新型MGB探针特异性检测变形链球菌

目的:设计一种新型TaqManMGB探针,利用实时荧光定量PCR检测变形链球菌,提高PCR法检测变形链球菌的特异性,减少检测的假阳性。方法:提取6种不同链球属细菌的DNA,分别进行巢式PCR和TaqManMGB实时荧光定量PCR,比较两种PCR方法检测变形链球菌的特异性。巢式PCR第1轮扩增的引物是细菌16S rRNA基因通用引物,第2轮扩增使用变形链球菌16S rRNA基因可变区序列的特异性引物。TaqManMGB实时荧光定量PCR的引物与第2轮巢式PCR特异性引物相同,设计的MGB探针序列与变形链球菌16S rRNA基因中特异性序列相匹配,不与其他细菌的基因序列匹配。将变形链球菌标准株的DNA样本从2.5 mg/L至0.16μg/L按5倍梯度稀释,制备出实时荧光定量PCR的标准曲线。结果:变形链球菌和格氏链球菌在巢式PCR中均扩增出282 bp的DNA片段,出现假阳性结果。TaqManMGB实时荧光定量PCR能定量检出变形链球菌标准株和临床株,不检出其他链球菌,比巢式PCR特异性更好。TaqManMGB实时荧光定量PCR对变形链球菌DNA的最低检出浓度为20μg/L。结论:本研究设计出一种针对变形链球菌的TaqManMGB探针,建立利用TaqManMGB实时荧光定量PCR特异性检测口腔中变形链球菌的方法。     

shRNA沉默雄激素受体基因抑制人前列腺癌裸鼠移植瘤

目的:探讨雄激素受体(androgen receptor,AR)小片段发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)通过沉默AR基因对人前列腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法:建立人前列腺癌细胞株22RV1裸鼠移植瘤模型,同时构建针对其AR的shRNA,经酶切导入质粒载体,测序确认后行重组质粒的大量制备。将荷瘤裸鼠随机分为实验组和对照组,待移植瘤体积长至300 mm3左右时,实验组裸鼠予单次尾静脉注射AR shRNA质粒(2μg/g体重),对照组注射等量生理盐水。隔日观察并记录肿瘤体积变化情况,至实验后14 d为观察终点,处死裸鼠取出肿瘤组织称重,比较两组肿瘤生长差异。对肿瘤组织行AR、Ki-67蛋白免疫组织化学染色及TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transter-ase-mediated dUTP nick end labeling)检测,用HSCORE计分法、增殖指数(proliferative index,PI)和凋亡指数(apopto-tic index,AI)分别量化AR、Ki-67免疫组织化学染色和TUNEL检测结果,比较两组肿瘤组织在AR蛋白表达及细胞增殖、细胞凋亡方面的差异。结果:实验组较对照组肿瘤生长缓慢,至观察终点,实验组肿瘤体积为(1 199.56±86.48)mm3,较对照组肿瘤体积(1 742.02±98.16)mm3明显缩小(P=0.002)。实验组肿瘤重量为(1 006.2±79.1)mg,较对照组肿瘤重量(1 383.4±74.8)mg明显减轻(P=0.005)。实验组的AR HSCORE、PI、AI分别为25.8±6.7、(26.0±3.1)%、(55.6±7.9)%,与对照组[268.8±18.7、(87.6±7.9)%、(27.2±3.9)%]相比,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论:AR shRNA可以通过静脉注射的方式,在体内抑制雄激素受体表达,从而抑制人前列腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长。     

肿瘤型人工关节置换术

关于肢体恶性骨肿瘤患者的治疗,由于有效的化学治疗(化疗)和重建技术的发展,保肢手术已经成为一种规范化的治疗手段[1]。新辅助化疗的开展为保肢治疗创造了条件,术前化疗是保肢手术的前提。术前化疗能使肿瘤体积缩小、分界清楚,血管减少,坏死增加等[2]。肢体恶性骨肿瘤切除后,肿瘤型人工关节置换已经成为最常采用的骨缺损替代手段。     

RNA结合蛋白La在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨RNA结合蛋白La在宫颈癌组织中的表达及在宫颈癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化染色技术分别测定La蛋白在宫颈癌和正常宫颈组织中的表达情况;采用RNA干扰技术沉默La基因在宫颈癌细胞株HeLa的表达,并通过G418筛选,构建稳定表达的HeLa的La干扰克隆。然后使用HeLa-shLa和HeLa-shNC分别进行细胞增殖、体外肿瘤球形成实验,细胞周期检测和Western blot等。结果宫颈癌组织中La蛋白的表达61%明显高于正常宫颈组织9%,差异有统计学意义(P<0.05);且干扰La后,HeLa细胞的增殖能力及肿瘤球形成率(shNC组:17.1%±1.92%,shLa组:6.3%±0.45%)均出现降低,与载体对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外La蛋白干扰后,HeLa细胞发生明显的G0/G1期阻滞,且细胞内CyclinD1的表达降低。结论 RNA结合蛋白La对宫颈癌的形成具有促进作用,可能在宫颈癌的发生、发展中起重要作用。     

端粒、端粒酶的研究及其在喉癌中的应用

端粒酶作为广谱的肿瘤特异性标记物用于肿瘤的诊断 ,以及其抑制剂用于肿瘤的治疗已成为近年来肿瘤分子生物学领域中最热门的研究课题之一。笔者就端粒、端粒酶的研究及在喉癌中的应用作一综述。1　端粒、端粒酶的结构与功能端粒是真核细胞内由DNA序列和结合蛋白组成的、位于染色体 3′末端以维持染色体结构稳定的特殊结构。人类端粒含有几千拷贝的六聚体重复序列 ,是一个简单重复的富含鸟苷酸 (G)的DNA序列[1] ,重复单位是 (5′ ,-TTAGG 3′)n ,端粒对染色体稳定及其基因组的完整非常重要 ,为染色体末端提供一个保护性“帽子” ,就象鞋…     

端粒酶在膀胱肿瘤中活性表达及临床意义

目的:探讨端粒酶在膀胱癌中活性表达及其与膀胱肿瘤临床生物学行为的关系。方法:利用TRAP银染法对32例膀胱癌组织和10例正常膀胱粘膜端粒酶活性进行检测,并结合临床资料分析。结果:32例膀胱肿瘤中有26例表达阳性(81.25%),而10例正常膀胱组织均无端粒酶表达。差异有显著性(χ2=18.018,P<0.05)。G 1级肿瘤阳性结果为7/11,G 2级为12/13,G 3级为7/8;T a~T 1期阳性者为15/20,T 2~T 4期为11/12,统计学分析证实与分期分级不相关。结论端粒酶活性表达与膀胱肿瘤的发生有关,是一个重要的肿瘤标记物。     

DC联合CIK在肿瘤免疫治疗中的研究进展

伴随生物技术的突飞猛进,在恶性肿瘤的治疗中使用免疫治疗手段成为研究的热点,生物免疫治疗日益成为肿瘤治疗的一种新途径,特别是树突状细胞(dendritic cells,DCs)结合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对恶性实体瘤展现了优异疗效。本文就DC细胞以及CIK细胞生物学特性和它们于临床抗肿瘤的作用进行综述。     

联合靶向Survivin和Livin的双重siRNA表达载体的构建及其活性鉴定

目的构建联合靶向凋亡抑制基因Survivin和Livin的双重siRNA表达载体并鉴定其活性,为研究同时下调Survivin和Livin表达的协同效应奠定基础。方法选取已证实有效的分别靶向Survivin和Livin的siRNA序列,通过定向克隆技术构建同时编码2个siRNA分子的真核表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv,将其转染HepG2细胞后检测Survivin和Livin mRNA水平的变化,同时转染表达DsRed2-SURVIVIN和GFP-LIVIN的Hela荧光报告细胞观察荧光强度变化。结果双重siRNA表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv构建成功,转染HepG2后Survivin和Livin mRNA水平明显下降,转染Hela报告细胞后荧光强度变弱。结论联合靶向Survivin和Livin的双重siRNA表达载体构建成功,并能有效下调Survivin和Livin的表达水平。     

端粒酶的研究进展

端粒/端粒酶系统可以调节细胞的增殖。通过抑制端粒酶的活性而抑制细胞的增殖,是一种肿瘤治疗的策略;通过激活端粒酶的表达而促进细胞增殖,可以治疗某些退形性疾病。近年来对此系统的研究成为热点,本文就端粒酶的作用、调节及其与肿瘤、细胞永生化方面进行综述。     

多生牙发生的分子生物学研究进展

多生牙(supernumerary teeth)是指超出正常牙数以外的牙齿,可以单发或多发,单侧或双侧,发生在上颌或下颌[1]。多生牙的萌出部位、方向和形态特点均有很大变异,根据位置不同,多生牙分为正中多生牙、前磨牙区多生牙、磨牙区多生牙和磨牙远中区多生牙;多生牙的形态有锥形、结节型、补充型     

端粒酶和erbB4基因在非小细胞肺癌中表达的研究

目的研究端粒酶和erbB4基因在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及与肺癌临床、病理的关系。方法应用TRAP法测定56例肺癌组织标本中端粒酶的表达。同时应用免疫组化法检测56例肺癌石蜡组织中erbB4的表达。记录56例肺癌患者5年生存情况。结果NSCLC组织中端粒酶和erbB4阳性表达率分别为75%（42/56）及89.3%（50/56）。端粒酶、erbB4表达与不表达在临床分期组间的差异有统计学意义（P=0.004、0.005）,端粒酶表达与不表达患者5年生存率差异有统计学意义（P=0.0005）。结论检测端粒酶及erbB4表达有助于判断NSCLC临床特点及预后。     

非小细胞肺癌上皮间质转化与化疗耐药性的相关性

目的通过观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中上皮间质转化标记物与肿瘤细胞耐药蛋白表达情况,从组织学角度探讨NSCLC化疗耐药性与上皮间质转化之间的关系。方法收集NSCLC新辅助化疗后手术标本和单纯手术后标本各40例,采用免疫组织化学方法分别检测耐药蛋白DNA修复家族成员核苷酸切除修复基因1(ERCC1)、上皮间质转化标记物E-钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达情况。结果 NSCLC新辅助化疗组和单纯手术组ERCC1与vimentin的表达均呈正相关(r=0.482、0.405,P<0.05),ERCC1与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.519、-0.346,P<0.05);ERCC1、E-cadherin和vimentin的表达强度与分化程度及有无淋巴结转移有关(Z=-2.031～-1.976,P<0.05),而与病理类型、性别、年龄无关(P>0.05)。结论发生上皮间质转化的NSCLC肿瘤细胞化疗耐药性明显增强,对上皮间质转化的研究有可能成为治疗抗耐药肿瘤的新思路。     

下咽癌相关血浆肿瘤标志物的蛋白质组学筛选

目的分析下咽癌患者与健康人血浆中差异表达的蛋白质组,筛选潜在的与下咽癌诊断密切相关的血浆肿瘤标志物。方法取下咽癌患者与健康人空腹血浆标本各6例分别等量混合成2组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向电泳(2-DE)进行分离,经软件分析后找出表达量变化2倍以上的差异蛋白点,接着利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)进行差异蛋白质鉴定,然后利用Western blotting对α2-HS-糖蛋白的表达量进行验证。结果下咽癌患者与健康人血浆相比较,筛选出表达量差异2倍以上的差异蛋白点共11个,其中表达上调的有5个,表达下调的有6个,进行质谱分析后,表达上调的蛋白有α2-HS-糖蛋白、结合珠蛋白;表达下调的蛋白有免疫球蛋白κ链C结构域、载脂蛋白A1。Western blotting结果表明,α-2-HS-糖蛋白的表达上调,与双向电泳结果一致。结论下咽癌患者与健康人血浆的蛋白质表达谱表现出一定差异,这些差异蛋白有可能成为下咽癌患者早期诊断的特异性血浆肿瘤标志物。     

特发性全面性癫痫的遗传学研究进展

癫痫(epilepsy)是一种世界范围内常见的神经系统疾病。据世界卫生组织(World Health Organiza-tion,WHO)的报告显示,癫痫的患病率在5.0‰～11.2‰,即大约全球有5 000万的活动性癫痫患者(经常有癫痫发作并需要抗癫痫药物维持治疗者)。     

HMG-CoA还原酶与胆囊结石关系的相关研究

目的:探讨3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶与胆囊结石形成的关系。方法:利用干扰基因技术构建三条短发夹RNA(shRNA)质粒载体,对模型注射shRNA载体,观察实验组胆囊结石的形成情况;经分析测定HMG-CoA还原酶mRNA的表达量,选择抑制效果较佳的shRNA质粒载体来抑制HMG-CoA还原酶mRNA的表达,研究能否抑制胆囊结石的形成。结果:抑制率较高的shRNA-3实验组mRNA与对照组mRNA相比,差异具有统计学意义(P<0.05),可认为HMG-CoA还原酶shRNA-3质粒载体对HMG-CoA还原酶有抑制作用。shRNA-3实验组与对照组成石率相比,对照组较高(P<0.05)。结论:成功构建的shRNA-3质粒载体抑制了HMG-CoA还原酶mRNA的表达,并减少了胆囊结石的形成;HMG-CoA还原酶是促进胆囊结石形成的关键因素之一。     

腹腔镜保留肾单位手术

肾根治性切除术是目前局限性肾肿瘤的经典治疗术式,但是基于肾部分切除术对于适当的肾肿瘤病例可以获得相同的疗效,并且具有保留肾单位、减低术后肾功能不良事件发生的优势,2009年《美国泌尿外科学会指南》已经将肾部分切除术修订为T1期肾肿瘤的治疗方案[1]。随着影像技术的提高及其广泛的应用,小肾癌的检出率不断提高,肾部分切除术也越来越多地开展。与传统的开放手术相比,腹腔镜和机器人手术显著降低了保留肾单位手术过程中的并发症发生率,取得了良好的肾功能保护和肿瘤控制效果[2]。腹腔镜     

脂质体介导端粒酶反义RNA对人乳腺癌细胞MCF-7活性及增殖的影响

目的:探讨经脂质体介导转染端粒酶反义RNA对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法:用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人乳腺癌细胞MCF-7中,采用TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性,四唑盐比色(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖,FCM分析等方法观察其对MCF-7细胞的增殖影响。结果:端粒酶反义RNA能显著抑制MCF-7细胞的端粒酶活性,抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。结论:脂质体转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,可促进MCF-7细胞凋亡。     

骨质疏松的研究进展

骨质疏松已经成为当今骨科常见的疾病,得到了人们的高度重视。目前关于骨质疏松的发病原因以及对于骨质疏松的干预代谢治疗的研究也越来越多,关于骨质疏松模型的建立、治疗药物的实验研究以及实验观测指标的选定等问题还在继续探讨研究中,本文就骨质疏松研究的进展综述如下。     

中心型肾肿瘤的腹腔镜肾部分切除术

近20年来,随着腹腔镜技术在泌尿外科的迅速发展,腹腔镜下肾部分切除术(laparoscopic partial ne-phrectomy,LPN)在临床得到了越来越广泛的应用。目前已有许多研究证明,LPN与肾部分切除术(openpartial nephrectomy,OPN)具有相似的近期和远期效果[1-6],而对于中心型肾肿瘤(central tumor)或肾门旁肿瘤(hilar tumor),因为肿瘤位置较深、与肾门血管关系密切,其技术操作难度明显增大,尤其是中心型肾肿瘤