二肽基肽酶-4通过CXCR4/mTOR信号通路介导小鼠肺泡巨噬细胞MH-S自噬的机制研究

目的 探究二肽基肽酶-4（DPP-4）通过趋化因子受体4（CXCR4）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路介导小鼠肺泡巨噬细胞MH-S自噬的机制。方法 体外培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S并分组转染。分别设置PBS组（PBS培养MH-S细胞）、LPS组（100 ng/mL LPS诱导24 h）、DPP-4组（DPP-4表达病毒转染）、si-DPP-4组（si-DPP-4病毒载体转染）、DPP-4 + BafA1组（DPP-4表达病毒转染+自噬抑制剂BafA1干预）及si-DPP-4 + BafA1组（si-DPP-4病毒载体转染+自噬抑制剂BafA1干预）。绿色荧光蛋白（GFP）检测转染效率，稳定转染后，酶联免疫吸附试验检测MH-S细胞上清液炎症因子水平，腺病毒检测MH-S细胞自噬流变化，实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞DPP-4、CXCR4、mTOR mRNA的表达，Western blottig检测CXCR4/mTOR通路蛋白的表达。结果 LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α、GFP、RPF、Merge数量，CXCR4 mRNA、mTOR mRNA和CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量高于PBS组（P <0.05）；DPP-4组与LPS组IL-1β、IL-6及TNF-α水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；DPP-4组GFP、RPF、Merge数量，DPP-4 mRNA相对表达量高于LPS组（P <0.05），CXCR4 mRNA、mTOR mRNA、CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量低于LPS组（P <0.05）；si-DPP-4组IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于LPS组（P <0.05），GFP、RPF及MergeMerge数量低于LPS组（P <0.05）；si-DPP-4组和DPP-4 + BafA1组IL-1β、IL-6、TNF-α水平、CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量高于DPP-4组（P <0.05），GFP、RPF及Merge数量低于DPP-4组（P <0.05）；si-DPP-4组DPP-4 mRNA相对表达量低于DPP-4组（P <0.05），CXCR4 mRNA、mTOR mRNA相对表达量高于DPP-4组（P <0.05）；si-DPP-4 + BafA1组IL-1β、IL-6水平、CXCR4 mRNA、mTOR mRNA、CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量高于si-DPP-4组（P <0.05），GFP、RPF、Merge数量低于si-DPP-4组（P <0.05）。结论 DPP-4能够调节小鼠肺巨噬细胞自噬作用，调控炎症反应，其作用机制可能与CXCR4/mTOR通路有关。     

妊娠糖尿病患者血清microRNA-21调节Bcl-2/Caspase-9对滋养层细胞生物学行为的影响

目的 探讨妊娠糖尿病（GDM）患者血清microRNA-21（miR-21）表达变化及其对滋养层细胞生物学行为的作用机制。方法 选取2019年1月—2020年10月三亚市妇幼保健院收治的66例GDM孕妇及同期体检且孕周相近的38例健康孕妇作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血清miR-21 mRNA表达水平,microRNA转染JAR细胞系构建Control、miR-21 NC、miR-21、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor组细胞。采用CCK-8法检测细胞活力,Brdu检测细胞增殖,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭,TUNEL法检测细胞凋亡;采用Western blotting检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase 9、E-cadherin及Vimentin蛋白表达。结果 研究组患者miR-21 mRNA相对表达量及FPG、HbA1c水平较对照组高（P <0.05）。miR-21组细胞miR-21 mRNA相对表达量高于Control组（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞 mRNA相对表达量低于Control组（P <0.05）。CCK-8法检测结果显示,miR-21组细胞活力较Control组下调（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞活力较Control组上升（P <0.05）。miR-21组细胞增殖能力较Control组减弱（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞增殖能力较Control组增强（P <0.05）。miR-21组细胞凋亡率较Control组升高（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞凋亡率较Control组降低（P <0.05）。miR-21组的穿膜细胞数低于Control组（P <0.05）,miR-21 inhibitor组的穿膜细胞数高于Control组（P <0.05）。相较于Control组,miR-21组E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调（P <0.05）,miR-21 inhibitor组E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调（P <0.05）。相较于Control组,miR-21组Cleaved Caspased-9、Bax蛋白相对表达量上升,Bcl-2蛋白相对表达量下降（P <0.05）;miR-21 inhibitor组Caspased-9、Bax蛋白相对表达量下降,Bcl-2蛋白相对表达量上升（P <0.05）。结论 GDM孕妇存在miR-21高表达,miR-21可通过调节Bcl-2/Caspase-9介导对滋养层细胞增殖、侵袭的抑制作用,继而促进细胞凋亡。     

miRNA-140在早期骨关节炎软骨细胞中的表达规律及功能

目的 观察早期骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨细胞中miRNA-140的表达规律以及转染ds-miRNA-140对软骨细胞功能的影响。 方法 建立兔OA模型,获得正常软骨细胞（A组）和4周（B组）、8周（C组）OA软骨细胞,应用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测各组miRNA-140相对表达量以及Ⅱ型胶原蛋白（Col2a1）和金属蛋白酶13（MMP-13）的表达情况。各组软骨细胞转染ds-miRNA-140后,观察细胞Col2a1、MMP-13的表达情况。 结果 B组、C组软骨细胞miRNA-140的表达和A组相比分别下降到63%和57%（P<0.01）,而B组和C组软骨细胞miRNA-140的表达差异无统计学意义（P>0.05）;B、C两组细胞Col2a1 mRNA的表达和A组相比分别减少了52%和63%（P<0.01）,B、C两组软骨细胞MMP-13 mRNA的表达和A组相比分别升高了3.01倍和4.15倍（P<0.01）。转染ds-miRNA-140后,B、C两组细胞Col2a1 mRNA的表达分别增加了60%和127%（P<0.01）,B、C两组MMP-13 mRNA的表达在转染后是转染前的54.53%和42.61%（P<0.01）。Col2a1和MMP-13蛋白表达水平变化趋势与mRNA一致。 结论 OA早期关节软骨miRNA-140的表达显著减少;转染ds-miRNA-140可增加软骨细胞Col2a1表达,同时降低MMP-13的表达。     

Lnc-AK077216基于OPG/RANKL/RANK通路对破骨细胞分化成熟的调控作用

目的 基于骨保护蛋白（OPG）/细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）/细胞核因子κB受体活化因子（RANK）通路探究Lnc-AK077216对破骨细胞（OC）分化成熟的调控作用。方法 取对数生长期RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,采用脂质体转染法将Lnc-AK077216-shRNA、Control-shRNA转染至RAW264.7细胞,分别设为转染组、空载组。另取未作处理细胞设为对照组。采用荧光显微镜观察转染率,并采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定转染后Lnc-AK077216 mRNA相对表达量;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测诱导分化7 d后的OC数及阳性染色面积;采用qRT-PCR检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK mRNA相对表达量;采用Western blotting检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK蛋白相对表达量。结果 转染48 h后,荧光显微镜显示转染效率> 70％;转染48 h后转染组Lnc-AK077216 mRNA相对表达量低于对照组和空载组（P <0.05）;诱导分化前RAW264.7细胞多呈圆形且形态规则,诱导分化7 d后经TRAP染色,可观察到呈阳性的多核巨细胞,细胞有伪足、突起,且体积较大,表明生成OC;转染组OC数少于对照组和空载组（P <0.05）,阳性染色面积小于对照组和空载组（P <0.05）;转染组OPG mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和空载组（P <0.05）,RANKL、RANK mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组和空载组（P <0.05）。结论 敲低Lnc-AK077216可抑制RAW264.7细胞向OC分化,其调控机制可能与上调OPG mRNA和蛋白表达,下调RANKL、RANK mRNA和蛋白表达有关。     

自拟补肾祛瘀方对多囊卵巢综合征模型大鼠的作用及机制研究

目的 探究自拟补肾祛瘀方治疗多囊卵巢综合征（PCOS）的疗效及机制。方法 选取SD雌性大鼠,复制PCOS模型后随机分为对照组、模型组、西药组及联合组。对照组和模型组根据大鼠体重给予1 mL/（kg·d）氯化钠溶液灌胃,联合组每天根据体重给予补肾祛瘀汤剂11 g/kg和4.5 mg/kg二甲双胍灌胃,西药组仅给予4.5 mg/kg二甲双胍灌胃。药物干预后分别采用Western blotting、qRT-PCR、免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子κB（NF-κB）、核因子IκB（IκBα）的蛋白、mRNA及阳性表达。比较各组大鼠的体重及血清睾酮（T）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平。结果 各组大鼠药物干预前的体重比较,差异无统计学意义（P >0.05）;各组大鼠药物干预28 d后的体重比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组的体重高于另外3组（P <0.05）,西药组高于联合组和对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）。各组大鼠血清T、FSH、LH水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组血清T、FSH、LH水平高于另外3组（P <0.05）,西药组高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB蛋白相对表达量高于另外3组,IκBα蛋白相对表达量低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB蛋白相对表达量高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα蛋白相对表达量低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB mRNA相对表达量高于另外3组,IκBα mRNA相对表达量低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB mRNA相对表达量高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα mRNA相对表达量低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。各组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB、IκBα的OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）;进一步两两比较,模型组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB的OD值高于另外3组,IκBα的OD值低于另外3组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织TNF-α、NF-κB的OD值高于联合组与对照组（P <0.05）,联合组高于对照组（P <0.05）;西药组大鼠卵巢组织IκBα的OD值低于联合组与对照组（P <0.05）,联合组低于对照组（P <0.05）。结论 自拟补肾化瘀方治疗PCOS可通过影响TNF-α调控的NF-κB/IκBα信号通路促进LH、FSH、T的恢复。     

CTRP9对远端缺血预处理心肌梗死模型大鼠心肌缺血再灌注致脑损伤的保护作用及其机制研究

目的 探讨CTRP9对远端缺血预处理心肌梗死模型大鼠心肌缺血再灌注致脑损伤的保护作用。方法 选取40只雄性SD大鼠，随机分为4组：假手术组（NS组）、心肌缺血再灌注组（NIR组）、缺血预处理组（NIPost组）及缺血预处理+ CTRP9抑制剂组（NIPostI组），每组10只。采用苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织病理学变化，免疫组织化学法检测大鼠脑组织凋亡因子、炎症因子的表达，TUNEL法检测大鼠脑组织细胞凋亡，Western blotting检测大鼠心肌组织p-AMPK/t-AMPK、LC3Ⅰ/Ⅱ及P62蛋白的表达。结果 ①HE染色结果显示，NS组皮层的神经元胞浆十分丰富，核呈圆形，碱染后呈蓝色，分布均匀且排列整齐；NIR组神经元结构受损，分布不均匀，胞浆出现空泡，胞核固缩，碱染后出现了淡红色；NIPost组细胞结构大多恢复正常，大部分神经元包膜完整，胞核清晰可见；NIPostI组经CTRP9抑制剂干预后，预处理的保护效应消失。②NIR组、NIPost组及NIPostI组脑组织Bax、IL-6、IL-8表达水平高于NS组（P <0.05），Bcl-2、IL-10表达水平低于NS组（P <0.05）；NIPost组较NIR组Bax、IL-6、IL-8表达水平降低（P <0.05），Bcl-2、IL-10表达水平升高（P <0.05）；NIPostI组较NIPost组Bax IL-6、IL-8表达水平升高（P <0.05），Bcl-2、IL-10表达水平降低（P <0.05）。③NIR组、NIPost组和NIPostI组脑组织凋亡细胞多于NS组（P <0.05）；NIPost组和NIPostI组较NIR组凋亡细胞减少（P <0.05）。NIPost组和NIPostI组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。④NIR组、NIPost组及NIPostI组心肌组织p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量低于NS组（P <0.05），LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量高于NS组（P <0.05）；NIPost组较NIR组p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量升高（P <0.05），LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量降低（P <0.05）；NIPostI组较NIPost组p-AMPK/t-AMPK蛋白相对表达量降低（P <0.05），LC3Ⅰ/Ⅱ和P62蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 远端缺血预处理可缓解大鼠心肌缺血再灌注所致脑损伤。CTRP9可通过激活AMPK信号通路，参与远端缺血预处理对心肌缺血再灌注所致脑损伤的保护过程。CTRP9水平升高有益于防治心肌梗死。     

lncRNA TUG1吸附microRNA-144对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（lncRNA TUG1）吸附microRNA-144（miR-144）对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响机制。方法 B6.MRL-Fas^lprNju系统性红斑狼疮模型小鼠20只和C57BL/6健康小鼠5只在适应性条件下喂养5 d。每天收集B6.MRL-Fas^lprNju系统性红斑狼疮模型小鼠24 h尿量，尿蛋白浓度> 1 mg/L表明狼疮肾炎发病，为狼疮肾炎组。C57BL/6小鼠为正常组。分离纯化两组小鼠肾小球系膜细胞。对lncRNA TUG1实施亚细胞定位，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测狼疮肾炎组和正常组小鼠肾组织中lncRNA TUG1和miR-144 mRNA相对表达量。狼疮肾炎组小鼠肾小球系膜细胞转染并分为NC组（肾小球系膜细胞转染阴性对照序列）、TUG1过表达组（肾小球系膜细胞转染TUG1）、sh-TUG1组（肾小球系膜细胞转染sh-TUG1）、miR-144 mimic组（肾小球系膜细胞转染miR-144 mimic）、TUG1过表达+miR-144 mimic组（肾小球系膜细胞转染TUG1和miR-144 mimic）。双荧光素酶报告实验验证lncRNA TUG1和miR-144的靶向关系，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。Western blotting法检测纤维化标记因子Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）、纤连蛋白（FN）的蛋白相对表达量。MTT法检测各组细胞增殖活力，Transwell实验检测各组细胞侵袭数，流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 与正常组小鼠比较，狼疮肾炎组小鼠肾组织中的miR-144 mRNA相对表达量升高，lncRNA TUG1 mRNA相对表达量降低（P <0.05）。lncRNA TUG1与miR-144存在靶向结合关系。NC组、TUG1过表达组、sh-TUG1组、miR-144 mimic组、TUG1过表达+miR-144 mimic组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；与NC组比较，TUG1过表达组TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低，miR-144 mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高（P <0.05）。各组的Col Ⅳ、FN蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05）；与NC组比较，TUG1过表达组Col Ⅳ和FN蛋白相对表达量降低，miR-144 mimic组Col Ⅳ、FN蛋白相对表达量升高（P <0.05）。各组不同时间点的肾小球系膜细胞增殖活力比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的肾小球系膜细胞活力有差异（P <0.05）；②各组肾小球系膜细胞活力有差异（P <0.05）；③各组的细胞活力变化趋势有差异（P <0.05）；与NC组48 h和72 h比较，TUG1过表达组48 h和72 h细胞增殖活力降低（P <0.05），sh-TUG1组48 h和72 h细胞增殖活力增强（P <0.05），miR-144 mimic组48 h和72 h细胞增殖活力增强（P <0.05）。各组肾小球系膜细胞侵袭数和细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.05）；与NC组比较，TUG1过表达组的细胞侵袭数减少（P <0.05），细胞凋亡率升高（P <0.05）；sh-TUG1组细胞侵袭数增多（P <0.05），细胞凋亡率降低（P <0.05）；miR-144 mimic组细胞侵袭数增多（P <0.05）、细胞凋亡率降低（P <0.05）。结论 lncRNA TUG1吸附miR-144进而抑制狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌，减少细胞增殖并促进凋亡。     

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征对大鼠海马神经细胞线粒体自噬相关蛋白表达的影响

目的 观察阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）大鼠海马细胞线粒体自噬相关蛋白的表达。方法 将24只成年雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组。实验组进行OSAS模型复制，复制成功后继续饲养，按饲养时长分为2周组、4周组和6周组；对照组无特殊处理。每组6只。Western blotting检测大鼠海马细胞线粒体自噬相关蛋白LC3（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）、p62、PINK1及Parkin蛋白相对表达量；用透射电子显微镜观察其线粒体的变化。结果 实验组大鼠模型复制前后最低血氧饱和度和平均血氧饱和度的比较，差异有统计学意义（P <0.05），即OSAS模型复制成功。与对照组比较，2周组、4周组和6周组大鼠海马神经细胞LC3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PINK1及Parkin蛋白相对表达量均高于对照组，p62蛋白相对表达量低于对照组（P <0.05）；进一步两两比较，4周组LC3、LC3Ⅱ/LC3ⅠPINK1及Parkin蛋白相对表达量均高于2周组，p62蛋白相对表达量低于2周组（P <0.05）；6周组LC3、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PINK1及Parkin蛋白相对表达量均高于4周组，p62蛋白相对表达量低于4周组（P <0.05）。透射电镜观察，与对照组比较，2周组、4周组和6周组大鼠海马区可见被双层或多层磷脂双分子层包裹的线粒体自噬体。结论 OSAS可致大鼠海马神经细胞发生线粒体自噬，其自噬程度随饲养时间延长而加重。     

MicroRNA-137通过Wnt信号通路对宫颈癌细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用研究

目的 探究microRNA-137（miR-137）通过Wnt信号通路对人宫颈癌细胞HeLa的增殖与凋亡,以及对裸鼠移植瘤的作用。方法 将人宫颈癌细胞HeLa分别转染miR-137-mimic质粒（miR-137组）和空载质粒（NC组）,另设空白组只加入等量转染试剂不做其他处理。待细胞稳定转染后,采用CCK-8法检测细胞活性。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Wnt、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）、分泌型蛋白Dickkopf-1（DKK1）、miR-137 mRNA相对表达量;采用Western blotting检测Wnt、MMP-7、DKK1蛋白的相对表达量。将稳定转染的细胞接种于裸鼠背部,观察裸鼠移植瘤的生长情况,绘制生长曲线并计算抑瘤率。结果 空白组、NC组、miR-137组12 h、24 h、48 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）;②3组的OD值有差异（P <0.05）,miR-137组OD值较空白组和NC组低,相对细胞活性较低;③3组OD值的变化趋势有差异（P <0.05）。miR-137组细胞凋亡率高于空白组和NC组（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt和MMP-7 mRNA相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1和miR-137 mRNA相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt、MMP-7蛋白相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1蛋白相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。NC组裸鼠移植瘤的抑瘤率与miR-137组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,miR-137组裸鼠移植瘤的抑瘤率增加。空白组、NC组、miR-137组裸鼠不同时间点的肿瘤体积比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的肿瘤体积有差异（P <0.05）;②3组的肿瘤体积有差异（P <0.05）,miR-137组与空白组和NC组相比,肿瘤生长缓慢,相对抑瘤效果较好;③3组肿瘤体积的变化趋势有差异（P <0.05）。结论 在人宫颈癌细胞中过表达miR-137可以促进癌细胞凋亡,抑制癌细胞增殖,该作用可能与Wnt及其上下游MMP-7/DKK1信号通路有关。     

EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 取对数生长期人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、空载组及沉默组，分别转染Lipofectamine^TM 2000、含无义随机序列（siRNA-NC-PGCsi3.0）和EphA2干扰序列（EphA2-siRNA-PGCsi3.0）质粒和脂质体的复合物。稳定转染后，Brd U法检测细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell小室实验检测细胞侵袭能力，qRT-PCR和Western blotting分别检测细胞中EphA2、Wnt1、β-连环蛋白（β-catenin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）mRNA及蛋白相对表达量。结果 对照组、空载组、沉默组Brd U阳性率分别为（26.48±2.79）%、（23.52±2.57）%、（13.29±2.06）%，Brd U阳性率组间比较，差异有统计学意义（F =38.560，P =0.000）。与对照组、空载组比较，沉默组Brd U阳性率降低（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞划痕愈合率分别为（83.16±8.31）%、（82.35±7.24）%、（34.24±5.27）%，细胞划痕愈合率组间比较，差异有统计学意义（F =78.869，P =0.000）。与对照组、空载组比较，沉默组细胞划痕愈合率降低（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组穿膜细胞数分别为（326.74±33.15）个、（331.27±34.59）个、（126.23±26.18）个，穿膜细胞数组间比较，差异有统计学意义（F =68.997，P =0.000），与对照组、空载组比较，沉默组穿膜细胞数减少（P <0.05）；对照组与空载组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05），与对照组、空载组比较，沉默组Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA相对表达量降低（P <0.05），E-cadherin mRNA相对表达量升高（P <0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05），与对照组、空载组比较，沉默组EphA2、Wnt1、β-catenin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05），E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）。对照组和空载组上述指标比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论 EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移和侵袭有一定的抑制作用，其机制可能与阻止Wnt/β-catenin信号通路相关。     

雷公藤多苷通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病大鼠热休克蛋白90及PGC-1α表达的影响

目的 探究雷公藤多甙（TG）通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病（DN）大鼠热休克蛋白90（HPS90）及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α（PGC-1α）水平的影响。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素复制DN大鼠模型，并将其随机分为DN组、DN+TG组和DN+TG+SC79组（每组15只），另取15只健康大鼠作为对照组。TG灌胃剂量为20 mg/kg。大鼠腹膜内注射SC79（0.04 mg/g）以激活PI3K/Akt通路。通过HE染色验证模型复制结果和TG对肾组织的保护作用。生化检测大鼠24 h尿蛋白和肌酐，酶联免疫吸附试验检测炎症因子水平，HE染色观察各组大鼠肾损伤情况，Masson染色观察各组大鼠肾纤维化情况，qRT-PCR和Western blotting 分别检测HPS90和PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量。结果 DN组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于对照组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量低于对照组（P <0.05）；DN+TG组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6低于DN组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量高于DN组（P <0.05）。DN+TG+SC79组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于DN+TG组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量低于DN+TG组（P <0.05）。结论 TG可以通过抑制PI3K/Akt通路抑制HSP90的转录和翻译，从而促进PGC-1α的表达，并发挥抗炎和抗纤维化作用，从而缓解DN。     

基于microRNA-92a-3p靶向SIRT1调控氧糖剥夺再灌注诱导脑微血管内皮细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探讨基于microRNA-92a-3p（miR-92a-3p）靶向调控SIRT1氧糖剥夺再灌注（OGD/R）诱导小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）炎症反应的作用机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-92a-3p、SIRT1、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）mRNA的表达；Western blotting明确SIRT1、核转录因子-κB（NF-κB）p65、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）p65、TNF-α和IL-1β蛋白的表达；双荧光素酶报告基因验证miR-92a-3p与SIRT1靶向关系；划痕实验检测bEnd.3细胞的迁移能力。结果 OGD/R组miR-92a-3p相对表达量较对照组升高（P <0.05）。M_SIRT1 WT+mimics+TK组荧光素酶活性较M_SIRT1 WT+mimics NC+TK组低（P <0.05）。OGD/R组SIRT1蛋白和mRNA相对表达量较对照组降低（P <0.05），OGD+92a抑制剂组较OGD+92a抑制剂内参组升高（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组NF-κBp65/p-NF-κBp65蛋白较模拟物内参组高，SIRT1蛋白和mRNA表达较模拟物内参组低（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA相对表达量较模拟物内参组高（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组伤口愈合率较模拟物内参组低（P <0.05）。结论 miR-92a-3p通过靶向抑制SIRT1表达，促进OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞炎症反应。     

上皮性卵巢癌组织中microRNA-375、ERBB2的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的 探究上皮性卵巢癌（EOC）组织中microRNA-375（miR-375）、erb-b2受体酪氨酸激酶2（ERBB2）的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法 选取2015年10月—2017年10月上海交通大学附属第六人民医院收治的134例EOC患者的基本资料。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-375和ERBB2在EOC组织及其癌旁正常组织中的表达,并分析两者的相关性及其与临床病理特征和预后的关系。结果 EOC组织中miR-375 mRNA相对表达量较癌旁组织低（P <0.05）,而ERBB2 mRNA相对表达量较癌旁组织高（P <0.05）。EOC组织中miR-375 mRNA和ERBB2 mRNA相对表达量在淋巴结转移和FIGO分期方面差异有统计学意义（P <0.05）。EOC组织中miR-375的表达与ERBB2的表达呈负相关（P <0.05）。miR-375低表达组的3年总生存率较高表达组低（P <0.05）。ERBB2高表达组的3年总生存率较低表达组低（P <0.05）。Cox回归分析显示,高级别的FIGO分期、有淋巴结转移、miR-375低表达以及ERBB2高表达是影响EOC患者预后的独立危险因素（P <0.05）。结论 EOC组织中miR-375呈低表达而ERBB2呈高表达,两者呈负相关,且均与FIGO分期及淋巴结转移有关,对评估病情进展及其预后生存率具有重要的临床价值。     

针刺对乳腺癌化疗后癌因性疲乏模型小鼠肠-脑轴相关因子的影响

目的 观察针刺对乳腺癌化疗后癌因性疲乏（CRF）模型小鼠肠-脑轴相关因子的影响,探讨针刺改善乳腺癌CRF的可能机制。方法 将BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、针刺组和假针刺组,以荷瘤加化疗的方法复制乳腺癌化疗后CRF模型小鼠。针刺足三里、三阴交、百会、关元、气海穴位,1次/d,30 min/次,干预14 d。通过小鼠一般情况、强迫游泳实验、旷场实验评估小鼠体力和疲劳情况;Western blotting检测下丘脑和结肠组织中炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达;酶联免疫吸附试验检测血清HPA轴相关因子皮质醇（CORT）、促肾上腺皮质激素（ACTH）表达。结果 模型组模型复制后强迫游泳不动时间长于空白组（P <0.05）。模型组干预后强迫游泳不动时间长于针刺组（P <0.05）,假手术组干预后长于针刺组（P <0.05）。模型组模型复制后水平运动得分、垂直运动得分低于对照组（P <0.05）。针刺组干预后水平运动得分、垂直运动得分高于模型组、假针刺组（P <0.05）。模型组、假针刺组小鼠下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白相对表达量高于空白组（P <0.05）,针刺组低于模型组、假针刺组（P <0.05）。针刺组、模型组、假针刺组结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白相对表达量高于空白组（P <0.05）,针刺组低于模型组、针刺组（P <0.05）。模型组、假针刺组ACTH蛋白水平高于空白组（P <0.05）,CORT蛋白水平低于空白组（P <0.05）;针刺组ACTH蛋白水平低于模型组（P <0.05）,CORT蛋白水平高于模型组（P <0.05）;针刺组ACTH蛋白水平低于假针刺组（P <0.05）,CORT蛋白水平高于假针刺组（P <0.05）。结论 针刺可能通过降低乳腺癌CRF模型小鼠中枢和结肠中促炎因子的表达水平,调节HPA轴功能紊乱状态,进而改善乳腺癌化疗后CRF的疲乏症状,这可能是针刺治疗CRF的作用机制之一。     

PCNA、Bcl-2及EGFR在喉癌组织中的表达及与临床病理特征、生存的关系

目的 探讨增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）及表皮生长因子受体（EGFR）在喉癌组织中的表达及与临床病理特征、生存的关系。方法 选取2017年3月—2020年1月在苏州大学附属第一医院因喉癌行手术治疗的92例患者的喉癌组织及对应癌旁组织标本。检测癌组织与癌旁组织PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA、EGFR mRNA相对表达量,多元线性回归分析其癌组织表达与临床病理特征的关系。随访3年,采用Kaplain-Maier曲线分析不同PCNA、Bcl-2、EGFR表达水平患者生存情况差异。结果 癌组织PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA、EGFR mRNA相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）。不同年龄、肿瘤部位患者PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA、EGFR mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）;低分化,临床分期Ⅲ、Ⅳ期及淋巴结转移患者PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA、EGFR mRNA相对表达量分别高于中、高分化,临床分期Ⅰ、Ⅱ期,无淋巴结转移患者（P <0.05）。多元线性回归分析结果显示,肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移是喉癌组织PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA、EGFR mRNA表达的影响因素。Kaplain-Maier曲线分析结果显示,PCNA mRNA高表达患者3年无进展生存率、总生存率分别为59.57%和70.21%,低于低表达患者的80.00%和88.89%（P <0.05）;Bcl-2 mRNA高表达患者3年无进展生存率、总生存率分别为60.78%和70.59%,低于低表达患者的80.49%和90.24%（P <0.05）;EGFR mRNA高表达患者3年无进展生存率、总生存率分别为59.09%和70.45%,低于低表达患者的79.17%、87.50%（P <0.05）。结论 喉癌组织PCNA、Bcl-2、EGFR呈高表达,且其高表达状态与肿瘤分期高、分化程度低、淋巴结转移有关,PCNA、Bcl-2、EGFR表达水平可在一定程度上反映患者预后。     

依托咪酯对新生大鼠认知功能的影响及其机制研究

目的 探讨新生大鼠依托咪酯麻醉后近远期认知功能及烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）功能的变化。方法 将7 d龄新生大鼠随机分对照组、依托咪酯组、激动剂组,分别单次腹腔注射生理盐水10 ml/kg、依托咪酯5 ml/kg、依托咪酯5 ml/kg+α7nAChR激动剂PNU-282987 5 ml/kg,每组16只。麻醉清醒后2 h和4周,各组随机取8只大鼠进行行为学测试,完成测试后立即取双侧海马组织,采用qRT-PCR和Western blotting检测α7nAChR、乙酰胆碱酯酶（AChE） mRNA和蛋白。结果 麻醉清醒后2 h,依托咪酯组洞板实验探洞次数少于对照组和激动剂组（P <0.05）;3组Y电迷宫实验中正确反应次数和全天总反应时间比较,差异无统计学意义（P >0.05）。麻醉清醒后4周,3组洞板实验探洞次数、Y电迷宫实验中正确反应次数和全天总反应时间比较,差异无统计学意义（P >0.05）。麻醉清醒后2 h,依托咪酯组海马组织α7nAChR mRNA相对表达量低于对照组和激动剂组（P <0.05）,AChE mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和激动剂组（P <0.05）。麻醉清醒后4周,3组α7nAChR、AChE mRNA和蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 新生大鼠依托咪酯麻醉对近期学习记忆能力和远期认知能力无明显影响,但可一过性影响新生大鼠近期探索能力,其机制可能与抑制海马nAChR功能有关。     

干扰素诱导蛋白16在胎膜早破孕妇血清、胎盘组织中的表达及其意义

目的 研究孕妇血清、胎盘组织中γ干扰素诱导蛋白16（IFI16）表达水平与胎膜早破（PROM）的关系，为感染性PROM的早期诊断提供参考。方法 选取2019年9月—2020年9月徐州医科大学附属徐州妇幼保健院收治的PROM手术终止妊娠孕妇60例作为研究组。依据孕周将研究组分为足月PROM组［（38.16±1.47）周］和未足月PROM组［（34.87±2.05）周］，各30例。选取同期该院足月正常剖宫产的产妇30例作为对照组。对比3组胎盘组织IFI16表达情况，IFI16 mRNA、Caspase-1 mRNA表达水平及孕妇血清IFI16、炎症因子［白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β］水平。结果 足月PROM组、未足月PROM组IFI16蛋白阳性率高于对照组（P <0.05），足月PROM组与未足月PROM组IFI16蛋白阳性率比较，差异无统计学意义（P >0.05）。未足月PROM组、足月PROM组胎盘组织IFI16 mRNA、Caspase-1 mRNA相对表达量较对照组高（P <0.05）。未足月PROM组、足月PROM组血清IFI16、IL-6、IL-1β水平较对照组高（P <0.05）。结论 IFI16在孕妇血清及胎盘组织中升高可能与PROM孕妇的炎症反应有关，IFI16水平升高对PROM炎症反应可能有预测意义。     

重度子痫前期胎盘组织中sVCAM-1、GDF-15的表达及其临床意义

目的 探讨重度子痫前期（SPE）胎盘组织中可溶性血管内皮黏附分子-1（sVCAM-1）、生长分化因子-15（GDF-15）的表达及临床意义。方法 选取2018年5月—2021年5月江苏大学附属医院行剖宫产术终止妊娠的204例妊娠高血压患者，其中单纯妊娠高血压患者87例（妊娠高血压组），子痫前期（PE）患者52例（PE组），SPE患者65例（SPE组），另选取同期该院产检住院行剖宫产分娩的健康妊娠孕妇52例为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测所有研究对象胎盘组织中sVCAM-1、GDF-15的表达。分析不同人群胎盘组织中sVCAM-1 mRNA、GDF-15 mRNA相对表达量，Pearson法分析sVCAM-1 mRNA与GDF-15 mRNA的相关性；多因素Logistic回归模型分析影响SPE发生的因素。结果 对照组胎盘组织中sVCAM-1 mRNA、GDF-15 mRNA相对表达量低于妊娠高血压组、PE组及SPE组（P <0.05），妊娠高血压组sVCAM-1 mRNA、GDF-15 mRNA相对表达量低于PE组和SPE组（P <0.05），PE组sVCAM-1 mRNA、GDF-15 mRNA相对表达量均低于SPE组（P <0.05）。Pearson相关性分析结果显示，SPE组sVCAM-1 mRNA与GDF-15 mRNA呈正相关（P <0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，sVCAM-1 mRNA［O^R=3.550（95% CI：1.461，8.628）］、GDF-15 mRNA［O^R=4.059（95% CI：1.670，9.865）］是SPE发生的影响因素（P <0.05）。结论 胎盘组织中sVCAM-1、GDF-15的异常表达可能与PE发病有关，sVCAM-1、GDF-15高表达可能使PE患者进展为SPE。     

丙泊酚后处理对离体培养胎鼠海马神经元凋亡及cPKCγ/GAP-43信号通路的影响

目的 探究丙泊酚后处理对离体胎鼠海马神经元凋亡及经典型蛋白激酶Cγ（cPKCγ）/生长相关蛋白-43（GAP-43）信号通路的影响。方法 取培养7 d的胎鼠海马神经元，随机分为对照组、缺氧组、丙泊酚组。缺氧组和丙泊酚组于90% NO₂+10% CO₂的无氧培养箱中缺氧处理30 min。丙泊酚组在缺氧处理后立即加入终浓度为50 μmol/L的丙泊酚新培养基，对照组和缺氧组换等体积的新培养基孵育2 h。采用MTT法检测神经元存活率，流式细胞仪检测神经元凋亡率，比色法检测神经元超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting检测cPKCγ、GAP-43 mRNA和蛋白的表达。结果 免疫组织化学染色结果显示，培养7 d的海马神经元胞质饱满，状态良好。与对照组比较，缺氧组和丙泊酚组海马神经元存活率、SOD活性降低（P <0.05），凋亡率升高（P <0.05），MDA含量增加（P <0.05）；与缺氧组相比，丙泊酚组海马神经元存活率、SOD活性升高（P <0.05），凋亡率降低（P <0.05），MDA含量减少（P <0.05）。与对照组比较，缺氧组和丙泊酚组海马神经元cPKCγ、GAP-43 mRNA和蛋白相对表达量降低（P <0.05）；与缺氧组比较，丙泊酚组海马神经元cPKCγ、GAP-43 mRNA和蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 缺氧的胎鼠海马神经元经丙泊酚后处理后可以增加神经元抗氧化应激水平，降低神经元凋亡率，其保护作用可能与激活cPKCγ/GAP-43信号通路有关。     

穿心莲内酯靶向Akt信号干预HIV感染T细胞的效率研究

目的 探讨穿心莲内酯靶向Akt信号干预人类免疫缺陷病毒（HIV）感染T细胞的效率。方法 培养Jurkat T细胞,用WST-1试剂检测穿心莲内酯干预对Jurkat T细胞活性的影响。将Jurkat T细胞分为空白对照组、穿心莲内酯组、LY294002组（PI3K抑制剂）及穿心莲内酯联合LY294002组。各组药物分别干预24 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞PI3K、Akt mRNA相对表达量,采用Western blotting检测各组细胞p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量。制备HIV假病毒,用假病毒感染各组细胞,萤光素酶系统检测假病毒感染Jurkat T细胞的效率。结果 WST-1试剂检测结果显示,随着穿心莲内酯浓度增加,Jurkat T细胞活力降低（P <0.05）。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,穿心莲内酯降低Jurkat T细胞PI3K及其下游Akt mRNA相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量（P <0.05）。HIV假病毒感染实验结果显示,穿心莲内酯降低HIV假病毒感染Jurkat T细胞的效率,联合组比单独组的抑制效果更好（P <0.05）。结论 穿心莲内酯可能通过PI3K降低其下游Akt的活化,从而减少HIV假病毒在Jurkat T细胞间的传播及进入细胞的机会,降低其感染Jurkat T细胞的概率。