阿司匹林对结肠癌细胞株SW480生长增殖和诱导凋亡作用及其机制研究

目的：研究阿司匹林对人结肠癌细胞株SW480生长增殖的影响和诱导凋亡作用及其机制。方法：以不同浓度（2.5、5.0、10.0mmol／L）的阿司匹林干预体外培养人结肠癌细胞株SW480,MTT比色法观察生长增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,透射电镜扫描观察细胞形态变化,免疫组化染色法检测凋亡相关基因。结果：阿司匹林对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有抑制作用,阻滞细胞周期于G0／G1期,诱导细胞凋亡,降低Bcl-2基因表达,提高Bax基因表达,阿司匹林上述作用呈浓度和时间依赖关系。此外,高浓度阿司匹林可导致细胞坏死。结论：阿司匹林具有拮抗结肠癌细胞株的生长增殖作用,通过调控Bcl-2、Bax等基因表达而诱导细胞凋亡或细胞坏死,阻滞细胞周期可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

阿司匹林对结肠癌细胞株SW480转移侵润潜能影响的初步研究

目的观察阿司匹林对人结肠癌细胞株SW480生长增殖及转移侵润潜能的影响。方法以不同浓度(2.5、5.0、10.0mmol/L)的阿司匹林干预体外培养人结肠癌细胞株SW480,应用生长曲线法和MTT比色法观察其生长增殖,体外侵润法观察细胞转移能力,免疫细胞化学染色法检测细胞表面粘附因子CD44v6及抑癌基因nm-23表达的变化。结果阿司匹林对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有抑制作用,在观察的药物浓度和时间范围内,抑制率可达14.5%~91.8%,其效应呈浓度和时间依赖关系。阿司匹林可抑制CD44v6但促进nm-23蛋白的表达,明显降低肿瘤细胞穿透matrigel膜的能力。结论阿司匹林具有拮抗结肠癌细胞株的生长增殖作用,并降低其转移侵润潜能;抑制CD44v6蛋白,促进nm-23蛋白表达可能是阿司匹林降低细胞侵润能力的分子机理之一。     

辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响

目的 了解辣椒素对人结肠癌 SW480 细胞株增殖作用的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT检测法,观察终浓度100～400 μmol/L的辣椒素作用24、48 h对人结肠癌SW480 细胞株生长作用的影响;采用流式细胞仪检测400 μmol/L辣椒素作用人结肠癌 SW480 细胞株后其细胞周期变化和凋亡率.结果 辣椒素能抑制结肠癌 SW480 细胞株增殖,呈浓度、时间依赖性.在400μmol/L辣椒素作用下,结肠癌SW480细胞株停滞于G0/G1期.辣椒素作用24、48 h,SW480 细胞凋亡率升高(F=8.73、8.10,q=4.86～7.30,P<0.01).结论 辣椒素抑制 SW480 细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能是阻滞细胞周期于G0/G1,期.     

大豆异黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究大豆异黄酮对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响并探讨其作用机制?方法:分离大鼠胸主动脉,组织贴块法培养VSMC,以AngⅡ为诱导剂,建立VSMC细胞增殖模型?应用MTT法,CellTiter-Glo■ Assay法检测细胞增殖,观察不同浓度的大豆异黄酮及亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对AngⅡ诱导的VSMC增殖的影响?硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)含量;化学比色法测定一氧化氮合酶(NOS),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;半定量RT-PCR检测VSMC iNOS mRNA的表达?结果:大豆异黄酮能剂量依赖性的抑制VSMC增殖,该作用可被L-NAME部分抵消;大豆异黄酮能升高NOS?iNOS和NO水平,增加iNOS mRNA的表达?结论:大豆异黄酮可呈剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,该作用可能通过上调iNOS基因表达?升高NO水平实现的?     

大豆异黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉内皮细胞增殖的影响

目的:观察大豆异黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠胸主动脉内皮细胞(RAECs)增殖的影响及机制。方法:组织贴块法培养RAECs,AngⅡ刺激RAECs建立细胞增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖,观察不同浓度大豆异黄酮、亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME,100μmol/L)对AngⅡ诱导RAECs增殖的影响。硝酸还原酶及化学比色法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测RAECs iNOS mR-NA的表达。结果:大豆异黄酮在0.1～1.0μmol/L呈剂量及时间依赖性抑制RAECs增殖,但可被L-NAME部分抵消;大豆异黄酮能升高NO、NOS和iNOS水平,增加iNOS mRNA的表达。结论:大豆异黄酮对AngⅡ诱导的RAECs增殖有抑制作用;而上调iNOS基因表达,升高NO水平可能是其发挥作用的机制。     

藤黄酸抑制人结肠癌SW480细胞增殖过程中APC蛋白的表达变化

目的 观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和APC蛋白表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制.方法 以不同浓度(0、0.5、1、4μg/ml)的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48 h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析APC蛋白的变化.结果 1 μg/ml以上浓度的藤黄酸可以显著抑制人结肠癌细胞株SW480细胞增殖,且随浓度增加效果增强,随着时间增加抑制率显著增加(P＜0.01).藤黄酸浓度达到4 μg/ml时,C2/M期细胞达到54.74％;藤黄酸浓度为0、0.5、1、4μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为(0.17±0.08)％、(0.85±0.19)％、(7.12±1.21)％、(15.87±1.59)％.用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24 h,APC蛋白的表达随药物浓度的升高而增加(P＜0.01).结论 藤黄酸能够抑制人结肠癌细胞株SW480增殖并诱导其凋亡,干扰SW480细胞周期使其阻断于G2/M期,高表达APC蛋白有可能是藤黄酸抗癌作用的重要机制.     

光动力作用对人结肠癌细胞转录因子激活蛋白-4表达的影响

目的观察不同浓度光敏剂酞菁锌对结肠癌细胞株SW480的生长抑制作用及其对转录因子激活蛋白-4(AP-4)表达的影响。方法应用CCK-8方法评估光动力作用后SW480细胞的存活率,通过流式细胞技术、RT-PCR技术、Western blot技术检测光敏剂酞菁锌光动力作用后对SW480细胞凋亡和AP-4基因表达等生物学行为的影响。结果酞菁锌光动力治疗对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和光照剂量依赖性;流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随酞菁锌浓度增加逐步上升。2.0μg/mL酞菁锌光动力作用SW480细胞48 h后其AP-4 mRNA水平下降了81%,培养液上清液AP-4蛋白浓度下降了75.6%(P<0.01)。结论应用光敏剂酞菁锌光动力作用能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为结肠癌治疗提供了新的思路和手段。     

丁酸钠对结肠癌细胞SW480凋亡及Survivin基因和VEGF表达水平的影响

目的:观察丁酸钠对结肠癌细胞株SW480的生长抑制、凋亡情况以及对生成素(Survivin)表达水平的影响,探讨其预防结肠癌的作用机制。方法:人传代结肠癌细胞株SW480经不同浓度丁酸钠处理后,在不同时段收集细胞,分别用四唑蓝法检测肿瘤细胞生长增殖率,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,免疫细胞化学技术观察对Survivin基因和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。结果:随着培养液中丁酸浓度的不断升高和培养时间的延长,SW480细胞的生长逐渐受到抑制。G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,细胞凋亡率逐渐增高。Sur-vivin基因和VEGF随着丁酸浓度的不断升高而表达下降。结论:丁酸钠能抑制SW480细胞株增生,诱导凋亡,并抑制Survivin基因和VEGF表达。     

阿司匹林对人结肠癌细胞中肿瘤干细胞标记物CD44表达的影响

目的:观察阿司匹林对人结肠癌肿瘤干细胞标志物CD44的影响,以探讨其对结肠癌干细胞的作用。方法:Western blot检测不同浓度阿司匹林作用后CD44在人结肠癌细胞株HT-29和SW480中的表达情况。结果:Western blot结果显示肿瘤干细胞标志物CD44在人结肠癌细胞株HT-29和SW480中均有表达,阿司匹林能降低HT-29和SW480中CD44蛋白的表达,并具有良好的量-效关系(P0.05);两种细胞中CD44蛋白的表达比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:阿司匹林能降低结肠癌细胞株HT-29和SW480中CD44的表达,并对结肠癌肿瘤干细胞有抑制作用。     

奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中caspase-8的活化

目的 探讨奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中半胱天冬酶亚类8(caspase-8)的变化.方法 以不同浓度(0,0.03,4.0,100 μg/ml)的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24,36,48 h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性.流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;奥沙利铂浓度为0,0.03,4.0,100 μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为(0.15±0.09)%、(0.43 ±0.17)%、(6.92 ±0.81)%、(11.76 ±1.25)%.用不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24 h,caspase-8酶原的表达随药物浓度的增加而减少,caspase-8 mRNA水平呈浓度依赖性的增加(P＜0.01).用4.0 μg-ml奥沙利铂分别处理细胞0.5,2,6,12,24,36 h,caspase-8活性于2 h开始升高,12 h达高峰(P＜0.01);用不同浓度的奥沙利铂处理细胞12 h,caspase-8活性呈浓度依赖性的升高(P＜0.01).结论 奥沙利铂能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达上调有关.     

猪松弛素对人肺微血管内皮细胞产生一氧化氮的影响

目的 观察猪松弛素(pRLX)对人肺微血管内皮细胞(HMVECs)产生一氧化氮(NO)的影响,探讨这种效应的可能.机制.方法 Westemb lotting检测不同浓度pRLX作用下HMVEC s诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)和原生型一氧化氮合成酶(cNOS)蛋白表达;Griess法检测不同浓度pRLX分别在不同的作用时间下对HMVECsNO产量的影响;Griess法检测选择性iNOS抑制剂氨基胍、非选择性NOS抑制剂L-单甲基精氨酸和NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸对pRLX刺激HMVECs产生NO效应的影响.结果 pRLX促进HMVECs iNOS蛋白表达,但对cNOS表达影响不显著;DRLX呈浓度依赖性促进HMVECs NO产量,但24 h至96 h范围内各pRLX作用时间组之间NO产量无显著差异;氨基胍、L-单甲基精氨酸和吡咯烷二硫氨基甲酸均能阻断pRLX促进HMVECs产生NO的效应.结论 pRLX促进HMVECs iNOS表达和NO生成.     

复方瑞康欣对吗啡依赖SK-N-SH细胞NOS活性和NO浓度的影响

目的：观察复方瑞康欣对吗啡依赖的SK-N-SH细胞各型NOS活性和NO浓度的影响并探讨其机制。方法：SK-N-SH细胞周期同步化后,用吗啡（10μmol/L）作用48h,然后用复方瑞康欣含药血清干预12h,再用纳洛酮（10μmol/L）作用10min后,检测NOS活性和NO含量。结果：复方瑞康欣含药血清能抑制总NOS和cNOS活性（P〈0.01）,从而降低NO含量（P〈0.01）,但对iNOS活性没有影响（P〉0.05）。结论：复方瑞康欣的戒毒作用与NOS活性和NO水平有关。     

苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌细胞株增殖的抑制作用及机制研究

【目的】观察苦参碱对K-ras基因突变型结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】以不同浓度苦参碱干预K-ras基因突变型人结肠癌SW480细胞,采用新型四唑氮盐(MTS)做比色分析测定细胞增殖,流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡,细胞划痕法观察细胞侵袭转移能力的变化,Western blotting方法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路下游关键激酶MEK1/2蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,0.125~1 mg/m L浓度的苦参碱能显著抑制SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,有效抑制结肠癌细胞的移行,降低MEK1/2蛋白的表达(P0.05),其作用强度随药物浓度增加有升高的趋势。【结论】苦参碱可能通过下调MAPK信号通路下游MEK1/2蛋白的表达,有效抑制SW480细胞的增殖和移行,并促进其凋亡。     

外源性一氧化氮对小鼠神经干细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨外源性一氧化氮(NO)对小鼠神经干细胞(NSC)增殖的抑制作用. 方法: 用含表皮生长因子(EGF)的条件培养基原代培养NSC,在培养基中加入不同浓度的硝普钠(SNP)作为NO的体外供体. 24 h后用Griess还原法检测细胞上清液中NO的释放量;取一半细胞进行MTT试验,另一半细胞换成无SNP的条件培养基继续培养24 h,再行MTT试验. 另取经SNP抑制24 h后的NSC进行血清诱导分化试验和免疫组化试验检测其NOS表达. 结果: 24 h后细胞上清液中NO释放量随SNP浓度的增高而增加;MTT试验反映经SNP作用后的NSC活细胞数较对照组明显减少(P<0.01);经SNP作用后的NSC在解除抑制后仍能保持旺盛的增殖能力并能被诱导分化为神经细胞样细胞,这些NSC表达nNOS和eNOS,而不表达iNOS. 结论: 外源性NO对培养状态下的小鼠NSC有抑制作用.     

NK细胞联合西妥昔单抗对大肠癌细胞ADCC作用的研究

目的比较3株肠癌细胞株(LOVO、SW480、SW620)与自然杀伤(natural killer,NK)细胞、西妥昔单抗(Cetuximab)混合作用之后,NK细胞抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell cytotoxicity,ADCC),探讨Cetuximab抗肿瘤过程中ADCC的作用。方法免疫组织化学方法检测3种不同肠癌细胞系(LOVO、SW480、SW620)的EGFR表达水平;MTT法检测6种不同浓度Cetuximab作用48h后肿瘤细胞的生长抑制情况;NK细胞与Cetuximab包被的肿瘤细胞共孵育,LDH法检测NK细胞的ADCC功能变化。结果免疫组织化学结果显示,3株细胞EGFR表达:LOVO(),SW480(+),SW620(-);Cetuximab对LOVO细胞和SW480细胞的生长抑制呈剂量依赖,对SW620细胞无抑制作用;LOVO细胞和SW480细胞经Cetuximab处理后,NK细胞的ADCC作用均增强且有统计学意义(P<0.05)。结论单独的Cetuximab可抑制EGFR阳性的LOVO细胞和SW480细胞,而对EGFR阴性的SW620细胞生长抑制作用不明显,所选的2株EGFR阳性肿瘤细胞都可被Cetuximab所介导ADCC作用所抑制,高EGFR表达的肿瘤细胞更加敏感。     

雷公藤甲素对大肠癌细胞细胞周期的调控作用

目的:观察雷公藤甲素对大肠癌SW480细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外培养大肠癌SW480细胞,分别给予不同浓度的雷公藤甲素进行干预,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物对SW480细胞生长的抑制率,流式细胞术(FCM)测定SW480细胞周期及凋亡率变化。结果:MTT实验结果显示当药物浓度在20～100 mol/L之间时,体外雷公藤甲素可明显抑制SW480细胞的生长;FCM检测显示药物作用后,细胞凋亡率没有明显变化,但是S期细胞数目显著增多,细胞周期受到明显阻滞。结论:雷公藤甲素对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其机制可能是使细胞周期发生阻滞。     

全反式维甲酸对大肠癌细胞间隙连接蛋白Cx32与Cx43表达及增殖和迁移能力的影响

目的:检测全反式维甲酸(ATRA)对大肠癌细胞Caco-2及SW480增殖、迁移及间隙连接蛋白Cx32与Cx43胞膜表达的影响,分析其对大肠癌效应作用机制.方法:取对数生长期大肠癌细胞分为ATRA处理组及阴性对照组,以1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理Ca...     

选择性及非选择性COX-2抑制剂对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨选择性及非选择性环氧合酶-2（cylooxygenase-2,COX-2）抑制剂对体外培养的结肠癌细胞生长的影响及凋亡的诱导作用。方法体外培养HT-29、SW480及LS174-T三种结肠癌细胞,分别加入不同浓度的非选择性COX-2抑制剂阿司匹林（aspirin）、选择性COX-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）及美洛昔康（meloxicam）作用于HT-29及SW480细胞。采用MTT法检测结肠癌细胞增殖;用免疫细胞化学法及免疫印迹技术分别检测结肠癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞COX-2的表达;流式细胞技术分析对结肠癌细胞周期的影响;用Annexin V／PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果aspirin、celecoxib及meloxicam均能有效抑制体外培养的HT-29、SW480结肠癌细胞生长,并具有良好的量-效关系。Western blot表明,HT-29细胞表达COX-2,而SW480细胞不表达COX-2。Aspirin及celecoxib处理组细胞PCNA表达较对照组明显下调。10mmol／L的aspirin及50μmol／L的celecoxib能诱导HT-29及SW480细胞凋亡,凋亡率分别为4．8％,17．7％;5．1％,20．4％。结论选择性及非选择性COX-2抑制剂均能有效抑制结肠癌细胞生长,这种作用亦存在于COX-2阴性表达的结肠癌细胞。     

SD幼鼠内毒素血症小肠iNOS免疫活性表达

目的：探讨SD幼鼠内毒素血症时小肠iNOS免疫活性表达。方法：用生物化学方法测定内毒素血症幼鼠小肠组织匀浆中NOS和NO水平,用免疫组织化学方法显示小肠诱导性一氧化氮合成酶（iNOS）免疫活性表达。结果：内毒素可使NOS活性增加,NO浓度提高;并且NOS和NO之间有较好相关性;内毒素可增加小肠巨噬细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的iNOS表达。结论：小肠iNOS免疫活性表达和小肠匀浆中NOS和NO的峰值均在内毒素刺激后6～12h。