编码磷酸转运受体的结核DNA疫苗的免应原性和保护效力

作者用分枝杆菌感染的Ｈ－２～ｂ单倍型小鼠生产的培养滤液抗原（Ａｇ）特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）确定了结核杆菌基因组中编码３种推定的磷酸结合蛋白的３个基因。为了确定这些磷酸结合蛋白的潜在疫苗特性,作者将编码结核杆菌ＰｓｔＳ－１、ＰｓｔＳ－２或ＰｓｔＳ－３蛋白的ＤＮＡ转化到大肠杆菌制成质粒ＤＮＡ疫苗,同时还构建了一个编码结核杆菌Ａｇ８５Ａ的质粒ＤＮＡ作为阳性对照,用空载体作阴性对照。分别用上述质粒ＤＮＡ肌肉接种６～８周龄的Ｃ５７ＢＬ／６雌性小鼠３次,每次间隔３周。分别测定抗体及Ｔｈ１型细胞因子白细胞…     

佐剂和母体抗体对新生鼠接种RSVBBG2Na疫苗后保护效果的影响

本文报道了重组Ａ亚型呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）融合蛋白ＢＢＧ２Ｎａ疫苗,在不同佐剂组成、不同免疫途径和高水平母体抗体存在的情况下对新生小鼠的保护作用。将１剂ＡＩＰＯ＿４－ＢＢＧ２Ｎａ（２０μｇ）腹腔或肌肉接种卫周龄新生小鼠,４周后取血用ＥＬＩＳＡ测定ＢＢＧ２Ｎａ和ＲＳＶ－Ａ特异性抗体滴度。结果试验组２３只小鼠中有２２只产生较强的疫苗特异性及ＲＳＶ－Ａ特异性ＩｇＧ抗体应答（与接种途径无关）。接种ＰＢＳ的时照组全部抗体阴性。接种后４周,用ＲＳＶ－Ａ攻击,结果显示对照组小鼠肺部病毒滴度很高（３．５ｌｏｇ…     

用两种HCV E2蛋白编码质粒对小鼠及恒河猴进行DNA免疫

本研究以小鼠和恒河猴为实验对象,通过接种两种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白表达质粒来比较胞内表达及膜外表达Ｅ２蛋白所诱导的体液免疫应答的差异,以评价哪种表达形式更适用于ＤＮＡ疫苗。选取３０只６周龄ＢＡＬＢ／ｃ雌鼠,分六组（Ａ～Ｆ）。Ａ～Ｃ组作肌肉注射,Ｄ～Ｆ组用基因枪皮内注射。Ａ、Ｄ组分别注射空载体质粒ＤＮＡ（ｐＤｉｓｐｌａｙ）作为阴性对照;Ｂ、Ｅ组注射含有完整Ｅ２和ｐ７基因的ＤＮＡ质粒载体（ｐＥ２）;Ｃ＊组注射Ｃ端疏水区基因被删除、替换上血小板源生长因子受体（ＰＤＧＦＲ）跨膜序列、并在上游加入…     

通过自动与被动免疫防御日本蜱传脑炎病毒

作者在人和小鼠中评估了欧洲的蜱传脑炎病毒（ＴＢＥＶ）疫苗诱导抗日本ＴＢＥＶ Ｏｓ－ｈｉｍａ ５－１０株免疫应答的情况,还在小鼠模型中检测了暴露前后注射多克隆兔抗－ＴＢＥＶ血清的保护效力。 ＦＳＭＥ－ＩＭＭＵＮ疫苗系由 ＴＢＥＶ西方亚型株Ｎｅｕｄｏｅｒｆｌ灭活纯化制成。对１０名健康志愿者间隔４周肌注疫苗２次,其中４人１年后免疫第３次,于免疫当天及每次免疫４周后采血。对１０只６周龄ＩＣＲ小鼠在０、７天皮下注射０．２ｍｌ４倍稀释的疫苗,对照小鼠则注射ＰＢＳ,第２针后１周采血。为了解是否存在交叉保护作用,用…     

IL-15表达质粒能增强HIV-1 DNA疫苗诱导的细胞免疫应答

本研究旨在观察白细胞介素１５（ＩＬ－１５）表达质粒能否增强１型人类免疫缺陷症病毒（ ＨＩＶ－ １） ＤＮＡ疫苗诱导的细胞免疫应答及ＩＬ－ １５与 ＩＬ－ ２或 ＩＬ－１２表达质粒是否具有协同作用。 作者分另将ＨＩＶ－１ＤＮＡ 疫苗（ｐＣＭＶ１６０ⅢＢ和 ｐｃＲＥＶ各 ２μｇ）、ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗和ＩＬ－１５表达质粒 ｐＣＡＧＧＳ－ＩＬ１５（ １、 １０、５０μｇ）、ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗和 ｐＣＡＧＧＳ－ＩＬ１５同 ＩＬ－２表达质粒 ｐＢＣＭＧＮｅｏ－ｍＩＬ２（１０μｇ）或ＩＬ－１２表达质粒ｐＣＡＧＧＳ－ＩＬ１…     

小鼠口服免疫人乳头状瘤病毒样颗粒可诱生病毒中和抗体

本文评估了口眼免疫人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）样颗粒（ＶＩＰ）预防ＨＰＶ病的可行性。ＨＰＶ－１１Ｌｌ／ｌ－２ＶＬＰ得自重组杆状病毒ＡｃｌｌＬ１．１和Ａ。１１Ｌ２共感染的昆虫细胞培养物，经管饲法给小鼠口腔接种。ＶＬＰ剂量分别为１００、５０和１０μｇ，每个剂量组５只雌性Ｂａｌｂ／ｃ／小鼠（８～１０周龄）。初免后的１４和４１天加强免疫，对照组不接种。初免后每间隔两周采集血清。用ＶＬＰＥＬＩＳＡ法检测口服免疫的小鼠血清，表明有特异性ＩｇＧ应答。免后８周，中高剂量组的ＶＬＰ特异性抗体滴度＞４０９６；１０μｇ组…     

编码血凝素的DNA疫苗可在小鼠中提供抗流感病毒H5N1感染的保护性免疫

作者评价了编码流感病毒ＴｙＩｒ８３和ＨＫ９７株血凝素（ＨＡ）的ＤＮＡ疫苗在小鼠中的同源和异源保护作用。用巨细胞病毒立即早期启动子和鸡β肌动蛋白启动子将ＨＡ基因的全长ＣＤＮＡ拷贝分别克隆到表达载体ｐＪＷ４３０３和ｐＣＡＧＧＳ／ＭＣＳ获得ｐＴｙＩｒＨＡ和ＰＨＫＨＡ两种ＤＮＡ疫苗。用基因枪对６～７周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹部注射１μｇＤＮＡ疫苗，４周后加强免疫１次，之后１０天用１０半数致死量（ＬＤ５０）的ＣｋＨＫ９７和ＨＫ９７病毒进行攻击。结果发现，注射ＰＨＫＨＡ后经ＨＫ９７株攻击的小鼠肺中病毒的半数卵感…     

以DNA、痘苗病毒和蛋白免疫接种提呈HIV Env蛋白的新方法

重组ＤＮＡ、痘苗病毒载体（ＶＶ）作为人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ）抗原的送递系统因其能同时诱导细胞免疫和体液免疫而受到重视,作者对表达ＨＩＶ包膜（Ｅｎｖ）蛋白的ＤＮＡ和ＶＶ载体（ＤＮＡ－Ｅｎｖ和ＶＶ－Ｅｎｖ）及纯化的Ｅｎｖ蛋白的免疫效果进行了检测。 将ＨＩＶ－ⅢＢ株的 ｇｐ１４０ Ｅｎｖ编码序列插入含有巨细胞病毒增强子／启动子的质粒中,用基因枪将包被于金粒上的重组质粒注入８～１２周龄的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹部;或腹腔接种表达 ＨＩＶ－ⅢＢ株蛋白的重组 ＶＶ感染细胞的裂解物;纯化蛋白疫苗则由ｇｐ １２０（１…     

链球菌G蛋白血清白蛋白结合区能增强RSV-A G130-230蛋白的免疫原性

本文旨在证明Ａ亚型呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ－Ａ）Ｇ蛋白１３０－２３０氨基酸区（Ｇ２Ｎａ）与链球菌Ｇ蛋白的血清白蛋白结合区（ＢＢ）融合（ＢＢＧ２Ｎａ）后免疫原性增强,从而可作为候选ＲＳＶ疫苗。 给６～８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠皮下注射１剂不同浓度的 Ｇ２Ｎａ或 ＢＢＧ２Ｎａ（均加用 Ａｌ－ｈｙｄｒｏｇｅｌ佐剂）,免疫后２９天用ＥＬＩＳＡ检测抗Ｇ２Ｎａ抗体滴度,发现ＢＢＧ２Ｎａ组的特异性抗体水平显著高于 Ｇ２Ｎａ组,且 ＢＢＧ２Ｎａ诱生抗体应答所需的剂量亦较小。抗体应答的动力学观察表明,单次注射 １２μｇ Ｇ２Ｎ…     

含人脑钠素多拷贝基因原核系列表达载体的构建

根据人脑钠素（ＨｕｍａｎＢｒａｉｎＮａｔｒｉｕｒｅｔｉｃＰｅｐｔｉｄｅ，ｈＢＮＰ）的ｃＤＮＡ序列，化学合成四条ＤＮＡ片段，经ＰＣＲ延伸扩增，获得全长ＢＮＰ之ｃＤＮＡ，依ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ位点插入ＰＢＶ２２１表达质粒，构建成ＰＢＶ２２１／ＢＮＰ重组体，依据ｃＤＮＡ片段中ＢｇＩⅡ和ＢａｍＨＩ切点的共同粘性末端，依次构建成ＰＢＶ２２１／２ＢＮＰ，ＰＢＶ２２１／３ＢＮＰ．．．．．．．．．ＰＢＶ２２１／８     

人IL—15cDNA的克隆及真核表达载体的构建

目的 构建人白细胞介素－１５（ＩＬ－１５）ｃＤＮＡ真核表达载体,以期在哺乳类细胞中获得高效、稳定表达。方法 从外周血粘附性单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ,并与ｐｃＤＮＡ３．１质粒的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ位点定向连接,构建受控于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１－ＩＬ－１５。结果 经ＰＣＲ扩增鉴定和ＤＮＡ序列分析,证明ＩＬ－１５已经正确插入克隆载体且序列正确。     

鼻腔淋巴瘤的病理类型及免疫表型与EB病毒的相关性

目的 探讨鼻腔淋巴瘤的类型、免疫表型及ＥＢＶ的关系。方法 选用Ｔ、Ｂ及ＮＤ淋巴细胞单克隆抗体,采用免疫组织化学方法标记２２例鼻腔淋巴瘤;用原位杂交法检测ＥＢＶ编码的ＲＮＡ（ＥＢＥＲ１／２）。结果 （１）Ｔ细胞来源占４５．４５％（１０／２２）,ＮＫ细胞来源占４５．４５％（１０／２２）,Ｂ细胞来源占９．０９％（２／２２）。（２）多形细胞淋巴瘤１７例（７７．３％）,单一形淋巴瘤５例（２２．７％）。（３）     

DNA疫苗

慢性乙型和丙型肝炎病毒（ＨＢＶ，ＨＣＶ）感染常常导致慢性肝病及肝细胞癌，实验小鼠接种编码ＨＣＶ和ＨＢＶ结构蛋白或非结构蛋白的ＤＮＡ疫苗后，产生了宿主清除病毒所需的广泛的ＣＤ４＾＋及ＣＤ８＾＋细胞免疫应答。ＤＮＡ免疫是开发抗ＨＢＶ和ＨＣＶ治疗和预防性疫苗的有希望的抗病毒方法。     

致肾盂肾炎大肠杆菌papA免疫保护作用的初步研究

目的：对致肾盂肾炎大肠杆菌ｐ菌毛的结构基因ｐａｐＡ的免疫保护作用进行研究。方法：用ＰＣＲ方法扩增ｐａｐＡ基因,并将５５４ｂｐ扩增产物克隆入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,构建重组质粒ｐＣＴ３７作为ＤＮＡ疫苗,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。结果：全菌ＥＬＩＳＡ测定显示疫苗接种组小鼠血清效价明显高于对照组,分别为１：５７５０和１：４０００（Ｐ〈０．０１）。尿液和肾脏菌落计数在接种组均明显低于对照组（Ｐ〈０．０５）,     

T细胞淋巴瘤与EB病毒关系的研究

收集贵州地区１００例Ｔ细胞淋巴瘤进行了ＥＢ病毒检测，用免疫组织化学方法确定肿瘤细胞的Ｔ细胞表型；用聚合酶链检测ＥＢ病毒特征的ＤＮＡ序列（ＥＢＶ－ＤＮＡ），用原位杂交法检测ＥＢ病毒编码的ＲＮＡ（ＥＢＥＲ１／２），研究结果表明，贵州地区Ｔ细胞淋巴瘤与ＥＢ病毒关系极为密切，ＥＢ病毒在鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤中起着一定的作用，淋巴母细胞性性Ｔ细胞淋巴瘤与ＥＢ病毒有一定的关系。     

用裸RNA免疫小鼠产生抗天然HIV-1包膜糖蛋白单克隆抗体

作者介绍了使用西门利克森林病毒（ＳＦＶ）这一新型表达系统产生具有天然构型的１型人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ－１）包膜（Ｅｎｖ）糖蛋白，以及用裸ＳＦＶ－ｇｐ１６０ＲＮＡ免疫小鼠制备抗Ｅｎｖ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和对１２ＨＺ杂交瘤细胞系进行鉴定的结果。用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增全长ＨＩＶ－１ＨＸＢ２ｅｎｖ基因并将其插入ｐＳＦＶ－１载体的ＢａｍＨＩ位点，构建表达载体ＰＳＦＶ－ｇｐ１６０．纯比后采用电穿孔技术将ＳＦＶ－ｇｐｌ６０ＲＮＡ转染ＢＨＫ－２１细胞。以蛋白印迹法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫荧光法检测Ｈ…     

对新型凝聚体佐剂的评估

作者以可溶性卵清蛋白（ＯＶＡ）为抗原,制备了 ３种凝聚体佐剂,其中 ＲＡＭ１由含番茄苷、胆固醇和磷脂酰乙醇胺的固状凝聚体构成,ＰＡＭ２由糖基酰胺脂构成,ＲＡＭ３由第５代树状聚合物ＰＡＭＡＭ构成。作者对３种新型分子凝聚体的免疫增强特性及毒性进行了评估。 ６～８周龄雌性Ｃ５７ＢＬ／６和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠分别于０、７、２１和３５天皮下接种１００μｌ含５０μｇ抗原的佐剂溶液,或在皮下注射佐剂后３小时在不同部位接种抗原。以单纯凝聚体和溶于生理盐水的ＯＶＡ作阴性对照,以铝佐剂、弗氏不完全佐剂（ＩＦＡ）及 Ｐｒｏ…     

病毒性心肌炎小鼠心脏、外周血白细胞CARmRNA表达的实验研究

引起人类病毒性心肌炎 (ＶＭＣ)最常见的病毒包括Ｂ组柯萨奇病毒 (ＣＶＢ)和腺病毒 (ＡｄＶ)。ＣＶＢ是无衣壳ＲＮＡ病毒 ,ＡｄＶ为无衣壳ＤＮＡ病毒 ,两种结构完全不同的病毒成为ＶＭＣ共同致病因子 ,是长期困扰人们的问题。有研究推断并证实两者作用于同一受体 ,称ＣＶＢ ＡｄＶ受体ＣＡＲ。 2 0 0 1年 1月～ 10月 ,我们通过ＲＴ ＰＣＲ结合放射自显影半定量检测ＶＭＣ小鼠心脏、外周血白细胞ＣＡＲｍＲＮＡ的表达 ,探讨ＣＡＲ在ＶＭＣ发病中的作用。材料与方法一、动物模型制作 :Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 14 4只 (上海西普尔 必凯实验动物有限公…     

人EPO cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达

建立稳定表达人红细胞生成素（ＥＰＯ）的工程细胞株。方法：用 ＤＮＡ磷酸钙共转染法,将人ＥＰＯ ｃＤＮＡ的表达质粒 ｐＣＤＢ与标志质粒 ｐＳＶ－ｄｈｆｒ共转染到 ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞中。用 ＥＬＩＳＡ法检测到 ７０个克隆的细胞培养上清,筛选出５０个克隆细胞系。结果：经ＭＴＸ加压扩增,获得４系高效表达ＥＰＯ的细胞系（Ｂ４、Ｃ３、Ｆ１０、Ｇ７）,表达量为 ２． ２～１０ μｇ／（１０６ ｃｅｌｌ· ２４ ｈ）,ＥＰＯ的分泌量在上述细胞系扩增了 １１～３１倍。 Ｆ１０细胞系表达量为最高,并进一步亚克隆纯化。其中Ｆ１０－６亚克隆细胞株的平均表达水平为１０ ｕｇ／（１０６ｃｅｌｌ·２４ ｈ）,细胞冻存后复苏传代１５次,ＥＰＯ的表达水平无明显改变。结论：以Ｆ１０－６亚克隆细胞株建立了工程细胞株。     

RP－HPLC法测定人血清中卡马西平及其环氧化物

用ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定人血清中卡马西平（ＣＢＺ）及活性代谢产物卡马西平１０，１１－环氧化物（ＣＢＺ－Ｅ）的含量。血清样品用乙醚－二氯甲烷（３：１，Ｖ／Ｖ）混合溶剂提取，以硝基安定为内标，乙腈－水（４０：６０，Ｖ／Ｖ）为流动相，流速为１．２０ｍｌ／ｍｉｎ，ＵＶ２１５ｎｍ处测定；ＣＢＺ－Ｅ和ＣＢＺ最低检测浓度分别为５０和６０ｎｇ／ｍｌ；线性范围为０．１～５．０μｇ／ｍｌ和０．２～２０μｇ／ｍｌ；ＲＳＤ在５％以下。应用本法测定了８名癫痫病人单一服用ＣＢＺ治疗血清中ＣＢＺ和ＣＢＺ－Ｅ的浓度。