内源性H_2S对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用

目的观察糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织中纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)分布及含量变化,探讨内源性硫化氢(H2S)对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用。方法雄性SD大鼠28只用数字表法随机分为对照组、DN组、H2S干预组和胱硫醚-γ裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)阻断剂组,每组7只。用免疫组织化学法及Western blotting免疫印迹法检测各组大鼠肾组织中FN分布及含量。结果1)对照组大鼠FN主要分布于系膜基质和肾小囊壁;DN组和CSE阻断剂组大鼠肾小球基质中FN的分布增加;与DN组及CSE阻断剂组比较,H2S组大鼠FN的分布明显减少。2)与对照组比较,DN组大鼠FN的含量增加,Western blotting检测结果显示,DN组(48896±779)与对照组(38531±902)比较差异有统计学意义(P<0.01);与DN组、CSE阻断剂组比较,H2S组中FN的含量下降,Western blotting结果显示,H2S干预组(42737±1196)与DN组(48896±779)、CSE阻断剂组(48252±1068)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论内源性H2S可抑制DN大鼠肾脏中细胞外基质的过度积聚,延缓糖尿病肾病的病理改变。     

2型糖尿病患者血清细胞外基质水平与糖尿病肾病的关系研究

目的　探讨 2型糖尿病患者血清细胞外基质 (ECM)水平与糖尿病肾病 (DN)之间的关系。方法　运用放射免疫法检测 78例 2型糖尿病患者和 2 5名健康者的血清Ⅳ型胶原 (CⅣ )、层粘蛋白 (LAN)、前胶原 3(PⅢ )和透明质酸 (HA) 4种ECM水平。糖尿病患者按尿白蛋白排泌率 (UAER)分为糖尿病肾病组 (DN)和非糖尿病肾病组(NDN) ,DN组进一步根据UAER值分为微量白蛋白尿组 (MA ,UAER 30～ 30 0mg 2 4h)和临床肾病组 (CDN ,UAER≥30 0mg 2 4h)。结果　DN组和NDN组的血清CⅣ、LAN水平与对照组间差异有显著性意义 ,DN组的血清CⅣ、LAN水平与NDN组间差异有显著性意义 (P <0 0 1)。DN患者进一步分组后 ,CDN组的血清CⅣ、LAN水平与MA组间差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。糖尿病患者血清CⅣ、LAN水平均分别与空腹血糖 (FPG)、舒张压和病程呈正相关。结论　 2型糖尿病患者血清CⅣ、LAN水平高于正常人 ,而且与DN的发生、发展有密切的关系     

内源性硫化氢在糖尿病大鼠肾脏的变化及作用（英文）

新型内源性气体信号分子-硫化氢(内源性H_2S)具有类似氧化亚氮(nitric oxide,NO)的某些特征,如松弛血管、抑制血管平滑肌细胞增生、调节血管平滑肌细胞张力等作用。本系列研究观察了糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏内源性H2S的变化以及与H2S合成酶-半胱氨酸胱硫醚2β2合成酶(cystathionine 2β2 synthase,CBS)、胱硫醚2γ2裂解酶(cystathionine 2γ2 lyase,CSE)的关系,对DN大鼠肾脏病理改变的影响,对成肌纤维细胞特征性标志物-a平滑肌肌动蛋白(asmooth muscle actin,α-SMA)和细胞外基质成分-纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在大鼠肾组织分布和表达的影响,来探讨内源性H_2S在糖尿病肾病发病机制中的作用。结果显示:①DN大鼠内源性H_2S量明显减少,肾脏CSE的表达亦明显减少。②内源性H_2S的减少与DN大鼠临床表现和肾脏病理改变密切相关。③DN组大鼠肾组织中α-SMA和肾小球基质中FN均增加,分布增多,补充外源性H_2S后,α-SMA和FN明显下降。DN大鼠肾脏内源性H_2S降低。肾脏CSE的减少可能是导致DN大鼠肾脏内源性H_22S降低的直接因素。外源性补充H_2S可抑制糖尿病肾病大鼠肾脏中成肌纤维细胞的生成和细胞外基质的过度积聚。提示,内源性H_2S的减少与糖尿病肾病的发生有关。     

NO、CO和H2S与缺血性脑损伤关系研究进展

20世纪80年代以后学者相继发现动物和人体内也存在一定浓度的一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)和硫化氢(H2S)等气体。这些气体分子可由生物体自身合成,均具有神经递质和调质作用,它们的生物作用有所不同,但可以单独或者联合的形式,在多个系统及其多种疾病的生理及病理过程中起调节作用。它们的产生及传感机制引起了学者的兴趣。中风已成为中老年人致残的主要原因并成为世界第3大死亡原因[1]。在     

坎地沙坦对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的:探讨坎地沙坦对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vi mentin)表达的影响。方法:雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)诱导糖尿病模型后,随机分为糖尿病组和坎地沙坦组。正常对照组仅注射等剂量溶媒。16周后观察各组血糖(BS)、肾重/体重(KW/BW)、24h尿白蛋白排泄率(AER)、肌酐清除率(Ccr)。PAS染色观察肾脏病理形态学变化;免疫组化观察肾组织α-SMA和Vi mentin表达的变化。结果:与对照组相比,糖尿病组大鼠BS、KW/BW、AER、Ccr及间质纤维化损伤均显著上升(P<0.01),坎地沙坦组上述指标除血糖外均明显改善,与对照组相比,α-SMA和Vi mentin在肾小管上皮表达均明显上调(P<0.01),结果表明,坎地沙坦治疗阻止了二者在糖尿病大鼠肾脏的高表达。结论:坎地沙坦能显著下调糖尿病大鼠肾小管α-SMA和Vi mentin表达,阻抑肾小管上皮细胞转分化。     

系膜细胞外基质与糖尿病肾病

细胞外基质进行性积聚是导致糖尿病肾病发生、发展的重要病理基础.通过对细胞外基质成分及代谢相关途径包括糖代谢紊乱引发的葡萄糖转运蛋白表达、蛋白激酶C通路激活、糖激化终末产物及多元醇通路激活;细胞因子影响,以系统阐明糖尿病肾病发病过程中影响系膜细胞外基质的机制.     

血清细胞外基质浓度和糖尿病肾病的关系

目的：探讨血清细胞外基质（ＩＶ型胶原,ＣＩＶ和层粘蛋白,ＬＡＭ）浓度与糖尿病肾病的关系。方法：放免法测定患者血清ＣＩＶ、ＬＡＭ浓度。结果：糖尿病肾病组血清ＣＩＶ、ＬＡＭ水平明显高于正常对照组（Ｐ＜００１）及无糖尿病肾病组（Ｐ＜００５）;血清ＣＩＶ、ＬＡＭ值与血糖、病程呈正相关（ｒ分别为０３０和０２６,Ｐ＜００１和Ｐ＜００５）。结论：血清细胞外基质水平的增高可能是引起糖尿病肾病的一个重要原因。     

β-连环蛋白在糖尿病大鼠肾小管中的表达及意义

目的 观察β-连环蛋白(β-catenin)在糖尿病大鼠肾小管中的表达,初步探讨其与糖尿病肾病(DN)发生发展的关系.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为正常对照组(C组)和糖尿病组(D组),分别观察2、4、8、12、16和24周.生化方法检测血糖、血肌酐和尿蛋白水平.PAS染色观察肾小管-间质损伤程度.免疫组织化学法检测β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)表达,RT-PCR法检测β-catenin mRNA水平.结果 D组各时点血糖、血肌酐和尿蛋白明显高于C组.与C组相比,D组肾皮质β-catenin蛋白和mRNA表达量无明显变化,胞核内蛋白表达明显增强(P＜0.01).C组α-SMA仅在血管壁表达,D组从2周开始,随病程进展闻质细胞胞浆阳性染色逐渐增多,第16周和24周可见少数肾小管表达.FN在D组大鼠肾小管-间质表达从2周开始逐渐增多,与C组比较差异有显著性(P＜0.05).结论 DM大鼠β-catenin蛋白肾小管上皮细胞胞核内表达增强,肾间质α-SMA、FN蛋白表达增多,提示β-catenin可能由于降解减少后胞浆内增多而转移入核,参与了肾小管上皮细胞的转分化过程,促进了DN的发生发展.     

螺内酯对糖尿病大鼠肾小管间质的保护作用

目的:观察螺内酯对糖尿病大鼠肾小管间质的保护作用并探讨其机制。方法:雄性SD大鼠,随机分为健康对照组、糖尿病组和螺内酯治疗组。8周后检测各组大鼠血压、24 h尿蛋白定量、血肌酐、血钾、血糖、内生肌酐清除率;留取肾组织作PAS染色行病理检查;采用免疫组织化学技术检测近端肾小管上皮细胞醛固酮受体(MR)、检测肾小管-间质中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)表达,并做半定量分析。结果:各组大鼠肾脏近端小管上皮细胞胞质内均有MR表达,与健康对照组相比,糖尿病组近端小管MR表达上调,螺内酯对MR的表达无影响;糖尿病组大鼠肾小管间质MMP-2、-αSMA表达均显著高于对照组(P<0.01),螺内酯治疗8周后,肾组织MMP-2及-αSMA明显下调(P<0.01),肾功能指标及组织病理学损害得以改善,而螺内酯对大鼠的血压、血钾没有影响(P>0.05)。肾组织内-αSMA与MMP-2的表达具有明显的正相关关系(r=0.920,P<0.01)。结论:大鼠近端小管上皮细胞存在MR的表达,糖尿病肾内MR表达增加可能是醛固酮促肾纤维化的部分原因;螺内酯对糖尿病大鼠肾小管间质病变具有保护作用,其机制至少部分与抑制肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化,下调肾小管间质中MMP-2、-αSMA表达有关。     

2型糖尿病大鼠肾脏病变与线粒体功能变化关系

目的探讨2型糖尿病大鼠肾脏病变与局部能量代谢的关系。方法4只Wistar大鼠为正常对照组,10只GK Wistar大鼠随机分为糖尿病对照组和糖尿病硫辛酸治疗组（腹腔内隔日注射α-硫辛酸35 mg.kg-1）,各5只。12周后测定24 h尿蛋白排泄率、肾组织ATP酶活性和氧化应激指标。结果糖尿病对照组大鼠尿蛋白排泄率增高,肾组织ATP酶活性降低,以及MDA水平升高和GSH水平降低,而硫辛酸治疗能明显改善上述异常变化。24 h尿蛋白排泄率与SOD、GSH和ATP酶活性呈显著负相关,肾组织ATP酶活性与GSH呈显著正相关。结论2型糖尿病大鼠肾脏存在明显的线粒体功能障碍,此与肾病的发生和发展有关。     

H2S/CBS体系在大鼠癫痫发病中的变化及意义

目的 探讨大鼠癫痫发病过程中H2S/CBS的变化及意义.方法 雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)和癫痫模型组(EP组),每组大鼠又分为2h、24 h、7d和30d 4个时间点,氯化锂-匹罗卡品腹腔注射复制癫痫模型,出现Ⅳ级及以上无明显间隔的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)为模型复制成功 ;敏感硫电极法测定大鼠血浆中H2S含量 ;免疫印迹(WB)检测大鼠海马中CBS蛋白的表达情况 ;荧光定量PCR检测海马中的CBS mRNA表达变化.结果 癫痫模型组大鼠癫痫发作急性期(2h和24 h)血浆H2S水平、海马CBS mRNA和蛋白表达水平明显高于正常对照组(P＜0.05) ;随后在7d和30 d时H2S/CBS水平降低,显著低于正常对照组(P＜0.05).结论 大鼠癫痫发作急性期H2S和CBS表达水平升高,慢性自发性痫性发作期间H2S和CBS表达水平下降,提示H2S/CBS参与癫痫的发病过程.     

腺苷酸活化蛋白激酶通过抑制 mTOR 信号通路缓解糖尿病大鼠肾脏细胞外基质沉积

目的：高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素（streptozocin ,STZ）诱导大鼠糖尿病模型,尾静脉注射人重组腺相关病毒介导的截断突变型腺苷酸活化蛋白激酶基因AMPK‐CA（AMPKα1312,T172 D）,观察AMPK基因治疗对糖尿病大鼠肾脏的保护作用并进行相关机制研究。方法24只雄性Wistar大鼠随机分为糖尿病组（n＝16）和普通饮食组（n＝8）,糖尿病组以高糖高脂饮食加小剂量STZ诱导糖尿病模型,8周后再将其随机分为两组,分别经尾静脉导入表达持续激活型AMPK‐CA的重组腺相关病毒rAAV2‐AMPK‐CA和rAAV2‐GFP作为对照,观察12周后处死实验动物,留取肾脏组织。PAS染色观察比较各组大鼠肾脏的病理改变,Real‐time PCR法检测各组细胞外基质的 mRNA 水平变化, Western blot法检测Ⅳ型胶原蛋白α1（Col4α1）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）及磷酸化AMPK、磷酸化的乙酰辅酶A羧化酶（p‐ACC）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化的mTOR及其下游分子磷酸化水平改变。结果与正常对照组（C组）相比,转染rAAV2‐GFP组（GFP组）糖尿病大鼠肾脏内p‐AMPK和p‐ACC蛋白水平显著降低（均 P＜0.05）;与rAAV2‐GFP组相比,转染 rAAV2‐AMPK‐CA的糖尿病大鼠（CA组）体内p‐ACC表达活性显著升高,肾重/体重、肾小球体积、肾小球系膜基质增生等指标有明显改善,细胞外基质纤维连接蛋白（FN）、Col4α1、Col4α5 mRNA表达水平,以及Col4α1、信号分子p‐mTOR、磷酸化的真核延伸因子激酶2（p‐eEF2K）及磷酸化的起始因子4E结合蛋白1（p‐4EBP1）蛋白表达水平显著降低（均 P＜0.05）。结论 rAAV2介导的AMPK‐CA基因治疗可能通过增加糖尿病大鼠肾脏AMPK活性,抑制mTOR信号通路,缓解基质沉积,对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。     

硫化氢供体型ADT-OH衍生物的合成及其活性

二硫杂环化合物5-对羟基苯基-3H-1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(ADT-OH)是一种缓释硫化氢供体,并具有一定的神经保护作用。为了研究其构效关系,对其芳环进行改造,合成了17个Y类化合物(Y₁~Y₁₇),其结构均经 ¹H NMR、¹³C NMR 和HR-MS确证,其中6个化合物(Y₄,Y₁₃~Y₁₇)结构是全新的。采用MTT法评价了该类化合物对谷氨酸诱导损伤的HT-22海马神经元细胞生存率的影响,结果发现,这些化合物在1~100 μmol/L浓度范围内具有很强的神经保护作用,其中化合物Y₁~Y₉,Y₁₁在全部测试浓度内均能非常显著地提高受损神经元的生存率(P<0.01),特别是化合物Y₁,Y₄,Y₆~Y₉,Y₁₁在1~10 μmol/L浓度范围内活性比ADT-OH强,值得进一步研究。     

止消通脉宁对糖尿病大鼠肾小球细胞外基质成分的影响

采用链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型 ,观察中药复方止消通脉宁对其肾小球细胞外基质 (ECM)成分的影响。结果显示 :止消通脉宁能够明显减少糖尿病大鼠肾小球ECM主要成分ColIV、FN、LN的积聚 ,具有抑制ECM增生的作用 ,从而可以延缓糖尿病肾病发生发展的病理进程     

CSEsiRNA对EAhy926细胞的CSE及H2S的表达影响

目的观察胱硫醚γ裂解酶(CSE)siRNA转染人脐静脉内皮EAhy926细胞后CSE的表达及对H2S的影响。方法体外培养EAhy926细胞,经siRNA转染以沉默CSE基因表达,分为5组进行培养:正常对照组(A组):只加入转染试剂;阴性对照组(B组):转染Neg-siRNA;转染CSEsiRNA1组(C组);转染CSEsiRNA2组(D组);转染CSEsiRNA3组(E组)。采用Lipofectamine 2000介导转染EAhy926细胞,在荧光显微镜下观察细胞以检测转染效率;Western blot法检测CSE蛋白表达;收集细胞检测H2S含量。结果观察转染效率为60%左右;A组CSE蛋白表达为(153.41±23.43),B组24 h CSE蛋白表达为(150.22±17.56),而D组24 h CSE蛋白表达降至(59.43±21.81),差异有统计学意义(P<0.01);并且A组H2S含量为(0.96±0.05),B组24 h H2S含量为(0.95±0.06),D组24 h H2S含量降至(0.54±0.08),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CSE-siRNA能够有效地抑制EAhy926中CSE的表达,并且CSE-siRNA2沉默作用最强。     

硫化氢对高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪代谢的调控作用

 目的 探讨给予外源性硫化氢(H₂S)对肥胖小鼠脂肪代谢的调控作用。方法 将小鼠分为正常对照组、模型组和治疗组。正常对照组(n=10)：给予正常小鼠饲料喂养;模型组(n=10)：给予高脂饲料喂养12周建立饮食致胖(diet-induced obesity, DIO)模型;治疗组(n=15)：同样建立成DIO小鼠并随机分3小组,分别给予25、50和100 μmol·kg-¹·d-¹ NaHS治疗6周,期间继续给予高脂饲料。给药期间动态监测各组小鼠的体质量变化。治疗期满处死小鼠,检测附睾脂肪以及肾周脂肪重量,用自动生化仪和ELISA法分别检测小鼠血清中的游离脂肪酸(non-esterified fatty acid,NEFA)和抵抗素(resistin)脂肪因子水平。结果 与正常对照组比较,DIO模型组小鼠造模成功,体质量、附睾脂肪重量与肾周脂肪重量均有明显升高,但小鼠血清中的NEFA和resistin含量没有明显变化;与模型组相比,治疗各组小鼠附睾脂肪重量与肾周脂肪重量均有明显的回落(P<0.05),血清中的NEFA水平也明显降低(P＜0.05),resistin含量没有显著变化。结论 H₂S可以显著缓解DIO小鼠脂肪的堆积,降低治疗组血清中NEFA的水平,但对resistin脂肪因子无明显调控作用。     

硫化氢对小鼠背根神经节河豚毒素敏感型钠电流的影响

研究硫化氢(H₂S)对小鼠背根神经节(DRG)细胞河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流的影响。急性分离小鼠DRG细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察H₂S供体NaHS对TTX-S钠电流的影响。结果显示,NaHS浓度依赖性地增加TTX-S钠电流,其半数最大激活浓度(EC₅₀)为119 μmol/L,Hill系数为1.105;100 μmol/L NaHS可使TTX-S钠电流激活曲线向去极化移动约9.8 mV,稳态失活曲线向去级化方向移动约10.4 mV,但对恢复曲线无明显影响。因此,H₂S能增加TTX-S钠通道电流,并改变TTX-S钠通道稳态激活和失活动力学特征,这可能是H₂S参与疼痛发生发展的机制之一。