紫草素对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力影响

目的 观察紫草素对人胃癌细胞SGC-7901增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法 MTT法检测细胞增殖抑制作用,Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞侵袭、迁移能力.实时荧光定量PCR测定加入不同浓度紫草素24h的SGC-7901细胞的MMP-2、MMP-7 mRNA的表达水平.结果 紫草素可以抑制人胃癌细胞的增殖,在2μg/ml之前其抑制效应呈浓度-时间依赖性;紫草素作用胃癌细胞株SGC-7901细胞48h后SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力降低;紫草素作用胃癌细胞株SGC-7901细胞24h后,紫草素组的MMP-2的相对表达量均显著低于阴性对照组的相对表达量.结论经紫草素作用后SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力降低,其机制可能与下调MMP-2、MMP-7 mRNA的表达有关.     

CXCL12对人胃癌细胞增殖及受体CXCR4和CXCR7表达的影响

[目的]探讨趋化因子CXCL12对人胃癌SGC-7901细胞增殖及趋化因子受体CXCR4,CXCR7和血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白(MMP)-2,MMP-9mRNA表达的影响.[方法]取体外培养的人胃癌SGC-7901细胞,用不同质量浓度的CXCL12(0.1,1.0,10.0,100.0μg/L)处理后培养72 h,采用MTT法检测人胃癌SGC-7901细胞的增殖率;用CXCL12(10.0μg/L)处理人胃癌SGC-7901细胞48h后,应用RT-PCR检测细胞内CXCR4,CXCR7,VEGF,MMP-2及MMP-9 mRNA的表达水平.[结果]不同质量浓度的CXCL12均可明显促进人胃癌SGC-7901细胞的增殖率(P<0.001),CXCL12可显著上调CXCR4及CXCR7 mRNA的表达(P<0.001,P<0.01),增加VEGF,MMP-2及MMP-9 mRNA的表达(P<0.05).[结论]趋化因子CXCL12可促进人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其机制可能与上调CXCR4及CXCR7表达,从而增加VEGF,MMP-2及MMP-9表达有关.     

Hedgehog信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移作用及机制探讨

目的:探讨Hedgehog(Hh)信号通路对人胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移的作用及其机制.方法:环靶明特异性阻断Hh信号通路后,Transwell小室和划痕实验检测SCC-7901细胞侵袭和迁移的能力;RT-PCR检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达;细胞免疫化学检测SGC-7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果:阻断Hh信号通路能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力(P＜0.05).MMP-2和MMP-9的mRNA以及蛋白表达亦显著降低(P＜0.05).结论:Hh信号通路可能是通过调节MMP-2和MMP-9的表达促进SCC-7901细胞侵袭、迁移.     

DIM对胃癌细胞SGC-7901体外增殖与侵袭的抑制作用

目的 探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM)对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的抑制作用.方法 用MTT法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L) DIM对胃癌细胞SGC-7901生长抑制情况;Transwell小室检测40 μmol/L的DIM对胃癌SGC-7901细胞侵袭力的影响,Western blot检测胃癌细胞中血小板源性生长因子-D(PDGF-D)和β-catenin蛋白表达的变化,ELISA法检测培养液上清中MMP-2、MMP-9的浓度.结果 不同浓度的DIM对胃癌细胞SGC-7901均有抑制作用(P＜0.05),随着药物浓度增加,抑制作用增强;但40 μmol/L和80 μmol/L差异无统计学意义(P＞0.05).40μmol/L的DIM作用24 h后胃癌细胞SGC-7901侵袭力下降75.2％(125.4 ±10.8 vs 31.1 ±4.5,P＜0.05),PDGF-D和β-catenin的表达分别下降了55.8％和52.5％(P＜0.05),培养液上清中的MMP-2、MMP-9的浓度明显下降(23.5 ±2.6 vs 13.2 ±1.9;30.4 ±2.4 vs 15.8±2.1,P＜0.05).结论 DIM对胃癌细胞的增殖和侵袭有抑制作用,其机制可能与PDGF-D、β-catenin、MMP-2、MMP-9的表达下降有关.     

榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株ERK1/2通路的影响

目的 探讨榄香烯对人胃癌SGC-7901 细胞株增殖以及对细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度榄香烯(0.01、0.02、0.04mg/ml)处理胃癌SGC-7901细胞,然后用CCK -8法观察细胞增殖抑制作用,光镜和透射电镜观察细胞形态学改变,Western-blot 法检测磷酸化ERK1/2 的表达水平.结果 榄香烯可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性;光镜和透射电镜下可以观察到典型的细胞凋亡形态学改变;榄香烯作用48h后胃癌SGC-7901细胞磷酸化ERK1/2表达水平受到明显抑制,并呈浓度依赖性,各浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 榄香烯可以抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖,诱发其凋亡,作用机制可能为抑制了细胞的ERK1/2 信号通路.     

HSP90抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响

目的研究一种特异性的热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人胃癌细胞SGC-7901
细胞增殖和凋亡的影响,分析其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测不同浓度的17-AAG对胃癌SGC-7901细胞的生
长抑制率;荧光显微镜下观察PI染色的SGC-7901细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测SGC-7901细胞的细胞周期变化
及凋亡率变化;通过免疫组化检测胃癌SGC-7901 细胞中Fas 蛋白的表达。结果MTT 法显示17-AAG 能明显抑制胃癌
SGC-7901 细胞的生长增殖,呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG处理48 h后使SGC-7901 细胞发生
G2/M期阻滞,并有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用;细胞免疫组化结果显示,SGC-7901细胞胞浆内有Fas表达,随着药物浓度的
加大,阳性表达率也逐渐增加。结论17-AAG 通过改变细胞周期、诱导其凋亡来抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖,上调
SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达是诱导凋亡的作用机制之一。
     

藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的研究藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其部分作用机理。方法采用不同浓度的藤梨根提取物作用于人胃癌SGC-7901细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学方法检测Bcl-2基因表达。结果藤梨根作用于SGC-7901,在(8～32)mg/mL时促进该细胞呈不同程度的凋亡;藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌SGC-7901细胞Bcl-2蛋白表达阳性灰度值分别为103.41±1.01,104.05±1.239,0.52±1.09。结论藤梨根提取物对SGC-7901有明显促凋亡作用;藤梨根提取物抑制SGC-7901 Bcl-2蛋白水平的表达有可能是促进SGC-7901凋亡的作用机制。     

强力霉素对人肺癌细胞系增殖及侵袭行为的影响

目的探讨强力霉素对人肺癌细胞系A549细胞的增殖和体外侵袭能力及其基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法采用MTT比色法研究不同浓度强力霉素(2.5、5、10、20、50mg/L)对A549细胞增殖的影响,免疫组织化学方法和Millicell-pore小室法,研究不同浓度强力霉素(2.5、5、10、20mg/L)作用后,A549细胞MMP-2蛋白表达及其体外侵袭转移能力的影响。结果10mg/L以上强力霉素可以抑制A549细胞增殖,5mg/L以上强力霉素可以抑制A549细胞中MMP-2蛋白的表达及体外侵袭。结论强力霉素可以抑制A549细胞增殖及体外侵袭,其抑制A549细胞侵袭及转移的作用与其抑制MMP-2的表达有关。     

N-乙酰半胱氨酸通过下调缺氧诱导因子-1α抑制胃癌SGC-7901细胞MMP-9的表达的实验研究

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否通过下调低氧环境诱导的HIF-1α抑制胃癌SGC-7901细胞MMP-9的表达。方法首先将胃癌SGC-7901细胞分为3组,分别为常氧组(Normoxia组)、低氧组(Hypoxia组)和低氧+NAC组(Hypoxia+NAC组)。在低氧环境下对胃癌SGC-7901细胞使用NAC干预,在3个不同时间点(0h、24h和72h)使用MTT法对SGC-7901细胞活性进行检测;同时在干预24h后,分别采用RT-PCR法和western blot法对SGC-7901细胞MMP-9和HIF-1α的mRNA和蛋白水平进行检测。结果低氧环境下SGC-7901细胞活性呈时间依赖性下降,差异均有统计学意义(P<0.05);且在各时间点低氧+NAC组细胞活性较低氧组细胞下降更加明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。在干预24h后,SGC-7901细胞MMP-9和HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平较未干预细胞明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在低氧环境下,NAC可以通过抑制HIF-1α的合成下调胃癌SGC-7901细胞MMP-9的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。     

小檗胺联合热疗对人胃癌顺铂耐药细胞增殖的影响

目的 研究小檗胺联合热疗对人胃癌顺铂耐药细胞(SGC-7901/DPP)的增殖作用及机制。方法 SGC-7901/DPP细胞的增殖利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测,SGC-7901/DPP细胞生长利用细胞集落试验检测, SGC-7901/DPP细胞凋亡率利用流式细胞仪检测, 蛋白的表达水平利用蛋白印迹（Western blot）检测。结果 小檗胺 (0～64 mg/L) 对SGC-7901/DPP细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性 (P<0.05)。与单独热疗组或者单独小檗胺组相比,小檗胺(16 mg/L)联合热疗对SGC-7901/DPP细胞的增殖、生长起到抑制作用,同时对SGC-7901/DPP 细胞的凋亡起到促进作用 (P<0.05)。 与单独热疗组或者单独小檗胺组相比,小檗胺(16 mg/L)联合热疗能够使SGC-7901/DPP细胞的Bcl-2的蛋白水平降低,同时使SGC-7901/DPP细胞的cleaved caspase-3, cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平增加(P<0.05)。进一步实验发现,与单独热疗组或者小檗胺组相比,小檗胺(16 mg/L)联合热疗能够降低SGC-7901/DPP细胞的多药耐药基因1 （MDR1）以及多药耐药相关蛋白1（MRP1）的蛋白水平。结论 小檗胺联合热疗对SGC-7901/DPP的增殖有抑制作用,其机制可能是通过调控凋亡相关蛋白促进SGC-7901/DPP凋亡以及抑制MDR1和MRP1蛋白水平有关。     

沉默Beclin1基因对β-榄香烯抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖与诱导自噬的影响

目的探讨Beclin1基因对β-榄香烯抗人胃癌SGC-7901细胞增殖及自噬诱导的影响。方法用前期实验构建成功的GV112-Beclin1-shRNA1(short hairpin RNA,短发夹RNA)慢病毒载体感染人胃癌SGC-7901细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测β-榄香烯对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及沉默Beclin1基因后对β-榄香烯抗增殖能力的影响。免疫蛋白印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3-II、P62的表达,评价β-榄香烯作用SGC-7901后的自噬水平和Beclin1基因沉默对β-榄香烯诱导自噬的影响。结果 MTT法显示,β-榄香烯能够抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制作用随浓度的增加而递增(浓度为20、50、100μg/mL比0μg/mL时,抑制率为21.5%、31.7%、37.4%比0,P<0.05);沉默Beclin1基因后β-榄香烯抑制胃癌SGC-7901细胞抑制率增加(42.3%比36.1%,P<0.05)。Western blot法显示,β-榄香烯能诱导SGC-7901细胞发生保护性自噬,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达上调,P62蛋白表达下降,沉默Beclin1基因可抑制β-榄香烯对SGC-7901细胞保护性自噬的增强,LC3-Ⅱ蛋白表达水平下降,P62蛋白表达增加。结论β-榄香烯可诱导胃癌SGC-7901细胞发生保护性自噬,下调Beclin1基因有助于降低保护性自噬的发生,从而增强β-榄香烯的抗癌效果。     

花边莲提取液对人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的影响

目的观察花边莲（HBL）提取液对人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡和增殖的影响。方法采用细胞增殖抑制试验（MTT法）、荧光显微镜观察及流式细胞仪检测等方法观察了SGC-7901细胞的形态变化、细胞凋亡率及细胞周期变化。结果HBL对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性；在形态上具有凋亡细胞的形态特征；与对照组比较，HBL处理48h后，各组胃腺癌SGC-7901细胞均出现亚二倍体峰（Sub-G1），细胞凋亡率与HBL呈剂量依赖性，并使细胞阻滞于S期。结论HBL可诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡、对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用，其机制可能与细胞阻滞于S期有关。     

hTERT上调FOXM1乙酰化影响胃癌细胞侵袭能力

目的 探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse enzyme,hTERT)促进胃癌细胞侵袭的分子机制.方法 构建稳定过表达hTERT的细胞株SGC-7901-hTERT,采用Western blot检测叉头盒蛋白(forkhead box M1,FOXM1)的表达,qRT-PCR和Western blot检测FOXM1下游侵袭相关基因基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA和蛋白表达;构建FOXM1的shRNA干扰质粒,在SGC-7901-hTERT细胞中转染该质粒,Transwell法检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达;构建FOXM1启动子活性报告质粒,在SGC-7901-hTERT细胞中用双荧光素酶报告实验检测FOXM1启动子活性,qRT-PCR检测FOXM1 mRNA表达;构建稳定过表达FOXM1的细胞株SGC-7901-HA-FOXM1,并在此细胞中转染hTERT过表达质粒,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FOXM1乙酰化水平变化,免疫荧光实验检测hTERT与FOXM1的细胞定位.结果 与对照组比较,过表达hTERT促进FOXM1及其下游分子MMP-2、MMP-9的蛋白表达,同时也促进肿瘤细胞侵袭(P＜0.01),但不影响FOXM1的启动子活性及mRNA表达;与过表达hTERT组比较,干扰FOXM1可抑制MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达,同时也抑制肿瘤细胞侵袭(P＜0.01);hTERT与FOXM1存在细胞共定位,且过表达hTERT可上调FOXM1乙酰化水平.结论 hTERT通过上调FOXM1乙酰化促进胃癌细胞侵袭.     

白术内酯Ⅰ通过调低CyclinD1/CDK4抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖及机制

目的 探讨白术内酯I抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖及可能机制。 方法 MTT法检测白术内酯Ⅰ对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用;流式细胞仪检测白术内酯Ⅰ作用后胃癌细胞SGC-7901的凋亡率及细胞周期的改变;Western blotting检测度白术内酯Ⅰ作用后胃癌细胞SGC-7901中Cyclin D1、CDK4蛋白的变化。 结果 MTT试验结果显示与对照组相比,白术内酯Ⅰ可抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,并且呈时间及剂量的依赖性（P < 0.05~P < 0.01）;流式细胞仪结果显示与对照组相比白术内酯Ⅰ能够明显促进胃癌细胞SGC-7901后的细胞凋亡,并且呈剂量的依赖性（P < 0.01）,同时会增加细胞中G₁期细胞的比例（P < 0.01）,减少G₂期细胞的比例（P < 0.01）,并且呈剂量的依懒性（P < 0.05）;Western blotting结果显示同对照组相比白术内酯Ⅰ能够调低胃癌细胞SGC-7901中Cyclin D1、CDK4蛋白的表达（P < 0.01）,并且呈剂量的依赖性（P < 0.05）。 结论 白术内酯Ⅰ能通过调低Cyclin D1、CDK4蛋白进而改变细胞周期来抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖同时促进其凋亡。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响 Ⅰ.乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TMP-2表达的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡脱氧核苷酸(AS-OND)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响。方法:采用脂质体介导法将HPAAS-ODN转染SGC-7901细胞G用RT-PCR检测HPA-mRNA表达,用免疫细胞化学的方法检测细胞内MMP-2和TIMP-2的变化。结果:AS-ODN转染48h后GSGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降(P<0.01),MMP-2的表达量亦减少(P<0.01)。结论:HPAAS-ODN可以有效地抑制胃癌细胞MMP-2的表达。     

薯蓣皂苷元对人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的: 观察薯蓣皂苷元对人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡过程的影响并探讨其机制。方法: 采用薯蓣皂苷元处理体外培养的BGC-823和SGC-7901细胞,用MTT法、Transwell 实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。用免疫印迹法检测BGC-823和SGC-7901细胞中凋亡相关蛋白BAX、凋亡抑制基因Bcl-2和MAPK信号通路的Erk1/2、JNK、p38三个通路中相关蛋白的表达。结果： 经薯蓣皂苷元处理后,BGC-823和SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,凋亡相关蛋白BAX明显升高,Bcl-2的表达明显降低;p-p38表达水平明显降低,但JNK、p-JNK、Erk1/2、p-Erk1/2和p38的表达无明显变化。结论： 薯蓣皂苷元可能通过MAPK通路中的p-p38通路影响人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞的生物学行为。     

阿司匹林抑制胃癌细胞生长及其机制探讨

目的　研究阿司匹林对 SGC- 790 1胃癌细胞生长的影响 ,并初步探讨其作用的分子机制。方法　采用 3H- Td R法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞 DNA合成及细胞周期的影响 ;用免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞 COX- 2表达的影响 ;Western blotting法及 EMSA法检测阿司匹林对胃癌细胞 c- fos表达及 AP- 1活化的影响。结果　胃癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后 ,其 3H- Td R掺入值明显降低 ,且与阿司匹林浓度呈高度负相关 ( r=- 0 .9,P<0 .0 5 )。细胞周期分析显示 ,阿司匹林主要作用于胃癌细胞 S期。免疫细胞化学染色显示 ,阿司匹林能下调胃癌细胞 COX- 2表达 ,且具有良好的量效关系。Western blotting检测表明 ,阿司匹林能降低胃癌细胞 c- fos蛋白的表达。EMSA分析显示 ,阿司匹林能有效抑制血清刺激的 AP- 1的 DNA结合活性。结论　阿司匹林能有效抑制胃癌细胞的生长 ,这种作用可能是其通过抑制胃癌细胞 c- fos表达以及 AP- 1活化 ,进而抑制COX- 2表达所致     

中效原理在胃癌联合化疗中的应用及药物抗癌机制的初步探索

目的 运用中效原理分析姜黄素联合顺铂或塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞的化疗效应,并初步探索上述三种药物对胃癌的抗癌机制.方法 将实验组分为姜黄素组、顺铂组、塞来昔布组、姜黄素联合顺铂组、姜黄素联合塞来昔布组,用相应药物作用于胃癌SGC-7901细胞,阴性对照组为不含药物组.然后采用MTT法测定药物对SGC-7901细胞的增殖抑制率,并运用中效原理分析药物联用的效果;同时采用流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量RT-PCR法检测COX-2 mRNA的表达;分光光度法检测Caspase-3的活性.结果 姜黄素、顺铂和塞来昔布组均能抑制SGC-7901细胞的增殖,且呈浓度依赖性;姜黄素与顺铂或塞来昔布联用时可增强这种抑制,表现为协同作用.上述三种药物均能诱导胃癌SGC-7901发生凋亡,两药联用组的细胞凋亡率较单药作用组均显著升高（均P＜0.01）.单药作用组细胞中COX-2 mRNA的表达较阴性对照组均显著下降（均P＜0.01）.单药作用组细胞中Caspase-3的活性较阴性对照组均显著升高（均P＜0.01）.结论 在一定药物浓度范围内,姜黄素、顺铂和塞来昔布均能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、诱导其凋亡.姜黄素与顺铂或塞来昔布联用时均呈现协同作用,这可能与三药均能抑制COX-2 mRNA的表达、提高Caspase-3的活性有关.