甘油常温保存肌腱的两种方法比较

背景：最大程度保留肌腱的生物活性是进行同种异体肌腱移植的条件。目的：通过比较选择出最佳的肌腱常温保存方法。方法：使用无菌操作的方法将兔肌腱随机分为4组：新鲜肌腱对照组、生理盐水组、无水甘油Ⅰ组（肌腱梯度脱水后在无水甘油中保存）、无水甘油Ⅱ组（肌腱直接在无水甘油中保存）,分别于保存的第2,4,7个月进行检测。结果与结论：苏木精-伊红染色显示：无水甘油Ⅰ组肌腱细胞完整率明显高于无水甘油Ⅱ组。电镜观察发现,无水甘油Ⅰ组大部分肌腱细胞形态正常,肌腱组织结构完整;无水甘油Ⅱ组保存4,7个月后细胞核凝固、固缩、崩解状。无水甘油Ⅰ组的超氧化物歧化酶活性也明显高于无水甘油Ⅱ组。说明肌腱经梯度脱水后在无水甘油中常温保存效果更佳。     

常温下无水甘油保存的同种异体肌腱

背景:寻找一种同种异体组织保存液,使保存的肌腱具有最大程度的生物活性.目的:使用无水甘油在常温下对兔子肌腱进行保存,观察不同时间点的细胞形态和肌腱活性.方法:使用特殊的方法处理兔肌腱,并常温避光密封保存在无水甘油中,在保存2,4,7,12个月使用苏木精-伊红染色石蜡切片、透射电镜观察肌腱组织结构及细胞形态,使用超氧化物歧化酶酶学实验观察肌腱的生物学活性.结果与结论:2,4,7,12个月苏木精一伊红染色石蜡切片示大部分细胞细胞膜完整,细胞核规则,肌腱组织结构存在.透射电镜结果示细胞呈静止状态,核形态正常.超氧化物歧化酶酶学实验示肌腱具有超氧化物歧化酶酶活性.结果说明使用特殊的方法处理兔肌腱并在无水甘油中常温避光保存12个月,肌腱的组织结构、大部分细胞的细胞形态和肌腱生物活性得以保存.     

无水甘油保存同种异体肌腱的移植

背景:如何处理和保存同种异体肌腱,使之尽可能保留生物活性并降低其免疫原性是近年研究热点。目的:将保存于无水甘油的兔肌腱进行同种异体移植,观察移植后肌腱的组织学变化。方法:将兔肌腱经特殊处理后,常温避光保存在无水甘油中,保存7,12个月后取出肌腱,移植到兔后腿屈肌腱中。饲养3个月后处死并取出移植的肌腱,进行苏木精-伊红染色石蜡切片及透射电镜观察。结果与结论:苏木精-伊红石蜡切片示肌腱纤维排列尚整齐,细胞形态正常,切片某些区域细胞密度较正常组低,未见明显的炎性细胞浸润。透射电镜示肌腱纤维排列整齐,细胞形态正常。结果提示经无水甘油保存的肌腱进行同种异体移植后,在组织学上与正常肌腱相似,无明显的免疫排斥反应。     

无水甘油保存同种异体肌腱的移植

背景：如何处理和保存同种异体肌腱,使之尽可能保留生物活性并降低其免疫原性是近年研究热点。目的：将保存于无水甘油的兔肌腱进行同种异体移植,观察移植后肌腱的组织学变化。方法：将兔肌腱经特殊处理后,常温避光保存在无水甘油中,保存7,12个月后取出肌腱,移植到兔后腿屈肌腱中。饲养3个月后处死并取出移植的肌腱,进行苏木精-伊红染色石蜡切片及透射电镜观察。结果与结论：苏木精-伊红石蜡切片示肌腱纤维排列尚整齐,细胞形态正常,切片某些区域细胞密度较正常组低,未见明显的炎性细胞浸润。透射电镜示肌腱纤维排列整齐,细胞形态正常。结果提示经无水甘油保存的肌腱进行同种异体移植后,在组织学上与正常肌腱相似,无明显的免疫排斥反应。     

保存方法对同种异体软骨移植物免疫原性的影响

背景:异体软骨移植是治疗关节软骨缺损主要手段,寻找软骨组织保存方法来降低移植软骨的免疫原性已成为临床上关键性的技术问题.目的:比较慢速梯度降温法、玻璃化法与60Co射线照射+梯度降温法对同种异体骨软骨移植物免疫原性的影响.方法:将关节软骨块随机分为4组:新鲜组不采取任何措施;慢速梯度降温组给予程序降温法保存关节软骨;玻璃化组利用玻璃化溶液处理后保存;60Co射线照射+梯度降温组给予60Co射线照射后,再按程序降温法保存关节软骨.保存8,15,30,60 d后关节软骨块经细胞培养及扩增后制备成细胞悬液.流式细胞仪检测关节软骨细胞表面主要组织相容性复合体Ⅰ,Ⅱ抗原表达率.结果与结论:经过保存后,慢速梯度降温组、玻璃化组和60Co射线照射+梯度降温组细胞表面的主要组织相容性复合体Ⅰ和Ⅱ抗原表达率有大幅下降,与新鲜组相比有显著性差异,但前3组间没有显著性差异.各保存组主要组织相容性复合体Ⅰ类抗原和主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原表达率均随着时间的推移下降,并且在30 d时3种不同保存方法保存的软骨细胞表面主要组织相容性复合体表达率就降低到最低.预示着经保存处理的关节软骨可能会提高同种异体骨软骨移植手术的成功率.     

保存方法对同种异体软骨移植物免疫原性的影响

背景：异体软骨移植是治疗关节软骨缺损主要手段,寻找软骨组织保存方法来降低移植软骨的免疫原性已成为临床上关键性的技术问题。目的：比较慢速梯度降温法、玻璃化法与60Co射线照射＋梯度降温法对同种异体骨软骨移植物免疫原性的影响。方法：将关节软骨块随机分为4组：新鲜组不采取任何措施;慢速梯度降温组给予程序降温法保存关节软骨;玻璃化组利用玻璃化溶液处理后保存;60Co射线照射＋梯度降温组给予60Co射线照射后,再按程序降温法保存关节软骨。保存8,15,30,60d后关节软骨块经细胞培养及扩增后制备成细胞悬液。流式细胞仪检测关节软骨细胞表面主要组织相容性复合体Ⅰ,Ⅱ抗原表达率。结果与结论：经过保存后,慢速梯度降温组、玻璃化组和60Co射线照射＋梯度降温组细胞表面的主要组织相容性复合体Ⅰ和Ⅱ抗原表达率有大幅下降,与新鲜组相比有显著性差异,但前3组间没有显著性差异。各保存组主要组织相容性复合体Ⅰ类抗原和主要组织相容性复合体Ⅱ类抗原表达率均随着时间的推移下降,并且在30d时3种不同保存方法保存的软骨细胞表面主要组织相容性复合体表达率就降低到最低。预示着经保存处理的关节软骨可能会提高同种异体骨软骨移植手术的成功率。     

鸡肌腱的玻璃化冷冻保存

目的:筛选出适合于肌腱玻璃化冷冻保存的溶液及保存程序,并通过细胞培养来进一步检测玻璃化肌腱的活性。方法:实验于2003-11/2005-02在解放军总医院骨科研究所完成。实验包括①筛选与检测:取来亨鸡30只,切取屈趾深肌腱,按随机数字法分为2组,新鲜鸡肌腱组,玻璃化组。运用正交设计和肌腱活性快速检测技术,筛选出适合鸡屈趾肌腱玻璃化保存程序,再从6种玻璃化溶液中(二甲基亚砜 乙酰胺 丙二醇 聚乙二醇;乙二醇 二甲基亚砜 蔗糖;乙二醇 二甲基亚砜 丁二醇;丙二醇 二甲基亚砜 蔗糖;二甲基亚砜 乙酰胺 丙二醇;二甲基亚砜 丙二醇)筛选出适于肌腱玻璃化保存的配比方案。②细胞培养:将玻璃化法保存鸡屈趾深肌腱进行细胞培养,观察培养后细胞的存活情况,以了解玻璃化法保存肌腱的细胞活性。结果:①通过统计学分析,肌腱玻璃化保存的最佳程序为平衡处理选择4℃3个浓度梯度、平衡时间选择4℃30min、洗脱处理选择4℃3个浓度梯度、洗脱时间选择4℃20min。玻璃化溶液二甲基亚砜 丙二醇为的最佳配比方案。②应用酶消法测得新鲜肌腱活性为89.26%,玻璃化法优化组合所保存肌腱的活性为78.49%。③将玻璃化组肌腱进行细胞培养,细胞第8天自组织块周边长出,第21天后传代,培养3代后出现明显的退化现象,玻璃化组肌腱细胞的生物学特性与新鲜肌腱组相似。④将两组肌腱所培养的细胞分别进行免疫组织化学染色,经鉴定均为肌腱细胞。结论:玻璃化法冷冻保存的肌腱具有良好的细胞活性,经细胞培养获得成功,其生物学特性无明显变异。     

连续硬膜外输注消炎镇痛液治疗不同病程带状疱疹后遗神经痛的疗效研究

目的:比较连续硬膜外输注利多卡因和甲基强的松龙对不同病程带状疱疹后遗神经痛(PHN)患者的治疗效果。方法:胸腹部PHN患者70例,皮损位于T3-T11脊神经支配区。按照入院时疼痛持续的时间分为5组:Ⅰ组(n=13),疼痛持续1—2个月;Ⅱ组(n=15),疼痛持续2—3个月;Ⅲ组(n=16),疼痛持续3—6个月;Ⅳ组(n=12),疼痛持续6—12个月;Ⅴ组(n=14),疼痛持续12个月以上。所有患者在CT引导下置入硬膜外导管,采用硬膜外自控镇痛泵输注利多卡因和甲基强的松龙,连续输注18—20d,如果患者自控镇痛次数超过10次/d,则加用曲马多进行治疗。采用数字模拟评分法(NRS)评定疼痛强度。结果:硬膜外阻滞期间所有患者均达到满意镇痛,但Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组的镇痛泵使用数量和曲马多用量显著高于Ⅰ组、Ⅱ组;出院后7d,总有效率100%,组间无显著差异(P>0.05),但Ⅰ组和Ⅱ组的NRS评分明显低于Ⅴ组(P<0.05)。出院后3个月和6个月,Ⅰ组和Ⅱ组的有效率仍明显高于Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组(P<0.05);出院后3个月,Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组患者的NRS亦明显高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。出院后6个月,Ⅰ组患者的NRS明显低于其他4组(P<0.05);除Ⅰ组外,其余各组均有高于20%的患者治疗无效。患者的生存质量评分与疼痛程度密切相关(R2=0.945)。结论:连续硬膜外输注利多卡因和甲基强的松龙对病程<3个月的PHN患者的疗效优于病程≥3个月的患者。     

复温速度对重症颅脑外伤亚低温神经保护的初步研究

目的探讨不同复温速度对重症颅脑外伤亚低温神经保护作用的影响。方法将39例亚低温治疗的重症颅脑外伤患者随机分为Ⅰ组(n=13,复温速度0.1℃/h)、Ⅱ组(n=13,复温速度0.2℃/h)及Ⅲ组(n=13,复温速度0.3℃/h)。治疗过程中动态监测颅内压、心率、血压、脉氧饱和度,每日测定血糖、血细胞分析、血气分析、凝血功能、肝肾功能、电解质,每日进行GCS评分,并于伤后3个月根据格拉斯哥预后分级(GOS)评定疗效。结果复温达36.5℃时及达标后24 hⅢ组颅内压监测(ICP)明显高于Ⅰ组,有统计学意义(P<0.05);复温达标后72 h GCSⅠ组、Ⅱ组均高于Ⅲ组,有统计学意义(P<0.05),Ⅰ组高于Ⅱ组,但无统计学意义;3个月时Ⅰ组、Ⅱ组GOS明显优于Ⅲ组(P<0.05),Ⅰ组与Ⅱ组间比较无明显差异;复温达36.5℃时及达标后24 hⅢ组血糖明显高于Ⅰ组和Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论较慢的复温速度可改善脑灌注,减轻脑水肿,有效保护神经功能并改善预后。     

转化生长因子β1对肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖和胶原产生的影响

背景:转化生长因子β是一种在组织损伤的修复和更新中具有多种生物学效应的细胞因子;腱鞘成纤维细胞和Ⅰ型胶原在肌腱愈合和粘连形成过程中起着重要的作用。目的:观察兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖、胶原产生和转化生长因子β1对细胞的增殖和胶原产生的影响。设计:对比观察实验。单位:青岛大学医学院附属医院创伤外科。材料:实验于2004-07/2005-09在青岛大学医学院附属医院动物实验室完成,选用6只成年新西兰大白兔,雌雄不拘,体质量3.5～4.5kg,由青岛市实验动物中心提供。胶原酶(sigma),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原抗体(Sigma),转化生长因子β1(武汉博士德生物公司)。方法:按文献方法进行将实验兔屈趾肌腱分离腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞并培养,将3种细胞采用含血清培养液培养后,转移到不含血清的培养液中,分为实验组及对照组,实验组每孔加入5μg/L转化生长因子β1,对照组不予添加。主要观察指标:①用细胞计数法观察培养1,2,3,4d各组细胞增殖情况。②采用免疫细胞化学染色检测细胞培养4d后Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的产生;通过酶联免疫吸附试验法定量检测2组细胞的各型胶原含量。③采用RT-PCR定量检测2组细胞Ⅰ型胶原基因的表达。④酶联免疫吸附试验法测定不同剂量的转化生长因子β1(0,5,10,15和20μg/L)作用于3种细胞的Ⅰ型胶原含量。结果:①每种细胞培养1d后增长率相近,培养2～4d,腱鞘细胞增殖率显著增高,与其他两种细胞增殖率比较,差异有显著性意义(P<0.05)。②免疫细胞化学染色显示3种细胞均可以产生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原;酶联免疫吸附试验法定量测定胶原结果显示:各组腱鞘细胞产生的3种胶原量最多,且实验组各种细胞Ⅰ型胶原含量高于对照组(P<0.05～0.01)。③实验组腱鞘细胞Ⅰ型胶原基因表达比对照组增加1.3倍,差异有统计学意义(P<0.01),腱外膜细胞和腱内膜细胞表达也高于对照组(P<0.05)。④胶原产生量在5～10μg/L转化生长因子β1作用时明显增加,而转化生长因子β1增加到10～20μg/L时胶原产生量无明显改变。结论:转化生长因子β1可增加腱鞘成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞胶原的产生和Ⅰ型胶原的基因表达,在肌腱损伤后调节转化生长因子β1的水平可能对肌腱粘连的防止具有重要的作用。     

二维超声及超声弹性成像对类风湿关节炎股四头肌肌腱的评估

目的:探讨超声弹性成像(Ultrasound elastography,UE)在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)活动期中评估股四头肌肌腱损伤的应用价值。方法:选取40例健康志愿者(对照组)及40例RA患者,参照跟腱分段方法将股四头肌腱分为近段、中段、末段。分别使用二维超声和UE对两组的股四头肌肌腱进行检查,记录结果并进行分级,可分为Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级,Ⅰ级肌腱视为正常肌腱,Ⅱ级及Ⅲ级肌腱视为异常或受损肌腱。通过两位评估者对肌腱超声诊断分级进行一致性检验。应用SPSS 22.0对数据进行统计分析。结果 :二维超声在对照组和RA活动组股四头肌肌腱各段分级异常数目中无统计学差异(P=0.173,P=0.072,P=0.242);UE股四头肌肌腱近段分级异常数目在两组中无显著的统计学差异(P=0.093),在中段和末段分级异常数目中有显著的统计学差异(P=0.002,P=0.001)。两组在评估肌腱二维超声诊断分级的一致性较好,对照组(k=0.794,k=0.851,k=0.726),RA活动组(k=0.707,k=0.709,k=0.703);两组在UE诊断分级近段肌腱一致性中等,对照组(k=0.576),RA活动组(k=0.574),两组在中、末段肌腱一致性较好,对照组(k=0.739,k=0.717),RA活动组(k=0.710,k=0.723)。结论:UE在评估RA活动期患者中、末段股四头肌肌腱损伤中有良好的应用价值;UE可以提供RA活动期中股四头肌肌腱硬度信息,可做为二维超声的补充检查方法。     

关节镜下单操作通道改良Mason-Allen技术修复肩胛下肌腱LafosseⅠ型、Ⅱ型损伤

[目的]探讨关节镜下单操作通道改良Mason-Allen缝合技术修复肩胛下肌腱LafosseⅠ型、Ⅱ型损伤的缝合技巧和临床效果.[方法]回顾性分析2018年1月至2018年12月采用单操作通道改良Mason-Allen技术修复肩胛下肌腱撕裂患者24例的临床资料.根据视觉模拟评分(VAS)评估患者术前及术后静息(夜间)和被动运动时疼痛评分.记录术前、术后被动前屈、体侧内旋和外旋角度.术后至少6个月均予复查肩关节核磁共振.[结果]根据关节镜下肩胛下肌损伤Lafosse分型,Ⅰ型7例、Ⅱ型17例;孤立肩胛下肌腱损伤5例,合并冈上肌腱损伤19例.所有患者随访6~12个月,无血管神经及感染等并发症发生,未发现肩胛下肌腱再撕裂表现.其中,术后6个月,静息(夜间)时VAS评分、被动活动时VAS评分显著低于术前,差异均有统计学意义(P<0.05).手术前后主动前屈、外展和体侧外旋角度比较,差异无统计学意义(P>0.05).术后6个月,美国加州大学肩关节评分(UCLA)和美国肩肘外科医生评分(ASES)显著高于术前,差异有统计学意义(P<0.01).[结论]肩关节镜下单操作通道改良Mason-Allen缝合技术修复肩胛下肌腱LafosseⅠ型、Ⅱ损伤具有操作便利,损伤小的优点,早期临床效果满意,值得临床推广.     

肌腱损伤后腱中心区域组织愈合能力

背景实验发现,在肌腱损伤后,腱中心部分细胞生长增殖能力不如腱外膜细胞和周边部分腱内膜细胞,肌腱中心部位细胞的分裂增殖能力及自愈能力究竟如何?目的研究肌腱损伤后腱中心区域组织的愈合能力.设计设立对照的重复测量设计.地点和对象南通医学院第二附属医院骨科.白色纯种Leghorn鸡8只,雌雄不拘,体质量约400 g,购自南通医学院动物中心,许可证号SYXK(苏)2002-0066.干预在无菌条件下切取鸡双侧最长趾Ⅱ区趾深屈肌腱,切成4 nn长的肌腱段,分为两组,每组12条.实验组切除腱外膜和外膜下腱组织肌的肌腱中心区域组织;对照组仅剥除腱外膜组织的肌腱段.将两组肌腱组织进行体外培养,另取4条肌腱作正常对照组.主要观察指标实验组和对照组于培养第9,8,7天取标本及正常对照组均进行大体观察和组织学检查.结果腱细胞数两组培养前为167±13,培养第9,8,7天对照组分别为80±7,5±10,12±14,实验组分别为237±16,02±16,88±10.对照组均明显少于实验组及培养前,差异有显著性意义(P＜0.01);实验组比培养前明显增多,差异有显著性意义(P＜0.01);但培养第18和27天时,实验组腱细胞数较培养第9天少(P＜0.01).结论屈肌腱损伤后肌腱中心区域组织有良好的愈合能力.     

氟桂嗪对沙鼠脑缺血后脑内转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体基因表达的影响

背景氟桂嗪和转化生长因子β(TGF-β)都具有抗脑缺血损伤作用,但两者之间是否存在某种联系,目前还不明确.目的通过研究氟桂嗪对沙鼠脑缺血再灌注后脑内转化生长因子Ⅰ型,Ⅱ型受体(TβRⅠ,Ⅱ)基因表达的影响,探讨氟桂嗪与TGFβ信号转导途径在抗脑缺血损伤方面的联系.设计随机对照的实验研究.地点和对象实验在中南大学湘雅二医院中心实验室完成.健康雄性蒙古沙鼠60只,9月龄,体质量(90±5)g,随机分为脑缺血组、氟桂嗪治疗组、假手术组、正常对照组,其中脑缺血组、氟桂嗪治疗组各有缺血再灌6 h,1,3,7 d组,共计10组,每组6只.干预夹闭双侧颈总动脉法制作沙鼠脑缺血再灌注模型,氟桂嗪治疗组实验前1 d给沙鼠喂食氟桂嗪[按20 mg/(kg·d)].采用原位杂交检测TβRⅠ,Ⅱ基因表达情况,用苏木精-伊红染色方法观察脑组织病理变化.主要观察指标脑组织病理变化,及脑内TβRⅠ,Ⅱ mRNAs的表达.结果氟桂嗪治疗组在再灌注各个时间点脑组织损伤程度均明显轻于脑缺血组.各组沙鼠脑组织的神经元和胶质细胞胞浆均有TβRⅠ,ⅡmRNAs阳性表达.棕褐色颗粒主要位于神经元和胶质细胞胞浆中,但表达程度有所不同.假手术组的TβRⅠ,Ⅱ mRNAs的表达较正常对照组稍高但无明显差异(P＞0.05).氟桂嗪治疗组中缺血再灌注6 h,1 d,3 dTβRⅠ,ⅡmRNAs表达较脑缺血组稍高,但无明显差异(P＞0.05),7 d时同脑缺血组相比TβRⅠ mRNAs的表达下降[每1 000个细胞中可见阳性细胞数为(78.87±1.48)个比(85.23±1.71)个](P＜0.01),而TβRⅡ mRNAs表达增高[每1 000个细胞中可见阳性细胞数为(75.40±2.19)个比(49.28±2.32)个](P＜0.01).结论氟桂嗪能抑制缺血再灌注后TβRⅠmRNAs的过度表达,避免TβRⅠ和Ⅱ mRNAs表达比例失调,可能有利于TGF-β的信号传递,有利于抵御脑缺血再灌注造成的脑细胞延迟性损伤.     

脱细胞近交系微型猪肌腱修复兔跟腱缺损

背景：异体肌腱移植是目前修复肌腱缺损的理想方法,但移植后的排斥反应是其使用受到限制的主要原因. 目的：观察脱细胞处理的版纳近交系微型猪肌腱移植修复兔跟腱缺损的疗效,以及其作为异种肌腱移植支架材料的可行性. 方法：将40只日本大白兔制作双后肢跟腱缺损实验动物模型后,随机均分为2组,脱细胞猪肌腱组用脱细胞版纳近交系微型猪肌腱修复,自体肌腱组用自体肌腱修复,术后用3-0肌腱线改良HEMI-KESSLER法进行端端原位吻合. 结果与结论：①移植后2周内,脱细胞猪肌腱组与自体肌腱组白细胞计数、C-反应蛋白测量结果差异无显著性意义（P 〉0.05）.②两组移植后局部反应小,伤口一期愈合,屈踝功能恢复正常.③组织学检查均未见明显淋巴细胞浸润,肌腱缝合处胶原纤维相互衔接.结果说明脱细胞版纳近交系微型猪肌腱能成功修复兔跟腱缺损,且具有组织相容性好、移植排斥反应轻的优点.