冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果:冬凌草甲素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论:冬凌草甲素能抑制BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用

目的：探讨冬凌草甲素对急性白血病NB4细胞的生长抑制作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用Hoechst 33258荧光染色法观察药物作用后细胞形态学的变化。结果：冬凌草甲素可显著抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系，在Hoechst染色图片上可见细胞核染色质浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变：结论：冬凌草甲素能抑制NB4细胞的生长及诱导细胞凋亡，具有显著的体外抗白血病作用，这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗白血病提供了有力的试验依据。     

冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果冬凌草甲素可显著降低Raji细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病具有明显的体外抗白血病作用，降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生凋亡，可能是其重要作用机制。     

冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响

目的:探讨冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响。方法:MTT实验检测冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞增殖能力的影响;集落克隆实验检测细胞集落形成能力; DAPI荧光染色法检测HNE1/DDP细胞核形态的变化; PI单染流式细胞术分析细胞的凋亡情况;检测试剂盒测定细胞内ROS的水平; Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果:MTT实验结果表明,冬凌草甲素20μmol/L～50μmol/L可显著减弱HNE1/DDP细胞活力,抑制细胞增殖;相比于模型对照组,3μmol/L～5μmol/L的冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞的集落形成能力有明显的抑制作用(P <0. 05或P <0. 01);且随着冬凌草甲素给药浓度的增加,细胞核发生明显皱缩,核碎裂增加;细胞内ROS水平明显增加;抑凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2表达明显下调,促凋亡蛋白Bax、Bak表达明显上调(P <0. 05或P <0. 01)。结论:冬凌草甲素能显著抑制耐顺铂鼻咽癌HNE1/DDP细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,其作用可能是通过诱导细胞内ROS的产生,对Mcl-...     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P<0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P<0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P<0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P<0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P<0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对急性白血病 NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制.方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的 NB4细胞, MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及 Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡, TRAP- PCR- ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果冬凌草甲素可显著降低 NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,有明显的量-效与时-效关系.结论 冬凌草甲素能抑制 NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

光诱导金丝桃素对人鼻咽癌细胞CNE-2的毒作用和凋亡研究

目的:探讨以发光二极管为光源,金丝桃素光动力疗法对体外培养鼻咽癌细胞CNE-2的毒作用和凋亡影响。方法:体外培养CNE-2细胞分别加入不同浓度的金丝桃素,另设血卟啉阳性对照组,避光培养6h,分别用黄色和红色发光二极管照射90min,积累能量为5.67J/cm2,培养24h后用MTT法检测金丝桃素和血卟啉在光照条件下对鼻咽癌细胞CNE-2的影响,并用流式细胞仪进行细胞周期分析和凋亡检测。结果:MTT结果显示光活化金丝桃素和血卟啉呈剂量依赖性抑制鼻咽癌细胞的生长,IC50分别为0.049和0.650μg/mL;流式细胞仪分析表明金丝桃素经光照后,可使细胞停留在S期和G2期,并诱导细胞凋亡,0.20μg/mL金丝桃素作用18、28、48h,凋亡率分别达到9.97%、72.19%、92.24%。结论:金丝桃素经光诱导后,可有效抑制体外培养鼻咽癌细胞的增殖,并诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

高效液相色谱法测定冬凌草中冬凌草甲素及冬凌草乙素的含量

目的：建立冬凌草的质量控制方法。方法：高效液相色谱法同时对冬凌草中冬凌草甲素、冬凌草乙素进行了含量测定。采用C18柱，以甲醇-水(55：45)为流动相，检测波长238nm。结果：冬凌草甲素的浓度在0．152～1．52μg／ml，冬凌草乙素的浓度在0．2～2μg／ml范围内，线性关系良好(冬凌草甲素r=0．9998，n=5；冬凌草乙素r=0．9992，n=5)，平均回收率冬凌草甲素为99．1％，RSD为0．4％；冬凌草乙素为98．0％，RSD为0．6％。结论：该法准确、灵敏、可靠，可用于冬凌草的质量控制。     

冬凌草片中冬凌草甲素的含量测定

目的:通过对25批次农村基本药物冬凌草片的含量测定的结果比较,考察冬凌草片中冬凌草甲素的稳定性.方法:采用HPLC法对冬凌草片中的冬凌草甲素进行含量测定.结果:25批次冬凌草片中24批次含量合格,1批不合格.结论:冬凌草片中冬凌草甲素的稳定性相对较差.     

冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究

目的:研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法:MTT法、Hoechst33258荧光染色、流式细胞分析法和Western blot分析法。结果:冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性,其作用24h的半数有效抑制浓度IC50=(29.7±1.5)μmol.L-1。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生了凋亡;30μmol.L-1冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),p53抑制剂PFTα显著地抑制了ROS的产生,从而抑制了细胞凋亡的发生;在HepG2细胞中,30μmol.L-1冬凌草甲素促进了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,同时线粒体下游蛋白caspase-9,-3的抑制剂明显地抑制了30μmol.L-1冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过p53蛋白诱导ROS的产生,从而导致HepG2细胞凋亡,除此之外冬凌草甲素还通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

莪术醇诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡作用及其抗肿瘤机制探讨

目的探讨莪术醇对人鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡作用及其分子机制。方法以不同浓度的莪术醇处理体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用western blot检测核因子NF-κB、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)及血管内皮生成因子(VEGF)的表达。结果流式细胞仪检测结果显示莪术醇处理组与阴性对照组CNE-2细胞凋亡率有显著性差异(P<0.01),且呈量效关系;Western blot检测显示NF-κB、Bcl-2和VEGF的表达水平随莪术醇剂量的增大而下降(P<0.01)。结论莪术醇能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能是通过抑制NF-κB表达,从而影响了Bcl-2转录激活;此外莪术醇还可抑制VEGF的表达。     

抗癌扶正方抑制HAC移植性肝癌的作用机理研究

目的：探讨国医大师经验方＂抗癌扶正方＂的抗肝癌作用机理。方法：采用HAC移植性肝癌小鼠模型,通过整体动物实验,检测移植性肝癌的瘤体大小的变化、实体瘤坏死面积及肝癌细胞凋亡情况。结果：实验结果显示抗癌扶正方具有良好的抗肝癌作用,可以加速肝癌细胞坏死,促进肿瘤细胞的凋亡。结论：抗癌扶正方具有较好的抑制肝癌活性,其作用可能与促进恶性细胞凋亡有关,有必要进一步深入探讨开发。     

姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导其凋亡的机制研究

目的:探讨姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0mg/L5,mg/L1,0mg/L,20mg/L。姜黄素处理24h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20mg/L姜黄素处理24h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。     

半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的研究半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法以台盼蓝活细胞计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用FCM检测5F对细胞周期和凋亡的影响;用PI/Hoechst33258荧光双染法和DNA ladder检测凋亡。结果 5F作用后,生长曲线测定和MTT比色法实验结果显示,5F对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪、DNA ladder和荧光双染法结果提示5F可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论半边旗提取物5F能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

藤梨根提取物对人胃癌BGC细胞凋亡及Bax蛋白表达的影响

目的：探讨藤梨根提取物对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响及其调控机制。方法：体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,采用不同浓度的藤梨根提取物作用于人胃癌BGC-823细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,采用免疫组织化学方法检测Bax蛋白表达。结果：藤梨根作用于BGC-823,在8～32mg·mL^-1时呈不同程度的促进凋亡;藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调。结论：藤梨根提取物对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,在实验浓度范围内呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这可能与激活Bax蛋白表达有关。     

苦参碱抗人鼻咽癌CNE2细胞的作用及其机制研究

目的：观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞的作用,并探讨其作用机制。方法：倒置相差显微镜观察苦参碱对人鼻咽癌CNE2细胞形态的影响;CCK-8法检测苦参碱对CNE2细胞增殖的影响;流式细胞仪分析苦参碱对CNE2细胞周期的影响;Annexin V-FITC／PI法检测苦参碱对CNE2细胞凋亡影响。结果：苦参碱处理后CNE2细胞形态发生改变：细胞皱缩,变小变圆,空泡明显。苦参碱对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈量效和时效关系。与对照组相比,苦参碱处理后的CNE2细胞G0／G1期比例明显增高,S期、G0／M期比例下降。苦参碱能诱导CNE2细胞的凋亡,其发生率随着药物浓度的增加而增加。结论：苦参碱能抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制CNE2的增殖。     

芦荟大黄素对人膀胱癌细胞T24增殖及凋亡的影响

目的：探讨芦荟大黄素（AE）对人膀胱癌细胞株T24细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法：采用甲基噻唑（MTT）比色法测定AE对体外培养的T24细胞的抑制率,并用作图法计算半数有效抑制浓度（IC5）0;光学显微镜下观察AE作用前后细胞形态学变化;流式细胞技术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测mRNA表达。结果：MTT法测定显示,在5～160μg/mL浓度范围内,AE对膀胱癌T24细胞生长有抑制作用,并呈量-效关系,IC50为31.55μg/mL;光学显微镜下药物IC50剂量（32μg/mL）作用T24细胞后呈现明显的死亡形态变化;流式细胞仪检测显示AE可阻滞T24细胞进入G2/M期;Annexin V-FITC/PI双染法显示早期凋亡细胞数明显增加;R T-PCR法显示myc基因表达下降。结论：AE能抑制人膀胱癌T24细胞生长,并阻断细胞周期和诱导细胞凋亡。其机制可能与myc基因表达下调有关。     

榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响

目的:探讨榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响.方法:分别用20,10,5,2.5,0g·L-1榄香烯注射液处理CNE1细胞12,24,48 h后,Prestoblue法检测细胞的增殖抑制率,光镜观察细胞形态变化,Hoeehst-PI双染、流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果:榄香烯注射液对CNE1细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,处理12,24,48 h的IC50值分别为(10.70±0.26),(7.06±0.11),(5.52±0.10) g·L-1;光镜下显示,给药后细胞大量凋亡,折光性下降;榄香烯注射液可诱导CNE1细胞凋亡.结论:榄香烯注射液能抑制CNE1细胞增殖并诱导其凋亡.     

抗癌扶正方对HAC移植性肝癌的抑制作用及形态影响

目的:探讨国医大师经验方抗癌扶正方的抗肝癌作用以及对实体肝癌的形态影响。方法:采用HAC移植性肝癌小鼠模型,通过整体动物实验,检测该方的抑瘤率及对肝癌形态影响。实验结果显示:抗癌扶正方具有良好的抗肝癌作用,可以加速肝癌细胞坏死。结论:抗癌扶正方具有较好的抑制肝癌活性,有必要进一步深入探讨。