抑制钙结合蛋白S100A4表达缓解小鼠脓毒血症相关肺损伤的研究

目的 探讨抑制钙结合蛋白S100A4表达在脓毒血症相关肺损伤中的意义及潜在的调控机制。方法 复制脓毒血症模型小鼠,部分加氯硝柳胺Niclosamide预处理,收集肺泡灌洗液和肺组织。BCA蛋白定量法检测小鼠肺泡灌洗液总蛋白浓度;酶联免疫吸附试验检测肺S100A4蛋白含量;苏木精-伊红染色评估小鼠肺部炎症;免疫组织化学检测肺S100A4蛋白和紧密连接蛋白Occludin表达情况,Western blotting检测潜在信号分子的表达。结果 与Con组比较,LPS组小鼠肺泡灌洗液总蛋白浓度升高（P <0.05）,与Con组比较,肺S100A4水平差异无统计学意义（P >0.05）;免疫组织化学染色结果显示,肺支气管上皮细胞高表达S100A4,且LPS组S100A4表达较Con组升高（P <0.05）,Occludin表达较Con组降低（P <0.05）;Western blotting结果显示,LPS组STAT3和MAPK3表达较Con组升高（P <0.05）。与LPS组比较,Niclosamide预处理可有效降低小鼠肺支气管上皮细胞S100A4表达（P <0.05）,一定程度上恢复Occludin表达和下调STAT3、MAPK3表达。结论 Niclosamide可能通过STAT3、MAPK3信号下调S100A4和上调Occludin表达,进而缓解脓毒血症相关肺损伤。     

右美托咪定对脓毒症小鼠认知功能及HSP70表达的影响

目的 探讨右美托咪定（Dex）对脓毒症小鼠认知功能及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响，为其脑保护机制的研究提供参考。方法 将80只C57BL/6小鼠随机分为对照组（CON组）、单纯Dex组（Dex组）、脓毒血症组（LPS组）和Dex +脓毒血症组（D + L组），每组20只。首先，Dex组和D + L组腹腔注射Dex 25 μg/kg，CON组和LPS组腹腔注射等剂量的生理盐水；30 min后LPS组和D + L组腹腔注射5 mg/kg脂多糖（LPS）复制脓毒血症模型，CON组和Dex组腹腔注射等剂量的生理盐水。采用Morris水迷宫实验评估小鼠学习记忆能力，酶联免疫吸附试验检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平，化学比色法检测海马组织过氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）水平，苏木精-伊红染色观察海马CA1区病理变化，免疫组织化学染色和实时荧光定量聚合酶链反应检测海马HSP70蛋白、mRNA表达。结果 各组小鼠第1、2、3、4、5天逃避潜伏期比较，经重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的逃避潜伏期比较，差异有统计学意义（P <0.05）；②各组小鼠的逃避潜伏期比较，差异有统计学意义（P <0.05），LPS组较CON组延长，D + L组较LPS组缩短；③各组小鼠逃避潜伏期变化趋势比较，差异有统计学意义（P <0.05）。各组小鼠游泳速度比较，差异无统计学意义（P >0.05）。LPS组目标象限停留时间短于CON组（P <0.05），D + L组长于LPS组（P <0.05）；LPS组穿越平台次数少于CON组（P <0.05）；D + L组多于LPS组（P <0.05）。LPS组血清TNF-α、IL-1β水平较CON组升高（P <0.05），D + L组较LPS组降低（P <0.05）。LPS组GSH、SOD水平较CON组降低（P <0.05），MDA水平较CON组升高（P <0.05），D + L组GSH、SOD水平较LPS组升高（P <0.05），MDA水平较LPS组下降（P <0.05）。LPS组HSP70蛋白阳性表达率较CON组升高（P <0.05），D + L组较LPS组升高（P <0.05），Dex组与CON组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。LPS组HSP70 mRNA相对表达量较CON组升高（P <0.05），D + L组较LPS组升高（P <0.05）；Dex组与CON组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论 Dex能够降低脓毒症小鼠体内炎症和氧化应激水平，改善认知功能，其机制可能与上调HSP70表达有关。     

Lnc-AK077216基于OPG/RANKL/RANK通路对破骨细胞分化成熟的调控作用

目的 基于骨保护蛋白（OPG）/细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）/细胞核因子κB受体活化因子（RANK）通路探究Lnc-AK077216对破骨细胞（OC）分化成熟的调控作用。方法 取对数生长期RAW264.7小鼠单核巨噬细胞,采用脂质体转染法将Lnc-AK077216-shRNA、Control-shRNA转染至RAW264.7细胞,分别设为转染组、空载组。另取未作处理细胞设为对照组。采用荧光显微镜观察转染率,并采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定转染后Lnc-AK077216 mRNA相对表达量;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测诱导分化7 d后的OC数及阳性染色面积;采用qRT-PCR检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK mRNA相对表达量;采用Western blotting检测诱导分化培养3 d后各组OPG、RANKL、RANK蛋白相对表达量。结果 转染48 h后,荧光显微镜显示转染效率> 70％;转染48 h后转染组Lnc-AK077216 mRNA相对表达量低于对照组和空载组（P <0.05）;诱导分化前RAW264.7细胞多呈圆形且形态规则,诱导分化7 d后经TRAP染色,可观察到呈阳性的多核巨细胞,细胞有伪足、突起,且体积较大,表明生成OC;转染组OC数少于对照组和空载组（P <0.05）,阳性染色面积小于对照组和空载组（P <0.05）;转染组OPG mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和空载组（P <0.05）,RANKL、RANK mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组和空载组（P <0.05）。结论 敲低Lnc-AK077216可抑制RAW264.7细胞向OC分化,其调控机制可能与上调OPG mRNA和蛋白表达,下调RANKL、RANK mRNA和蛋白表达有关。     

Robo4在脑缺血再灌注损伤大鼠小胶质细胞极化中的作用及其机制研究

目的 探讨环形交叉轴突导向受体同源物4（Robo4）蛋白对脑缺血再灌注损伤（CIRI）后小胶质细胞M1/M2极化的影响。方法 选取60只SD大鼠，随机分为假手术（Sham）组、大脑中动脉短暂性闭塞/再灌注（tMCAO/R）组、tMCAO/R联合过表达Robo4慢病毒阴性载体（tMCAO/R+Lv-scramble）组、tMCAO/R联合过表达Robo4慢病毒载体（tMCAO/R+Lv-Robo4）组，每组15只。tMCAO/R+ Lv-scramble组及tMCAO/R+Lv-Robo4组在复制tMCAO前7 d于脑室内注射慢病毒载体。Longa评分评估神经功能缺损，TTC法检测脑梗死面积，实时荧光定量聚合酶链反应及Western blotting检测大脑组织中Robo4的表达，Western blotting检测M1小胶质细胞标志物（iNOS和CD86）、M2小胶质细胞标志物（Arg-1和CD206）和Notch通路蛋白（Notch-1、Hes1和Hes5）表达。酶联免疫吸附试验检测TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β水平。结果 tMCAO/R组Longa评分较Sham组高（P <0.05），tMCAO/R+Lv-scramble组较tMCAO/R+Lv-Robo4组高（P <0.05）。tMACO/R组Robo4 mRNA和蛋白相对表达量较Sham组低（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组较tMCAO/R+Lv-scramble组高（P <0.05）。tMACO/R组脑梗死面积较Sham组大（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组较tMCAO/R+Lv-scramble组小（P <0.05）。tMACO/R组较Sham组高（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组iNOS、CD86较tMCAO/R+Lv-scramble组低，Arg-1、CD206较tMCAO/R+Lv-scramble组高（P <0.05）。tMACO/R组较Sham组高（P <0.05），tMCAO/R+Lv-Robo4组TNF-α、IL-1β较tMCAO/R+Lv-scramble组低，IL-10、TGF-β较tMCAO/R+Lv-scramble组高（P <0.05）。tMACO/R组Notch-1、Hes1和Hes5相对表达量较Sham组高，tMCAO/R+Lv-Robo4组较tMCAO/R+Lv-scramble组低（P <0.05）。结论 Robo4可调控CIRI后小胶质细胞极化向M2表型转移，并调控Notch信号通路，缓解CIRI。     

TLR4特异性抑制剂对大鼠心脏死亡器官捐献供肝缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨TLR4特异性抑制剂调控HMGB1/TLR4信号通路对大鼠心脏死亡器官捐献供肝缺血再灌注（IR）损伤的作用。方法 将8周龄Balb/c雄性大鼠分为对照组［术前30 min经腹腔注射二甲基亚砜（DMSO）无菌生理盐水］、对照抑制组（术前30 min经腹腔注射含TLR4抑制剂的DMSO无菌生理盐水）、模型组（术前30 min经腹腔注射DMSO无菌生理盐水）、模型抑制组（术前30 min经腹腔注射含TAK242的DMSO无菌生理盐水）,每组6只。收集肝脏组织标本,采用苏木精-伊红染色检测肝脏细胞形态结构,Suzuki评分评估肝脏细胞损伤情况;TUNEL染色法检测细胞凋亡率,Western blotting检测肝细胞HMGB1/TLR4及下游炎症因子相对表达量;免疫荧光和Western blotting测定TLR4与HMGB1的共表达作用。结果 病理结果显示,模型组肝脏损伤情况较对照组严重,模型抑制组肝脏损伤情况优于模型组;模型组Suzuki评分高于对照组（P <0.05）,模型抑制组Suzuki评分低于模型组（P <0.05）。模型组、模型抑制组HMGB1、TLR4、IL-1β、IL-6蛋白相对表达量高于对照组（P <0.05）;模型抑制组HMGB1、TLR4、IL-1β、IL-6蛋白相对表达量低于模型组（P <0.05）。模型组肝脏组织细胞凋亡率高于对照组和模型抑制组（P <0.05）。模型组HMGB1蛋白相对表达量高于对照组和模型抑制组（P <0.05）。免疫荧光结果显示,模型组大鼠肝细胞HMGB1的免疫活性显著增加,且主要位于细胞浆内;但对照组HMGB1免疫活性无显著变化。结论 TLR4特异性抑制剂可显著下调HMGB1/TLR4信号通路及相关信号分子,减轻供肝氧化应激和炎症反应,对供肝IR损伤具有保护作用。     

3种小分子拮抗剂对骨关节炎软骨细胞的作用

目的 探讨3种小分子拮抗剂（TN14003、T140、AMD3100）阻断SDF-1/CXCR4信号通路对骨关节炎（OA）软骨细胞表达的影响,为寻找一种高效的OA治疗药物奠定实验基础。方法 OA软骨细胞随机分成4组,A组、B组、C组分别加入TN14003、T140及AMD3100,D组为对照组。第2天、第4天时,qRT-PCR检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原（ColⅡ）mRNA相对表达量,Western blotting检测各组软骨细胞ColⅡ蛋白相对表达量。第10天时,免疫组织化学染色观察各组软骨细胞ColⅡ表达。结果 培养第2天、第4天时,4组软骨细胞ColⅡ mRNA和蛋白相对表达量比较：①不同时间点软骨细胞ColⅡ mRNA和蛋白相对表达量有差异（P <0.05）;②4组软骨细胞ColⅡ mRNA和蛋白相对表达量有差异（P <0.05）;③4组软骨细胞ColⅡ mRNA和蛋白相对表达量变化趋势有差异（P <0.05）。进一步行两两比较,结果提示第2天、第4天时A组软骨细胞ColⅡ mRNA和蛋白相对表达量均高于其他3组（P <0.05）。第10天时,免疫组织化学染色发现A组软骨细胞ColⅡ染色最深,B组、C组、D组依次变浅。结论 TN14003较T140、AMD3100能明显缓解OA软骨关节退变,有望成为一种高效的抗OA治疗药物。     

格隆溴铵对高氧诱导幼鼠急性肺损伤的影响及其机制研究

目的 探究格隆溴铵对高氧诱导幼鼠急性肺损伤（ALI）的影响及作用机制。方法 从30只SD幼鼠中随机选取10只为对照组,其余幼鼠成功复制高氧诱导的ALI模型,随机分为ALI组、格隆溴铵组,每组10只。格隆溴铵组雾化吸入0.8 mg/（kg·d）格隆溴铵,ALI组、对照组吸入等体积生理盐水,连续给药7 d后,测量幼鼠肺组织湿/干重比值（W/D）、肺指数,检测白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平及血清活性氧基团（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）水平,比较肺组织病理学变化及Toll样受体4/髓分化因子88（TLR4/MyD88）通路蛋白的表达。结果 与对照组比较,ALI组W/D及肺指数升高（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6、TNF-α、SOD水平升高（P <0.05）,ROS水平降低（P <0.05）,TLR4、MyD88蛋白相对表达量上调（P <0.05）;与ALI组比较,格隆溴铵组W/D及肺指数降低（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6、TNF-α、SOD水平降低（P <0.05）,ROS水平升高（P <0.05）,TLR4、MyD88蛋白相对表达量下调（P <0.05）。结论 格隆溴铵能改善血清炎症指标及氧化应激指标,降低高氧诱导的ALI,其作用机制可能与TLR4/MyD88通路有关。     

GPR30对大鼠椎间盘退行性病变的作用及其机制研究

目的 探讨G蛋白偶联受体30（GPR30）通过Nrf2/ARE信号通路抑制白细胞介素1β（IL-1β）诱导的大鼠椎间盘髓核细胞的凋亡、炎症反应和氧化应激。方法 使用IL-1β处理大鼠椎间盘髓核细胞复制体外椎间盘退变模型,将椎间盘髓核细胞分为空白对照（Control）组、IL-1β组、IL-1β+过表达GPR30阴性对照质粒（oe-NC）组、IL-1β+过表达GPR30质粒（oe-GPR30）组、IL-1β + oe-GPR30+干扰Nrf2表达阴性对照质粒（si-NC）组、IL-1β + oe-GPR30+干扰Nrf2表达质粒（si-Nrf2）组,IL-1β的处理浓度为10 ng/mL。实时荧光定量聚合酶链反应检测GPR30 mRNA表达;Western boltting检测GPR30、抗重组与合成蛋白（Nrf2）和抗醌NADH脱氢酶（NQO1）和抗血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和IL-6水平;使用ELISA法检测活性氧（ROS）、分光光度法检测超氧化物歧化酶（SOD）水平,比色法检测丙二醛（MDA）水平。结果 IL-1β组髓核细胞GRP30 mRNA、蛋白相对表达量较Control组降低（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30组较IL-1β + oe-NC组升高（P <0.05）。IL-1β组髓核细胞核中Nrf2蛋白相对表达量较Control组升高（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30组较IL-1β + oe-NC组升高（P <0.05）。IL-1β组Nrf2、HO-1及NQO1蛋白相对表达量较Control组降低（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30组较IL-1β + oe-NC组升高（P <0.05）。IL-1β组髓核细胞Nrf2蛋白相对表达量较Control组降低（P <0.05）,IL-1β+ oe-GPR30组较IL-1β + oe-NC组升高（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30 + si-Nrf2组较IL-1β + oe-GPR30 + si-NC组降低（P <0.05）。IL-1β组髓核细胞凋亡率较Control组升高（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30组较IL-1β + oe-NC组降低（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30 + si-Nrf2组较IL-1β + oe-GPR30+si-NC组升高（P <0.05）。IL-1β组TNF-α、IL-6水平较Control组升高（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30组较IL-1β + oe-NC组降低（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30 + si-Nrf2组较IL-1β + oe-GPR30 + si-NC组升高（P <0.05）。IL-1β组ROS、MDA水平较Control组升高（P <0.05）,SOD水平较Control组降低（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30组ROS、MDA水平较IL-1β + oe-NC组降低,SOD水平较IL-1β + oe-NC组升高（P <0.05）,IL-1β + oe-GPR30 + si-Nrf2组ROS、MDA水平较IL-1β + oe-GPR30 + si-NC组升高,SOD水平较IL-1β + oe-GPR30 + si-NC组降低（P <0.05）。结论 上调GPR30表达激活Nrf2/ARE信号通路,能抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡、炎症和氧化应激反应。     

lncRNA TUG1吸附microRNA-144对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（lncRNA TUG1）吸附microRNA-144（miR-144）对狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌与凋亡的影响机制。方法 B6.MRL-Fas^lprNju系统性红斑狼疮模型小鼠20只和C57BL/6健康小鼠5只在适应性条件下喂养5 d。每天收集B6.MRL-Fas^lprNju系统性红斑狼疮模型小鼠24 h尿量，尿蛋白浓度> 1 mg/L表明狼疮肾炎发病，为狼疮肾炎组。C57BL/6小鼠为正常组。分离纯化两组小鼠肾小球系膜细胞。对lncRNA TUG1实施亚细胞定位，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测狼疮肾炎组和正常组小鼠肾组织中lncRNA TUG1和miR-144 mRNA相对表达量。狼疮肾炎组小鼠肾小球系膜细胞转染并分为NC组（肾小球系膜细胞转染阴性对照序列）、TUG1过表达组（肾小球系膜细胞转染TUG1）、sh-TUG1组（肾小球系膜细胞转染sh-TUG1）、miR-144 mimic组（肾小球系膜细胞转染miR-144 mimic）、TUG1过表达+miR-144 mimic组（肾小球系膜细胞转染TUG1和miR-144 mimic）。双荧光素酶报告实验验证lncRNA TUG1和miR-144的靶向关系，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。Western blotting法检测纤维化标记因子Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）、纤连蛋白（FN）的蛋白相对表达量。MTT法检测各组细胞增殖活力，Transwell实验检测各组细胞侵袭数，流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 与正常组小鼠比较，狼疮肾炎组小鼠肾组织中的miR-144 mRNA相对表达量升高，lncRNA TUG1 mRNA相对表达量降低（P <0.05）。lncRNA TUG1与miR-144存在靶向结合关系。NC组、TUG1过表达组、sh-TUG1组、miR-144 mimic组、TUG1过表达+miR-144 mimic组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；与NC组比较，TUG1过表达组TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低，miR-144 mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高（P <0.05）。各组的Col Ⅳ、FN蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05）；与NC组比较，TUG1过表达组Col Ⅳ和FN蛋白相对表达量降低，miR-144 mimic组Col Ⅳ、FN蛋白相对表达量升高（P <0.05）。各组不同时间点的肾小球系膜细胞增殖活力比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的肾小球系膜细胞活力有差异（P <0.05）；②各组肾小球系膜细胞活力有差异（P <0.05）；③各组的细胞活力变化趋势有差异（P <0.05）；与NC组48 h和72 h比较，TUG1过表达组48 h和72 h细胞增殖活力降低（P <0.05），sh-TUG1组48 h和72 h细胞增殖活力增强（P <0.05），miR-144 mimic组48 h和72 h细胞增殖活力增强（P <0.05）。各组肾小球系膜细胞侵袭数和细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.05）；与NC组比较，TUG1过表达组的细胞侵袭数减少（P <0.05），细胞凋亡率升高（P <0.05）；sh-TUG1组细胞侵袭数增多（P <0.05），细胞凋亡率降低（P <0.05）；miR-144 mimic组细胞侵袭数增多（P <0.05）、细胞凋亡率降低（P <0.05）。结论 lncRNA TUG1吸附miR-144进而抑制狼疮肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎症因子分泌，减少细胞增殖并促进凋亡。     

星状神经节阻滞术对大鼠急性心肌梗死后炎症反应的影响

目的 探讨星状神经节阻滞术（SGB）对大鼠急性心肌梗死（AMI）后心肌细胞炎症的保护作用。方法 选取8周龄雄性SPF级Wistar大鼠60只,体重200～250 g,随机分为假手术组、AMI组和SGB组,每组20只。假手术组只打开胸腔暴露心脏,不结扎冠状动脉;AMI组结扎冠状动脉左前降支复制AMI模型;SGB组在AMI模型复制成功后行SGB。模型复制成功后1周采集各组大鼠血清及心脏组织,qRT-PCR检测各组大鼠心肌组织中炎症因子（IL-6、IL-1β及TNF-α）mRNA;酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中炎症因子（IL-6、IL-1β及TNF-α）,全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中心肌酶（AST、LDH和CK-MB）。结果 各组大鼠心肌组织中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α mRNA的相对表达量均较AMI组降低（P <0.05）。各组大鼠血清中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,AMI组、SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平较假手术组升高（P <0.05）,SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平较AMI组降低（P <0.05）。各组大鼠血清AST、LDH及CK-MB表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,AMI组、SGB组AST、LDH及CK-MB表达水平较假手术组升高（P <0.05）,SGB组AST、LDH和CK-MB表达水平较AMI组降低（P <0.05）。结论 SGB对大鼠AMI后心肌细胞炎症有一定的保护作用。     

4-氨基-4-甲基哌啶二对甲苯磺酸盐的合成

目的 合成二肽基肽酶4抑制剂ABT-279和K-579的重要中间体4-氨基4-甲基哌啶二对甲苯磺酸盐.方法 以4-哌啶甲酸乙酯为原料,经N-Boc保护、烷基化、酰胺化、Hofmann降解和N-Boc脱保护5步反应,制备得4-氨基4-甲基哌啶二对甲苯磺酸盐.结果 4-哌啶甲酸乙酯为原料合成目标化合物的总收率为49.5%....     

4-取代氨基甲酰胺基-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素衍生物的合成及其抗肿瘤活性

根据鬼臼毒素类化合物C_4位氮取代衍生物构效原理,设计并合成了11个4-取代氨基或烃氧甲酰胺基表鬼臼毒素类似物。从鬼臼毒素出发,经溴代、水解、叠氮化、还原以及酰化等六步反应合成标题化合物。体外抗肿瘤活性试验表明这类化合物具有较为显著的生物活性,多数化合物对L1210白血病肿瘤细胞与KB细胞生长抑制活性超过临床用药依托泊甙。     

苯甲酸酯类液晶的合成和性能测试

本文介绍了４－辛氧基苯甲酸－４＇－辛氧基苯酚酯的合成路线。红外光谱，核磁共振、质谱、元素分析的结果确证了该化合物的分子结构。经相变温度，介电各向异性的测试，证实其具有液晶性。     

4-取代氨基甲酰胺基-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素衍生物的合成及其抗肿瘤活性

根据鬼臼毒素类化合物C_4位氮取代衍生物构效原理,设计并合成了11个4-取代氨基或烃氧甲酰胺基表鬼臼毒素类似物。从鬼臼毒素出发,经溴代、水解、叠氮化、还原以及酰化等六步反应合成标题化合物。体外抗肿瘤活性试验表明这类化合物具有较为显著的生物活性,多数化合物对L1210白血病肿瘤细胞与KB细胞生长抑制活性超过临床用药依托泊甙。     

雷公藤甲素对哮喘小鼠白三烯B_4、C_4表达的影响

目的研究雷公藤甲素对哮喘小鼠哮喘小鼠白三烯B4、C4表达的影响,探讨其治疗哮喘的机制。方法建立小鼠卵蛋白哮喘模型,随机分为7组,分别为对照组、地塞米松治疗组及不同剂量雷公藤甲素治疗组,用ELISA测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织匀浆中白三烯B4、C4表达水平。结果哮喘组白三烯B4、C4表达明显高于正常对照组(P<0.01),雷公藤甲素治疗组及地塞米松组明显低于哮喘组(P<0.01)。结论雷公藤甲素抑制哮喘气道炎症的机制可能与其抑制白三烯B4、C4表达的表达活性有关。     

石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变

目的研究石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变。方法用PCR-SSCP、PCR产物直接测序法检测46例石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4基因改变情况,用原位杂交(ISH)、免疫组织化学(IHC)检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织DPC4的mRNA、SMAD4蛋白表达情况。结果胰腺癌DPC4基因第1、2、3、4、8、11外显子的纯合性缺失率为28.26%,突变率为21.74%,测序显示有3例无义突变,5例错义突变,1例插入、缺失及错义突变,1例插入突变。ISH、IHC显示胰腺癌DPC4/SMAD4阳性率分别为53.57%、58.93%,而对应正常胰腺阳性率分别为91.07%、89.29%。统计学分析表明胰腺癌与正常胰腺有显著性差异(P<0.05)。32例胰腺癌进行了PCR-SSCP、测序、ISH和IHC实验,四者结果一致者28例,符合率为87.50%,其中基因改变与ISH符合率为87.50%,基因改变与IHC符合率为96.88%。56例胰腺癌的ISH与IHC符合率为91.07%,统计学分析显示上述三组阳性率间均无显著性差异(P>0.05)。结论人胰腺癌纯合性缺失和突变是DPC4失活的主要机制,胰腺癌与正常胰腺相比,SMAD4表达明显下降,DPC4作为一种抑癌基因,其改变可能为胰腺癌的重要分子事件,在胰腺癌的形成中可能起重要作用。     

血清IL-4和sIL-4R与骨关节炎严重程度的相关性研究

目的通过测定不同严重程度的骨关节炎患者的血清IL-4和sIL-4R水平,对IL-4和sIL-4R水平与骨关节炎严重程度的相关性进行分析研究。方法选取临床收治的膝关节骨关节炎病例共42例作研究,选取12名性别比例、体质量指数相当的正常人作对照组。用WOMAC骨关节炎指数对骨关节炎严重程度进行临床评估。用K＆L评级法对骨关节炎严重程度进行影像学评估。用ELISA法检测研究对象血清IL-4和sIL-4R水平。结果骨关节炎组和正常对照组血清IL-4浓度在0~1.582pg/ml,差异无统计学意义。骨关节炎组的血清sIL-4R水平显著高于正常对照组（Z=-4.236,P=0.00）,差异有统计学意义。骨关节炎组的WOMAC指数与血清sIL-4R水平存在相关关系,相关系数为0.366（P=0.017）。正常对照组与骨关节炎各K＆L等级组的血清sIL-4R水平比较差异有统计学意义（χ2=29.219,P=0.00）,各组的sIL-4R水平均数呈递增趋势。结论骨关节炎患者血清IL-4水平无明显升高,骨关节炎患者sIL-4R水平显著高于正常对照组,而且sIL-4R水平与OA的严重程度具有相关性,血清sIL-4R水平可作为OA的诊断及严重程度判断的参考指标。     

4-间氨基酚-4′去甲表鬼臼酯的抗氧化与抗肿瘤作用

目的 研究4-间氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(MDE)的体外抗氧化与抗肿瘤活性.方法 体外对人胃癌细胞SGC-7901的抗肿瘤活性用四氮唑比色法;体内抗肿瘤活性用动物移植瘤法.用硫代巴比妥酸法测定大鼠肝自发性,Fe2 -抗坏血酸诱发的心、肝、肾组织匀浆中丙二醛生成;分光光度法测定H2O2诱导的红细胞溶血.结果 MDE剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞生长,IC50为36.5(17.1～77.8)mg/L,体内对小鼠移植性肿瘤S180和H22均有明显的抑制作用,并浓度依赖性地抑制大鼠肝组织自发性和Fe2 -抗坏血酸诱导的心、肝、肾组织匀浆中丙二醛的生成,对H2O2诱导的大鼠红细胞溶血也有一定的抑制作用.结论 MDE有明显的抗氧化及抗肿瘤作用.     

Sirt4在心肌细胞中增强血管紧张素Ⅱ对GATA结合蛋白4的激活作用

目的 探索Sirt4在大鼠原代心肌细胞中对GATA结合蛋白4(GATA-binding protein 4,GATA4)活性的影响.方法 构建过表达Sirt4(Ad-Sirt4)以及干扰Sirt4表达(Ad-shSirt4)的腺病毒并且在体外培养大鼠原代心肌细胞,将构建好的腺病毒及其相应的对照腺病毒(Ad-GFP/Ad-U6)分别感染大鼠原代心肌细胞,感染24 h后用PBS或1μmol/L血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理细胞48 h.采用Western blot及Real-time PCR检测GATA4的表达,通过免疫荧光及细胞核分离法检测GATA4的核转运,利用双荧光素酶报告基因法检测GATA4下游分子心房利钠肽(atrial natriureticpeptide,ANP)、脑利钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的启动子活性.结果 Sirt4在大鼠原代心肌细胞中不会影响GATA4的蛋白及mRNA水平(P＞0.05).与对照组比较,Sirt4过表达显著增加AngⅡ诱导的GATA4磷酸化,而干扰Sirt4表达降低GATA4的磷酸化水平.在大鼠原代心肌细胞中下调Sirt4表达可以明显抑制AngⅡ引起的GATA4入核;Sirt4过表达显著增加GATA4下游分子ANP、BNP的启动子活性(P＜0.01).结论 Sift4可以在大鼠原代心肌细胞中促进AngⅡ对GATA4的激活效应.     

IL-4与IL-10调控CD4+ T细胞CXC趋化性细胞因子受体4的研究

目的研究IL-4和IL-10对CD4+ T细胞上CXC趋化性细胞因子受体4（CXCR4）表达的调控。方法采用流式细胞术,实时定量逆转录PCR（RT-PCR）,细胞因子的趋化性分析以及Scatchard分析法检测CXCR4和CXCR4 mRNA。结果 IL-4和IL-10能够显著上调或下调CD4+ T细胞上CXCR4的表达。SDF-1诱导的CD4+ T细胞趋化性同样也受到IL-4和IL-10的调控。IL-4和IL-10能分别上调或下调CD4+ T细胞中CXCR4的mRNA表达。在新鲜分离的CD4+ T细胞上只存在一种亲和力的CXCR4（Kd 6.3 nmol*L-1）。而IL-4刺激的CD4+ T细胞存在两种不同亲和力的CXCR4（Kd1 4.4 nmol*L-1和Kd2 14.6 nmol*L-1）。IL-4和IL-10通过环腺苷酸和环鸟苷酸双重信号途径对CD4+ T细胞上CXCR4表达的调控与Ca2+激活刺激无关。IL-4和IL-10可能是通过CD26来调控CXCR4在CD4+ T细胞上的表达。结论 IL-4和IL-10对CXCR4-SDF-1受体-配体对的调节,在HIV侵袭和炎症感染进程有关的细胞因子环境中起着重要作用。