IL-17、RORγt在实验性自身免疫性神经炎中的表达

目的 观察Th17型细胞因子IL-17和Th17细胞特异性转录因子维甲酸受体相关孤儿受体γ的胸腺异构体(RORγt) mRNA在实验性自身免疫性神经炎(EAN)模型中的表达,以探讨Th17细胞在EAN中的作用.方法 用P253-78aa肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察大鼠发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增殖反应,用RT-PCR技术检测IL-17和RORγt在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达.结果 EAN组大鼠在第14-16天发病高峰期时平均临床评分为(7.5±1.2),病理学检查可见明显炎性细胞浸润,对P253-78aa的刺激产生强烈淋巴细胞增殖反应,与对照组相比,IL-17和RORγt mRNA在脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达均显著升高(P<0.001).结论 IL-17和RORγt表达上调与EAN的发病相关.     

从Th1、Th17细胞除极探讨丙戊酸干预实验性自身免疫性神经炎的机制

目的从Ⅰ型辅助T细胞(Th1)、17型辅助T细胞(Th17)细胞除极角度探讨丙戊酸(VPA)干预实验性自身免疫性神经炎(EAN)的机制。方法实验大鼠随机分为VPA治疗组、EAN组、正常组,应用周围神经髓鞘抗原(P257-81)多肽与完全弗氏佐剂的混合液免疫VPA治疗组和EAN组大鼠。VPA治疗组大鼠于免疫当天至第15天每天腹腔内注射300mg·kg-1丙戊酸钠。观察发病情况,坐骨神经电生理改变及组织病理学变化,检测腹股沟淋巴结中IFN-γ、IL-17 mRNA水平。结果 VPA治疗组的最初发病时间迟于EAN组(P<0.05),其高峰期临床评分显著低于EAN组(P<0.05),坐骨神经复合肌肉动作电位(CMAP)的波幅较EAN组明显升高,潜伏期和时限显著缩短(P<0.05)。髓鞘脱失和炎性细胞浸润较EAN组明显减少(P<0.05)。淋巴结中IFN-γ、IL-17mRNA表达明显下降(P<0.05)。结论 VPA通过影响Th1、Th17细胞除极,使IFN-γ、IL-17分泌下降,从而抑制EAN大鼠的自身免疫反应。     

丙戊酸对实验性自身免疫性神经炎大鼠保护作用的机制

目的观察丙戊酸(VAP)对实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠的保护作用及其机制。方法实验大鼠随机分为VAP高剂量组、VAP低剂量组、EAN模型组、正常组,应用P2 57-81多肽与完全弗氏佐剂的混合液诱导EAN模型。VAP于免疫当天至第15d每天腹腔内注射。观察各组大鼠发病情况和坐骨神经组织病理学变化,检测外周血中Th17细胞和Foxp3+Treg细胞含量,检测淋巴结中TNF-α、IFN-γ、IL-17、TGF-βmRNA表达。结果 VAP高剂量组的最初发病时间迟于EAN组(P<0.05),其高峰期临床评分显著低于EAN组(P<0.05),坐骨神经炎性细胞浸润较EAN组明显减少;VAP高剂量组和低剂量组外周血中Th17细胞比例较EAN组显著减少(P<0.05),Foxp3+Treg细胞比例较EAN组显著增加(P<0.05),淋巴结中促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ及IL-17mRNA表达与EAN组比较明显下降(P<0.05),VAP高剂量组抑炎细胞因子TGF-βmRNA表达与EAN组比较明显升高(P<0.05)。结论 VAP对EAN有治疗作用,这种作用可能与其能够增加Foxp3+Treg细胞和抑炎细胞因子TGF-β含量、减少TH17细胞含量和促炎细胞因子的表达有关。     

实验性自身免疫性神经炎全血免疫吸附治疗的实验研究

目的 观察以色氨酸为配基、纤维素为载体的吸附剂全血灌流免疫吸附法(WBIA)治疗实验性自身免疫性神经炎(EAN)的疗效.方法 用新鲜牛坐骨神经提取周围神经髓鞘组织中的髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫接种雄性Wistar大鼠建立EAN动物模型,采用临床症状评分及运动神经传导速度测定对模型进行评价,并将EAN模型大鼠分为WBIA治疗组和模型组两组,在接种后第13天对WBIA治疗组进行全血灌流免疫吸附治疗,接种后第18天取坐骨神经进行病理检查.另设对照组,仅接种福氏佐剂和百日咳菌苗.结果 (1)EAN模型鼠坐骨神经运动传导速度[(39.33±5.51) m/s]明显低于对照组[(74.33±4.04)]m/s(P<0.05).(2)WBIA治疗组在接种后第16天临床症状开始好转,在接种后第22～24天完全恢复.WBIA治疗组和模型组单核细胞数分别为(7.58±0.80)和(12.56±1.06)个,脱髓鞘评分分别为(1.58±0.38)和(2.83±0.38)分,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 WBIA能有效治疗EAN大鼠.     

未成熟髓源树突状细胞负载P2 58-73肽段诱导免疫耐受对实验性自身免疫性神经炎的预防作用

目的观察未成熟髓源树突状细胞(iMDC)负载P258-73肽段诱导免疫耐受对实验性自身免疫性神经炎(EAN)的预防作用,以及对干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-33(IL-33)mRNA表达的影响。方法(1)P258-73aa与iMDC共培养。(2)21只Lewis大鼠随机分为EAN组(A组)、iMDC组(B组)和P258-73aa-iMDC组(C组),并分别于皮下注射磷酸盐缓冲液(PBS)、iMDC及P258-73aa-iMDC;7d后,各组均给予P253-78aa和完全弗氏佐剂(CFA)进行免疫,诱发EAN。观察各组发病情况并作临床评分至免疫后16d(发病高峰期)。(3)采用3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应;RT-PCR检测大鼠坐骨神经、脾脏和淋巴结中IL-33、IFN-γmRNA的表达。结果(1)发病高峰期,A组、B组、C组的临床评分为(7.4±1.9)分、(5.2±1.6)分和(3.4±0.9)分,各组间比较差异有统计学意义(均P<0.01)。(2)A组、B组、C组抗原特异性淋巴细胞增殖反应依次明显降低(均P<0.01)。(3)A组、B组、C组坐骨神经、脾脏和淋巴结中IFN-γmRNA表达水平依...     

从IFN-γ／IL-33表达变化探讨EAN中的Th1／Th2细胞极化

目的探讨IFN-γ／和IL-33在实验性自身免疫性神经炎（EAN）发病机制中的作用及EAN中的Th1／Th2细胞极化。方法用P253-78肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察其发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增值反应,用RT-PCR技术检测干扰素γ（IFN-γ）和白介素33（IL-33）在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达。结果EAN组大鼠临床表现明显,病理检查可见大量炎性细胞浸润;坐骨神经组织、淋巴结,脾脏中IFN-γ mRNA表达显著升高,IL-33mRNA表达明显减少,其引流淋巴结淋巴细胞对P253-78aa的刺激发生强烈的淋巴细胞增殖反应。结论IFN-γ对EAN发病起促进作用,IL-33对EAN大鼠起保护作用;EAN中Th0细胞向Th1的转化明显增强而向Th2细胞的转化则受到抵制。     

从Th1、Th17细胞极化探讨iMDC负载P258-73肽段干预EAN的机制

目的 观察未成熟髓源树突状细胞负载P258-73肽段干预实验性自身免疫性神经炎的效果,及干预对IL-17、IFN-γ mRNA表达的影响,从Th1、Th17细胞极化的角度探讨其干预机制.方法 P258-73aa负载于体外培养的iMDC,获得P258-73aa-iMDC,用P253-78aa和CFA免疫Lewis大鼠制成EAN动物模型,免疫前7d各组大鼠分别给予PBS、iMDC及P258-73aa-iMDC干预.观察发病情况并作临床评分及病理改变.收集引流淋巴结细胞检测淋巴细胞增殖反应,RT-PCR技术检测大鼠脾脏、淋巴结和坐骨神经中IL-17、IFN-γ mRNA的表达.结果 P258-73aa-iMDC干预组大鼠的平均临床评分、抗原特异性淋巴细胞增殖反应和坐骨神经炎性细胞浸润均降低;IFN-γ 及IL-17 mRNA在脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达也明显降低.结论 P258-73aa-iMDC通过影响IL-17、IFN-γ 的分泌,影响Th1、Th17细胞极化,抑制抗原特异性淋巴细胞增殖,从而减轻EAN的发病,这可能是其诱导免疫耐受的机制之一.

Abstract：

Objective To explore the improving potential of immature myeloid dendritic cell (Imdc) pulsed with P258-73aa peptide (P258-73aa-Imdc) in experimental autoimmune neuritis (EAN) ,and to explore the role of Th1/Th17 cells polarization in this tolerance therapy by detecting the expression of IL-17 and IFN-γ mRNA. Methods P258-73aa21 was pulsed with Imdc in vitro to get P258-73aa-iMDC. Rats of each group were immunized with P253-78aa and CFA. 7 days before immunization, each group was injected with PBS or iMDC or P258-73aa-iMDC respectively. Clinical scores of each group and histopathological changes were evaluated and the lymphocyte proliferation response was assayed; IL-17 and IFN-γ mRNA in spleen,lymph node and sciatic nerves were measured by RT-PCR. Results The P258-73aa-iMDC interferred group had lower average clinical score and suppressed antigen specific lymphocyte proliferation, as well as milder infiltration by the inflammatory cells in sciatic nerves. Meanwhile, the expression of IL-17/IFN-γ mRNA in spleen, lymph node and sciatic nerves were also decreased. Conclusion The protective effect of P258-73aa-iMDC could be associated with the inhibition of lymphocyte proliferation and IL-17, IFN-γ through the polarization of Th1/Th17 cells,which is probably one of the tolerance mechanism of P258-73aa-iMDC in EAN.     

单核细胞趋化蛋白-1和调节活化正常T细胞表达分泌因子与实验性变态反应性神经炎的关系

目的 研究趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和调节活化正常T细胞表达分泌因子（RANTES）与实验性变态反应性神经炎（EAN）发病的关系，探讨EAN的免疫发病机制。方法 给Wistar大鼠足垫皮下注射兔坐骨神经匀浆建立EAN模型，用免疫组化技术检测EAN大鼠发病不同时间坐骨神经MCP-1和RANTES的表达。结果 EAN组的MCP-1表达第9d达高峰，随后逐渐下降，第15d、21d、28dMCP-1的表达与前一时间点比较差异均有显著性（均P〈0．01）；第9d、15d、21dMCP-1表达均显著高于对照组（均P〈0．001）。EAN组第9d、15d、21dRANTES表达均显著高于对照组（P〈0．01～0．001），第15d表达最高。结论 MCP-1和RANTES在EAN的发病过程中发挥了重要作用，MCP-1可能起始动作用，RANTES可能与EAN的病情进展有关。     

趋化因子在实验性自身免疫性神经炎中的动态表达

目的 探讨趋化因子在实验性自身免疫性神经炎（EAN）中的作用。方法 用兔坐骨神经匀浆免疫Wistgr大鼠．观察免疫后大鼠的发病情况和病理改变，通过免疫组化测定趋化因子在坐骨神经中的动态表达。结果 EAN大鼠于免疫后第9天开始出现症状．第15天症状达高峰，病理表现为炎性细胞浸润和脱髓鞘。趋化因子MCP-1表达在第9天达高峰，随后逐渐下降．前后时相点相比差异均有显著性（P〈0．05），且与对照组相比差异也有显著性（P〈0．001）。趋化因子MIP—1α和RANTES的表达有着相似的动态变化，在第15天疾病高峰期表达最高．随后逐渐下降，且与对照组相比差异有显著性（P〈0．001）。结论 趋化因子MCP-1在EAN发病早期可能起一定作用，MIP-1α和RANTES可能与EAN的病情进展有关。     

Th1/Th2型细胞因子在实验性自身免疫性神经炎发病机制中的作用

目的 建立P2多肽诱导的实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠模型,探讨Th1/Th2型细胞因子在EAN发病机制中的作用.方法 实验组用100 μg或200 μg P257-81多肽加完全弗氏佐剂(FCA)免疫Lewis大鼠,对照组单用FCA免疫,致敏后每日对大鼠进行临床评分,比较高峰期最高评分.致敏第14天测定淋巴结细胞培养液上清干扰素(IFN)-γ、IL-4及IL-10的含量,并进行坐骨神经病理学检查.结果 实验大鼠瘫痪高峰期最高评分P257-81 200 μg组(3.6±0.3)显著高于100 μg组(2.2±0.6,P＜0.01);P257-81 200 μg组大鼠病程显著长于100 μg组;IFN-γ含量,两组实验大鼠均显著高于对照组[分别为(530.6±91.7)、(806.3±132.4)和(35.0±5.9)pg/ml,均P＜0.01],而P257-81 200 μg组显著高于100 μg组(P＜0.01);IL-4和IL-10含量,P257-81 100 μg组均显著高于对照组(均P＜0.01),P257-81 200 μg组显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);坐骨神经病理可见EAN急性期以炎性细胞浸润为主,P257-81 200 μg组慢性期无炎性细胞浸润,而表现为多发性局灶性脱髓鞘和神经纤维崩解未恢复.结论 EAN临床表现随致敏原P257-81多肽剂量增加而加重;在EAN急性期,IFN-γ水平与EAN临床表现大致平行;EAN疾病具有自限性可能与IL-4和IL-10水平增高有关,而疾病迁延可能与IL-4和IL-10水平降低有关.     

B cells play a cooperative role via CD40L-CD40 interaction in T cell-mediated experimental autoimmune neuritis in Lewis rats

The expression of co-stimulatory molecules CD40 and CD40L was examined over the course of experimental autoimmune neuritis (EAN) induced in Lewis rats by immunization with bovine peripheral nerve myelin. In draining lymph nodes, highest level of CD40L expression was seen on day 7 post immunization (p.i.), i.e. before onset of clinical signs of EAN, while CD40 expression was increased on day 14 p.i., i.e. at peak of clinical disease. In contrast, both CD40 and CD40L expressing cells in sciatic nerves, a target organ of EAN, peaked on day 14 p.i., large numbers of both expressing cells were mainly detected on day 14-21 p.i. After co-culture with EAN rat B cells bearing CD40, P0 peptide 180-199-specific T cell line cells exhibited a rapid down-regulation of CD40L expression. Furthermore, EAN rats had enhanced P0 peptide 180-199-specific antibody responses on day 14 p.i., which might have contributed to their aggravated EAN and further demonstrated the role of antibodies in EAN. The results indicate that CD40L-CD40 interactions are involved in the initiation of the antigen-specific T cell responses associated with the generation and development of EAN, and may mediate autoantibody production in EAN. Evidently, B cells play a cooperative role via CD40L-CD40 interaction in T cell-mediated EAN of Lewis rats.     

Expression of OX40 and OX40 ligand (gp34) in the normal and myasthenic thymus

OBJECTIVES: To examine the expression of OX40, an activated memory T-cell marker, and its ligand (OX40L), a set of molecules for T-cell-B-cell interaction, and other lymphocyte activation markers in the thymuses of myasthenia gravis (MG) and controls. MATERIAL AND METHODS: We studied the expression of OX40, OX40L, IL-2Ralpha and HLA-DR in the thymic tissues of MG and controls using immunocytochemistry and flowcytometry. RESULTS: In both hyperplastic thymus of MG and control thymus, OX40+ cells were scattered mainly in the medulla with much fewer OX40L+ cells being distributed in the corticomedullary junctions. IL-2Ralpha and HLA-DR were expressed in the medulla at higher frequencies as compared with OX40 in controls as well as MG. In contrast, the numbers of OX40+ cells around the germinal centers (GC) were significantly greater than those of control thymuses, and some mononuclear cells in GC were OX40L+. A considerable number of OX40+ cells were seen in the thymic tissues adjacent to thymomas. OX40+ cells were CD4+ CD8- or CD4+ CD8+ and were mostly HLA-DR-. (The coexpression of OX40 and IL-2Ralpha on activated CD4+ T cells was previously reported.) CONCLUSION: OX40, expressed in a fraction of activated CD4+ T cells, may be upregulated in thymic tissues adjacent to GC and thymoma in MG, and OX40 may interact with OX40L in GC to enhance anti-acetylcholine receptor antibody production in MG.     

共刺激分子OX40在急性脑梗死患者外周血调节性T细胞上的表达及其临床意义

目的探讨急性脑梗死患者外周血调节性T细胞(Treg)上共刺激分子OX40的表达情况及其临床意义。方法选择苏州大学附属第一医院神经内科自2019年4月至l2月收治的75例首次发病的急性脑梗死患者纳入病例组,选择同期招募的年龄、性别与病例组相匹配的36例健康志愿者纳入对照组。采用免疫荧光标记和流式细胞技术检测2组受试者肘静脉血中CD4+CD25+CD127^low Treg细胞上OX40的表达,并分析病例组的OX40^+Treg细胞比例与其美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、缺血半暗带体积、核心梗死灶体积、梗死灶体积的相关性,同时比较病例组的OX40^+Treg细胞比例在血管内治疗或静脉溶栓前后的变化。结果与对照组比较,病例组的外周血Treg细胞比例明显降低,OX40^+Treg细胞比例明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。病例组的外周血OX40^+Treg细胞比例与其NIHSS评分呈正相关关系(rs=0.271,P=0.018),与其缺血半暗带体积、核心梗死灶体积、梗死灶体积亦均呈正相关关系(rs=0.435,P=0.000;rs=0.343,P=0.003;rs=0.245,P=0.034)。病例组中血管内治疗患者的术后第7天外周血OX40^+Treg细胞比例较术前明显降低,静脉溶栓患者的术后第3、7天外周血OX40^+Treg细胞比例较术前明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论OX40在急性脑梗死患者外周血Treg细胞上异常表达,并与神经功能缺损、影像学表现及再灌注治疗密切相关。     

重症肌无力患者外周血CD4+T细胞OX40的表达及作用机制研究

目的 分析重症肌无力(MG)患者外周血CD4+T细胞协同刺激分子OX40表达及其对FoxP3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的调控作用,初步探讨OX40在MG免疫学发病中的作用机制.方法 以流式细胞技术检测42例MG患者及38名健康对照的外周血OX40+CD4+T细胞、FoxP3+CD4+CD25+Treg表达水平,比较OX40表达在MG患者不同临床疾病状态、Osserman分型、临床绝对评分、胸腺病理类型等情况下的差异,并分析OX40对FoxP3+CD4+CD25+Treg细胞的影响.结果 (1) MG患者外周血OX40+CD4+T细胞占淋巴细胞百分比高于健康对照组(P<0.01).(2)MG患者OX40+CD4+T细胞百分比在发作或加重期高于缓解期(P＜0.05);在临床绝对评分呈中、重度患者OX40+CD4+T细胞百分比高于轻度患者(均P＜0.05);Osserman Ⅱ、Ⅳ型患者OX40+CD4+T细胞百分比高于Ⅰ型患者(均P＜0.05);胸腺增生及胸腺瘤患者OX40+CD4+T细胞百分比高于胸腺正常患者(P＜0.05,P＜0.01).(3)MG患者外周血OX40+CD4+T细胞百分比与FoxP3+CD4+CD25+Treg细胞百分比呈负相关(r=-0.843,P=0.01).结论 协同刺激分子OX40参与MG发病,可能通过抑制FoxP3+CD4+CD25+Treg细胞生成发挥作用.     

FTY720 attenuates lesional interleukin-17+ cell accumulation in rat experimental autoimmune neuritis

Aims : Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-known animal model of human demyelinating polyneuropathies. Here we have studied the spatiotemporal accumulation of interleukin (IL)-17⁺ cells in sciatic nerves of EAN rats and effects of FTY720, an agonist of sphingosine-1-phosphate (S1P) receptors. Methods : In this study, we examined the spatiotemporal expression of IL-17 using immunohistochemistry and RT-PCR, and analysed the IL-17⁺ cell proportion in blood and lymph nodes using flow cytometry. Results : In sciatic nerves of EAN rats, IL-17⁺ cells were mainly found to concentrate around blood vessels and IL-17⁺ cell accumulation was temporally correlated with severity of neurological signs. FTY720, which has been shown to reduce severity of EAN, attenuated accumulation of IL-17⁺ cells in sciatic nerves, decreased IL-17⁺ cell proportion in peripheral blood, but increased IL-17⁺ cell proportion in lymph nodes, suggesting the involvement of S1P signal pathway in regulating IL-17⁺ cell trafficking. Conclusions : our data are consistent with the possibility that IL-17⁺ cells might contribute to the pathogenesis of EAN and the S1P signal pathway may be involved in the in vivo trafficking of IL-17⁺ cells.     

OX40L在C57BL/6与BALB/c小鼠组织的差异性表达及分析

背景：有研究发现C57BL/6小鼠对动脉粥样硬化易感,而BALB/c小鼠却对动脉粥样硬化不易感。OX40L的表达情况与动脉粥样硬化的狭窄程度和心肌梗死的严重度相关,其在两种品系小鼠中是否存在表达差异？ 目的：分析OX40L在BALB/c和C57BL/6小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织的表达差异。 方法：取C57BL/6和BALB/c小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织,以Trizol提取总RNA, RIPA Buffer提取组织总蛋白。采用RT-PCR和Western Blot方法检测两种品系小鼠心脏、脑、肾脏、脾脏和骨骼肌的OX40L mRNA和蛋白的表达。OX40L在两种品系小鼠不同器官间的表达差异。 结果与结论：RT-PCR结果显示,C57BL/6小鼠心脏OX40L mRNA表达显著高于BALB/c小鼠(P < 0.05),脾脏OX40L mRNA表达明显低于BALB/c小鼠(P < 0.05),两种品系小鼠大脑、肾脏及骨骼肌OX40LmRNA表达差异无显著性意义;Western Blot结果显示,两种品系小鼠OX40L的蛋白表达均在心脏最高;C57BL/6小鼠心、脑及肾OX40L蛋白表达均显著高于BALB/c小鼠(P < 0.05),两种品系小鼠骨骼肌和脾脏OX40L蛋白表达差异无显著性意义。两个品系小鼠OX40L mRNA的表达水平与蛋白表达水平不完全一致。C57BL/6小鼠心脏中OX40L mRNA转录水平较BALB/c高,但在脾脏中表达量较后者低;C57BL/6小鼠心脏、大脑和肾脏OX40L蛋白水平均较BALB/c小鼠高;两种品系小鼠之间的表达差异提示OX40L可能与C57BL/6小鼠易感动脉粥样硬化有关。