诱导多潜能干细胞来源的神经干细胞在阿尔茨海默病模型及其治疗方面的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是最常见的神经退化性疾病,临床表现主要为记忆力逐渐丧失和认知功能障碍。其药物治疗效果不佳,且临床试验取得的成果少,但利用神经干细胞(NSCs)移植到AD小鼠模型的脑部,可恢复部分行为学功能。由于诱导多潜能干细胞(iPSCs)来源的NSCs,具有分化效率高、不存在排斥反应及伦理问题等优点,因而为神经退行性疾病提供了新的治疗策略。故探讨iPSCs向NSCs分化及提高其分化效率的方法,对iPSCs及由iPSCs来源的NSCs分化的神经元细胞在AD模型以及治疗方面的研究具有重要意义。     

诱导性多能干细胞在神经系统变性疾病中的研究与应用

神经系统变性疾病为一类缓慢起病、病程呈进行性发展、预后不良的疾病。近年来,神经变性疾病的发病率逐步上升。但是,临床上对于该类疾病还没有十分有效的治疗方法,其发机制也未完全清楚。随着体细胞重编程技术的进步,疾病特异性诱导性多能干细胞被逐渐应用于神经变性疾病发病机制、药物筛选及临床治疗方法的研究。然而,体细胞重编程技术尚处于早期级阶段,诱导性多能干细胞存在潜在的致癌风险及产生效率较低等问题,未来研究人员将致力于建立安全、高效、符合临床标准的诱导性多能干细胞。     

诱导性多能干细胞研究进展及应用前景

将体细胞或成体干细胞重编程转变为诱导性多能干细胞(iPSCs)技术是近年来再生医学领域的重大进展。它是通过人工方法将适当的外源性转录因子导入体细胞或成体干细胞,使体细胞或成体干细胞转化为具有无限增殖潜能和定向分化能力、类似于胚胎干细胞的一类"人造干细胞"。来源于特定患者体细胞的iPSCs为医学研究提供了强有力的工具,并有可能为损伤修复的替代治疗提供细胞来源。现重点讨论iPSCs在重编程过程中最新研究进展并概述了iPSCs的临床应用前景。     

诱导性建立多能干细胞系

目的建立多能干细胞系,并鉴定其是否具有正常于细胞的特性。方法将原代皮肤标本用胶原酶消化处理,利用成纤维细胞培养基进行培养,然后感染病毒。对挑选的人成体细胞来源的iPS克隆进行扩大培养,并对克隆进行免疫荧光检测和lit-PCR检测,确定表达的分子标志,采用体外三胚层分化来鉴定其生物学特性。结果所获得的iPS细胞经鉴定具有碱性磷酸酶活性。并表达Nanog、SSEA-4、Sox2、TRA-1-60等干细胞特异标记物,可形成拟胚体并在体内外可以分化为三胚层的细胞类型。结论成功建立了iPS细胞系,为今后的研究提供了良好的细胞模型。     

诱导性多能干细胞的基础和临床研究进展

通过导人外源基因将已分化细胞诱导成为一个多功能的干细胞,具有类似胚胎干细胞(ESC)的所有特性,在形态学、基因表达状况和表观遗传修饰方面都与ES细胞十分相似.该方法相对简单和稳定,并避开了伦理争议,具有重要意义.     

用精神分裂症患者皮肤成纤维细胞构建诱导性多潜能干细胞模型

目的将精神分裂症患者来源的人皮肤成纤维细胞(HDF)重编程为诱导性多潜能干细胞(i PSCs),为精神分裂症患者建立i PSCs模型。方法采用聚合酶链反应技术从p EP4EO2SEM2K质粒上扩增2条目的片段:OCT4-IRES2-SOX2和C-MYC-IRES2-KLF4,将其连接到慢病毒载体p LVX-IRES-m Cherry上。构建成功的质粒通过磷酸钙转染法转染293T细胞包装病毒,检测病毒活力后侵染患者皮肤成纤维细胞,将其去分化为诱导性多潜能干细胞,并检测其多能性。结果测序表明重组慢病毒载体构建成功,并制备了具有良好侵染活力的重组慢病毒。将含4种重编程因子的慢病毒颗粒侵染1例精神分裂症患者的HDF后,HDF的形态逐步发生变化,最终形成典型的i PSCs克隆。结论成功将1例精神分裂症患者成纤维细胞重编程为iPSCs,为以后建立更多精神分裂症疾病模型奠定基础。     

诱导性多潜能干细胞的研究进展

多能干细胞是一种能够分化成内胚层,中胚层,外胚层三个胚层能力的细胞。目前有四种技术可获得多能干细胞,分别为体细胞核转移技术、体细胞与多能干细胞融合技术、利用多能干细胞提取物诱导技术、及诱导性多能干细胞技术。1996年7月Wilmut虽然通过体细胞核转移技术培育出世界上首例哺乳动物＂多莉羊＂,使治疗性克隆有了实质性进展,但是体细胞核移植技术形成胚胎和个体发育的低效使其应用受到很大限制,而体细胞与多能干细胞融合技术、     

诱导性多能干细胞的来源 优化及应用

<正>诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)可来源于人和动物细胞,可通过导入特定的几个转录因子转染直接诱导胎儿、新生儿和成年动物体细胞,使其重编程为iPS细胞。这相对于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)的来源更方便、更丰富[1]。iPS细胞的产生克服了使用传统方法的伦理问题,iPS细胞具有和胚胎干细胞类似的功     

诱导性多功能干细胞在脊髓损伤干细胞治疗中的研究进展

2012年诺贝尔生理与医学奖颁发给Shinya Yamanaka和Sir John Gurdon后,受此风潮影响,医学领域对诱导性多功能干细胞(iPS)和重编程技术的关注激增.当iPS被认为极有可能开启细胞治疗和再生医学一个新时代时,基于iPS的细胞治疗应用于临床前首当其冲的是安全相关问题.在这篇综述中,笔者概述了iPS来源的神经干/祖细胞在脊髓损伤(SCI)的临床前研究以及其体内安全性问题,并试图讨论其临床应用策略.     

诱导多功能干细胞分化为脊髓神经元的代表性标志物的鉴定

近期引起广泛关注的诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)的成功开发为神经再生提供了一条新的思路.由病毒或非病毒的方法传输重要的转录因子对体细胞进行重编程而产生的iPS细胞,除了拥有胚胎干细胞所具有的各种分化潜能外,它还绕开了人类胚胎干细胞研究所带来的伦理问题,为再生医学和组织移植提供充足的细胞来源.然而多能性的干细胞注射至体内并不能自动分化为各种成体细胞,因此移植多能性干细胞的关键一步就是需要在体外优化分化条件使之达到最恰当、最适宜移植的程度,这样才能够在移植后迁移至神经受损部位,达到在结构和功能上的修复或替代.本篇综述以细胞治疗神经损伤中的脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)疾病模型为出发点,以iPS细胞向脊髓神经元分化为方向,综述探讨鉴定与区别脊髓中的神经元的各类特定标志物.该篇文章的重要研究意义在于一方面利用这些特定的标志物可以区分从多能干细胞分化为各类神经细胞的混合细胞鉴定筛选出分化为神经元细胞的比例,从而找出最优分化条件;而在另一方面利用这些标志蛋白在体内鉴定已经移植的神经细胞前体如何可以进一步分化为神经元细胞,从而可以进一步探讨移植的不同神经细胞在再生修复中的作用与机制.     

大鼠诱导性多能干细胞向神经前体细胞诱导分化研究

目的探讨大鼠来源的诱导性多能干细胞(iPS细胞)向神经前体细胞(NPC)定向诱导分化的方法。方法在大鼠iPS细胞培养到悬浮类胚体阶段加入维甲酸(RA)诱导分化,对分化获得的细胞,分别通过免疫荧光染色和实时定量PCR方法检测NPC标志物、用BrdU免疫荧光染色检测其增殖能力、并通过大鼠视网膜下腔移植对其存活、整合情况及分化能力进行检测。结果经诱导分化获得的细胞能够在贴壁培养条件下形成Rosette结构、表达NPC标志物并且绝大多数呈BrdU阳性,移植到大鼠视网膜下腔后能分化为神经元和胶质细胞。结论大鼠iPS细胞能够通过悬浮EB加RA诱导的方法分化为NPC,有可能作为细胞移植治疗视网膜退行性疾病的供体细胞。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响

目的研究神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后Caspase-3和c-fos表达的影响。方法 SD大鼠45只,随机分成3组(n=15):假手术组、脊髓损伤模型组(模型组)和神经干细胞移植组。假手术组仅打开锥板但不离断脊髓;模型组动物锥板打开后横向断开脊髓,止血并逐层缝合;神经干细胞移植组椎板打开后横向断开脊髓,止血并注入神经干细胞悬液,再逐层缝合。手术后1、2、3和14 d对大鼠进行神经功能评分(BBB评分)。14 d后处死动物,取脊髓组织,部分用于制备切片并进行TUNEL标记,检测神经细胞(神经元)的凋亡;对另一部分脊髓组织进行蛋白提取,Western blotting检测Caspase-3和c-fos蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组和神经干细胞移植组BBB评分均显著下降(P<0.05);但神经干细胞移植组神经功能改善情况好于模型组(P<0.05)。模型组和神经干细胞移植组的细胞凋亡率均显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,模型组和神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著高于假手术组(P<0.05);神经干细胞移植组大鼠脊髓组织中Caspase-3和c-fos的表达量显著低于模型组(P<0.05)。结论在大鼠脊髓损伤后,神经干细胞移植能够加快大鼠损伤后的恢复并降低细胞凋亡率,使Caspase-3和c-fos的表达量减少,对大鼠脊髓损伤具有治疗作用。     

阿尔茨海默病的分子机制与神经干细胞移植治疗的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)亦称老年性痴呆，是1907年由德国精神病学家和神经解剖学家Alois Alzheimer描述并命名的，它是以进行性痴呆为特征的大脑退行性变性疾病。该病常见于老年人，其发病率随年龄增长而逐渐上升，65～74岁发病率为3．0％，75～84岁为18．7％，85岁以上为47．2％。顶计到2025年全球将有2，200万AD患者，到2050年AD患者将增加到4，     

成体神经干细胞巢

对于成年哺乳动物来说，只有神经发生区域：室下区（subventricular zone，SVZ）和海马齿状回的颗粒下层（subgranular zone，SGZ）的神经干细胞，可以在体内向神经元分化，而其他区域的神经干细胞在体内只能分化为神经胶质细胞。但将神经发生区域的干细胞移植到非神经发生区域，则只能分化为胶质细胞；而非神经发生区域的干细胞移植到神经发生区域后，就能向神经元分化；这无疑会使我们想到体内环境存在某种调节神经干细胞分化的机制。目前对神经干细胞生物学特性影响因素的研究多集中在某些单个因子的领域，这些研究虽可以反映某些因子的作用途径，但尚无法全面了解神经干细胞在体内复杂环境下的生物学特性。神经干细胞巢（neural stem cell niche）的发现，为我们全面了解神经干细胞的生物学特性提供了切入点。     

干细胞移植治疗阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病(AD)的病理机制十分复杂,至今仍不明确,其治疗主要以口服药物为主,仅能缓解症状,并不能降低致残率,而干细胞移植作为近年医学界关注的重点和热点,为AD的治疗提供了新方向.干细胞能修复损伤的神经元,恢复神经功能,减少药物使用的不良反应,以改善患者生活质量.目前,干细胞移植技术日趋成熟,对各种类型干细胞在治疗A...     

诱导性多能干细胞形成过程中转录因子的研究进展

诱导性多能干细胞(iPS)是以反转录病毒为载体将胚胎特异性转录因子导入体细胞,使其诱导分化为具有胚胎干细胞(ESCs)特性的细胞。这种多能干细胞在细胞形态、增殖速率、致瘤性、基因表达以及形成嵌合小鼠的能力上与ESCs有许多相似之处,将来可能成为ESCs在临床应用中的替代。现对iPS细胞相关的几种转录因子及其在重编程过程中的作用,以及转导基因的选择予以综述。     

诱导性多潜能干细胞滋养层制备条件的实验研究

目的制备小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblasts,MEFs）滋养层,用于诱导性多潜能干细胞（Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs）的体外培养。方法取13.5～15.5天胎龄的胎鼠,采用组织消化法分离原代培养成纤维细胞,对MEFs的生长形态、生长曲线进行观察。采用10μg/ml丝裂霉素C预处理P2～P3代MEFs 2～3h制备出细胞滋养层,在该滋养层上进行iPSCs培养,观察iPSCs的集落生成情况,并行碱性磷酸酶细胞染色。结果 MEFs经丝裂霉素C预处理后细胞既不增殖,也不会死亡,仍保持分泌多种生长因子的能力。iPSCs在MEFs滋养层上生长良好,类似于胚胎干细胞一样能形成＂鸟巢＂状集落,并可维持iPSCs正常形态,抑制其分化而不影响活力,碱性磷酸酶染色阳性。结论利用诱导性多潜能干细胞滋养层方法制备的细胞滋养层,能有效支持iPSCs的生长,为进一步开展iPSCs的研究提供了理论依据和实验基础。     

人诱导性多能干细胞及分化产物在发育毒性研究中的应用

个体成年之前因接触外源化学物质而产生的任何有害影响均会造成自身生长发育异常,因此,药物开发乃至临床运用均需要可靠的发育毒性实验数据来证明其可用性.人诱导性多能干细胞(hiPSCs)作为一种新型的体外细胞来源,其生理特点与胚胎干细胞类似,具有无限增殖和多向分化的潜能.近年来,不断有研究检测了外源物对hiPSCs及其衍生的...     

中药仙茅对骨髓干细胞向神经元细胞定向诱导的实验研究

目的研究中药仙茅水提物是否具有定向诱导大鼠骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cell，MSCs）向神经元细胞诱导分化的作用。方法用仙茅水提物对大鼠骨髓间质干细胞进行刺激，经RT-PCR和免疫细胞化学染色检测、倒置显微镜下观察使用中药仙茅水提物诱导刺激后的大鼠骨髓间质干细胞的变化情况。结果RT-PCR检测有神经元细胞和神经胶质细胞的特异性蛋白神经元烯醇酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达，倒置显微镜下观察到有神经元样细胞生长，免疫细胞化学染色检测有神经元细胞和神经胶质细胞着色。结论中药仙茅水提物能定向诱导骨髓干细胞向神经元细胞分化。