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1.
目的 研究急性髓系白血病(AML)患者骨髓中FMS样酪氨酸激酶3基因(FLT3)表达水平与FLT3基因内部串联重突变(FLT3-ITD突变)、临床表现和疾病预后的相关性及意义。方法 采用荧光定量PCR法检测128例AML患者初诊时骨髓标本中FLT3基因表达水平,以FLT3基因表达量<35%作为低表达组,≥35%作为高表达组,并探讨不同FLT3基因表达水平的FLT3-ITD突变、临床症状、实验室检查结果及疾病预后,采用多因素logistic回归分析FLT3基因高表达的影响因素,采用单因素Cox回归和生存曲线进行生存分析。 结果 剔除1例不合格的M2患者RNA样本,最终纳入127例进行分析。AML患者初诊时FLT3表达量为0.01~180.68(均值14.65)。FLT3基因表达水平在WHO的AML分型中M1最高,M6最低,但各亚型间差异不具有统计学意义。FLT3基因高表达组AML患者外周血白细胞计数(WBC)较低表达组高(P<0.01),且高表达组患者更容易发生贫血及发热临床症状(P<0.05),多因素logistic回归发现,FLT3基因高表达的可能相关因素为WBC〔回归系数(B)=1.508,比值比(OR)=4.518,95%可信区间(95%CI):1.465~13.390,P=0.009〕及贫血(B=2.142,OR=8.513,95%CI:3.201~22.644,P<0.001)。 FLT3基因低表达组AML患者完全缓解率(CR)为81.82%(36/44),高于FLT3基因高表达组38.55%(32/83),(P<0.05)。生存曲线显示,FLT3基因高表达组患者生存时间较低表达组短(P<0.05)。Cox回归显示, FLT3基因表达高水平患者死亡风险是FLT3基因表达低水平者的3.810倍(B=1.338,相对危险度3.810,95%CI:1.820~7.947,P<0.001)。高表达组总生存率为56.63%,低表达组为70.45%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FLT3基因高表达可能与AML患者WBC及贫血症状有关。FLT3基因高表达是AML患者预后不良的指标。 相似文献
2.
目的 在我们的前期研究工作中,通过Tol2转座子介导的插入突变,筛选到了一批组织特异性表达绿色荧光蛋白GFP的斑马鱼品系。其中一个品系Tol2:20141221t的GFP在神经系统中表达,但还没有鉴定到Tol2转座子插入到基因组什么位置,造成了哪个基因的突变。本文的主要研究目标就是对这一由Tol2转座子插入诱导的斑马鱼突变品系进行鉴定。方法 使用交错式热不对称PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)鉴定Tol2转座子插入的基因组位置;利用原位杂交检测被突变的基因的时空表达是否与该品系GFP表达具有一致性;筛选鉴定纯合体突变体,并进一步分析该基因突变造成的发育缺陷。结果 在该品系中,Tol2转座子插入到了亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1a(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1a,sat1.a)的第八个内含子区域,致使sat1.a基因转录提前终止。我们筛选到了sat1.a纯合突变体,但是没有检测到明显的发育缺陷。结论 筛选鉴定的Tol2转座子介导的斑马鱼sat1.a突变体没有明显的发育缺陷,但可以作为研究神经系统发育的有力工具。 相似文献
3.
目的 建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法 通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果 将Cas9-MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物,可被酶切成166 bp和62 bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论 成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。 相似文献
4.
目的 观察RUNX3基因重组质粒转染人膀胱癌T24细胞后细胞增殖及凋亡的变化以及Smad4 mRNA表达的变化,探讨RUNX3基因与转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路在膀胱癌发生机制中的作用。方法 构建pIRES-EGFP-RUNX3质粒,将T24细胞分空白对照组(不转染)和空载体质粒组以及重组质粒组。空载体质粒组和重组质粒组细胞分别转染pIRES-EGFP和pIRES-EGFP-RUNX3,转染24 h后采用荧光显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测各组细胞RUNX3、Smad4基因mRNA表达水平。结果 成功构建pIRES-EGFP-RUNX3重组质粒,显微镜观察发现转染组均出现细胞死亡,重组质粒组出现凋亡细胞;转染24 h后空白对照组凋亡率为(3.23±0.45)%,空载体质粒组为(8.98±1.62)%,重组质粒组为(43.61±2.69)%;RUNX3 mRNA仅重组质粒组有表达(2.79±0.36),重组质粒组Smad4 mRNA较另两组表达上调(P <0.05)。结论 转染RUNX3基因可上调膀胱癌T24细胞中Smad4 mRNA的表达,且能抑制细胞增殖并促进其凋亡,抑癌基因RUNX3可能通过TGF-β/Smad信号通路参与对膀胱肿瘤细胞增殖与凋亡的调控。 相似文献
5.
目的 选择斑马鱼作为实验对象,研究阿霉素(doxorubicin,DOX)对其abcb4基因表达的影响,进一步了解abcb4基因在斑马鱼多药耐药机制中可能的作用。方法 分别以2 mL/L二甲基亚砜(DMSO),10 μmol/L DOX及含2 mL/L DMSO的10 μmol/L DOX对斑马鱼胚胎进行药物处理,另以Eggwater处理的胚胎作为对照组。将正常发育的4~16个细胞期斑马鱼胚胎,随机分入以上各组中,药物处理至120 hpf。收集药物处理下的斑马鱼不同时期胚胎运用实时荧光定量PCR和胚胎原位杂交技术,检测abcb4基因在斑马鱼中的表达变化情况。结果 相较于对照组,药物处理的斑马鱼胚胎abcb4基因mRNA表达水平升高(P<0.05),而abcb5基因mRNA表达情况则无明显变化。通过斑马鱼胚胎原位杂交,均在斑马鱼120 hpf胚胎小肠部位发现有abcb4基因阳性杂交信号,且药物处理的斑马鱼胚胎在脑及心脏部位发现abcb4基因阳性杂交信号。结论 DOX能诱导斑马鱼胚胎abcb4基因表达水平增高,对阐明abcb4基因在斑马鱼多药耐药产生机制中的作用具有重要意义。 相似文献
6.
通过框内敲除鉴定了链霉菌Streptomyces sp.Tü 4128中基因bagJ的功能。HPLC结果表明,敲除基因bagJ导致抗生素生产水平大幅降低;回补菌株恢复了抗生素的生产;过表达菌株大幅提高了抗生素的产量,证明基因bagJ在新型抗生素bagremycins的生物合成中必不可少。抑菌圈实验表明基因bagJ敲除菌株较野生菌株对bagremycins更加敏感;BagJ在Streptomyces lividans TK64中异源表达后使该菌株对bagremycins的耐受性增强,证明bagJ是新型抗生素bagremycins的抗性基因。扫描电镜的结果证明了BagJ异源表达后导致Streptomyces TK64的菌丝形态发生了改变。其他抗生素的敏感性实验表明,BagJ可能是一个逆向转运蛋白。 相似文献
7.
目的 探讨miR-429及其目标基因热休克蛋白A4L(HSPA4L)在弱精症患者低活力精子中的表达。方法 收集20份成年健康生育能力的精液标本和20份弱精症患者精液标本,按照 WHO第五版规定的精液分级标准,对液化后的精液进行常规参数分析;利用qRT-PCR检测精子中miR-429的表达水平;通过生物信息学手法预测miR-429 的靶点;构建HSPA4L 3′UTR双萤光素酶报告载体,采用双萤光素酶报告实验验证miR-429的靶基因;利用qRT-PCR和Western blot分别检测HSPA4L mRNA和蛋白的表达水平。结果 弱精症精子活力低于健康对照组,同时miR-429在弱精症精子中表达上调。通过生物信息学手法、双萤光素酶报告基因基检测以及转染实验发现miR-429 通过作用于HSPA4L 3′UTR来抑制HSPA4L mRNA和蛋白的表达。进一步的qRT-PCR分析发现弱精症组的HSPA4L mRNA和蛋白的表达水平下调,并且HSPA4L mRNA 表达水平与miR-429 的表达水平呈负相关(r=-0.725,P<0.05)。结论 miR-429在低活力精子中的表达上调,可能通过调控HSPA4L基因来影响精子的活力。 相似文献
8.
目的:通过 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑技术构建卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(lecithin-cholesterol acyltransferase, LCAT)基因敲入C57BL/6小鼠并与肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠配繁得到肝脏特异性敲入Lcat基因C57BL/6小鼠模型。 为Lcat基因在肝脏相关代谢疾病发生机制的研究提供动物模型。方法:利用CRISPR/Cas9技术构建Lcat基因敲入小鼠;利用肝脏特异性表达Cre的转基因小鼠与Lcat基因敲入小鼠交配得到肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠;通过PCR法鉴定小鼠的基因型 ;利用实时荧光定量 PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)和 Western blot 技术验证 Lcat 基因的 mRNA 水平和蛋白水平。 结果:PCR结果显示肝脏特异性敲入Lcat基因的小鼠模型构建成功;qPCR结果显示Lcat基因在肝脏中特异性高表达;WB结果显示,与对照组小鼠相比,LCAT蛋白在肝脏特异性敲入Lcat的小鼠肝脏中有明显更高的表达。结论:成功构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠,为在动物水平探索Lcat基因在肝脏相关代谢疾病中的功能及相关发病机制提供研究平台。 相似文献
9.
目的 通过构建成纤维细胞生长因子-21基因(fibroblast growth factor 21,FGF-21)荧光素酶报告基因载体,观察has-miR-577和has-miR-583对FGF-21基因的靶向调控。方法 利用生物学信息网站对has-miR-577和has-miR-583靶向结合FGF-21 3′UTR区的位点进行分析,设计合成包含与has-miR-577和has-miR-583结合序列及其突变序列的FGF-21基因片段,构建野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突变型(psiCHECK2-FGF-21-mut)FGF-21双荧光素酶报告基因载体。进行双酶切电泳和测序鉴定后,FGF-21野生型与突变型双荧光素酶报告基因载体分别+〔hsa-miR-577模拟物、hsa-miR-583模拟物和miR无义序列阴性对照 (miR negative control,miR-NC)〕转染293T 细胞,检测荧光素酶活性,观察has-miR-577和has-miR-583对FGF-21表达的影响。结果 双酶切电泳和测序结果显示,野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突变型(psiCHECK2-FGF-21-mut)基因载体片段大小、序列结果与实验预期一致,载体构建成功。has-miR-577和has-miR-583可抑制野生型FGF-21载体的荧光表达(P<0.05) ,而对突变型FGF-21载体的荧光表达无抑制作用。结论 has-miR-577和has-miR-583可以靶向调控FGF-21的表达。 相似文献
10.
目的应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达,检测Beclin 1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及p53、BAX、Bcl2等基因表达的影响。方法分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H2O2刺激等处理后Beclin 1的表达,然后采用设计的Beclin l基因的干扰RNA及阴性对照分别瞬时转染裸鼹鼠成纤维细胞。采用real-time PCR及Western blot法检测沉默效果后,采用CCK-1实验检测沉默后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,然后采用Western blot检测相关基因蛋白表达水平。结果饥饿与H2O2刺激均能导致Beclin 1表达水平的改变。采用gene expresso转染试剂对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞转染效率可达到90%以上,real-time PCR及Western blot结果显示所设计的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表达。Beclin 1基因沉默后,裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖抑制率均显著高于对照组,细胞早期凋亡与晚期凋亡率均显著升高,同时p53、BAX、Bcl2、LC3B、p-AKT、mTOR等表达量下降。结论Beclin 1在裸鼹鼠成纤维细胞抵抗饥饿、H2O2刺激等过程中表达量显著变化,同时抑制Beclin 1的表达,可抑制裸鼹鼠细胞增殖,促进其凋亡,这提示Beclin 1基因对裸鼹鼠自噬、增殖、凋亡起到调控作用。 相似文献
11.
Helicobacterpylori (1f. pylori) infection causes peptic and duodenal diseases in humans. Among a 32-protein family of outer membrane proteins, a porin-like protein, HopE, has been a subject of note, mainly for its conservative nature among 11. pylori, and for its potential as a vaccine candidate. To achieve stable surface expression of this host cell-toxic protein, hopE gene was introduced into pBAD expression system. After induction with arabinose, all 15 randomly-chosen E. coli LMG 194 colonies from 3 successive passages could express Hope protein, while only 1 from 5 E. coli colonies that contained lac operon-regulated plasmid encoding hopE gene could express HopE. Indirect immunofluorescence confirmed the expression of HopE on E. coli cell surface 相似文献
12.
目的利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼lmna基因的技术方法。方法在斑马鱼lmna基因序列中选择靶点,设计针对斑马鱼lmna基因的吗啉代寡核苷酸序列(lmna-MO),构建能特异指示lmna基因表达的lmna-EGFP-pCS~(2+)重组质粒,并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中,通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应lmna基因表达量,并通过蛋白质印迹法检测胚胎中lamin蛋白表达量。结果蛋白质印迹法检测斑马鱼体内lamin蛋白的表达,分别有大小为69 KD和62 KD两种蛋白表达。设计并构建了lmna-MO和重组质粒lmnaEGFP-pCS~(2+),单独注射lmna-EGFP-pCS~(2+)质粒后观察到从6 hpf到96 hpf胚胎均有绿色荧光蛋白表达;二者共注射后观察到,与对照组相比,实验组从6 hpf至30 hpf胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失;蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内lamin蛋白表达量明显下降。表明已成功下调了斑马鱼胚胎lmna基因表达。结论可通过lmna-MO和重组质粒lmna-EGFP-pCS~(2+)共注射方法下调斑马鱼lmna基因表达,并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果。该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型。 相似文献
13.
Reversal of Adriamycin Resistance in Human Mammary Cancer Cells by Small Interfering RNA of MDR1 and MDR3 Genes 总被引:2,自引:0,他引:2
Resistance to antineoplastics is still the major cause of the failure of chemotherapy in cancer patients[1]. RNA interference (RNAi) is a conserved cellular mechanism in which double-stranded RNA silences the correspond-ing homologous cellular gene effectively and specificity. RNAi has a great potential of application in the reversal of drug resistance of tumor[2]. MDR1 and MDR3 are the two ATP binding cassette transporter genes. MDR3 is the second member of the human p-gp family next … 相似文献
14.
Summary To investigate the relationship between MDR1 and MDR3 gene and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells. Two siRNAs
(MDR1, MDR3) which specifically targeted MDR1 and MDR3 genes were transfered into A2780/DDP cells. Then double staining with
Annexin-V-FITC/PI was used to detect cell apoptosis by the flow cytometry (FCM). A2780/DDP cell viability was determined by
MTT. MDR1 and MDR3 mRNA were assessed by RT-PCR. Caspase-3 protein was detected by Western blotting. Transfection of MDR1
and MDR3 siRNA into A2780/DDP cells failed to reverse the drug-resistance of A2780/DDP cells to cisplatin (P>0.05). No significant difference in the apoptosis efficiency was observed between the MDR1 and MDR3 siRNA, pSuppressorNeo
vector transfection cells and untreated cells (P>0.05). In the presence of cisplatin of different concentrations, the viability of A2780/DDP cells was not significantly decreased
after the transfection. No changes in MDR1 and MDR3 mRNA were found in MDR1 and MDR3 siRNA-transfected A2780/DDP cells. As
compared with pSuppressorNeo and untreated groups, no significant difference existed in the expression of MDR1 and MDR3 mRNA
(P>0.05). The expression of caspase-3 protein in MDR1 and MDR3 siRNA transfected A2780/DDP cells was not significantly increased.
It is concluded that multidrug resistance induced by cisplatin in ovarian carcinoma cell lines is not due to overexpression
of MDR1 and MDR3 gene. The drug resistance of ovarian carcinoma cells to cisplatin is not mediated by P-glycoprotein. 相似文献
15.
Jia-Wei Liu Asan Jun Sun Sergio Vano-Galvan Feng-Xia Liu Xiu-Xiu Wei Dong-Lai Ma 《中华医学杂志(英文版)》2016,129(1):33-38
Background:
The dyschromatoses are a group of disorders characterized by simultaneous hyperpigmented macules together with hypopigmented macules. Dyschromatosis universalis hereditaria (DUH) and dyschromatosis symmetrica hereditaria are two major types. While clinical and histological presentations are similar in these two diseases, genetic diagnosis is critical in the differential diagnosis of these entities.Methods:
Three patients initially diagnosed with DUH were included. The gene test was carried out by targeted gene sequencing. All mutations detected on ADAR1 and ABCB6 genes were analyzed according to the frequency in control database, the mutation types, and the published evidence to determine the pathogenicity.Results:
Family pedigree and clinical presentations were reported in 3 patients from two Chinese families. All patients have prominent cutaneous dyschromatoses involving the whole body without systemic complications. Different pathogenic genes in these patients with similar phenotype were identified: One novel mutation on ADAR1 (c. 1325C>G) and one recurrent mutation in ABCB6 (c. 1270T>C), which successfully distinguished two diseases with the similar phenotype.Conclusion:
Targeted gene sequencing is an effective tool for genetic diagnosis in pigmentary skin diseases. 相似文献16.
采用重叠PCR(overlap PCR)方法构建了 pdr5与snq2基因敲除组件,研究了 pdr5、snq2基因突变对酵母细胞传感器评估遗传毒性的影响.考察了野生型、pdr5单基因突变、ssnq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器暴露于系列浓度甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)、顺铂、4-... 相似文献
17.
目的 报道家族性良性慢性天疱疮一家系,并对ATP2C1基因突变进行分析。方法 收集家族性良性慢性天疱疮家系成员的一般资料,进行临床调查,绘制家系图谱。采用PCR及Sanger直接测序法对该家系中4例患者的ATP2C1基因进行检测,并以该家系3例健康者和100例无亲缘关系的正常人作为对照。结果 4例家族性良性慢性天疱疮患者ATP2C1基因的第21号外显子的第472位核苷酸由G变为A,该突变导致原先158位的天冬氨酸变为天冬酰胺(p.Asp158Asn)的错义突变。而家系中健康对照及无亲缘关系的正常人均未发现该突变。结论 ATP2C1基因的第21号外显子的第472位核苷酸由G变为A是ATP2C1基因新的突变位点,可能是家族性良性慢性天疱疮家系发病的主要原因。 相似文献
18.
Cai Xiaokun Zhou Junli Lin Jusheng Sun Xuemei Xue Xiulan Li Chao 《华中科技大学学报(医学英德文版)》2005,25(2):178-181
Summary To investigate the killing effect ofPNP/MeP-dR suicide gene system on hepatoma cells, pcDNA3. 0/PNP, an eukaryotic expression vector harboringE. coli PNP gene, was transfected into human hepatoma HepG2 cells by liposome-mediated method. A HepG2 cell line with stablePNP gene expression, HepG2/PNP, was established with presence of G418 selection. The cell growth curves were determined with trypan blue staining. The sensitivity
of HepG2/PNP to MeP-dR and bystander effects were assayed by MTT and FCM methods. The enzymatic activity of the product ofPNP gene was determined by HPLC method. The cytotoxic effects of MeP-dR on HepG2/PNP cells were obvious (IC50=4.5 μmol/L) and all HepG2/PNP cells were killed 4 days after the treatment with 100 μmol/L MeP-dR. In mixed cultures containing increasing percentages
of HepG2/PNP cells, total population killing was demonstrated when HepG2/PNP cells accounted for as few as 5% of all HepG2 cells 8 days after the treatment with 100μmol MeP-dR. High-pressure liquid
chromatography (HPLC) demonstrated that thePNP enzyme could convert MeP-dR into 6-MP.PNP/MeP-dR suicide gene system had an advantage over traditional suicide gene systems for hepatoma gene therapy. Our e results
suggest that high-level bystander effects of this system result in significant anti-tumor responses to hepatoma gene therapy,
especiallyin vivo.
CAI Xiaokun, male, born in 1972, M.D., Ph.D.
This project was supported by a grant from the National Natural Science Foundation of China (No. 30330680). 相似文献
19.
目的 探讨丹参抗成纤维细胞增殖作用的有效成分及分子作用机制。方法 采用索氏提取法制备丹参多种提取物及萃取部位;以抗人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖的活性为导向,MTS法筛选活性部位,流式细胞仪检测细胞周期; UPLC-Q/TOF法分析丹参活性成分;通过反向对接预测试药抗细胞增殖的机制,RT-PCR检测caspase-3、MAP2K1、MAPK1增殖相关基因的表达水平。结果 丹参石油醚提取部位有较强的抗HSF增殖的活性,能显著增加G0/G1 期细胞的比例,降低增殖指数(PI),其主要活性成分为丹参酮类化合物;反向对接预测结果显示,丹参酮类化合物抗HSF增殖机制主要与调节caspase-3和MAP2K1等靶点及其相关通路有关;隐丹参酮能够上调caspase-3基因的表达,下调MAP2K1、MAPK1基因的表达,与预测结果相吻合。结论 丹参抗HSF增殖作用的机制与丹参酮类成分调节MAPK、VEGF等信号通路有关。 相似文献
20.
从烟曲霉菌株F3中克隆得到gliT基因(胶霉毒素生物合成基因簇成员之一),其编码产物GliT是一个假定的硫氧还蛋白还原酶,含有保守的Pyr_redox和TrxB结构域,与来自于烟曲酶菌株Af293的GliT在氨基酸水平上的同源性高达97%。不同盐浓度培养条件下,烟曲霉菌株F3中gliT基因的表达变化与发酵液中胶霉毒素的含量变化之间存在着明显的相关性,均在盐浓度70g/L培养条件下达到峰值,提示gliT基因在胶霉毒素生物合成过程中的作用可能与盐胁迫有关。 相似文献