神经元蜡样质脂褐质沉积病(NCL)的基因型与表型相关性研究

Objective:Genotype-phenotype associations were studied in 517 subjects clinically affected by classical neuronal ceroid lipofuscinosis (NCL). Methods:Genetic loci CLN1-3 were analyzed in regard to age of onset, initial neurological symptoms, and electron microscope (EM) profiles. Results: The most common initial symptom leading to a clinical evaluation was developmental delay (30%) in NCL1, seizures (42.4%) in NCL2, and vision problems (53.5%) in NCL3. Eighty-two percent of NCL1 cases had granular osmiophilic deposits (GRODs) or mixed-GROD-containing EM profiles; 94% of NCL2 cases had curvilinear (CV) or mixed-CV-containing profiles; and 91% of NCL3 had fingerprint (FP) or mixed-FP-containing profiles. The mixed-type EM profile was found in approximately one-third of the NCL cases. DNA mutations within a specific CLN gene were further correlated with NCL phenotypes. Seizures were noticed to associate with common mutations 523G>A and 636C>T of CLN2 in NCL2 but not with common mutations 223G>A and 451C>T of CLN1 in NCL1. Vision loss was the initial symptom in all types of mutations in NCL3. Surprisingly, our data showed that the age of onset was atypical in 51.3% of NCL1 (infantile form) cases, 19.7% of NCL2 (late-infantile form) cases, and 42.8% of NCL3 (juvenile form) cases.Conclusion:Our data provide an overall picture regarding the clinical recognition of classical childhood NCLs. This may assist in the prediction and genetic identification of NCL1-3 via their characteristic clinical features.     

等位基因特异性引物延伸法在婴儿型和幼儿型神经元蜡样质脂褐质沉积病产前诊断中的应用

Theinfantile (INCL ,NCL1,OMIM :2 5 6 730 )andlate infantile (LINCL ,NCL2 ,OMIM :2 0 4 5 0 0 )neuronalceroid lipofuscinosis (NCLs)areamongthemostcommonchildhoodlysosomallipid proteindisor ders.Theyarecharacterizedbyrapidlyincreasingseverityofseizures ;dete…     

UGT1A1基因复合杂合突变致吉尔伯特综合征一例

一例吉尔伯特综合征患儿自幼反复出现巩膜黄染,无其他自觉症状;血清胆红素水平升高,以非结合胆红素为主;排除胆道梗阻、溶血等其他引起黄疸的因素;基因检测发现患儿尿苷二磷酸葡糖苷酸转移酶1A1（UGT1A1）基因存在UGT1A1*28和c.211G>A杂合突变。     

凝血因子X基因复合杂合错义突变Gla26Lys和Ser425Pro导致因子X缺陷症

目的:检测1例凝血因子X(FX)缺陷患者的基因突变.方法:用活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)及FX促凝活性(FX∶C)等测定进行表型诊断;用PCR法对其F10基因8个外显子及其侧翼序列和5'端非翻译区(5'UTR)序列进行扩增,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变.突变位点经限制性内切酶分析排除多态性.结果:患者APTT 100.0 S、PT 46.6 s、FX:C 2.4%.位于F10基因Exon2内杂合性G8394A错义突变导致Gla(GAG)26Lys(AAG);位于Exon8内的杂合性T28262C错义突变导致Ser(UCC)425Pro(CCC).限制性内切酶分析排除Ser425Pro为多态性.结论:复合杂合性错义突变Gla26Lys和Ser425Pro可能是导致该例患者FX缺陷症的原因.这是2个新的导致FX缺陷症的F10基因突变.     

Ⅰ型神经纤维瘤一家系的基因检测及产前诊断

目的: 对一个Ⅰ型神经纤维瘤家系进行遗传学病因分析及产前诊断。方法: 应用目标捕获高通量测序和Sanger测序技术,对一个散发的Ⅰ型神经纤维瘤家系进行基因突变分析。提取先证者及其父母外周血淋巴细胞RNA,行RT-PCR及扩增产物测序分析。明确突变致病性后,抽取羊水标本对胎儿行产前基因诊断。结果: 先证者NF1基因存在c.1260+4A>T杂合剪接突变,为新发突变。RNA剪接分析提示先证者NF1基因发生转录时,11号外显子3'端发生相邻内含子区13个碱基的插入,理论上可导致蛋白编码提前终止,产生截短蛋白,影响蛋白功能。产前基因检测结果显示胎儿未携带该突变。结论: NF1：c.1260+4A>T杂合剪接突变是该Ⅰ型神经纤维瘤患者的致病原因,本研究结果为该家系遗传咨询和产前诊断提供了理论依据。     

肝豆状核变性中ATP7B基因复合突变的研究

目的通过对肝豆状核变性(Wilson’s disease,WD)患者ATP7B基因测序,探讨其突变率及与WD的关系,分析WD中ATP7B基因复合突变的意义。方法提取67例临床确诊的WD患者口腔黏膜细胞的基因组DNA,应用PCR技术对ATP7B全部外显子5′端→3′端扩增,运用DNA直接测序法检测突变。结果在67例患者中,发现WD中ATP7B基因突变患者52例,检出率为77.61%,其中16例纯合子突变(12例Arg778Leu纯合子突变和4例Arg919Gly纯合子突变),5例复合突变,31例单纯杂合子突变。5种ATP7B基因复合突变国内罕见报道。结论本研究发现5种ATP7B基因的复合突变,这些复合突变可能与WD的发生发展相关,值得进一步深入研究。     

表皮松解性掌跖角化症一家系的KRT9基因突变研究

目的研究一中国汉族人表皮松解性掌跖角化症(EPPK)家系KRT9基因是否发生突变,分析基因型和表型之间的相关性。方法收集1例EPPK家系,采用聚合酶链反应及直接测序的方法对该家系中6例患者KRT9基因进行突变检测,以家系中的14例健康者和100例无亲缘关系的正常人作对照。结果家系中6例患者KRT9基因的1号外显子第485位碱基鸟嘌呤G被腺嘌呤A替代,导致第162位的精氨酸被谷氨酰胺取代(R162Q),而家系中14例正常人和家系外100例正常人未发现此突变。结论错义突变c.485G>A是导致该家系临床表型的主要原因。     

CLN6基因复合杂合突变导致神经元蜡样脂褐质沉积症一家系遗传学研究

目的探讨一个常染色体隐性遗传神经元蜡样脂褐质沉积症（NCL）家系的遗传学原因。方法应用目标区捕获高通量靶向测序对先证者进行候选基因突变筛查，并通过PCR测序在先证者及其父母中对突变位点进行验证；RT-PCR及TA克隆测序考察上述两种突变是否影响剪接。结果测序结果显示先证者存在 CLN6：c.486+2T>C和c.486+4A>T复合杂合突变，分别来自父母双方。RT-PCR及TA克隆测序提示两种突变均可导致两种异常剪接。 结论 CLN6：c.486+2T>C和c.486+4A>T复合杂合突变很可能为该NCL家系患者的遗传学病因，新突变基因丰富了 CLN6基因突变谱。     

用PCR—SSCP方法探讨ras基因,p53基因突变与喉癌的关系

目的：研究ｒａｓ基因、ｐ５３基因突变与喉鳞状细胞癌发病的关系。方法：应用多聚酶链反应－单链构像多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法分析４０例喉鳞状细胞癌Ｈ－ｒａｓ,Ｋ－ｒａｓ,和Ｎ－ｒａｓ基因的第１２密码子,ｐ５３基因第５,７外显子中点突变的情况。结果：Ｈ－ｒａｓ基因突变９例,突变率为２２．５％（９／４０）;Ｋ－ｒａｓ基因突变８例,突变率为２０％（８／４０）,Ｎ－ｒａｓ基因突变５例,突变率为１２．５     

葡萄糖激酶W257R突变致青少年发病的成人型糖尿病一家系分析

青少年发病的成人型糖尿病（MODY）是一类以常染色体显性模式遗传的单基因疾病,临床表现以无症状、轻度空腹血糖升高为特征,很少出现糖尿病并发症。本文报道一例中国人群中葡萄糖激酶（GCK）基因新发W257R突变所致的MODY。在先证者及父亲、弟弟中均发现GCK基因（Chr744187343）第7号外显子的杂合突变c.769T>C（p.W257R）。该家系中W257R突变在中国人群中为首发。     

应用聚合酶链式反应-酶切法进行脊髓性肌萎缩的基因诊断及产前诊断

目的：建立一种高效,快速的脊髓性肌萎缩（SMA）的基因诊断与产前诊断的方法。方法：基于运动神经元生存基因（SMN）基因的两个同源拷贝碱基上的差异,采用聚合酶链反应（PCR）－酶切的方法,选择特异的酶切位点对11例SMA患儿进行SMN基因检测。同时采用SMN基因内部及旁侧的C161,C171,C212,C272等4对（CA)n对4个家系进行连锁分析。结果：11例SMA患儿中10例患儿缺失SMNt7,8号外显子,1例患儿仅缺失7号外显子。4个SMA家系中有3个胎儿未发现与先证者完全相同的SMN基因片段,1个胎儿检测到与先证者完全相同的SMN基因片段。结论：该方法快速,简便,适合临床推广。     

中国北方一马凡氏综合征家系致病基因突变研究

目的研究确定我国北方一马凡氏综合征(MFS)家系致病基因突变位点。方法对马凡氏综合征一家系进行临床研究和系谱分析。采集家系中3例患者和3例健康成员的静脉血,提取基因组DNA。应用聚合酶链反应(PCR)扩增马凡氏综合征致病基因原纤维蛋白1(FBN1)基因外显子及外显子-内含子接头处,直接测序确定致病的基因突变。结果马凡氏综合征患者的FBN1基因外显子6发生了错义突变,cDNA 640位的鸟嘌呤被腺嘌呤取代(G640A);对应的甘氨酸改变为丝氨酸。突变后EagⅠ内切酶位点消失。该突变在家系中表现为与疾病共分离。结论 FBN1基因突变G640A是该马凡氏综合征家系的致病基因突变。     

腺瘤性结肠息肉基因突变的检测

报道了腺瘤性结肠息肉（ＡＰＣ）基因突变位点的聚合酶链反应－限制性片断长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法。７个家族性腺瘤性息肉病（ＦＡＰ）家系中发现１个家系有该基因１３０９－１３ｌｌ密码子区域ＡＡＡＧＡ片断的缺失，并得到了序列分析证实。通过该家系亲缘族的检查，发现了２例青年病人，其结果与纤维肠镜检查结果一致。为早期发现部分ＦＡＰ患者提供了一个简便、可靠的检测手段。本文结果也表明中国人ＦＡＰ患者存在与西方国家相同的ＡＰＣ基因的突变方式。     

Wnt-5a在原发性肝细胞癌发生中的表达及临床意义

目的 检测Wnt-5a基因和基因产物在原发性肝细胞癌中的表达,探讨Wnt-5a基因在肝癌发生过程中的作用和临床意义.方法 采用实时定量PCR技术,检测Wnt-5a mRNA在26例新鲜肝细胞癌和癌旁组织中的含量;用免疫组化法观察Wnt-5a蛋白在85例肝细胞癌和癌旁组织、15例肝硬化组织中的表达.结果 Wnt-5a mRNA在肝癌及癌旁组织中的相对含量分别为0.102 127±0.158 620和0.020 106±0.022 075,两者间差异有统计学意义（P＜0.05）;Wnt-5a蛋白在肝细胞癌、癌旁组织和肝硬化中的阳性率分别为21.2％ （18/85）、81.26％ （69/85）和86.7％ （13/15）,Wnt-5a在肝癌组织中的阳性表达显著低于肝硬化和癌旁组织,差异有统计学意义（P ＜0.01）;Wnt-5a蛋白在肝癌中的表达与肿瘤的TNM分期和血清甲胎蛋白（AFP）含量有关（P＜0.05）.结论 Wnt-5a基因在HCC基因转录中呈上调表达,而在蛋白水平显示为缺失和下调表达,提示肿瘤细胞是在蛋白翻译水平而不是转录水平干扰了Wnt-5a基因功能.