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1.
目的分析泛醌蛋白1(UBQLN1)及上皮-间质转化(EMT)标志分子在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达及其相关性,探讨UBQLN1对ESCC细胞迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和western blot检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达;RT-qPCR检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中EMT标志分子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的mRNA表达;构建UBQLN1 siRNA和过表达重组质粒,分别转染ESCC细胞系EC9706、HET-1A和TE-1;采用划痕试验和Transwell试验检测各细胞的迁移和侵袭能力;RT-qPCR和western blot检测各组EC9706细胞中EMT标志分子的mRNA和蛋白表达。结果 ESCC癌组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织(均P<0.05);ESCC癌组织中E-cadherin mRNA的表达低于癌旁组织(P<0.05),而N-cadherin和Vimentin mRNA的表达均高于癌旁组织(均P<0.05);ESCC组织中UBQLN1与E-cadherin的mRNA表达呈负相关(r=-0.517 3,P<0.001),而与N-cadherin和Vimentin的mRNA表达呈正相关(r=0.780 3、0.685 6,P<0.001)。下调UBQLN1表达增加EC9706、HET-1A和TE-1细胞中E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达,抑制其迁移和侵袭,而过表达UBQLN1下调E-cadherin的表达,上调N-cadherin和Vimentin的表达,促进细胞迁移和侵袭。结论 UBQLN1能诱导EMT,促进ESCC细胞的迁移和侵袭。 相似文献
2.
目的 验证Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达差异及对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响,探讨其作用机制。方法 采用免疫组化及Western blot检测Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达定位及蛋白表达差异;HTR-8/SVneo细胞内转染Talin1 siRNA,划痕实验及Transwell实验检测Talin1对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRTPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Snail的表达。结果 正常输卵管组织及妊娠输卵管组织中均可检测到Talin1的阳性表达,主要表达于纤毛细胞的细胞质中;妊娠输卵管组织中Talin1的蛋白表达高于正常输卵管组织(P<0.01);输卵管妊娠绒毛中Talin1表达高于宫内妊娠绒毛(P<0.01);沉默Talin1抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭(P<0.01)和迁移(P<0.05);Talin1下调HTR-8/SVneo细胞中N-cadherin、MMP-2、Snail的表达(P<0.05),上调MMP-9的表达(P<0.05)。结论 输卵管妊娠患者的输卵管组织及绒毛中Talin1的表达显著升高,输卵管妊娠的发生可能和Talin1调控妊娠滋养细胞的侵袭相关。 相似文献
3.
目的 研究人PDZ和LIM域蛋白1(PDLIM1)特异性siRNA对人胶质母细胞瘤U87细胞系迁移、侵袭能力的影响,并对其相关机制进行初步探讨.方法 用小RNA干扰技术下调U87细胞PDLIM1,用荧光实时定量Real-time PCR技术验证siRNA干扰效率;采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力;用Western blot法检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达情况,并探讨相关机制.结果 经PD-LIM1-siRNA干扰后,胶质瘤U87细胞中PDLIM1在mRNA水平显著下调(P<0.001);与对照组相比,迁移和侵袭能力被显著抑制(P<0.001);PDLIM1基因表达下调后,U87细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、β-catenin、Slug下调.结论 PDLIM1通过EMT相关转录因子Slug调节N-cadherin、β-catenin蛋白表达,是其调节胶质瘤U87细胞迁移及侵袭能力的可能机制之一. 相似文献
4.
目的:探讨长链非编码RNA MALAT1(long non-coding RNA MALAT1,lnc RNA MALAT1)调控miR-22/snail轴对胃癌增殖、迁移及侵袭的影响。方法:采用siRNA干扰技术抑制MALAT1表达,同时过表达miR-22和Snail;采用RT-PCR检测MALAT1,miR-22和snail在胃癌细胞系中的表达水平(n=3);采用Western blot检测NC组、si-MALAT1组中snail蛋白的表达水平(n=3);采用CCK-8法在12、24、48、72 h检测NC组、si-MALAT1组、miR-22组、miR-22+snail组、si-MALAT1+miR-22组中细胞吸光度值(n=3);采用划痕实验检测NC组、si-MALAT1组、miR-22组迁移速度(n=3);采用Transwell检测NC组、si-MALAT1组、miR-22组、miR-22+snail组、si-MALAT1+miR-22组穿过膜细胞的个数(n=3);采用双荧光素酶检测NC+pMIR-MALAT1-WT组、NC+pMIR-MALAT1-MUT组、miR-22+pMIR-MALAT1-WT组、miR-22+pMIR- MALAT1-MUT、NC+ pMIR-Snail-WT组、NC+pMIR-Snail-MUT组、miR-22+pMIR-Snail-WT组、miR-22+pMIR-Snail-MUT组的荧光活性(n=3)。两独立样本间的比较采用t检验,多组数据之间的比较采用单因素方差进行分析,涉及时间因素时采用重复测量方差分析。结果:MALAT1在胃癌细胞系中的表达水平明显高于正常胃黏膜上皮细胞(均P=0.000);低表达MALAT1后,AGS和SGC-7901增殖能力(P1=0.001,P2=0.005),迁移能力(P1=0.018,P2=0.007),侵袭能力(P1=0.024,P2=0.015)均降低;同时双荧光素酶结果显示MALAT1能够靶向结合miR-22(P=0.001),miR-22能够靶向结合snail(P=0.001);miR-22在胃癌细胞中的表达水平明显低于正常胃黏膜上皮细胞(均P<0.05);过表达miR-22后,AGS和SGC-7901增殖能力(P1=0.004,P2=0.009),迁移能力(P1=0.034,P2=0.005),侵袭能力(P1=0.037,P2=0.011)均降低;在低表达MALAT1和过表达miR-22后能够更进一步增加低表达MALAT1后对AGS和SGC-7901的增殖(P1=0.022,P2=0.006)和侵袭(P1=0.024,P2=0.015)的抑制作用;同时过表达miR-22和snail后能够反转miR-22对AGS和SGC-7901的增殖(P1=0.003,P2=0.004)和侵袭(P1=0.015,P2=0.01)的抑制作用。结论:MALAT1在胃癌细胞中明显高表达,并能通过调控miR-22/snail轴促进胃癌增殖、迁移及侵袭。 相似文献
5.
目的 探讨人矮小同源盒基因2(SHOX2)对人膀胱癌细胞迁移、侵袭能力和干细胞特性的影响及其可能机制。方法 分析TCGA肿瘤数据库中SHOX2基因在膀胱癌标本和癌旁对照标本的表达情况,利用GEPIA网站对TCGA膀胱数据中的SHOX2基因表达量进行单因素生存分析,并利用GSEA软件预测其可能的生物学功能。选取对数生长期的人膀胱癌细胞T24,采用SHOX2 shRNA及SHOX2过表达质粒分别敲低、过表达SHOX2基因,用Western blot检测SHOX2蛋白表达量,通过划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力,悬浮成球、克隆形成实验检测细胞的干细胞特性。在光镜下观察细胞形态变化,并用Western blot检测细胞上皮间充质转化(EMT)标志分子E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化和TGF-β信号通路重要组件TβR-I蛋白表达量的变化。结果 与癌旁膀胱组织相比,SHOX2基因在TCGA膀胱癌组织中表达升高(P=0.01),在配对的膀胱癌组织中明显升高(P=0.001),SHOX2基因表达与总生存率呈负相关(P=0.01);GSEA显示SHOX2基因表达与EMT(P=0.002,P=0.03)及干细胞特性(P=0.006,P=0.008)呈正相关。在膀胱癌细胞 T24 中,两种不同的 SHOX2 shRNA 均能降低SHOX2的蛋白表达水平(shSHOX2-1,P=0.004;shSHOX2-2,P=0.03),SHOX2过表达质粒则能提高SHOX2的蛋白表达水平(P=0.007)。划痕实验、Transwell侵袭实验结果显示,抑制SHOX2表达后膀胱癌细胞的迁移(P<0.001,P=0.02)、侵袭(P=0.002,P=0.003)能力明显降低,而SHOX2过表达则提高膀胱癌细胞的迁移(P<0.001)、侵袭(P=0.004)能力。悬浮成球、克隆形成实验结果显示,抑制SHOX2表达后明显减弱膀胱癌细胞的干细胞特性(P=0.002,P=0.007,P<0.001);而SHOX2过表达则增强膀胱癌细胞的干细胞特性(P=0.002,P<0.001)。此外,抑制SHOX2表达可使细胞发生上皮样形态改变,而SHOX2过表达可使细胞发生间充质样形态改变;Western blot结果显示,抑制SHOX2表达可使膀胱癌细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.00),Vimentin(P<0.001,P=0.01)、TβR- I(P=0.03,P=0.02)蛋白表达水平降低;而 SHOX2 过表达可使膀胱癌细胞中的Vimentin(P=0.04)、TβR-I(P=0.003)蛋白表达水平升高。结论 SHOX2在膀胱癌中扮演致癌基因:SHOX2增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力和干细胞特性,其作用机制可能与TGF-β信号通路参与调控的EMT有关。 相似文献
6.
祁小珍石立莹 《天津医科大学学报》2022,(5):497-502
目的:探究CD155在宫颈癌中的作用和依赖m6A修饰的调控机制。方法:应用数据库预测宫颈癌细胞中CD155(PVR)的表达情况,CD155对患者预后的影响,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定宫颈癌细胞HeLa和宫颈永生细胞S12中CD155的表达水平。分别运用MTT、平板克隆、迁移侵袭等实验评估CD155对宫颈癌细胞HeLa生长、增殖、迁移和侵袭的影响。应用Western印迹法测定E-钙黏蛋白(E-cad)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平并评价CD155对EMT的影响。MeRIP-RT-qPCR检测CD155是否受m6A 调控,Western印迹法和qRT-PCR测定METTL3是否影响CD155蛋白和RNA的表达水平。放线菌素D处理细胞后检测METTL3对CD155RNA半衰期的作用,利用预测网站m6ATaget预测CD155RNA甲基化位点的识别者(Reader),运用Western印迹法和qRT-PCR分析YTHDF1是否影响CD155蛋白和RNA的表达水平,放线菌素D处理细胞后检测YTHDF1对CD155RNA半衰期的作用,RIP-RT-qPCR实验进一步确定YTHDF1和YTHDF1-mut对CD155RNA下拉能力。结果: CD155在宫颈癌组织和细胞中表达较高,体内高表达CD155的患者生存率较低。相比S12细胞,HeLa细胞中CD155的表达增加(t=3.749,P<0.05)。CD155的高表达促进了体外宫颈癌细胞的生长(t=3.152,P<0.05)、增殖(t=3.706,P<0.05)、迁移(t=5.422,P<0.01)和侵袭(t=3.599,P<0.05),抑制E-cad的表达促进了Vimentin的表达。MeRIP-RT-qPCR结果显示CD155RNA受m6A调控,METTL3促进了CD155蛋白和RNA(t=6.725,P<0.05)的表达,敲降METTL3之后CD155RNA半衰期降低(t=5.622、6.063、5.857,均P<0.05)。敲降YTHDF1之后CD155的蛋白水平降低,CD155RNA半衰期降低(t=10.93、5.602、4.359,均P<0.05)。在YTHDF1高表达的细胞中,CD155RNA被有效免疫沉淀(t=4.686,P<0.01),但在YTHDF1-mut转染的细胞中,免疫沉淀结果显示下拉的CD155RNA水平明显降低(t=4.462,P<0.05)。结论:CD155RNA在m6A修饰的情况下,被YTHDF1特异性识别,进而稳定性增强和翻译增加,CD155表达增加促进了宫颈癌细胞的恶性行为。 相似文献
7.
目的探究沉默Yes 相关蛋白1(YAP1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR和
Western blot方法检测YAP1在鼻咽癌细胞系中的表达水平;在鼻咽癌细胞S26和S18中转染3条合成的小干扰RNA:si-NC, si-
YAP1#1和si-YAP1#2,以转染阴性对照si-NC的细胞作为对照组,转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的细胞作为实验组,实时荧光定
量PCR和Western blot检测转染后的干扰效率;通过细胞计数、平板克隆形成等方法评估转染si-YAP1#1和si-YAP1#2后的实验
组和转染si-NC的对照组对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;用划痕和Transwell 方法分析各组细胞迁移与侵袭能力的变化;
Western blot检测各组细胞中c-myc、上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)等与细
胞增殖和上皮间质转化相关蛋白的表达变化。结果YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达;与阴性对照组相比,转染si-YAP1#1和si-
YAP1#2的实验组细胞中YAP1的mRNA及蛋白水平均显著降低(P<0.05);生长计数、平板克隆、划痕及Transwell等实验结果
均显示转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的实验组细胞的生长和克隆能力、划痕愈合能力及侵袭能力较阴性对照组细胞明显下降
(P<0.01);且相较阴性对照组,实验组细胞中c-myc、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平降低,E-cadherin的表达量增加。
结论YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达,在鼻咽癌细胞中利用siRNA靶向敲低YAP1的表达后可以抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移
及侵袭能力,提示YAP1可以作为一个潜在的鼻咽癌临床治疗干预靶点。 相似文献
8.
目的 探讨miR-let-7c-5p能否调控HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移。方法 生物信息学方法确定miR-let-7c-5p的关键基因;RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌和癌旁组织中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2 蛋白相对表达量。以人正常膀胱细胞SV-HUC-1作为对照,RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌细胞系T24,UM-UC-3,5637细胞中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白的相对表达量。对UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p分别进行上调和下调,上调实验设模拟物阴性对照组(mimic-NC)、miR-let-7c-5p模拟物组(mimicmiR-let-7c-5p)、下调实验设阴性对照组(inhibitor NC)及miR-let-7c-5p抑制剂组(si-miR-let-7c-5p),双荧光素酶实验、RT-qPCR和Western blot法共同验证miR-let-7c-5p和HMGA2的靶向关系;Transwell小室检测单独上调或下调miR-let-7c-5p表达及同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移的变化;Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin, N-cadherin, vimentin, Snail)相对表达量。结果 HMGA2为miR-let-7c-5p的靶基因之一;与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-let-7c-5pmRNA相对表达量降低(P<0.05),HMGA2蛋白相对表达量增加(P< 0.05);与SV-HUC-1细胞相比,UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p相对表达量显著降低,HMGA2显著增加(P=0.01)。上调miR-let-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著下降(P<0.05);下调miR-let-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著增加(P<0.05);当同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。Western blot结果显示,上调miR-let-7c-5p表达,E-cadherin表达增加,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达下降;下调miR-let-7c-5p表达,E-cadherin表达下降,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达增加;同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达能够抑制UM-UC-3细胞EMT(P<0.05)。结论 miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制EMT进而抑制UM-UC-3细胞侵袭和迁移。 相似文献
9.
目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰降低PC4和SFRS1相互作用蛋白1(PSIP1)的表达对人胶质瘤U87细胞侵袭和迁移
的影响并初步探讨其机制。方法采用化学合成靶向PSIP1的siRNA,脂质体法转染U87细胞,用Real-time PCR检测RNA干
扰效率;Transwell侵袭实验测细胞侵袭能力;划痕实验检测其迁移能力;干扰PSIP1表达后,Western blot 检测间质细胞来源的
N-cadherin、β-catenin蛋白和转录因子Slug的表达。结果PSIP1-siRNA 转染胶质瘤U87细胞后,PSIP1的mRNA水平及蛋白
水平明显下降(P<0.001),U87 细胞侵袭和迁移能力下降,与阴性转染组及未转染组相比差异有统计学意义(P<0.001,P<
0.001),Western blot 显示,间质细胞来源的N-cadherin、β-catenin 蛋白表达量降低,同时与上皮间质转化(EMT)相关的转录因
子Slug 的表达降低。结论在胶质瘤中,抑制PSIP1 的表达可抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移,N-cadherin、β-catenin 蛋白和转录
因子Slug的表达量降低,提示PSIP1 可通过调控经典Wnt/β-catenin 信号通路来调节Slug 的表达,进而调控EMT,从而参与胶
质瘤U87 细胞的侵袭及迁移。 相似文献
10.
目的:构建人基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)基因重组真核表达载体,探讨MMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:以肝癌SMMC-7721细胞为研究模型,以基因重组技术构建pEYFP-Mmp-2重组真核表达载体,pEYFP-Mmp-2一过性转染模型细胞过表达MMP-2-YFP,siRNA转染沉默模型细胞内源性MMP-2表达,设立空白对照、MMP-2沉默对照组、MMP-2沉默组、过表达MMP-2融合蛋白对照组、过表达MMP-2融合蛋白组,划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,钙蛋白酶(calcium-activated neutral protease,Calpain)特异性抑制剂Calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测MMP-2、MMP-2-YFP、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vi-mentin)表达变化。结果:成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2。pEYFP-Mmp-2转染过表达MMP-2融合蛋白组细胞高表达MMP-2-YFP。与MMP-2沉默对照组相比,MMP-2沉默组内源性MMP-2表达明显下调(P=0.000),细胞12 h、24 h及48 h迁移率明显降低(P=0.000或P=0.001),48 h侵袭率明显降低(P=0.004),E-cadherin表达明显上调,N-cadherin及Vimentin表达明显下调(P=0.000)。与过表达MMP-2融合蛋白对照组相比,过表达MMP-2融合蛋白组12 h、24 h及48 h迁移率明显增强(P=0.015或P=0.001),48 h侵袭率明显升高(P=0.011),细胞E-cadherin表达明显下调,N-cadherin及Vimentin表达明显上调(P=0.003或P=0.001)。Calpeptin预处理明显降低过表达MMP-2融合蛋白组细胞迁移率和侵袭率(P=0.000),上调E-cadherin,下调N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平(P=0.000)。结论:本实验通过基因重组技术成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2,成功表达MMP-2-YFP 融合蛋白;并发现MMP-2通过调节Calpain介导肝癌SMMC-7721细胞迁移、侵袭及EMT。 相似文献
11.
目的:探讨大肿瘤抑制激酶2(LATS2)对恶性周围神经鞘瘤(MPNST)细胞增殖和迁移的影响及机制。方法:LATS2过表达慢病毒感染ST88-14、STS26T细胞,实验分为阴性对照组及LATS2过表达组,利用CCK-8、细胞划痕实验检测过表达LATS2对细胞增殖、迁移的影响。实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹实验检测细胞中LATS2、多梳抑制复合物2(PRC2)核心组分、Yes相关蛋白(YAP)、含有PDZ结合位点的转录共激活因子(TAZ)的mRNA和蛋白表达,以及组蛋白H3第27位赖氨酸上的三甲基化(H3K27me3)水平。结果:与对照组相比,LATS2过表达抑制ST88-14、STS26T细胞增殖(t=4.219、14.66、11.5,均P<0.05;t=5.674、7.118、10.77,均P<0.01)、迁移(t=4.838、4.736,均P<0.01)。与对照组相比,LATS2过表达不影响ST88-14、STS26T细胞中YAP/TAZ的mRNA和总蛋白水平,但升高其蛋白磷酸化水平(t=6.233、3.759,均P<0.01;t=3.44、2.947,均P<0.05)。与对照组相比,LATS2过表达不影响ST88-14、STS26T细胞中PRC2核心组分SUZ12、EZH2、EED的mRNA和蛋白水平,但H3K27me3水平明显升高(t=6.569、16.68,均P<0.01)。结论:LATS2在MPNST细胞系中表达下降,过表达LATS2升高H3K27me3表达水平,同时促进YAP/TAZ的磷酸化,从而抑制MPNST细胞的增殖、迁移,在MPNST中发挥肿瘤抑制因子的作用。 相似文献
12.
目的 探讨哺乳动物绝育20样激酶1(MST 1)、Yes相关蛋白1(Y AP1)在不同类型食管疾病中的表达、临床意义及两者之间的关系。方法 应用免疫组织化学染色方法,检测MST1、YAP1在食管炎、BARRETT食管、食管不典型增生及食管癌组织中的表达。结果 MST1、YAP1在食管炎、BARRETT食管、食管不典型增生及食管癌组织中的表达差异有显著性(V2=41 9.38、60.255,P〈0.05)。MST1、YA P1在食管癌中表达与病人性别、年龄无关(P〉0 0.5),而与组织分化程度及淋巴结转移有关(V2=5 6.83~9.038,P〈0 0.5)。MS T1与Y AP1在食管癌组织的表达呈负相关(r=-0.451,P〈0 0.5)。结论 MST1、YAP1可能在食管炎到食管癌的发病过程中起关键作用,可为食管癌的预防、治疗和预后判断提供新的靶点。 相似文献
13.
目的 探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义.方法 选取病理确诊的39例膀胱癌标本,采用甲基化特异PCR方法检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者的相关检测情况作为对照,分析膀胱肿瘤患者RASSF1A基因异常甲基化的情况.结果 膀胱癌组RASSF1A基因启动子甲基化阳性率(61.5%,24/39)显著高于非肿瘤组(4.4%,2/45)(P〈0.01),非肿瘤组与志愿组间(阳性率为0)并无明显差异(P>0.05);尿沉渣RASSF1A基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为61.5%(24/39),特异性为95.6%(43/45).性别、年龄、病理分级及临床分期与RASSF1A基因甲基化均无明显相关性(均P>0.05).膀胱癌肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化阳性率为69.2%(27/39).膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣同时出现RASSF1A基因甲基化为20例,同时仅出现非甲基化为8例,两者明显相关(P〈0.05).结论 RASSF1A基因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,其异常甲基化状态可能成为非侵入性诊断膀胱癌的分子标志物之一. 相似文献
14.
目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼(gefitinib)对恶性周围神经鞘瘤(MPNST)细胞增殖、迁移的影响。方法:选择STS26T细胞、ST88-14细胞,分为对照组和给药组(10 μmol/L),其中药物IC50实验、蛋白印迹实验给药组浓度分为5、10、15 μmol/L。CCK-8法检测吉非替尼对STS26T、ST88-14的半数抑制浓度并绘制药物IC50曲线;平板克隆形成实验检测吉非替尼对细胞增殖能力的影响;划痕实验检测吉非替尼对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR检测加药后各组细胞Kras、SUZ12、EED、EZH2 mRNA的表达情况;蛋白印迹实验检测加药后Kras、组蛋白H327位赖氨酸三甲基化蛋白(H3K27me3)的表达。结果:STS26T、ST88-14细胞的药物IC50曲线显示半数抑制浓度均为10 μmol/L(t=11.42、16.51,均P<0.05);与对照组比较,吉非替尼给药组(10 μmol/L)STS26T、ST88-14细胞增殖能力显著降低(t=5.48,P<0.05;t=4.89,P<0.01)、细胞迁移能力显著降低(t=4.94,P<0.01;t=4.75,P<0.01);与对照组比较,吉非替尼给药组(10 μmol/L)STS26T细胞中Kras mRNA表达显著降低(t=4.87,P<0.01),SUZ12、EED、EZH2表达显著升高(t=11.36、15.54、13.19,均P<0.05);与对照组比较,吉非替尼给药组(10 μmol/L)ST88-14细胞中Kras mRNA表达显著降低(t=13.75,P<0.05),SUZ12、EED、EZH2表达水平显著升高(t=12.56、7.48,16.33,均P<0.05);与对照组比较,吉非替尼给药组(5、10、15 μmol/L)STS26T、ST88-14细胞Kras蛋白表达显著降低(t=13.70、15.21,均P<0.05);与对照组比较,吉非替尼给药组(5、10、15 μmol/L)STS26T、ST88-14细胞H3K27me3蛋白表达显著增加(t=14.31、12.40,均P<0.05)。结论:EGFR抑制剂吉非替尼通过促进MPNST中PRC2的表达,提高表观遗传学标志物H3K27me3的表达,降低MPNST细胞株增殖、迁移的能力。 相似文献
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目的:检测活化T细胞c1核因子(NFATc1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和上皮间充质转化(EMT)的影响.方法:qRT-PCR检测NSCLC细胞H1650、H460、H1299及正常人支气管上皮细胞BEAS-2B中NFATc1表达水平,将si-NFATc质粒转染至H1650细胞中,通过CCK-8增殖及集... 相似文献
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目的:探讨体轴发育抑制因子(Axin1)调节骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达的作用及其机制。方法:利用RNAi干扰的Axin1腺病毒(Ad-siAxin1)感染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低Axin1,荧光显微镜和MTS实验明确Ad-siAxin1最佳感染浓度和时间。分别用携带绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)、Ad-siAxin1、载体质粒(vector)和Axin1质粒转染C2C12小鼠骨骼肌细胞敲低或过表达Axin1蛋白,Western印迹检测Axin1、端锚聚合酶蛋白(TNKS)和GLUT4蛋白水平。结果:荧光显微镜和MTS实验结果显示,在C2C12小鼠骨骼肌细胞中Ad-siAxin1作用的最佳浓度和时间分别为160μL和48 h。Western印迹结果显示,与Ad-GFP组相比,Ad-siAxin1组中Axin1蛋白降低(t=6.746,P<0.01)。Ad-siAxin1组TNKS蛋白水平降低(t=4.019,P<0.05),GLUT4蛋白水平下调(t=3.248,P<0.05)。与vector组相比,转染Axin1质粒后,Axin1蛋白水平上... 相似文献
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庄慧萍 《天津医科大学学报》2022,(5):478-482
目的:探究组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对基底样乳腺癌(BLBC)生长和转移的抑制作用。方法:通过MTT法和平板克隆实验检测LBH589对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和小鼠乳腺癌细胞系4T1增殖能力的影响;Transwell实验检测LBH589对细胞迁移和侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测LBH589对细胞上皮-间质转化的作用;构建4T1乳腺癌细胞Balb/c小鼠脂肪垫成瘤模型,腹腔注射LBH589,观察4T1细胞成瘤和转移能力。结果:体外实验结果显示,与对照组相比,LBH589显著抑制MDA-MB-231和4T1细胞的增殖能力(t=11.37,P<0.05;t=18.18,P<0.05)、克隆形成能力(t=7.76,P<0.05;t=15.22,P<0.05)、迁移(t=8.8,P<0.05;t=18.0,P<0.05)和侵袭能力(t=8.24,P<0.05;t=15.99,P<0.05);与对照组相比,LBH589上调细胞的上皮标志物CDH1的mRNA(t=7.33,P<0.05)表达水平,抑制细胞的... 相似文献
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目的:探讨白细胞介素4诱导蛋白1(IL4I1)在肾透明细胞癌中的表达及在肿瘤发展中的作用。方法:通过数据库分析IL4I1在正常肾组织和肾透明细胞癌组织中的表达及与预后的关系;通过qPCR和FCM比较正常肾细胞HK-2与肾癌细胞系786-O和769-P中IL4I1的表达情况;siRNA干扰786-O细胞系IL4I1表达后通过CFSE增殖实验及细胞划痕实验探究细胞生物学行为的改变;通过GSEA分析和qPCR探究潜在机制。结果:IL4I1在肾透明细胞癌组织中过表达(P<0.001),提示更短的总生存期(P<0.001)。IL4I1在肾癌细胞系786-O中mRNA及蛋白水平均过表达(t=16.83、280.40,均P<0.001)。干扰IL4I1表达后,786-O细胞增殖速度减慢,迁移能力下降(F=97.45,P<0.001),并伴随细胞间黏附分子-1(ICAM1)、血管内皮生长因子A(VEGFa)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、程序性细胞死亡蛋白-1(PD-L1)表达水平降低(t=9.031、8.613、9.066、12.66,均P<0.05)。GSEA分析显示... 相似文献
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目的:建立PAX1基因甲基化的CRISPR靶向调控系统。方法:首先,通过甲基化特异性PCR(MSP)测定宫颈癌细胞系(CaSki,SiHa)及正常细胞(人胚肾细胞HEK293T)中 PAX1基因启动子的DNA甲基化水平;通过荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)分别检测上述细胞系的mRNA及蛋白表达。然后,在PAX1高甲基化的宫颈癌细胞共转染sgRNA(single guide RNA)和dCas9-Tet1质粒,采用焦磷酸测序(Pyrosequencing)和 RT-PCR分别检测其基因甲基化和表达水平的改变。最后,结合生物信息学预测和RT-PCR评估该CRISPR系统的脱靶效应。结果:与HEK293T细胞相比,宫颈癌细胞的PAX1基因启动子呈现高甲基化,且其mRNA(CaSki:t=9.13;SiHa:t=12.31;P<0.05)和蛋白表达水平(CaSki:t=16.72;SiHa:t=11.81;P<0.05)均降低。在CaSki及SiHa细胞系中,去甲基化sgRNA3(act-sgRNA3)组调控最显著,其PAX1基因的甲基化水平在CaSki和SiHa细胞系中分别下降了22.21%(t=6.65,P<0.05)、19.62%(t=17.00,P<0.05),其mRNA表达水平均显著上调(P<0.05)。且该系统脱靶效应基因的表达差异均小于2倍。结论:本研究成功建立了PAX1基因甲基化的CRISPR靶向调控系统,可有效的降低其甲基化水平,增强其内源性的表达水平。 相似文献