硬脂酰辅酶A去饱和酶1在结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药中的作用

目的 通过建立结肠癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药细胞株,探讨硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl CoA desaturase 1,SCD1)在结肠癌细胞5-FU耐药中的作用.方法 采用5-FU浓度间歇性递增与高浓度反复诱导筛选的方法建立对5-FU耐药的结肠癌细胞株HCT116(HCT116/5FU).CCK-8实验检测HCT116、HCT116/5FU、HCT116-Control、HCT116-OE-SCD1 各组细胞在5-FU 作用下的存活率以及半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,1C50).制作结肠癌组织和癌旁组织芯片并以免疫组化方法检测SCD1的表达.定量PCR及Western blot检测各组细胞SCD1的表达;CCK-8实验、平板克隆形成及结晶紫染色实验检测各组细胞存活状况.Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.HCT116-Control、HCT116-OE-SCD1裸鼠皮下成瘤实验观察SCD1对肿瘤生长的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达.结果 HCT116的5-FU IC50为(0.90±0.06)μg/mL,HCT116/5FU的5-FU IC50为(15.02±0.81)μg/mL,耐药倍数约为16.7倍.SCD1在耐药结肠癌组织内的表达高于普通结肠癌组织和对应的结肠癌癌旁组织.HCT116/5FU中SCD1的表达显著高于HCT116(P＜0.01).过表达SCD1能降低结肠癌细胞的凋亡率.裸鼠皮下成瘤实验显示过表达SCD1能增加结肠癌细胞对5-FU的抵抗.在5-FU处理48 h后,HCT116-OE-SCD1组细胞凋亡相关蛋白bcl-2、caspase3的表达低于HCT116-Control组(P＜0.01).结论 成功建立了5-FU获得性耐药的结肠癌细胞模型,SCD1促进结肠癌细胞对5-FU的抵抗.     

硬脂酰辅酶A去饱和酶1在恶性肿瘤中的研究进展

恶性肿瘤的特点之一是不受控制地增殖和生长,该过程需要大量的能量和物质作为基础。这需要肿瘤在糖脂代谢上作出改变,以适应增殖和生长的需要。恶性肿瘤的脂代谢改变除了能为生长提供能量和物质基础,其中一些脂质也是细胞信号通路中的重要分子。脂代谢中的关键酶硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase-1,SCD1)在其中发挥了重要作用。本文旨在对SCD1的作用、SCD1在人体组织内分布、SCD1与恶性肿瘤的关系、SCD1靶向抑制剂研究进展等进行综述。     

小分子干扰RNA下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用设计合成的SCD-1 siRNA转染人肝癌细胞HepG2细胞株,转染后细胞分为3组:空白对照组(未做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和SCD-1 siRNA组(SCD-1 siRNA转染)。采用反转录聚合酶链反应检测HepG2细胞SCD-1 mRNA的表达,噻唑蓝法检测HepG2细胞的增殖,用流式细胞术检测SCD-1 siRNA对HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 SCD-1 siRNA组的SCD-1 mRNA表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);转染后24、48、72 h,SCD-1 siRNA组HepG2细胞增殖较空白对照组和阴性对照组明显减慢(P<0.01);SCD-1siRNA组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);SCD-1 siRNA组HepG2细胞在合成前期(G0/G1期)的细胞比例明显高于空白对照组和阴性对照组,在合成期(S期)和合成后期(G2/M期)的细胞比例均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。空白对照组和阴性对照组HepG2细胞在SCD-1 mRNA表达、细胞增殖、细胞凋亡率及细胞周期方面差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA可通过下调HepG2细胞SCD-1基因的表达,抑制HepG2细胞的增殖,并促进其凋亡。     

高表达蛋白LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力的影响

目的 观察高表达蛋白LATS1(Large tumor suppressor,homolog 1)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.方法 构建含有绿色荧光蛋白GFP的LATS1质粒GFP-C1-LATS1;将构建好的GFP-C1-LATS1质粒转染MCF-7细胞,36 h后荧光显微镜下观察质粒转染效率;然后通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测转染后1~4 d细胞增殖率;通过细胞克隆形成实验检测在乳腺癌MCF-7中高表达LATS1后对细胞克隆形成的影响;最后通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测高表达LATS1对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.结果 质粒GFP-C1-LATS1构建成功,GFP-C1-LATS1质粒转染效率为80%左右;Western blot检测结果 表明,与空质粒对照GFP-C1相比,转染GFP-C1-LATS1后蛋白LATS1明显高表达;MTT结果 表明高表达蛋白LATS1明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖;细胞克隆形成实验表明高表达蛋白LATS1后明显抑制细胞克隆的形成,对照组和高表达LATS1组的克隆数分别为(136±30)和(53±12)个(P＜0.05);BrdU掺入结果 显示,在MCF-7细胞中,阴性对照组的细胞增殖率为(24±2)%,而高表达蛋白LATS1后细胞增殖率为(13±1)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高表达蛋白LATS1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖.     

辛基酚对MDA-MB-231乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响

目的:观察辛基酚(OP)对细胞周期及周期蛋白表达的影响,探讨OP抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的可能分子机制.方法:以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察OP对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、细胞周期、CDK2,CDK4,cyclin D1和cyclin D3表达的影响.结果:4, 8 μmol/L OP作用MDA-MB-231乳腺癌细胞48h时,其抑制率为(17.1±4.1)%, (40.3±8.7)%,cyclin D1表达量荧光值为55.1±10.2,41.4±11.2,比对照组(89.9±11.2)明显降低(P＜0.05). 8 μmol/L OP作用MDA-MB-231乳腺癌细胞24 h和72 h,G0/G1期细胞为(67.0±17.6)%和(44.4±11.9)%,G0/G1期细胞比对照组[24 h,(46.6±12.8)%;72 h,(15.3±3.1)%]明显增高(P＜0.05). OP导致MDA-MB-231乳腺癌细胞中CDK2,CDK4,cyclin D1和cyclin D3 mRNA的表达降低,且cyclin D1蛋白的表达也降低.结论:OP能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖,其机制可能与OP能降低乳腺癌细胞中CDK2,CDK4,cyclin D1和cyclin D3 mRNA及其蛋白的表达有关.     

转染人核糖核酸酶抑制因子对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:利用脂质体转染技术上调乳腺癌MDA-MB-231细胞中核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)水平,探讨RI对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将RI基因转入乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选后获得稳定高表达RI的亚克隆细胞系MDA-MB-231/pLNCX-RI。RT-PCR、Western-blot等方法鉴定RI在转染细胞中的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况,流式细胞术检测细胞周期变化。结果:成功构建了稳定高表达RI的亚克隆细胞系MDA-MB-231/pLNCX-RI;MTT结果显示,转染的RI基因能抑制细胞恶性增殖(P<0.01);细胞周期分析显示转染的RI基因使细胞停留在G₀/G₁期,S期细胞明显减少(P<0.01)。结论:RI能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的恶性增殖。     

瘦素对大鼠肝星状细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶-1基因表达的影响

目的:探讨瘦素(Leptin)对大鼠肝星状细胞(HSC)硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)基因表达的影响,为进一步寻找糖尿病人合并脂肪肝的形成机制提供新的思路。方法:将培养好的肝星状细胞系分为两组,分别应用100ng/ml瘦素和DMEM细胞培养液培养,运用RealTimePCR的方法研究瘦素对SCD-1基因的调节作用。结果:应用RealTimePCR技术检测瘦素可以下调SCD-1基因的表达,下调倍数0.315倍。结论:高浓度瘦素可能通过下调SCD-1基因表达参与脂肪肝的形成,可能是导致糖尿病及代谢综合征合并脂肪肝的原因之一。     

RNAi抑制Aurora B激酶对卵巢癌A2780细胞增殖和周期的影响

目的研究RNAi抑制Aurora B激酶对卵巢癌A2780细胞增殖和周期的影响。方法采用RNAi方法,将AURKB RNAi转入A2780细胞,RT-PCR、Western blot检测Aurora B mRNA和蛋白的表达,MTT检测A2780细胞增殖情况,流式细胞术检测A2780细胞周期改变。结果①通过RT-PCR、Western blot检测到人类5种卵巢癌细胞株A2780、SKOV3、CAOV3、A2780/taxol及AD6中均明显表达Aurora B mRNA和蛋白;②A2780细胞转染AURKBRNAi后,Aurora B mRNA和蛋白的表达明显下降,转染浓度至200 pmol/L RNAi 48 h后,Aurora B mRNA和蛋白的表达被完全抑制;③MTT检测和锥虫蓝染色结果显示,于转染200 pmol/L AURKB RNAi第4天开始,A2780细胞增殖明显受到抑制,吸光度值与空白对照组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);④Flow cytometry检测显示,转染200 pmol/L AURKB RNAi 24 h,大量A2780细胞进入有丝分裂期,并形成多倍体细胞,于72 h多倍体细胞比例达到峰值20.54%,转染后96 h转染组细胞凋亡率(11.67%)显著高于对照组(0.57%);⑤Hoechst 33258染色观察细胞凋亡结果显示,与A2780对照和阴性对照相比,转染200 pmol/L浓度AURKB RNAi 96 h后A2780细胞凋亡明显增多。结论 Aurora B的抑制使A2780细胞增殖受到明显抑制;导致多倍体形成,使细胞基因组严重不稳定,最终导致细胞凋亡,Aurora B可能是卵巢癌治疗的有效分子靶点。     

四种脂肪酸对乳腺癌细胞增殖的影响及其作用机理

目的：探讨4种外源性脂肪酸对乳腺癌细胞增殖的影响及其作用机理。方法：在体外实验中实用四甲基偶氮唑蓝法观察外源性脂肪酸对乳腺癌细胞增殖的影响，并对细胞脂质过氧化反应产物丙二醛含量进行测定。结果：多不饱和脂肪酸可抑制乳腺癌细胞增殖，饱和脂肪酸及单不饱和脂肪酸作用不明显。4种脂肪酸对成纤维细胞没有明显抑制作用。多不饱和脂肪酸可引起细胞内丙二醛含量升高。结论：多不饱和脂肪酸可选择性地抑制乳腺癌细胞增殖，脂质过氧化反应增强可能是其主要作用机理。     

葛根素糖苷生物合成及对乳腺癌细胞增殖抑制的影响

目的 研究约氏不动杆菌G2菌株对葛根素糖苷生物合成的最佳转化条件，以及葛根素糖苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖抑制作用。方法 考察生物合成体系中转化温度、pH和蔗糖浓度对转化率的影响；并以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）观察不同浓度的葛根素及葛根素糖苷对MDA-MB-231细胞生长的影响。结果 葛根素糖苷的最佳转化条件为温度30 ℃，pH 7.38，蔗糖浓度60 g/L，在此条件反应24 h，转化率为85%。MTT法显示，不同浓度的葛根素及其糖苷对MDA-MB-231细胞均有抑制作用，并随浓度升高而抑制作用增强;其中200 μmol/L浓度葛根素及葛根素糖苷作用MDA-MB-231细胞48h后，其抑制率分别为61.91%和59.42%。结论 约氏不动杆菌G2菌株可有效催化葛根素合成葛根素糖苷；葛根素及其糖苷均能明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖。     

青藤碱对人结肠癌细胞株SW480增殖和细胞周期的影响

目的 研究青藤碱对人结肠癌SW480细胞增殖和细胞周期的影响.方法 用不同浓度的青藤碱处理体外培养的人结肠癌SW480细胞24、48、72h后,采用CCK法检测细胞的增殖活性,采用流式细胞术检测细胞的细胞周期分布,并用光镜和透射电镜观察SW480细胞的形态学变化.结果 青藤碱在体外可抑制SW480细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性.干预48h后,中、低浓度的青藤碱（8mmol/L、4mmol/L）可诱导SW480细胞G1期细胞比例增加,而高浓度的SIN（16mmol/L、10mmol/L）可诱导G1期、G2期细胞比例增加.光镜与电镜下均见凋亡细胞增多.结论 青藤碱在体外能抑制人结肠癌SW480细胞增殖和诱导该细胞系的凋亡,其机制可能与其阻滞细胞周期进程有关.     

蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞的杀伤作用

目的:观察蟾蜍毒素提取物对白血病K562细胞杀伤作用及对细胞周期的影响。方法:用无水乙醇、二甲基亚砜(DMSO)、PBS缓冲液浸溶中华大蟾蜍的耳后腺及皮下腺分泌物,采用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测对细胞周期的影响。结果:3种浸液均能抑制K562细胞的增殖,其抑制强度依次为乙醇浸液>DMSO浸液>PBS浸液。5 ng/ml的乙醇浸液、50 ng/ml的DMSO浸液、500 ng/ml的PBS浸液均能使K562细胞发生G2/M期阻滞。结论:蟾蜍毒素粗提物对白血病K562细胞增殖具有明显的抑制作用,并伴有G2/M期阻滞。     

钾通道阻断剂抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)对多西紫杉醇(DOC)抗人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖、凋亡、周期的影响。方法通过MTT比色法分析DOC、4-AP以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法和PI单染法检测2种药物对MDA-MB-435S凋亡和周期的影响。结果0.04～50μmol/LDOC可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S的增殖;4-AP(5mmol/L)本身具有抑制MDA-MB-435S细胞的增殖作用,并可使DOC(25μmol/L)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S达最大抑制率的时间明显提前,DOC和4-AP对MDA-MB-435S细胞的增殖抑制有相加或协同作用,并呈剂量和时间依赖性。DOC(2μmol/L)单用24h时促进MDA-MB-435S细胞凋亡的作用并不明显,当与4-AP(5mmol/L)联合应用后能明显增加细胞早期凋亡的发生率;单用DOC可使MDA-MB-435S细胞阻断在G2/M期,单用4-AP可使MDA-MB-435S细胞阻断在G0/G1期,两药联合应用可使细胞阻断在G2/M期。结论DOC和4-AP分别在G2/M期和G0/G1期抑制MDA-MB-435S细胞增殖,4-AP通过促进DOC诱导MDA-MB-435S细胞凋亡从而抑制其增殖作用。     

AMPK激动剂AICAR通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制肺动脉平滑肌细胞增殖

目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)的增殖细胞模型,通过AMPK激动剂AICAR干预,探讨AICAR对PASMCs细胞周期和增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找靶点。方法 通过20ng/ml PDGF-BB刺激诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用AICAR(0.5mmol/L)干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,Western blot法检测总的和磷酸化的AMPK, CCK-8检测PASMCs增殖,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达。结果 Western blot法检测表明AICAR可以活化AMPK,CCK-8检测结果表明AICAR能够抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖;流式细胞仪检测结果表明AICAR能够抑制细胞周期于G₀/G₁期,RT-PCR结果表明AICAR可以抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK4和CDK6的mRNA的表达。结论 AICAR通过抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 的mRNA表达阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,抑制PASMCs增殖。     

锂对A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨氯化锂（lithium chloride，LiCl）对人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的A549细胞在细胞增殖和细胞周期方面的影响。方法以不同浓度的LiCl作用A549细胞24h后，采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测各组细胞的增殖活性；利用流式细胞术进行细胞周期分析；免疫细胞荧光技术检测糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase3β，GSK3β）在各组细胞中的表达；并通过Western blot检测LiCl对GSK3β、磷酸化GSK3β（p—GSK3β）及CyclinD1蛋白质表达水平的影响。结果LiCl能提高A549细胞的增殖活性。且随着LiCl浓度的升高，处于G1期的细胞数量减少，而S期细胞数量增多，与正常对照组相比，差异具统计学意义（10mmol／L组：P〈0．05；20mmol／L组：P〈0．01）。LiCl能使GSK3β表达降低而无酶活性的p-GSK3β表达升高；同时上调CyclinD1的表达水平。结论LiCl能加快A549细胞的G1／S期转换并促进增殖，GSK3β的活性受抑从而减少Cyclin D1的降解是其可能的机制。     

乳腺癌干细胞标志物的研究进展

乳腺癌干细胞是乳腺癌组织中极少数具自我更新能力和多向分化潜能的细胞,与乳腺癌的发生发展密切相关。CD44、CD24、B38.1和ESA等表型标志物和标记滞留细胞、侧亚群细胞、细胞内乙醛脱氢酶1等功能性标志物可为乳腺癌干细胞提供重要的分离和纯化依据,与乳腺癌的转移和预后密切相关,对于研究乳腺癌的生物学特征、调控机制以及靶向治疗有着重要意义。     

miR-370-5p对前列腺癌细胞周期及增殖的影响

目的 研究miR-370-5p导入对前列腺癌细胞株DU-145和LNCaP细胞周期和增殖的影响。方法 合成miR-370-5p（实验组）和dsControl（阴性对照组）,分别转染至两个细胞株。利用Real-time PCR和Western blot法分别检测细胞转染后p21、CDK4、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达变化。流式细胞术分析细胞周期变化,利用MTT法和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力。结果 Real-time PCR结果提示,转染miR-370-5p后DU-145和LNCaP细胞中p21 mRNA水平分别上调3.43倍（P<0.01）和3.06倍（P<0.01）,CDK4 mRNA水平分别下调0.51倍（P<0.01）和0.43倍（P<0.01）,Cyclin D1 mRNA水平分别下调0.31倍（P<0.01）和0.35倍（P<0.01）。Western blot法检测结果符合这一趋势。流式细胞术检测结果显示,转染miR-370-5p后,位于S期和G₂/M期的细胞比例下降,位于G₀/G₁期的细胞比例则上升,说明细胞周期被阻滞在G₀/G₁期。MTT分析结果显示,与dsControl组相比,转染miR-370-5p后,DU-145和LNCaP细胞活力明显降低。集落形成实验显示,miR-370-5p组的集落数数量明显较少,细胞增殖能力降低。结论 miR-370-5p能显著激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖。     

质粒介导靶向c-myc的siRNA对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察靶向原癌基因c-myc的siRNA对MCF-7人乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达及细胞增殖的影响。方法以原癌基因c-myc mRNA 589-609位碱基为靶序列构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,用脂质体Lipo2000包裹转染MCF-7细胞。采用RT-PCR、Western blot检测c-myc mRNA及蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞增殖。结果与pEGFP-C1及p-Mis09-1比较,转染p-Mat01-1能够特异性抑制MCF-7细胞c-myc mRNA(24h:P<0.01)及蛋白(5d:P<0.01)表达,显著降低MCF-7细胞增殖能力(3d:P<0.05,5、7d:P<0.01)。结论采用siRNA表达质粒技术能够有效抑制MCF-7乳腺癌细胞c-myc/c-Myc表达,初步证实下调c-myc/c-Myc表达能够抑制MCF-7细胞增殖,为RNA干扰技术在乳腺癌生物治疗中的应用打下一定实验基础。