新基因丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)的发现和研究——献礼非酒精性脂肪性肝病

丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)是成军教授课题组利用酵母双杂交技术首先发现的与丙型肝炎病毒核心蛋白结合的蛋白。课题组进一步发现HCBP6可以感受肝细胞内总胆固醇与甘油三酯水平变化并调节总胆固醇与甘油三酯水平。动物模型发现,HCBP6基因敲除小鼠在高脂饮食喂养下会出现糖脂代谢紊乱。课题组进一步发现韩国红参组分可通过调节HCBP6改善糖脂代谢,推动了含有该组分PTIB001治疗非酒精性脂肪性肝病的功能食品的问世。这些工作为基于PTIB001治疗NAFLD药物的研发提供了理论依据。     

丙型肝炎病毒核心蛋白在大肠埃希菌中的表达及其纯化

目的 建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白.方法 以HCV株全长Cdna 序列为模板,PCR扩增获得核心蛋白基因,构建原核表达载体Pet-32a(+)-HCV-Core.转化大肠埃希菌DH5α,提取质粒,验证正确后,再次转化大肠埃希菌BL21中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot验证融合蛋白的表达.超声破碎表达菌,Ni+-亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.结果 成功构建了原核表达载体Pet-32a(+)-HCV-Core,并表达了预期分子量大小的目的蛋白.结论 成功表达、纯化HCV核心融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础.     

雌激素受体及雌激素调节蛋白与胃肠道肿瘤

雌激素调节蛋白的发现进一步揭示了雌激素致瘤机制。评价雌激素受体及雌激素调节蛋白在肿瘤生物学行为中的作用，对指导临床应用内分泌治疗有一定意义。本文就它们与胃肠道肿瘤的关系加以综述。     

成核效应蛋白在泡凝聚融合过程中作用的初步研究

为了探讨成核效应蛋白在泡凝聚、融合过程中的作用，作者研究了胆汁中主要的促成核蛋白系统—ＣｏｎＡ结合蛋白对模拟胆汁泡的形态与脂类组成的影响，发现ＣｏｎＡ结合蛋白在加快泡凝聚与融合的同时，也使泡胆固醇增加，磷脂减少，泡胆固醇／磷脂比增高，认为成核效应蛋白促泡凝聚与融合的本质是改变了泡胆固醇饱和度。作者的初步研究还发现泡相蛋白虽量微却具有强的促成核活性；几种已知的成核效应蛋白在泡相与微胶粒相的分布有差异；胆固醇结石患者与色素结石患者相比，泡蛋白的量与促成核活性均增高。通过泡蛋白亲和染色技术，还发现ＣｏｎＡ结合蛋白能与模拟胆汁泡形成脂质－蛋白复合体。作者认为，泡中成核效应蛋白的存在或量与质的改变，在泡凝聚与融合过程中起重要作用。     

超敏C反应蛋白与冠脉病变程度的相关性研究

目的:探讨冠心病患者冠状动脉病变程度与血清超敏C反应蛋白的相关性,进一步揭示冠状动脉粥样硬化性心脏病的发病机理与病理过程.方法:选择稳定性心绞痛组与不稳定性心绞痛组各50例患者,采用胶乳凝集法测定超载C反应蛋白(正常值0-3mg/l),酶终点法测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL),结合选择性冠脉造影,确定冠脉狭窄程度、痛变支数,以研究其相关性.结果:两组间超敏C反应蛋白比较有明显差异,血脂比较无显著差异,稳定性心绞痛组起敏C反应蛋白与冠脉病变程度无明显相关性,不稳定性心绞痛组超敏C反应蛋白与冠脉病变程度有相关性.结论:炎症因子参与了急性冠脉综合症的病理过程.     

胆固醇酯转移蛋白抑制药的研究进展

动脉粥样硬化是多种心血管疾病的病理基础，高密度脂蛋白胆固醇降低与三酰甘油升高是构成这种风险的主要因素。因此，升高高密度脂蛋白胆固醇水平或可成为调脂治疗的重要靶点。多项研究显示：胆固醇转移蛋白抑制药可显著升高高密度脂蛋白胆固醇水平。该文综述几种临床研究阶段的胆固醇转移蛋白抑制药研究进展。     

短期服用氟伐他汀对血脂及C反应蛋白的影响

目的:观察氟伐他汀在短期(4周)内对血脂及 C-反应蛋白的影响。方法:将80例高脂血症患者随机分为治疗组40例和对照组40例。治疗组在饮食和生活方式调整基础上,每天晚上服用氟伐他汀20mg,连续4周。分别测定治疗前后患者血浆总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),高敏感 C-反应蛋白(hsCRP)的水平。结果:4周后治疗组 TC、LDL-C 分别下降了21.7%和21.8%。HDL-C 升高了6.5%,hsCRP 下降了7.8%,hsCRP 的下降与血浆 TC、LDL-C 降低无相关性(P>0.05),而与 HDL-C 的升高呈显著负相关(r=0.22,P<0.01)。对照组无明显变化。结论:短期服用氟伐他汀即可调整血脂代谢异常,并且 hsCRP 的降低与血脂的下降无关,而与 HDL 的升高相关。     

丙型肝炎病毒核心蛋白激活肝门部胆管癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝门部胆管癌生长和转移的影响。方法 首先构建表达HCV核心蛋白的真核表达载体pcDNA3-HCVcore,再将含有 pcDNA3-HCVcore的载体和不含 pcDNA3-HCV core的空载体分别导入肝门部胆管癌细胞株 QBC939中,RT-PCR和免疫组织化学检测 VEGF mRNA和蛋白表达。结果 重组质粒 pcDNA3-HCVcore在 QBC939细胞中有稳定表达;表达 HCV核心蛋白的细胞QBC939的 VEGF在蛋白水平和 mRNA水平较转染空载体的细胞QBC939明显升高。结论 HCV核心蛋白能激活VEGF表达,可能对肝门部胆管癌的生长和转移具有促进作用。     

人食管下括约肌G蛋白耦联受体的表达及作用机制

人食管下括约肌(LES)包括神经调节、自身调节、体液调节三种调节方式。三种方式中体液调节涉及多种激素类物质，但均与G蛋白耦联受体结合发挥作用。激素类物质因配体和受体的不同调节功能也不尽相同。通过研究其作用机制发现通过进一步开发，有望通过药物调节治疗食管动力性疾病。     

胆囊结石患者血脂及蛋白测定的意义

目的 探讨胆囊结石的成因与血脂及蛋白水平的关系。方法 采用ＳＰＳＳ软件包对２０４例胆囊结石患者的血清脂质和蛋白测定值进行统计分析。结果胆囊石组患者的前白蛋白、总大醇、高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白Ｂ与对照组组比较其差异有高度显著性意义；总蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆因醇和载脂蛋白Ａ１均明显高于对照组。结论上述指标是胆囊结石成因的敏感因素，对预防胆囊结石形成有一定的临床意义。     

丙型肝炎病毒 NS4A蛋白在胰腺细胞 cDNA文库中的结合蛋白基因的筛选

目的:从人胰腺细胞cDNA文库中筛选出与丙型肝炎病毒(HCV)NS4A蛋白存在相关作用并且参与糖、脂类代谢过程的结合蛋白,为研究HCV影响糖、脂类代谢的分子生物学机制提供实验依据.方法:构建pGBKT7-NS4A作为诱饵质粒,转化酵母菌株AH109,用SD/-Trp筛选阳性菌落.配合两种重组酵母菌株AH109与Y187...     

骨钙素对糖、脂代谢的影响及分子机制的研究进展

血清骨钙素(osteocalcin,OC)是一种维生素K依赖性蛋白,由非增殖期的成骨细胞合成和分泌。骨钙素是骨代谢的特异性标志物之一,反映骨活性、骨转化。近年来,越来越多的研究表明骨钙素不仅参与骨代谢,还以非羧化形式调节糖代谢、脂代谢。骨钙素可作为一种内分泌激素,通过调节胰岛β细胞功能、胰岛素敏感性、基因多态性等方式参与糖代谢;也可调控脂联素、瘦素的表达参与脂代谢,通过Nrf2通路、JNK途径改善NAFLD的发生发展。同时,血糖浓度也可调控骨钙素的表达。骨钙素受体G蛋白偶联受体6 A(G protein coupled receptor 6 A,GPRC6A)在胰腺、肝脏、骨骼肌、脂肪等器官均有表达,在糖、脂代谢调控机制中扮演着重要的角色。骨骼、胰腺、脂肪等器官在能量代谢之间有着密切的联系。本文就血清骨钙素对糖、脂代谢的影响及其相关分子机制做一综述。     

HCV核心蛋白通过LXRα核受体介导HepG2细胞甘油三酯合成增加

目的：观察丙型肝炎病毒（HCV）的核心蛋白（core）对肝细胞甘油三酯（TG）合成的影响。方法将HCV 1b基因型core表达载体pcDNA3.1-myc/his（-）-core1b和HCV 3a基因型core表达载体pcDNA3.1-myc/his（-）-core3a分别转染至HepG2细胞,利用定量测定法检测细胞内TG含量,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（real time qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）方法观察脂质合成相关基因肝X受体α（LXRα）、甾醇调节元件结合蛋白1c（SREBP1c）和脂肪酸合酶（FASN）的mRNA和蛋白的表达变化,并进行比较分析。结果 HepG2细胞转染两个基因型HCV core表达载体之后均能显著增加细胞内的TG含量（P＜0.05）,尤以基因型core3a组为差异更显著（P＜0.001）。Real-time PCR结果显示,两个基因型core均上调LXRα的mRNA水平（P＜0.05）,基因型core3a组差异更为显著（P＜0.01）;FASN的mRNA水平只在仅在基因型core3a组上调（P＜0.05）,而基因型core1b组差异无统计学意义。Western blot结果显示,HCV core表达可以明显上调表达可以显著上调SREBP1c的蛋白水平,尤其基因型core3a组更为显著。对FASN蛋白水平,基因型core3a上调其表达,但基因型core1b组无明显变化。结论 HCV可能通过LXRα介导肝细胞内的脂质合成诱导肝脂肪变,有待进一步研究。     

HCV core protein augments cyclosporine immunosuppression

Hepatitis C viremia occurs universally after liver transplantation. It is speculated that soluble HCV proteins may be immunomodulatory. We measured the effects of HCV core upon human T-cell proliferation, expression of activation markers, and interaction with cyclosporine. Cells were activated with anti-CD3 for 2-6 days. Cultivation with 1, 2, 4, and 8 microg/mL core reduced tritiated thymidine uptake by 7% (P = ns), 63% (P < .001), 69% (P < .001) and 92% (P < .001). Direct cell counting (10(4)) showed proliferative inhibition in treated cultures after 2 days (84%, P < .05), 4 days (93%, P < .05), and 6 days (88%, P < .05). Viability remained greater than 90%. Expression of activation markers was reduced with core treatment. Treatment with 4 microg/mL core for 2, 4, and 6 days reduced CD2+CD25+ by 67% (P < .05), 67% (P < .05), and 51% (P < .05) and CD2+DR+ expression by 54% (P < .05), 46% (P < .05), and 54% (P < .05). Interaction between core and cyclosporine was determined by isobologram analysis which determines whether interactions are synergistic, additive or antagonistic. Combining core with cyclosporine resulted in an additive effect upon proliferative suppression. Linear regression confirmed an additive interaction with an r2 value of 0.98. The data shows that soluble core causes dose dependent suppression of T-cell proliferation and may potentiate suppression by cyclosporine.     

STRA6: role in cellular retinol uptake and efflux

Distribution of vitamin A throughout the body is important to maintain retinoid function in peripheral tissues and to ensure optimal vision. A critical step of this process is the transport of vitamin A across cell membranes. Increasing evidence indicates that this process is mediated by a multidomian membrane protein that is encoded by the stimulated by retinoic acid 6 (STRA6) gene. Biochemical studies revealed that STRA6 is a transmembrane pore which transports vitamin A bidirectionally between extra- and intracellular retinoid binding proteins. Vitamin A accumulation in cells is driven by coupling of transport with vitamin A esterification. Loss-of-function studies in zebrafish and mouse models have unraveled the critical importance of STRA6 for vitamin A homeostasis of peripheral tissues. Impairment in vitamin A transport and uptake homeostasis are associated with diseases including type 2 diabetes and a microphthalmic syndrome known as Matthew Wood Syndrome. This review will discuss the advanced state of knowledge about STRA6’s biochemistry, biology and association with disease.     

Liver transplant for hepatocellular carcinoma in the United States: Evolving trends over the last three decades

Hepatitis C virus infection has been the most common etiology in HCC‐related liver transplantation (LT). Since 2014, direct‐acting antivirals (DAAs) have dramatically improved HCV cure. We aimed to study the changing pattern of etiologies and impact in outcome in HCC‐related LT according to HCV treatment‐era through retrospective analysis of the Scientific Registry of Transplant Recipients (SRTR) database (1987‐2017). A total of 27 855 HCC‐related liver transplants were performed (median age 59 years, 77% male). In the DAA era (2014‐2017) there has been a 14.6% decrease in LT for HCV‐related HCC; however, HCV remains the most common etiology in 50% of cases. In the same era, there has been a 50% increase in LT for NAFLD‐related HCC. Overall survival was significantly worse for HCV‐related HCC compared to NAFLD‐related HCC during pre‐DAA era (2002‐2013; P = .031), but these differences disappeared in the DAA era. In addition, HCV patients had a significant improvement in survival when comparing the DAA era with IFN era (P < .001). Independent predictors of survival were significantly different in the pre‐DAA era (HCV, AFP, diabetes) than in the DAA era (tumor size). HCV‐related HCC continues to be the main indication for LT in the DAA era, but patients’ survival has significantly improved and is comparable to that of NAFLD‐related HCC.     

Speckle-type POZ protein suppresses lipid accumulation and prostate cancer growth by stabilizing fatty acid synthase

Fatty acid synthase (FASN) is vital for maintaining lipid homeostasis in prostate cancer (PCa) cells, which have an increased rate of de novo fatty acid (FA) synthesis. Mutations in the gene encoding the tumor suppressor speckle-type POZ protein (SPOP), which is a E3 ubiquitin ligase, are a critical feature of PCa. Here, we provide evidence that FASN is a substrate of SPOP and that interaction of these proteins induces FASN ubiquitination and proteasome-dependent degradation. We showed that SPOP mutants commonly found in PCa cannot bind to FASN. Moreover, a decrease in SPOP levels upregulated FASN expression and triggered lipid accumulation in PCa cells. These results demonstrate that FASN is a crucial mediator of SPOP-induced inhibition of PCa cell growth. Our data provide evidence that SPOP regulates lipid metabolism by decreasing FASN expression and FA synthesis, resulting in tumor suppression. Taken together, our study indicates that this pathway may be a new therapeutic target for treating PCa.     

直接抗病毒药物治疗六例丙型肝炎病毒相关性皮肤损害患者的回顾性研究

目的探讨基于索磷布韦方案治疗丙型肝炎病毒（HCV）相关性皮肤损害的疗效和安全性。 方法回顾性分析2016年2月至2019年9月西安交通大学第二附属医院收治的6例HCV相关性皮肤损害患者接受基于索磷布韦方案治疗的效果和安全性。评估其持续病毒学应答（SVR12）率，治疗过程和治疗结束后肝功能和皮损症状的变化以及安全性。 结果6例患者年龄25～56岁；其中5例女性；2例肝硬化；3例基因型为HCV 1b，3例基因型为HCV 2a。皮损分别表现为阴囊湿疹、结节性痒疹、结节性红斑、扁平苔藓、干燥综合征和混和冷球蛋白血症相关皮损。2例患者病理确诊为HCV相关性皮损，4例患者临床诊断为HCV相关性皮损。患者接受索磷布韦/维帕他韦（3例）、索磷布韦/雷迪帕韦（2例）12周或索磷布韦/利巴韦林（1例）24周治疗。与基线水平相比，治疗结束或随访12周的丙氨酸氨基转移酶（ALT）显著降低、白蛋白（ALB）不变或升高，6例患者均获得SVR12且皮损均明显缓解。3例患者（阴囊湿疹、结节性痒疹、干燥综合征）皮损完全治愈，其他皮损包括结节性红斑、扁平苔藓、混和冷球蛋白血症相关皮损明显缓解，但需要接受免疫抑制剂和（或）细胞毒药物维持治疗。治疗期间未出现明显不良反应，随访期间皮损无复发。 结论HCV可引起不同的肝外皮肤表现，基于索磷布韦的无干扰素方案治疗HCV相关皮肤损害有效且安全性良好。对于皮肤疾病经对症治疗后效果欠佳者，需要尽早行HCV筛查，确诊HCV感染后建议尽快给予抗病毒治疗。