Angiopep-2修饰的脑靶向多肽胶束的制备及体外评价

目的 构建angiopep-2修饰的硫辛酸-聚精氨酸组氨酸（LHRss）多肽纳米胶束并包载抗肿瘤药物多柔比星（DOX）的脑胶质瘤靶向纳米给药系统（LHRss-An/DOX）。方法 采用超声乳化法制备包载化疗药物DOX的多肽胶束LHRss-An/DOX,检测复合物的粒径、zeta电位和外观形态;测定载药量和包封率,并对其体外释放特性进行考察;通过体外血脑屏障（BBB）模型考察载药胶束的跨膜转运效率,使用激光扫描共聚焦显微镜观察DOX胞内的分布情况及对脑胶质瘤的靶向性。结果 胶束LHRss-An/DOX呈球形,平均粒径为（100.9±8.7） nm,聚合物分散性指数为0.232,电位为（28.8±3.3） mV,最佳药载比为40%,载药量为15.8%,包封率为55.3%,在pH 7.4、pH 5.5和pH 5.5+10 mmol/L DL-二硫苏糖醇（DTT）环境下72 h内的累积释放率分别为（60.3±2.6）%、（84.1±3.9）%和（96.6±2.7）%;LHRss-An/DOX的跨BBB效率分别是LHRss/DOX和游离DOX的2.04和4.27倍,差异有统计学意义（P<0.05）;脑胶质瘤细胞U251摄取LHRss-An/DOX的荧光强度强于LHRss/DOX和游离DOX的荧光强度。结论 经过angiopep-2修饰的载药纳米胶束的跨BBB能力及脑胶质瘤的靶向性显著增强,是一种潜在高效的靶向胶质瘤给药系统。     

甘草次酸修饰的壳寡糖-硬脂酸药物载体的合成及其胶束性质研究

目的 制备壳寡糖-硬脂酸（COS-SA）及具有肝靶向性的甘草次酸-壳寡糖-硬脂酸（GA-COS-SA）药物载体,并研究其形成胶束的理化性质。方法 采用碳二亚胺作为偶联剂,使硬脂酸、甘草次酸先后与壳寡糖中氨基发生取代反应,制得两种壳寡糖嫁接聚合物。采用超声方法制备二者的胶束溶液,染料增溶法测定二者的临界胶束浓度（CMC）,激光光散射仪测定胶束的粒径,透射电镜观察胶束的形态。结果 成功制得两种壳寡糖聚合物,所形成的胶束具有较低的CMC,胶束粒子呈较规则的球形,粒径分别为250、228 nm,且随疏水链段取代度增加,粒径变小,CMC降低。结论 胶束具有较好的物理化学性质,是具有发展前景的药物载体。     

靶向/促穿膜双功能肽介导的肿瘤靶向基因递送系统的构建及其抗肿瘤作用研究

【立论依据】 基因治疗(gene therapy)现已成为攻克肿瘤最具潜力,也是研究最活跃的领域,许多学者为基因治疗能成功应用于临床进行了大量相关研究。要成功地实施基因治疗,必须具备3个关键因素:针对性的治疗基因;基因传递系统;基因表达调节系统。基因传递系统是基因治疗的核心技术,而转染效率与细胞毒性相矛盾、稳定性与穿膜能力相矛盾以及靶向性差,是基因递送系统存在的3个关键问题。本课题旨在为肿瘤的基因治疗寻找到一种兼具高转染效率、高肿瘤细胞和组织特异靶向性及良好安全性和体内外稳定性的基因递药系统。 【设计思路】 首选通过将低分子量聚乙烯亚胺(LMW-PEI)连接到能形成单分子聚合物胶束的普朗尼克(Pluronic)表面,制得PEI衍生物;然后采用固相法合成兼具靶向和促穿膜作用的双功能短肽DR5-TAT(D21),其中DR5短肽对正常细胞无毒副作用、对肿瘤细胞具有高特异性和高选择性且自身具有抗肿瘤活性,TAT是具有促细胞穿膜作用的穿膜肽;再利用SMCC法将D21与Pluronic-PEI偶联,构建肿瘤靶向纳米基因载体递送系统(D21-Pluronic-PEI),并对其体内外性能进行评价。 【实验内容】 (1) Pluronic-PEI的合成,DNA/Pluronic-PEI纳米胶束的制备及其性能考察;(2) D21-Pluronic-PEI的构建及其性能考察; (3)载p53的靶向纳米非病毒基因给药系统 (p53/D21-Pluronic-PEI)的制备及其体内靶向特性和抗肿瘤效果评价 【材料】 分支状聚乙烯亚胺Pluronic 123 (Mw=2000 Da),DR5短肽,细胞穿膜肽TAT,p53等。 【可行性】 项目组有一定的专业基础,具有较强的创新意识和研究探索精神,具备开展该项目的素质与能力。该实验设计思路新颖、制定的项目方案切实可行,具有可靠的实施条件,可以保证该训练计划实施成效。项目组所在学校对学生实践创新及实验实训一贯积极支持和鼓励,匹配经费到位,配套扶持政策完善。因此,项目开展所需的人员、场地、实验设备、材料和经费等条件均可以保证。 【创新性】 (1)本课题拟采用不同PO/EO比的Pluronic连接低分子量PEI,并在此基础上合成具有可实现肿瘤靶向和具促穿膜作用的双功能短肽DR5-TAT(D21),将其与所得的PEI衍生物偶联,得到高效、低毒的新型基因靶向载体系统 (D21-Pluronic-PEI),该研究国内外尚未见报道。(2)重组人p53腺病毒注射液已应用于临床,但该药选择的载体为病毒基因载体-5型腺病毒,本课题拟采用高效,低毒且可主动靶向肿瘤细胞的新型聚阳离子载体系统(D21-Pluronic-PEI)作为p53载体,拟为p53的应用开辟新途径,国内外未见相关报道,具有潜在的应用价值。     

针刺得气对健康受试者脑功能反应影响的研究

[目的] 探索针刺得气对受试者脑功能的影响，为客观表征针刺得气提供实验依据。[方法] 对30例健康受试者的手三里穴分别施行得气与不得气针刺操作，以视觉模拟评分（VAS）量表评价受试者主观得气感，并运用功能性近红外光谱（fNIRS）技术全程采集受试者脑功能信号，比较针刺得气与不得气时受试者的脑激活和脑连接情况；分析主观得气感与脑功能激活的相关性。[结果] 针刺得气激活了双侧额叶岛盖部、背外侧前额叶皮质区、左侧三角部及右侧额极区，使同侧顶叶和颞叶、左侧颞叶与右侧顶叶之间的脑功能连接增强；受试者得气感与脑功能反应具有相关性。[结论] 针刺得气可激活受试者双侧额叶，增强不同脑区间的功能连接性，受试者脑功能反应可能有助于客观表征针刺得气。     

迷走神经刺激对难治性癫痫脑功能连接的即时效应

目的：研究迷走神经刺激（vagal nerve stimulation，VNS）对药物难治性癫痫（drug-resistant epilepsy，DRE）患者脑功能连接的即时效应，探讨VNS抑制癫痫发作的作用机制。方法：采集14例正常被试静息态和14例DRE患者静息态和刺激态的脑磁图数据，分6个频段分析即时VNS引起的DRE患者脑功能连接的改变。结果：在静息态，DRE患者相对正常被试，功能连接显著增强。当VNS发生时，DRE患者有显著降低的功能连接，包括theta频段的左侧额中回-右侧嗅皮质和左侧丘脑-右侧距状裂周围皮层，alpha频段的左侧丘脑-左侧颞极颞中回之间的连接。结论：即时VNS可以降低DRE患者脑功能连接，即降低患者脑网络对发作的易损性，这可能是VNS调节DRE患者神经系统抑制癫痫发作的重要机制。     

OX26/ApoE共修饰的载小檗碱介孔二氧化硅纳米粒药动学研究

[目的] 制备羧基功能化介孔二氧化硅纳米载体颗粒（MSNs-COOH）,通过表面偶联转铁蛋白受体单克隆抗体（OX26）和载脂蛋白E（ApoE）,增加包载小檗碱（BBR）的介孔二氧化硅纳米颗粒透过血脑屏障并靶向于脑部能力。[方法] 采用模板剂法制备MSNs-COOH,碳二亚胺法偶联OX26和ApoE,浸渍法将BBR包载于孔道内。通过透射电子显微镜（TEM）、激光粒度分析仪、氮气吸脱附法等对载体进行表征,透析袋法考察制剂在体外释放特性,尾静脉注射给药后测定大鼠血浆及脑组织中药物浓度,计算药动学参数,评价制剂脑部靶向性。[结果] 制备的MSNs-COOH在透射电镜下为有序孔道的球形颗粒,平均粒径为（129.8±1.3）nm,载药量为（10.71-20.39）%,体外释放结果显示该载体具有缓释特性,药动学参数表明制剂组的AUC与BBR溶液组有显著性差别,脑靶向指数大于1。[结论] 所构建的OX26/ApoE共修饰的小檗碱介孔二氧化硅纳米载体能改善药物口服吸收差的缺点,实现药物的脑部靶向治疗,具有一定的脑靶向性。     

壳聚糖微／纳米粒在定向给药系统中的应用研究

目的：介绍壳聚糖微／纳米粒在新型定向给药系统中的应用,为发展安全高效的壳聚糖微／纳米粒定向给药系统提供参考。方法：综合近年来出版的有关文献,对壳聚糖基本性质,定位给药于各组织部位进行了探讨。结果：壳聚糖微／纳米粒可应用于脑、眼、鼻、口、肺、胃、小肠、结肠等器官靶向给药。结论：壳聚糖微／纳米粒作为一种新型药用辅料,在定位给药系统中已经得到了开发和应用。     

奥曲肽修饰的N-辛基-O,N-羧甲基壳聚糖的合成、表征及其作为阿霉素递送载体的研究

以奥曲肽（OCT）为靶基团修饰两亲性壳聚糖衍生物N-辛基-O,N-羧甲基壳聚糖(OCC）,并考察其作为抗肿瘤药物阿霉素（DOX）增溶载体的可行性。以聚乙二醇（PEG）为化学连接臂,通过活化酯反应将OCT偶联于OCC上,并通过¹H NMR对其进行结构表征;采用透析法制备包载阿霉素（DOX）的主动靶向胶束（DOX-OCT-PEG-OCC）,并考察其理化性质;采用透析法研究DOX-OCT-PEG-OCC胶束在不同介质中的释放动力学,并以DOX-OCC为对照,通过MTT试验对DOX-OCT-PEG-OCC胶束的抗肿瘤活性进行了评价。OCT以PEG为连接臂成功偶联于OCC的游离羧基上,该偶联产物在水介质中能自组装形成纳米胶束,对DOX具有优越的增溶效果,载药量高达35.7%,包封率为97.5%,粒径为138.8 nm,多分散系数为0.184,Zeta电位为-34.0 mV,粉末衍射试验证实DOX以无定型或分子分散状态增溶于胶束疏水内核中;DOX-OCT-PEG-OCC胶束体外释放行为呈现非零级释药特征,释放速度具有一定pH依赖性。体外细胞毒实验结果表明：DOX-OCT-PEG-OCC胶束比DOX-OCC胶束对生长抑素受体（SSTR）过度表达的人乳腺细胞MCF-7具有更强的细胞毒性,而对不表达SSTR的人胚肺成纤维细胞WI-38细胞毒性没有显著差异。结果表明:OCT-PEG-OCC是阿霉素优良的增溶和细胞主动靶向递送载体,具有良好的应用前景。     

青蒿素分子印迹聚合物分子识别性研究

目的 合成对青蒿素具有特异识别能力的分子印迹聚合物。方法 采用分子印迹技术合成了以青蒿素为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂的青蒿素分子印迹聚合物。运用平衡结合试验研究了聚合物的吸附特性和选择识别能力。结果 Scatchard模型分析表明,该分子印迹聚合物在识别青蒿素分子的过程中存在两类不同的结合位点。高亲和力结合位点的离解常数K_d1＝1.87 mmol/L ,最大表观结合常数Q_MAX1＝27.99 μmol/g;低亲和力结合位点的离解常数K_d2＝48.5 mmol/L,最大表观结合常数Q_MAX2＝334.4 μmol/g。结论 结合底物的实验结果表明,青蒿素分子印迹聚合物对青蒿素具有良好的特征吸附和选择识别性能,为天然产物中高效分离纯化活性成分青蒿素提供了一种新型材料。     

中药柴贝止痫汤对难治性癫痫大鼠多药耐药基因MDR1表达的研究

[目的]通过比较不同药物干预对多药耐药基因1(MDR1)的影响,观察难治性癫痫大鼠脑内MDR1mRNA的表达和分布,探讨难治性癫痫多药耐药可能的分子病理机制,及中药复方柴贝止痫汤对其表达的影响。[方法]以不同药物干预下,观察癫痫发作的平均持续时间、癫痫发作级别,以判定、分析药物的疗效。采用荧光实时定量聚合敏链反应(PCR)的方法,分析、比较多药耐药基因MDR1在各组大鼠海马和皮质部位的表达和分布。[结论]与正常组大鼠比较,各致痫组MDR1mRNA表达含量均有明显增高,具有统计学意义(P<0.05)。[结论]癫痫的反复发作可以诱导慢性难治性癫痫大鼠海马和皮质MDR1mRNA的表达,中药复方柴贝止痫汤具有一定抑制MDR1药物转运体功能。     

Angiopep-2修饰的装载不同药物的纳米系统在胶质瘤中的应用

脑胶质瘤是常见的原发性颅内肿瘤,其难以治愈的主要原因为血脑脊液屏障（blood-cerebrospinal fluid barrier）的存在阻碍了化疗药物进入脑内,大大降低了有效药物浓度。此外,肉眼可见的肿瘤已经处于中后期,失去了最佳的治疗时机。Angiopep-2为低密度脂蛋白受体相关蛋白（low density lipoprotein receptor related protein, LRP）的配体,血脑脊液屏障和胶质瘤细胞表面都高度表达LRP受体。Angiopep-2具有靶向性,将其修饰到装载化疗药物和显像剂的纳米粒子表面,可以实现靶向释药,提高胶质瘤成像效果。本文综述了以Angiopep-2修饰的装载不同药物的纳米系统在胶质瘤中的应用,为胶质瘤的诊断和治疗提供了思路和方法。     

N-脂肪酰-N-三甲基壳聚糖的合成及其对蛇床子素的增溶作用

目的 合成2类两亲性壳聚糖（chitosan,CS）衍生物,自组装成聚合物胶束作为难溶性药物的新型递药载体。方法 先将CS与碘甲烷反应生成N-三甲基壳聚糖（trimethyl chitosan,TMC）,然后在TMC的氨基上引入长链脂肪酸（软脂酸和癸酸）,合成了两亲性的N-脂肪酰-N-三甲基壳聚糖（N-fatty acyl-N-Trimethyl chitosan,FA-TMC）衍生物。通过FT-IR、¹H-NMR和元素分析法,对衍生物的分子结构和N-位取代度进行表征,同时以疏水性药物蛇床子素（osthole,OST）为模型,探讨其胶束增溶特性。结果 实验合成了2类6种不同的新型CS衍生物,分析显示季胺化程度和脂肪酰基接枝率对FA-TMC的胶束性质有较大的影响;对于超声法制备的OST载药胶束,季胺化程度为62.00%、软脂酰基接枝率为13.37%的N-软脂酰-N-三甲基壳聚糖（N-palmitoyl-N-trimethyl chitosan,PA-TMC）和季胺化程度为43.06%、癸酰基接枝率为22.00%的N-癸酰-N-三甲基壳聚糖（N-caprinoyl-N-trimethyl chitosan,CA-TMC）的包封率分别为76.67%、79.11%,载药量分别为19.01%、19.08%,可使OST在水中的溶解度提高两个数量级。结论 FA-TMC是一种具有潜在应用价值的增溶载体,其在水中能自组装形成胶束,并对OST有明显的增溶作用,为OST制剂深入研究与应用奠定了基础。     

还原性多肽共载基因和化学治疗药载体的构建与体外评价

目的 制备一种应用于共载基因和化疗药的硫辛酸（LA）修饰的非内吞机制进入细胞的固有无序正常蛋白-细胞质定位的内化肽6（CL）的纳米复合物(LA-CL),并考察其对HEK293细胞的转染效率、胞摄取情况,以及体外释放规律。方法 以不同比例（2.5%、5%、10%、20%）半胱氨酸作为交联剂,合成四种不同交联度的LA-CLss (LA-CLss1, LA-CLss2,LA-CLss3, LA-CLss4),利用1H-NMR和凝胶色谱鉴定合成的LA-CLss。取增强绿色荧光蛋白质粒(plasmid Enhanced Green Fluorescent Protein, pEGFP) 和LA-CLss以不同氮磷比（N/P）（2.5, 5, 10, 20, 40, 80）自组装形成纳米复合物,粒度测定仪测定复合物的粒径和zeta电位,琼脂糖凝胶电泳测定载体LA-CLss对pEGFP的包裹能力以及保护作用。用超声乳化法制备载多西他赛的载药胶束,并用芘荧光探针法测定其临界胶束浓度。用LA-CLss/ pEGFP纳米复合物与人胚肾HEK293细胞共同培养,考察不同交联度复合物的细胞转染情况。结果 通过核磁结果确定LA-CLss合成成功;在N/P=40时,HEK293细胞对LA-CLss3/ pEGFP的转染效率高于其他四种 复合物(LA-CLss, LA-CLss1,LA-CLss2, LA-CLss4)。超声乳化法制备的载药胶束包封率为85.25 ± 0.04%,载药量为8.81 ± 0.02%。细胞摄取结果表明该载体可以有效地将基因递送进细胞内。体外释放实验结果表明该多肽胶束具有还原性条件敏感释药行为。结论 制备的LA-CLss纳米复合物有望成为一种高效的共载基因和化疗药的载体。     

脑靶向硫化银量子点的构建及体外跨血脑屏障作用

目的：设计脑胶质瘤靶向的Ag2S量子点及Ag2S-PEG量子点近红外二区成像探针,并比较修饰脑靶向肽Angiopep-2（ANG）前、后量子点通过体外血脑屏障及靶向脑胶质瘤细胞的能力。方法：Ag2S量子点及Ag2S-PEG量子点和脑靶向肽ANG经EDC和NHS介导,发生氨基和羧基的缩合反应进行连接。对Ag2S、Ag2S-ANG、Ag2S-PEG、Ag2S-PEG-ANG量子点的结构及粒径进行琼脂糖电泳、动态光散射及透射电镜等表征,并评价其对U87 MG和bEnd.3细胞的细胞毒性以及穿透体外血脑屏障的能力。结果：修饰ANG肽后的Ag2S-ANG、Ag2S-PEG-ANG量子点水合粒径较Ag2S、Ag2S-PEG增大,差异有统计学意义（P＜0.05）;表面Zeta电位正电性增强;在琼脂糖电泳中迁移距离变短。MTT实验发现,Ag2S、Ag2S-ANG、Ag2S-PEG、Ag2S-PEG-ANG四种量子点在100 μg/mL以下对U87 MG和bEnd.3细胞的存活率没有影响。在体外血脑屏障模型中,Ag2S-ANG、Ag2S-PEG和Ag2S-PEG-ANG均能够穿过上层的bEnd.3细胞到达下层培养基中,而Ag2S-ANG被下层的U87 MG细胞摄取的量有较大提升,约是Ag2S量子点的6倍,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：本研究成功构建了2种脑靶向硫化银量子点,其中Ag2S-ANG能够跨体外血脑屏障系统,靶向脑胶质瘤细胞,为进一步的体内脑靶向成像奠定了基础。     

超高分辨率CT靶扫描对肺结节的诊断价值

目的 探讨1 024超高分辨率CT靶扫描对直径8mm以下肺结节的诊断价值及其对随访方案的影响.方法 前瞻性分析2015年7月-2016年8月于同济大学附属上海市肺科医院影像科门诊进行1 024超高分辨率CT靶扫描的57例患者的67个肺结节资料.肺结节平均直径为(5.97±1.34) mm.对其中32个结节进行手术切除,病理结果提示2个结节为良性,9个结节为不典型腺瘤样增生(AAH),14个结节为原位腺癌(AIS),7个结节为微浸润腺癌(MIA);16个结节怀疑恶性但未手术;19个结节随访或考虑良性病灶.对67个肺结节均行常规CT扫描和1 024超高分辨率CT靶扫描,由3位有3～10年工作经验的影像科医师阅片,评价图像质量、判断结节类型、评估诊断信心、给出诊断结果和处理方案,并对阅片结果进行统计学分析.结果 1 024超高分辨率CT靶扫描在显示肺结节内部混杂密度、结节边缘、分叶征等方面优于常规CT检查(P＜0.05),两种扫描图像对判断纯磨玻璃结节和混杂密度结节的差异有统计学意义(P＜0.05).与常规CT比较,1 024超高分辨率CT靶扫描的诊断正确率增高(P＜0.01),医师诊断信心提高(P＜0.05),且基于两套图像给出的处理方案差异有统计学意义(P＜0.05),其差异主要体现为随访例数减少、手术例数和无需随访例数增加.结论 1 024超高分辨率CT靶扫描对直径8mm以下肺结节可较常规CT检查提供更好的图像质量.对通过常规CT检查难以确诊或诊断信心不充足的结节,可采用1 024超高分辨率CT靶扫描进一步检查.     

早期高分化浆液性囊腺卵巢癌中Ptch及Gli2表达情况

目的 研究hedgehog （Hh）信号通路中Ptch及Gli2蛋白在卵巢癌中的表达及其临床意义。方法 60例早期高分化浆液性囊腺卵巢癌组织标本为实验组,30例正常卵巢组织标本为对照组,应用免疫组化法检测Ptch及Gli2在实验组及对照组中的表达。结果 Ptch及Gli2在实验组的表达均高于对照组（P<0.05）。结论 Hh信号通路在卵巢癌组织中异常激活,且该信号通路可能参与卵巢癌的发生、发展过程,进而提示Hh是卵巢癌侵袭转移的一个重要信号通路,为进一步深化卵巢癌的机制研究和靶向治疗提供了一个新的思路。     

糖化血红蛋白达标的2型糖尿病患者血糖波动与尿白蛋白/肌酐的关系探讨

目的 探讨糖化血红蛋白（HbA1c）达标的2型糖尿病患者血糖波动与尿白蛋白/尿肌酐（UACR）的关系。方法 选择合肥市第二人民医院2010年8月至2016年3月收治的2型糖尿病患者（HbA1c<7.0%）107例,根据UACR结果分为正常组21例（NUA组）和升高组86例（MUA组）。动态血糖监测系统（CGMS）对受试者进行连续72 h的血糖监测,计算出平均血糖（MBG）和平均血糖波动幅度（MAGE）,同时检测血肌酐（Scr）、谷丙转氨酶（ALT）,测量血压和计算体质指数（BMI）。结果 MUA组MAGE显著高于NUA组,差异有统计学意义（P<0.05）。MAGE与年龄、病程、Scr、UACR呈中度相关（P<0.05）,与收缩压、舒张压、BMI、ALT呈低度相关（P<0.05）。结论 血糖控制达标的2型糖尿病患者尿白蛋白排泄增加与血糖波动有关。     

Of mice and men: a comparative study of cancer-associated fibroblasts in mammary carcinoma

Abstract

Introduction. The initial clinical experience from targeted therapy for breast cancer has been mixed. While important progress has been made in the care of a subset of patients characterized by amplification of HER2 through the use of trastuzumab, other targeted therapies have failed to improve the outcome for large, unselected groups of patients. Thus, efforts to find prognostic or predictive biomarkers to enable tailored therapy are highly warranted. Genetically engineered mouse models of human cancer provide a convenient setting in which to perform explorative studies. However, there is a paucity of comparative studies between mouse and human tumours in order to validate the use of mouse models as discovery tools.

Materials and methods. Here, we have compared the localization of markers for cancer-associated fibroblasts in the MMTV-PyMT mouse model of mammary carcinoma with that of human breast cancer. The expression of α-smooth muscle actin, platelet-derived growth factor receptor-α, and fibroblast-specific protein-1 was assessed by immunostaining of sections from tumours of MMTV-PyMT mice. Information about the distribution of the same markers in human breast cancer was derived from the publicly available database the Human Protein Atlas.

Results. Both mouse and human mammary carcinomas were infused by a rich fibrotic stroma. While no marker was capable of identifying all stromal fibroblasts, the expression pattern of each marker was remarkably similar in mouse and human.

Discussion. We conclude that the MMTV-PyMT mouse model of breast cancer will have utility as a discovery tool for biomarkers of cancer-associated fibroblasts during malignant conversion.     

Gli2在髓母细胞瘤中的表达及其靶向抑制剂的作用与意义

目的 探讨SHH(sonic hedgehog signaling pathway)信号通路下游转录因子Gli2在髓母细胞瘤(medulloblastoma, MB)中的表达及其靶向抑制剂对MB细胞增殖抑制的作用。 方法 使用不同浓度的Gli2特异性抑制剂GANT61作用Doay细胞,观察细胞形态的变化,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制作用,RT-PCR法和Western blot法分别检测Doay细胞中Gli2 mRNA的表达量及Gli2蛋白表达水平的差异。 结果 使用GANT61作用细胞后,可见细胞形态出现明显改变,细胞异常突起增多;CCK-8法检测显示,与对照组相比,GANT61能够抑制Doay细胞的增殖(P<0.05),且细胞增殖的抑制率呈明显的剂量-效应关系;RT-PCR法显示Gli2特异性抑制剂GANT61组较对照组Gli2 mRNA的表达明显下降(P<0.05);Western blot法检测结果示GANT61抑制剂组较对照组Gli2蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。 结论 GANT61主要通过抑制Gli2 mRNA的表达,下调Gli2蛋白表达水平而抑制MB的增殖生长。因此,Gli2可能是治疗MB的重要生物学标志物和生物治疗的潜在靶点。