稀土化合物对MNNG致穿梭质粒pSP189突变的影响

为探讨稀土抗诱变作用机理，本研究以穿梭质粒ｐＳＰ１８９，经具致癌作用的烷化剂甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）或ＭＮＮＧ加柠檬酸稀土同时处理后，转染猴肾ＶｅｒｏＥ６细胞，从细胞中回收的质粒转化大肠杆菌ＭＢＭ７０７０。结果表明，ＭＮＮＧ浓度在１．５～６．０μｇ／ｍｌ范围，突变率明显的高于溶剂对照。稀土浓度分别为１０，２０及４０μｇ／ｍｌ与３μｇ／ｍｌＭＮＮＧ同时处理质粒，发现突变率分别为１５．２×１０－４、１０．０×１０－４及１２．７×１０－４，明显低于ＭＮＮＧ单独处理时的２５．１×１０－４，推测稀土可能阻断ＭＮＮＧ引起的Ｇ．Ｃ→Ａ．Ｔ转换，保护质粒ｐＳＰ１８９的靶基因ＳｕｐＦｔＲＮＡ免受损伤或影响某些基因表达。     

接种表达细胞因子基因的重组HIV-1基因组DNA疫苗能增强HIV-1特异性免疫应答

１型人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ－１）ＤＮＡ疫苗能诱导实验动物产生体液和细胞免疫应答,但这些免疫应答弱且短暂。ＤＮＡ疫苗免疫研究结果证实,白细胞介素２（ＩＬ－２）或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因与ＨＩＶ－１基因共表达可增强抗原特异性抗体应答。 作者以ＨＩＶ－１基因组为载体,通过ＤＮＡ重组技术分别构建了缺失ｔａｔ及ｎｅｆ基因（以消除其免疫抑制作用）但含有ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ及γ干扰素（ＩＦＮ－γ）基因的重组质粒,分别称为ｐＴＸ ＧＥ／ＩＬ－２、ｐＴＸ ＧＥ／ＧＭ－ＣＳＦ及 ｐＴＸ ＧＥ…     

人IL—15cDNA的克隆及真核表达载体的构建

目的 构建人白细胞介素－１５（ＩＬ－１５）ｃＤＮＡ真核表达载体,以期在哺乳类细胞中获得高效、稳定表达。方法 从外周血粘附性单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ,并与ｐｃＤＮＡ３．１质粒的ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ位点定向连接,构建受控于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１－ＩＬ－１５。结果 经ＰＣＲ扩增鉴定和ＤＮＡ序列分析,证明ＩＬ－１５已经正确插入克隆载体且序列正确。     

Effects of heparin on growth factor-induced mitogenic and proliferative responses of rat pulmonary a

目的：探讨肝素是否能抑制生长因子诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）分裂和增殖．方法：应用含１０％ＦＢＳ的Ｍ１９９培养液培养大鼠ＰＡＳＭＣ．细胞分裂及细胞增殖分别用［ｍｅｔｈｙｌ３Ｈ］ＴｄＲ和细胞计数监测．结果：ＦＢＳ（１０％），以及ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），或ＩＬ１α（１００ｎｇ·Ｌ－１）联合应用均能增加大鼠ＰＡＳＭＣ分裂．肝素（１００ｍｇ·Ｌ－１）抑制１０％ＦＢＳ诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ增殖（２８％±６％）和胸腺嘧啶摄取反应（２７％±７％），抑制ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），或ＩＬ１α（１００ｎｇ·Ｌ－１）联用诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ增殖（２５％±６％，２７％±７％，２０％±４％），以及胸腺嘧啶摄取反应（２３％±７％，２６％±６％，２０％±６％）．结论：肝素抑制生长因子诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ的分裂与增殖．     

编码血凝素的DNA疫苗可在小鼠中提供抗流感病毒H5N1感染的保护性免疫

作者评价了编码流感病毒ＴｙＩｒ８３和ＨＫ９７株血凝素（ＨＡ）的ＤＮＡ疫苗在小鼠中的同源和异源保护作用。用巨细胞病毒立即早期启动子和鸡β肌动蛋白启动子将ＨＡ基因的全长ＣＤＮＡ拷贝分别克隆到表达载体ｐＪＷ４３０３和ｐＣＡＧＧＳ／ＭＣＳ获得ｐＴｙＩｒＨＡ和ＰＨＫＨＡ两种ＤＮＡ疫苗。用基因枪对６～７周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹部注射１μｇＤＮＡ疫苗，４周后加强免疫１次，之后１０天用１０半数致死量（ＬＤ５０）的ＣｋＨＫ９７和ＨＫ９７病毒进行攻击。结果发现，注射ＰＨＫＨＡ后经ＨＫ９７株攻击的小鼠肺中病毒的半数卵感…     

肝素对生长因子诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞分裂和增殖的影响

目的：探讨肝素是否能抑制生长因子诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）分裂和增殖。方法：应用含１０％ＦＢＳ的Ｍ－１９９培养液培养大鼠ＰＡＳＭＣ。细胞分裂及细胞增殖分别用［ｍｅｔｈｙｌ－＾３Ｈ］ＴｄＲ和细胞计数监测。结果：ＦＢＳ（１０％），以及ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ＾－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ＾－１），或ＩＬ－１α（１００ｎｇ·Ｌ＾－１）联合应用均能增加大鼠ＰＡＳＭＣ分裂。肝素（     

Fas与HIV感染

Ｆａｓ抗原（Ｆａｓ Ａｇ）表达与人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ）感染引起的艾滋病（ＡＩＤＳ）进程有密切关系。随着ＨＩＶ感染的加重，细胞表面Ｆａｓ Ａｇ表达增加，主要表现在ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋细胞。通过Ｆａｓ Ａｇ介导的细胞程序死亡（ＰＣＤ）途径是ＨＩＶ感染引起的Ｔ淋巴细胞免疫缺陷的重要原因，白细胞介素２（ＩＬ－２），ＩＬ－１２等细胞因子以及ＩＬ－１β转化酶（ＩＣＥ）样蛋白酶抑制剂在体外能抑制由Ｆａｓ     

用裸RNA免疫小鼠产生抗天然HIV-1包膜糖蛋白单克隆抗体

作者介绍了使用西门利克森林病毒（ＳＦＶ）这一新型表达系统产生具有天然构型的１型人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ－１）包膜（Ｅｎｖ）糖蛋白，以及用裸ＳＦＶ－ｇｐ１６０ＲＮＡ免疫小鼠制备抗Ｅｎｖ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和对１２ＨＺ杂交瘤细胞系进行鉴定的结果。用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增全长ＨＩＶ－１ＨＸＢ２ｅｎｖ基因并将其插入ｐＳＦＶ－１载体的ＢａｍＨＩ位点，构建表达载体ＰＳＦＶ－ｇｐ１６０．纯比后采用电穿孔技术将ＳＦＶ－ｇｐｌ６０ＲＮＡ转染ＢＨＫ－２１细胞。以蛋白印迹法、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫荧光法检测Ｈ…     

白芍总甙对B淋巴细胞增殖和白介素1生成的调节作用

白芍总甙（ＴＧＰ）对脂多糖（ＬＰＳ）诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应的量效曲线呈钟形，用贴壁法除去脾细胞中巨噬细胞（ＭΦ）或加入１０μｍｏｌ·Ｌ１吲哚美辛（Ｉｎｄ）可使ＴＧＰ量效曲线的下降支消失，再加５％同系小鼠腹腔ＭΦ中或前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）０．０２２０μｍｏｌ·Ｌ１可使量效曲线下降支再现．同步检测ＴＧＰ对ＬＰＳ诱导大鼠腹腔ＭΦ产生ＰＧＥ２与白介素１（ＩＬ１）．结果表明，ＴＧＰ０．５－３ｌ２．５μｇ·ｍＬ１对ＬＰＳ诱导的ＩＬ－１产生曲线呈钟形．而ＴＧＰＬＰＳ的ＰＧＥ２产生曲线呈浓度依赖性地增高；在１２．５－３１２．５μｇ·ｍＬＴＧＰ范围内，１０μｍｏｌ·Ｌ１Ｉｎｄ可使高浓度ＴＣＰＬＰＳ的ＩＬ－１释放曲线明显抬高。提示ＴＧＰ对ＬＰＳ诱导的Ｂ细胞增殖反应和ＩＬ－１诱生的负调节作用都与其促进ＭΦ释放ＰＧＥ２有关．     

表达结核杆菌不同分泌蛋白的DNA疫苗保护效力的差异

作者用质粒载体ｐＪＷ４３０３构建了分别表达结核杆菌分泌蛋白ＭＰＴ６４、Ａｇ８５Ｂ和ＥＳＡＴ－６的 ＤＮＡ疫苗 ＤＮＡ－６４、 ＤＮＡ－８５Ｂ和ＤＮＡ－Ｅ６。分别用上述ＤＮＡ疫苗免疫Ｃ５７Ｂ１／６小鼠,并以亲代ｐＪＷ４３０３作为阴性对照。免疫后４周用有毒力Ｈ３７ＲＶ株（约１００个活菌）通过气溶胶攻击,４周后取肺匀浆作活菌计数;在免疫后不同时间取血清用ＥＬＩＳＡ测特异性抗体;取部分小鼠淋巴结和脾细胞作淋巴细胞增殖试验及测细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）应答和γ干扰素（ＩＦＮ－γ）分泌细胞。 结果显示,ＤＮＡ－６…     

人EPO cDNA基因在CHO细胞中的稳定表达

建立稳定表达人红细胞生成素（ＥＰＯ）的工程细胞株。方法：用 ＤＮＡ磷酸钙共转染法,将人ＥＰＯ ｃＤＮＡ的表达质粒 ｐＣＤＢ与标志质粒 ｐＳＶ－ｄｈｆｒ共转染到 ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞中。用 ＥＬＩＳＡ法检测到 ７０个克隆的细胞培养上清,筛选出５０个克隆细胞系。结果：经ＭＴＸ加压扩增,获得４系高效表达ＥＰＯ的细胞系（Ｂ４、Ｃ３、Ｆ１０、Ｇ７）,表达量为 ２． ２～１０ μｇ／（１０６ ｃｅｌｌ· ２４ ｈ）,ＥＰＯ的分泌量在上述细胞系扩增了 １１～３１倍。 Ｆ１０细胞系表达量为最高,并进一步亚克隆纯化。其中Ｆ１０－６亚克隆细胞株的平均表达水平为１０ ｕｇ／（１０６ｃｅｌｌ·２４ ｈ）,细胞冻存后复苏传代１５次,ＥＰＯ的表达水平无明显改变。结论：以Ｆ１０－６亚克隆细胞株建立了工程细胞株。     

海洋硫酸多糖DPS对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

本文采用碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和白介素－１（ＩＬ－１）氘诱导的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖模型,以ＭＴＴ法观察了海洋硫酸多糖ＤＰＳ对ＶＳＭＣ增殖的影响。大鼠血管平滑肌细胞在ＤＰＳ浓度为０．００１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ的２液中孵育２４ｈ后,分别加入ｂＦＧＦ（５０ｍｇ／ｍｌ）或ＩＬ－１（５０Ｕ／ＭＬ）再孵育２４ｈ,用ＭＴＴ法测定海洋硫酸多糖ＤＰＳ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明,     

高糖增强兔血管平滑肌细胞对内皮素-1的增殖反应性(英文)

观察高糖对内皮素－１（ＥＴ－１）促兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响．方法： ＶＳＭＣ分别培养于含正常葡萄糖、高糖或高渗（５．５，２５，葡萄糖 ５．５＋甘露醇 １９．５ ｍｍｏｌ·Ｌ－１）的培养基中［３Ｈ］胸腺嘧啶掺入法检测ＤＮＡ合成速率，蛋白质印迹法检测磷酸化 ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的表达．结果：在 １０至 １０－８ｍｏｌ·Ｌ－１浓度范围内， ＥＴ－１以浓度依赖方式增加 ＶＳＭＣ的［３Ｈ］胸腺嘧啶掺入及磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的表达，从 １０－１１到 １０－８ｍｏｌ·Ｌ－１，培养于高糖的 ＶＳＭＣ对相同浓度 ＥＴ－１的增殖反应性高于正常糖或高渗培养条件下的ＶＳＭＣ（Ｐ＜ ０．０５，或 Ｐ＜ ０．０１），而在后两种条件下，ＶＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应无显著差别．同样，在高糖条件下，ＥＴ－１诱导的ＶＳＭＣ磷酸化ｐ４４／４２ＭＡＰＫ的表达较正常糖和高渗ＶＳＭＣ增加 ６０％－６５％结论：高糖增强ＶＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应性，可能与磷酸化的 ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ高表达有关     

以DNA、痘苗病毒和蛋白免疫接种提呈HIV Env蛋白的新方法

重组ＤＮＡ、痘苗病毒载体（ＶＶ）作为人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ）抗原的送递系统因其能同时诱导细胞免疫和体液免疫而受到重视,作者对表达ＨＩＶ包膜（Ｅｎｖ）蛋白的ＤＮＡ和ＶＶ载体（ＤＮＡ－Ｅｎｖ和ＶＶ－Ｅｎｖ）及纯化的Ｅｎｖ蛋白的免疫效果进行了检测。 将ＨＩＶ－ⅢＢ株的 ｇｐ１４０ Ｅｎｖ编码序列插入含有巨细胞病毒增强子／启动子的质粒中,用基因枪将包被于金粒上的重组质粒注入８～１２周龄的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹部;或腹腔接种表达 ＨＩＶ－ⅢＢ株蛋白的重组 ＶＶ感染细胞的裂解物;纯化蛋白疫苗则由ｇｐ １２０（１…     

链球菌G蛋白血清白蛋白结合区能增强RSV-A G130-230蛋白的免疫原性

本文旨在证明Ａ亚型呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ－Ａ）Ｇ蛋白１３０－２３０氨基酸区（Ｇ２Ｎａ）与链球菌Ｇ蛋白的血清白蛋白结合区（ＢＢ）融合（ＢＢＧ２Ｎａ）后免疫原性增强,从而可作为候选ＲＳＶ疫苗。 给６～８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠皮下注射１剂不同浓度的 Ｇ２Ｎａ或 ＢＢＧ２Ｎａ（均加用 Ａｌ－ｈｙｄｒｏｇｅｌ佐剂）,免疫后２９天用ＥＬＩＳＡ检测抗Ｇ２Ｎａ抗体滴度,发现ＢＢＧ２Ｎａ组的特异性抗体水平显著高于 Ｇ２Ｎａ组,且 ＢＢＧ２Ｎａ诱生抗体应答所需的剂量亦较小。抗体应答的动力学观察表明,单次注射 １２μｇ Ｇ２Ｎ…     

烟碱对白细胞介素1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达E-选择素的增强作用

目的··：观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）表达Ｅ－选择素的影响。方法··：离体培养新生牛脑微血管内皮细胞;血细胞计数仪测定ＢＣＭＥＣ粘附大鼠血单核细胞（ＭＮ）的数目;应用ＥＬＩＳＡ法检测ＢＣＭＥＣ表达Ｅ－选择素的量。结果··：高浓度烟碱（１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）单独作用于ＢＣＭＥＣ２ｈ后,使ＢＣＭＥＣ对ＭＮ的粘附率从１２．９％±ｓ０．４％增至１５．７％±ｓ０．６％,且ＢＣＭＥＣ也可表达少量的Ｅ－选择素;而当烟碱与ＢＣＭＥＣ作用２ｈ后,再经白细胞介素１β（ＩＬ－１β）诱导４ｈ,烟碱可浓度依赖性（１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１－１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）地增强ＩＬ－１β的诱导作用,增加ＢＣＭＥＣ对ＭＮ的粘附率以及Ｅ－选择素的表达量;抗Ｅ－选择素单克隆（ＡＥｍＡｂ）能显著阻断ＩＬ－１β诱导ＢＣＭＥＣ后对ＭＮ的粘附率。结论··：烟碱增强ＩＬ－１β诱导的脑微血管内皮细胞表达Ｅ－选择素的作用。     

编码磷酸转运受体的结核DNA疫苗的免应原性和保护效力

作者用分枝杆菌感染的Ｈ－２～ｂ单倍型小鼠生产的培养滤液抗原（Ａｇ）特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）确定了结核杆菌基因组中编码３种推定的磷酸结合蛋白的３个基因。为了确定这些磷酸结合蛋白的潜在疫苗特性,作者将编码结核杆菌ＰｓｔＳ－１、ＰｓｔＳ－２或ＰｓｔＳ－３蛋白的ＤＮＡ转化到大肠杆菌制成质粒ＤＮＡ疫苗,同时还构建了一个编码结核杆菌Ａｇ８５Ａ的质粒ＤＮＡ作为阳性对照,用空载体作阴性对照。分别用上述质粒ＤＮＡ肌肉接种６～８周龄的Ｃ５７ＢＬ／６雌性小鼠３次,每次间隔３周。分别测定抗体及Ｔｈ１型细胞因子白细胞…     

高糖增强兔血管平滑肌细胞对内皮素—1的增殖反应性

目的;观察高糖对内皮素－１促兔主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：ＶＳＭＣ分别培养于含正常葡萄糖,高糖或高渗的培养基中,「＾３Ｈ」胸腺嘧啶掺入法检测ＤＮＡ合成速率,蛋白质印迹法检测磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的表达。结果：在１０＾－１２至１０＾－８ｍｏｌ．Ｌ＾－１浓度范围内,ＥＴ－１浓度依赖方式增加ＶＳＭＣ的「＾３Ｈ」胸腺嘧啶掺入及磷酸化ｐ４４／ｐ４２ＭＡＰＫ的表达。     

用新型喷射技术按种HIV-1DNA疫苗诱导粘膜IgA应答

疫苗接种方式对于抗１型人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ－１）免疫的诱导至关重要。本文报告了采用喷射接种途径将ＤＮＡ疫苗转移至活体动物组织所获得的免疫结果。选用Ｆ１代雌性小鼠于０、４～６及８～１２周以分别含ＨＩＶ－１ｔａｔ、ｇｐ１６０及ｐ３７基因的质粒ＤＮＡ５～１０μｇ，经滴鼻、基因枪口内接种、舌部肌肉注射以及颊部高压喷射四种方式进行接种。免疫后７～１０天收集血清标本贮存于一２０℃。采集肠道分泌物和肺部洗液。粘膜洗液经离心沉淀取上清冻存于一７０℃。用亲和层析纯化的重组抗原进行ＥＬＩＳＡ测定抗体应答。通过…     

新型大肠杆菌融合表达系统表达水蛭素Ⅲ基因研究

选用大肠杆菌Ｌ－门冬酰胺酶（ＡＳＰｓⅡ）高效表达质粒ｐＫＡ作为融合表达载体,将水蛙素Ⅲ（ＨＶ３）人工合成编码基因插入 ｐＫＡ质粒的 ＡＳＰｓⅡ编码基因 ａｎｓＢ中,使 ＡＳＰｓ Ⅱ１Ｎ端的 ８９个氨基酸残基通过甲硫氨酸残基与 ＨＶ３形成融合蛋白,从而构建成 ＡＳＰｓⅡ－ＨＶ３融合蛋白表达质粒 ｐＫＡＨ,通过基因操作将该质粒的低拷贝数复制原长更换成 ｐＵＣ高拷贝数复制原点,进而构建成ＡＳＰｓⅡ－ＨＶ３融合蛋白高效表达载体 ｐＵＫＡＨ。该质粒在大肠杆菌 ＪＭ１０５宿主细胞中表达后,融合蛋白（１５． ６ ｋＤ）占细菌总蛋白 １０ ５％,该融合蛋白经 ＣＮＢｒ切割释放出活性水蛭素分子,抗凝血活力达约 ２０ ＡＴＵ／ｍｌ培养液,为以后进一步研究打下了基础。