巨噬细胞集落刺激因子与血管平滑肌细胞增殖

目的一些以血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖为特点的血管疾病，在病变部位常有巨噬细胞浸润。本研究巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）在ＶＳＭＣ生长调节中的作用。方法实验采用培养大鼠主动脉ＶＳＭＣ，细胞增殖观察指标采用氚标胸腺嘧啶核苷掺入法，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ技术测定原癌基因表达。结果（１）Ｌ９２９细胞上清液（富含ＭＣＳＦ）及重组ＭＣＳＦ以剂量依赖关系刺激氚标胸腺嘧啶核苷掺入；（２）ＶＳＭＣ在接受刺激后表达某些原癌基因，如ｃｆｏｓ、ｃｍｙｃ、ｅｒｇ１和ＪｕｎＢ；（３）凝血酶、ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦ与ＭＣＳＦ在促增殖作用上具有协同作用。结论ＭＣＳＦ与其它生长因子协同作用，通过自分泌／旁分泌机制调控ＶＳＭＣ增殖，从而可能在血管病变的形成和进展中起重要作用     

Dopamine d1-like receptors suppress proliferation of vascular smooth muscle cell induced by insulin-like growth factor-1

Objective: Proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) participates in the pathogenesis and development of cardiovascular diseases, including essential hypertension and atherosclerosis. Our previous study found that stimulation of D₁-like dopamine receptors inhibited insulin-induced proliferation of VSMCs. Insulin-like growth factor-1 (IGF-1) and insulin share similar structure and biological effect. However, whether or not there is any effect of D₁-like receptors on IGF-1-induced proliferation of VSMCs is not known. Therefore, we investigated the inhibitory effect of D₁-like dopamine receptors on the IGF-1-induced VSMCs proliferation in this study.

Method: VSMC proliferation was determined by [³H]-thymidine incorporation, the uptake of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay and cell number. Phosphorylated/non-phosphorylated IGF-1 receptor, Akt, mTOR and p70S6K expressions were determined by immunoblotting. The oligodeoxynucleotides were transfected to A10 cells to identify the effect of D₁ and D₅ receptors, respectively.

Results: IGF-1 increased the proliferation of VSMCs, while in the presence of fenoldopam, IGF-1-mediated stimulatory effect was reduced. Use of either antisense for D₁ or D₅ receptor partially inhibited the fenoldopam-induced antiproliferation effect of VSMCs. Use of both D₁ and D₅ receptor antisenses completely blocked the inhibitory effect of fenoldopam. In the presence of PI3k and mTOR inhibitors, the IGF-1-mediated proliferation of VSMCs was blocked. Moreover, IGF-1 increased the phosphorylation of PI3k and mTOR. The inhibitory effect of fenoldopam on VSMC proliferation might be due to the inhibition of IGF-1 receptor expression and IGF-1 phosphorylation, because in the presence of fenoldopam, the stimulatory effect of IGF-1 on phosphorylation of IGF-1 receptor, PI3k and mTOR is reduced, the IGF-1 receptor expression was reduced in A10 cells.

Conclusion: Activation of the D₁-like receptors suppressed the proliferative effect of IGF-1 in A10 cells via the inhibition of the IGF-1R/Akt/mTOR/p70S6K pathway and downregulated the expression of IGF-1 receptor.     

氯化锂通过上调焦磷酸水平抑制血管平滑肌细胞钙化

目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞,用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷,继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平,同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法,酶标仪(OD340)检测细胞外焦磷酸的分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ankh基因的表达;采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法,建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组,并观察其对细胞钙化的影响。结果高磷细胞组钙化检测值为(65.00±2.11)ng/g,较对照细胞组(12.39±0.38)ng/g钙化水平明显升高(P<0.01)。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为(24.92±1.87)ng/g,与高磷对照组(60.94±4.51)ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化(P<0.01);氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量,基础条件下预处理组为(51.70±7.26)×10^-3 mmol/g,对照组为(28.71±2.55)×10^-3mmol/g(P<0.01);高磷刺激下预处理组为(34.35±4.27)×10^-3mmol/g,对照组为(20.89±4.93)×10^-3mmol/g(P<0.05),同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平(P<0.01);而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重,敲低ankh细胞钙化检测值为(71.73±2.45)ng/g,对照组为(56.19±3.59)ng/g(P<0.01)。结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达,升高细胞外液中的焦磷酸水平,抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。     

血管外膜源一氧化氮对内皮素—1诱导的血管平滑肌增殖的影响

目的 观察血管外膜生成的一氧化氮（NO）对内皮素－1（ET－1）诱导的血管平滑肌（VSM）增殖的影响，以探讨血管外膜源NO对血管结构重塑调节的意义。方法 取大鼠胸主动脉，去除内皮，分以下几组进行组织孵育10h：（1）完整外膜血管组；（2）单纯中膜组；（3）中膜与剥离的外膜共育组；（4）中膜与服L－N－硝基精氨酸（L-NNA)预处理的外膜共育组。每例胸主动脉剪为二段，分两个亚组：ET（10^-7mol/L)组和对照组。^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR)掺入法检测各组VSM的细胞增殖。另取大鼠腹主动脉外膜，用10^-8和10^-7mol/L ET-1刺激4h。Griess法测血管外膜生成的亚硝酸（NO2-)含量，^3H-L－精氨酸（^3H-L-Arg)标记的同位素法测定外膜一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 （1）各ET亚组^3H-TdR掺入比相应对照组分别增加48．8％－71．9％。（2）在10^-7mol/L ET-1刺激下，完整外膜组及中膜＋外膜组的^3H-TdR掺入分别比单纯中膜组低21．3％和24．5％。中膜＋L－NNA预处理的外膜组^3H-TdR掺入分别比中膜＋外膜组及完整外膜组高30．8％和25．4％，而与单纯中膜组差异无显著性。（3）与对照组相比，10^-8和10^-7mol/L 的ET－1使外膜NOS活性分别增加124％和177％；使外膜生成的NO2－含量分别增加88％和225％。结论 实验结果表明：血管外膜生成的NO可抑制ET－1刺激的VSM的增殖，其抑制作用为ET－1激活的血管外膜NOS／NO途径所分导。提示血管外膜源NO可能参与心血管疾病过程中血管重塑的调节。     

雌激素对PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨17β-雌二醇（E2）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及细胞周期的影响。方法分离培养VSMC,血小板源生长因子（PDGF）诱导其增殖,应用MTT法及流式细胞仪检测不同浓度E2（10和100 nmol/L）对传代VSMC增殖活性及细胞周期的影响。结果E2（10和100 nmol/L）作用下VSMC增殖活性下降,且与浓度有关;对VSMC细胞周期的分布影响主要表现为处于G0/G1期细胞数增多,G2/S期的细胞数减少（P<0.01）。结论E2具有抑制VSMC增殖的作用,其部分机制可能是通过阻滞VSMC G0/G1期向S的转化有关。     

Intermedin modulates hypoxic pulmonary vascular remodeling by inhibiting pulmonary artery smooth muscle cell proliferation

BackgroundHypoxic pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disabling disease with limited treatment options. Hypoxic pulmonary vascular remodeling is a major cause of hypoxic PAH. Pharmacological agents that can inhibit the remodeling process may have great therapeutic value.ObjectiveTo examine the effect of intermedin (IMD), a new calcitonin gene-related peptide family of peptide, on hypoxic pulmonary vascular remodeling.MethodsRats were exposed to normoxia or hypoxia (∼10% O₂), or exposed to hypoxia and treated with IMD, administered by an implanted mini-osmotic pump (6.5 μg/rat/day), for 4 weeks. The effects of IMD infusion on the development of hypoxic PAH and right ventricle (RV) hypertrophy, on pulmonary vascular remodeling, on pulmonary artery smooth muscle cell (PASMC) proliferation and apoptosis, and on the activations of l-arginine nitric oxide (NO) pathway and endoplasmic reticulum stress apoptotic pathway were examined.ResultsRats exposed to hypoxia developed PAH and RV hypertrophy. IMD treatment alleviated PAH and prevented RV hypertrophy. IMD inhibited hypoxic pulmonary vascular remodeling as indicated by reduced wall thickness and increased lumen diameter of pulmonary arterioles, and decreased muscularization of distal pulmonary vasculature in hypoxia-exposed rats. IMD treatment inhibited PASMC proliferation and promoted PASMC apoptosis. IMD treatment increased tissue level of constitutive NO synthase activity and tissue NO content in lungs, and enhanced l-arginine uptake into pulmonary vascular tissues. IMD treatment increased cellular levels of glucose-regulated protein (GRP) 78 and GRP94, two major markers of endoplasmic reticulum (ER) stress, and increased caspase-12 expression, the ER stress-specific caspase, in lungs and cultured PASMCs.ConclusionsThese results demonstrate that IMD treatment attenuates hypoxic pulmonary vascular remodeling, and thereby hypoxic PAH mainly by inhibiting PASMC proliferation. Promotion of PASMC apoptosis may also contribute to the inhibitory effect of IMD. Activations l-arginine–NO pathway and of ER stress-specific apoptosis pathway could be the mechanisms mediating the anti-proliferative and pro-apoptotic effects of IMD.     

丝裂素活化蛋白激酶的激活和转核与大鼠 血管平滑肌细胞增殖关系的研究

目的 探讨丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）激活、转核与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞（VSMC）增殖间的关系。方法 本实验采用培养大鼠胸主动脉VSMC。用^3H-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入法测定DNA合成,用p43/p44磷酸化抗MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定MAPK蛋白量,用免疫细胞化学技术观察MAPK活化并转位入细胞核的过程。结果 （1）AngⅡt和PD98059的上述作用都呈剂量依赖性。（2）AngⅡ对MAPK蛋白表达有显著增强作用。此作用同样被PD98059以剂量依赖方式抑制。（3）AngⅡ刺激5min后,MAPK出现在VSMC的细胞浆中,30min时MAPK进入细胞核,3h后MAPK染色从核内消失,上述MAPK转核过程被PD98059抑制。结论 本实验证实人细胞核,3h后MAPK染色从核人消失,上述MAPK转核过程被PD98059抑制。结论 本实验证实AngⅡ能激活培养大鼠主动脉VSMC的MAPK,活化的MAPK从细胞浆转位进入细胞核导致VSMC增殖。     

华良姜素对PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的]探讨华良姜素对PDGF-BB诱导下血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及可能的机制。 [方法]利用25 μg/L的PDGF-BB处理人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移。实验分为正常对照组、PDGF-BB组(模型组)、PDGF-BB+华良姜素(10、20、40 μmol/L)组和DMSO组。采用CCK-8实验检测HA-VSMC增殖活力,Transwell实验检测HA-VSMC迁移能力,Western blot检测自噬效应蛋白p62、LC3、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平的变化。 [结果]PDGF-BB处理后,HA-VSMC增殖和迁移能力显著上调(P＜0.01),华良姜素显著抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMC的增殖和迁移,且随浓度的上升抑制能力越明显(P＜0.05)。与模型组比较,40 μmol/L华良姜素处理后,LC3Ⅰ以及mTOR蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62与p-mTOR蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),同时发现40 μmol/L华良姜素与AMPK抑制剂Compound C,对PDGF-BB诱导的HA-VSMC AMPK/mTOR信号通路的影响一致。 [结论]华良姜素可抑制PDGF-BB诱导的HA-VSMC的增殖和迁移,其作用机制可能是通过上调AMPK/mTOR信号通路,抑制自噬实现。     

着色性干皮病基因B对白介素-6介导的血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨着色性干皮病基因B(xeroderma pigmentosum B,XPB)对白介素-6(IL-6)介导人血管平滑肌细胞( VSMC)增殖及凋亡的影响.方法 用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-XPB和空载质粒pcDNA3.1稳定转染VSMC,然后给予100 U/ml的IL-6孵育48 h.实验分为6组:(1)空白对照组;(2) pcDNA3.1组;(3) pcDNA3.1-XPB组;(4)IL-6组;(5) IL-6+ pcDNA3.1组;(6)IL-6+ pcDNA3.1-XPB组.用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测XPB、Bcl-2、Bax和野生型p53(wt-p53)表达量的变化;用比色法(MTT)观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.结果 重组质粒pcDNA3.1-XPB转染使细胞XPB表达增高(P＜0.05或P＜0.01),同时Bcl-2表达降低、Bax和wt-p53表达增高(P＜0.05或P＜0.01),抑制IL-6促进VSMC的Bcl-2高表达、Bax和wt-p53降表达(P＜0.05或P＜0.01);XPB高表达抑制了细胞增殖活力(q=2.95,P＜0.05),并抑制IL-6促进VSMC增殖,IL-6+ pcDNA3.1-XPB组和IL-6 +pcDNA3.1组VSMC存活率分别为(102.6±6.2)％和(124.5+7.9)％(q=3.49,P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示,XPB高表达引起细胞G0/G1期增加、S期减少、凋亡率增加(q值分别为2.99、5.39、3.05,P＜0.05或P＜0.01),并抑制IL-6促进VSMC G0/G1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用,IL-6+ pcDNA3.1-XPB组和IL-6 +pcDNA3.1组分别为(70.9±6.7)％与(54.8±2.9)％、(20.2±3.6)％与(36.4±7.2)％、(5.9±2.1)％与(0.3±0.1)％(q值分别为6.91、8.54、7.53,均P＜0.01).结论 XPB基因能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点.     

干扰SET8调节血管平滑肌细胞增殖、凋亡促进血管钙化

背景与目的血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡在许多血管钙化疾病的病理过程中起关键作用。近期研究表明,赖氨酸甲基转移酶SET8参与调节细胞增殖、凋亡过程。文章旨在探寻SET8是否通过调节VSMC增殖、凋亡而影响血管钙化。方法体外培养原代大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组、空质粒组和SET8-shRNA组。以脂质体Lipofectamine~(TM)2000为载体,转染VSMC。采用茜素红染色法和钙含量测定法判断细胞钙化程度;采用MTT法检测三组细胞的增殖能力;实时荧光定量PCR、Western blot法检测三组细胞中增殖基因Survivin和凋亡基因Caspase-3的表达水平,分析干扰SET8对VSMC增殖、凋亡及其相关基因和蛋白表达的影响。结果 (1)干扰SET8可成功抑制VSMC中SET8蛋白的表达(P0.05)。(2)转染VSMC后,与正常对照组和空质粒组比较,SET8-shRNA组钙含量明显升高(P0.05)。(3)MTT结果显示,在第12 h、24 h、36 h、48 h,SET8-shRNA组VSMC的增殖能力较正常对照组和空质粒组明显降低(P0.05)。(4)实时荧光定量PCR和Western blot结果显示SET8-shRNA组Survivin的mRNA和蛋白表达较正常对照组和空质粒组明显下降,而Caspase-3的mRNA和蛋白表达则相反(P0.05)。结论干扰SET8能够增加促凋亡基因表达,抑制增殖基因表达,SET8有可能参与调节大鼠血管钙化。     

咖啡酸苯乙酯对激活的大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）激活血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）后,咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）对细胞过度增殖的影响。方法采用不同浓度的CAPE处理LPS激活的VSMC。MTT法用于检测细胞的生长情况;免疫细胞化学法检测增殖核抗原（PCNA）和存活素（Survivin）蛋白的阳性率;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果5、10、20、40、80 mg/L CAPE处理LPS激活的VSMC后,MTT检测发现细胞的生长明显受到抑制并呈剂量和时间依赖;VSMC经CAPE处理72 h后,细胞中PCNA和Survivin蛋白阳性表达率随药物剂量增加而显著降低（P<0.05）;细胞周期分析表明5、10、20 mg/L CAPE处理VSMC 24 h后,对照组和实验组G0/G1期细胞百分率分别为（40±4.3）%和（52±6）%,（65±1）%,（76±4）%,S期细胞百分率由对照组的（32.4%±2.6）%逐渐下降20 mg/L组的（11.2%±1.4）%,呈剂量依赖性（P<0.05）。结论CAPE可能通过调控细胞周期,减少PCNA和Survivin蛋白的表达而发挥细胞增殖抑制作用,其效能与作用时间和药物剂量存在一定的相关性。     

血管紧张素-(1-7)在内皮素诱导血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的　探讨血管紧张素 (1 7) [Ang (1 7) ]在内皮素 1(ET 1)诱导血管平滑肌细胞增殖反应中的作用。方法　在ET 1诱导培养的SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞模型中 ,应用Ang (1 7) ,通过测定3 H 胸腺嘧啶 (3 H TdR)掺入的方法 ,观察血管平滑肌细胞增殖情况。结果　Ang (1 7)呈剂量性抑制ET 1诱导血管平滑肌细胞的DNA合成 ,其作用受体不是血管紧张素Ⅱ受体 1(AT1)或血管紧张素Ⅱ受体 2 (AT2 ) ,而是通过一种特殊受体介导。结论　Ang (1 7)能抑制ET 1诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

齐墩果酸对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究齐墩果酸(OA)对H_2O_2诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMCs,随机分为对照组、H_2O_2组、H_2O_2+OA组、阻断剂组。采用Hoechst 33342染色和Annexin V/FITC染色检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中磷酸化Akt蛋白表达变化。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与H_2O_2组比较,H_2O_2+OA组细胞凋亡率明显降低,p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.05);与H_2O_2+OA组比较,阻断剂组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05)。荧光显微镜显示,对照组细胞核呈蓝色,H_2O_2组细胞核呈致密浓染,H_2O_2+OA组细胞核呈蓝染,有少量细胞核致密浓染,阻断剂组细胞核呈致密浓染。结论 OA能减轻H_2O_2导致的VSMCs凋亡,其机制可能与激活细胞内磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号通路引起下游促生存基因的表达有关。     

Effects of extracellular acid stimulation on rat vascular smooth muscle cell in Gas6/Axl or PI3K/Akt signaling pathway

Recent studies have indicated that extracellular acid stimulation inhibited the calcification of vascular smooth muscle cells (VSMCs). Cell apoptosis played an important role in the occurrence and development of vascular calcification. We further explored the effects of Gas6/Axl or PI3K/Akt signaling pathway on the inhibition of rat VSMCs calcification in response to extracellular acid stimulation. Our study demonstrated that a high concentration of phosphorus induced apoptosis and calcification of VSMCs, decreased expression of Axl, and reduced phosphorylation of Akt. Stimulation of extracellular acid counteracted the effects as above by increasing the expression of Axl and Akt phosphorylation and decreasing the expression of activated Caspase3, which thereby decreased cell apoptosis and calcification. Moreover, the effects can be attenuated by PI3K inhibitor. Our study proved that extracellular acid stimulation played a vital role in the inhibition of rat VSMCs calcification and apoptosis in Gas6/Axl or PI3K/Akt signaling pathway.     

白藜芦醇抑制大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌增殖

目的研究白藜芦醇对大鼠颈动脉内膜球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 72只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、损伤组和干预组,每组各24只。干预组于手术前1周及术后给予白藜芦醇50 mg/kg灌胃,余两组用等量生理盐水灌胃。术后1、7和14天观察大鼠颈总动脉形态学变化并进行图像分析;免疫组织化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,RT-PCR检测血管平滑肌中妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的表达。结果与假手术组比较,损伤组和干预组7、14天管腔面积明显减小。与损伤组比较,干预组7、14天管腔面积明显扩大(P<0.01),内膜面积/中膜面积明显减小(P<0.01);干预组7、14天PCNA,PAPP-A表达较损伤组明显降低(P<0.01)。结论白藜芦醇可能是通过抑制血管内膜平滑肌细胞PAPP-A的表达,减轻大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜平滑肌的增殖,为临床白藜芦醇抗血管平滑肌增殖的治疗提供理论依据。     

人白细胞介素10对血管紧张素II诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对 p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶的影响。　 方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES(methoxyphenyl tetrazoliumsalt/phenazineethosulfate)法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。利用 p4 4 /p4 2磷酸化抗丝裂素活化蛋白激酶抗体的蛋白免疫印迹法测定丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达 ;对照组为未用AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞。　 结果　AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (1 311± 0 2 0 1对 0 781± 0 2 36 ,P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (0 783± 0 170对 0 781± 0 2 36 ,P >0 0 5 )。在AngⅡ刺激下 ,1、10、10 0ng/ml的rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长 (分别为 0 984± 0 172、 0 932±0 134、0 784± 0 0 97对 1 311± 0 2 0 1,P <0 0 5 )。AngⅡ对p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达有显著的增强作用 (5 12± 78对 10 0 ,P <0 0 1) ,此作用可被rhIL 10抑制 (5 12± 78对 32 9± 5 9,P <0 0 1)。　结论　rhIL 10可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及 p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达。     

心肌素在周期性张应变调控血管平滑肌细胞表型转化中的作用

目的 探讨周期性张应变条件下诱导血管平滑肌细胞(VSMC)表型转换时,心肌素在其中可能的作用。方法 应用FX-5000T体外周期性张应变加载系统,分别对体外培养的VSMC施加频率为1.25 Hz、加载幅度为5%(正常张应变状态)、15%(高张应变状态)的周期性张应变力学刺激,加载时间为24 h。采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR技术检测心肌素、肌肉萎缩相关基因1(atrogin-1)及相关收缩蛋白SMA、SM22的蛋白表达水平和mRNA水平;敲除atrogin-1后测心肌素及相关收缩蛋白SMA、SM22的变化;用蛋白酶体抑制剂MG132处理后测心肌素和atrogin-1的表达水平。结果 与5%正常张应变组比较,15%高张应变促进平滑肌细胞的去分化。15%高张应变下调心肌素和SMA、SM22蛋白水平;上调atrogin-1蛋白表达水平;下调心肌素和SMA、SM22的mRNA水平,上调atrogin-1 mRNA水平。应用siRNA特异性下调atrogin-1后,心肌素、SMA、SM22蛋白水平均上升。用1 μmol/L MG132处理细胞后,心肌素、SMA、SM22的蛋白水平上升,atrogin-1蛋白水平下降。结论 周期性高张应变可以通过调节血管平滑肌细胞中atrogin-1/心肌素轴来调控血管平滑肌表型转换,进而影响VSMC的分化增殖。     

1-磷酸鞘氨醇受体1参与晚期糖基化终产物引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的观察1-磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)在晚期糖基化终产物(AGE)引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用。方法培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),葡萄糖与牛血清白蛋白(BSA)孵育法获得AGE-BSA,分为对照组、BSA组和AGE-BSA组,采用CCK-8实验检测平滑肌细胞增殖能力,采用细胞划痕和Transwell实验检测平滑肌细胞迁移能力,并进一步观察BSA和AGE-BSA在有或无S1PR1拮抗剂VPC23019/激动剂SEW2871预处理后的细胞增殖和迁移。结果与对照组比较,BSA和AGE-BSA均能诱导HUASMC增殖和迁移,AGE-BSA的作用比BSA更加显著(P0.05);S1PR1拮抗剂VPC23019可以明显抑制BSA和AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移;S1PR1激动剂SEW2871本身就可以促进HUASMC增殖和迁移,并且进一步促进BSA诱导的HUASMC增殖和迁移,而对AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移没有进一步的促进作用。结论血浆白蛋白本身对平滑肌细胞的增殖具有促进作用,糖基化修饰的白蛋白这一作用更加明显;S1PR1的激活参与了BSA和AGE-BSA促进平滑肌细胞增殖和迁移,AGE-BSA对S1PR1的激活作用更加显著。     

泛醌氧化还原酶铁硫蛋白4通过影响线粒体功能参与肺炎衣原体感染诱导的血管平滑肌细胞焦亡

目的]探究肺炎衣原体(C.pn)感染诱导血管平滑肌细胞(VSMC)焦亡及其可能机制。 [方法]组织贴块法培养大鼠原代VSMC,利用C.pn感染VSMC模型,使用倒置相差显微镜观察C.pn感染后VSMC形态学的变化,试剂盒检测C.pn感染VSMC后乳酸脱氢酶(LDH)含量变化,Western blot实验检测GSDMD和Caspase-1的表达,串联质谱标签法定量蛋白质组学实验和GO富集分析检测线粒体氧化磷酸化和氧化呼吸链Complex相关蛋白的变化。 [结果]与对照组相比,倒置相差显微镜下可见C.pn感染后VSMC膜外出现气泡状囊泡,C.pn感染VSMC 36 h、48 h后LDH含量分别增加38.92%和79.54%(均P＜0.001),焦亡相关蛋白GSDMD表达增加1.74倍和1.67倍(均P＜0.001);C.pn感染VSMC 48 h后Caspase-1表达(pro-Caspase-1)和活性(Caspase-1 p12/p10)分别增加2.69倍和3.47倍(均P＜0.001);质谱结果显示,C.pn感染VSMC后有20种差异表达的蛋白质富集在氧化磷酸化通路中,同时发现,ComplexⅠ泛醌氧化还原酶铁硫蛋白4(NDUFS4)下降最为显著。进一步的Western blot实验结果显示,C.pn感染VSMC 36 h、48 h后NDUFS4的表达水平分别下降了57.5%和57%(均P＜0.001)。 [结论]C.pn感染可能通过抑制NDUFS4表达影响线粒体功能,从而诱导VSMC焦亡。