)

Topographic distribution and soma size of ganglion cells were studied in Nissl-stained, whole-mounted retinas of the eastern chipmunk. High density areas in the central retina were elongated horizontally, making up the visual streak. The total count of ganglion cells was estimated as 410,000. Throughout the retina soma size of ganglion cells showed a uimodal distribution, although a distinct population of large cells was found in the dorso-temporal periphery.     

关注哺乳动物晶状体再生及“晶状体干细胞”的研究

一些哺乳动物的晶状体摘出后,在囊袋存在的情况下可以再生出新的晶状体.目前普遍认为囊袋内不能被完全清除而残留的晶状体上皮细胞(LECs)是晶状体再生的来源.但是哺乳动物的晶状体再生并非晶状体发育的简单重复,残余LECs的无序增生、移行和转化会影响再生晶状体的透明性.大量研究围绕LECs异常增生的机制进行,而近年来“晶状体干细胞”理论被逐渐提出.总结国内外关于哺乳动物晶状体再生研究的现状,提出一些观点和看法,希望为临床预防后发性白内障以及对其进行药物治疗提供新的靶点和思路.     

重视儿童眼部整形手术时机和术式选择

儿童眼部畸形患者是眼部整形患者中的重要群体之一。儿童的生理、解剖与成年人有很大差异，儿童的视功能、眼眶及面部均处于发育期，其眼部畸形尤其是一些先天性畸形常伴有或最终导致视功能异常，先天或后天性的眼球缺失或发育不全则致眼眶及面部发育迟滞，因此儿童眼部整形不单纯为一种整形美容手术，更多需关注整形手术对儿童视功能及眼眶发育的影响，因此选择适当的手术时机及手术方式对于儿童眼部整形尤为重要。