过敏性哮喘患者外周血T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3 mRNA的表达变化

目的：探讨特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3 mRNA在过敏性哮喘患者外周血中的表达变化。方法：选择30例慢性持续期的屋尘螨过敏性哮喘患者,其中轻度哮喘17例、中重度哮喘13例,14名正常人作为对照。通过荧光实时定量PCR方法检测3组患者外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet、GATA-3、RORγt和FoxP3mRNA的表达。结果：轻度和中重度哮喘患者的GATA-3 mRNA表达均显著高于正常人（均P〈0.01）。中重度哮喘患者的RORγt mRNA表达明显高于正常人和轻度哮喘患者（均P〈0.01）。T-bet和FoxP3 mRNA表达在3组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。结论：过敏性哮喘中GATA-3表达增加,中重度哮喘中RORγt表达增加,GATA-3和RORγt在哮喘发病中起着重要的作用。     

变应性鼻炎患者外周血T-bet及CD19/CD23对标准化变应原体内刺激的反应

目的 探讨变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者经体内螨变应原刺激后T-bet和CD19/CD23的变化.方法 采取15例健康人和60例接受标准化螨变应原疫苗的体内特异性免疫治疗(SIT)达1年的AR患者外周血,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析SIT前后1年外周血单核细胞(PBMC)中的T-bet mRNA表达变化情况.另外用流式细胞术(FCM)检测患者CD19/CD23水平SIT前后1年变化情况.结果 24例AR患者SIT前后PBMC中T-bet表达水平分别为(0.44±0.14)和(0.49±0.09),差异有统计学意义(t=2.324,P<0.05).在对照组,该比值为(0.59±0.09),显著高于AR患者(P<0.01).对照组和AR组CD19/CD23水平分别是(5.99±2.44)%和(13.53±5.41)%,P<0.05.42例单纯AR患者和合并有哮喘的18例AR患者的T-bet表达水平分别是(0.49±0.12)和(0.33±0.09),两组CD19/CD23水平分别是(12.32±5.71)%和(16.34±3.32)%,t值分别为5.411和3.407,P均<0.01;T-bet与CD23存在负相关(r=-0.260,P<0.05).经SIT后,CD23水平显著下降(t=2.334,P<0.05).经SIT后,T-bet mRNA表达显著上调(t=-2.324,P<0.05).结论 T-bet在AR患者PBMC中的表达均下调;AR患者经SIT后,可以看到T-bet表达的上调和CD23水平的下降.T-bet对变应原体外反应低下,而对体内小剂量变应原刺激产生保护性的Th1型免疫反应.对变应性鼻炎SIT机理的新认识认为,转录因子水平是通过Th1优势来纠正Th1/Th2失衡,而这种方式是以Th1型特异性相关转录因子的上调表达介导的.     

肝癌患者外周血淋巴细胞转录因子的表达及意义

目的研究原发性肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)的Th1-、Th2-特异性转录因子(TF)T-bet、GATA mRNA表达水平及意义。方法选取23例初次诊断为肝癌并需外科手术治疗的患者为肝癌组,体检中心健康者21例为对照组。采集所有受试者空腹外周静脉血标本,用含有淋巴细胞分离液的淋巴细胞分离管分离外周静脉血淋巴细胞。采用荧光实时定量PCR(RTq PCR)测定PBMC的T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平。结果肝癌组PBMC的T-bet mRNA水平显著低于对照组(P<0.01);肝癌组GATA-3 mRNA水平显著高于对照组(P=0.024)。肝癌组PBMC T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值较对照组显著降低(P=0.031)。结论原发肝癌患者PMBC T-bet表达降低、GATA-3表达增加,T-bet/GATA-3比值显著降低,且GATA-3表达显著,显示在转录水平存在Th2细胞漂移。     

支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘（哮喘）患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞（PBMC）,用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为（21.96±7.31）ng/ml,（118.73±22.59）pg/ml,明显低于对照组[分别为（64.88±25.27）ng/ml和（145.53±29.50）pg/ml,（均P〈0.01）],哮喘组IL-4（425.22±4.37）pg/ml高于对照组（69.72±10.15）pg/ml,（P〈0.01）。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平（0.12±0.01,0.25±0.04）显著低于对照组（0.48±0.12,1.894±0.65）（均P〈0.01）,GATA-3mRNA表达（0.45±0.05）较对照组明显升高（0.30±0.08）（P〈0.01）。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关（r分别为0.792,0.761,均P〈0.01）;与GATA-3mRNA无明显相关性（r=-0.146,P=0.551）。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。     

川芎嗪对支气管哮喘患者T-bet、GATA-3及气道炎症的影响

目的 观察川芎嗪对支气管哮喘患者气道炎症的作用以及对转录因子T-bet和GATA-3表达的影响.方法 60例哮喘患者随机分成常规治疗组(A组)和川芎嗪联合治疗组(B组),每组30例.另外选取健康人30例做为正常对照组(C组).观察治疗前后的临床疗效,采用ELISA法检测干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)水平,采用RT-PCR法测定T-bet和GATA-3的表达.结果 治疗前A、B组的T-bet、IFN-γ水平明显低于C组,GATA-3、IL-4水平明显高于C组(P＜0.05),A、B组间没有显著差异;与治疗前比较,治疗后A、B组的T-bet、IFN-γ以及GATA-3、IL-4水平均有显著性差异(P＜0.05);治疗后B组的T-bet和IFN-γ水平均高于A组,GATA-3和IL-4水平均低于A组(P＜0.05).结论 在常规哮喘治疗的基础上,加用川芎嗪可以取得更好的疗效.川芎嗪通过纠正哮喘患者的免疫失衡来治疗哮喘,为川芎嗪对哮喘的治疗进一步提供了理论依据.     

T-bet和GATA-3基因在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及作用

目的探讨T-bet和GATA-3基因在肝泡型包虫病患者肝脏组织中的表达及作用。方法选取14例在新疆医科大学第一附属医院接受手术治疗的肝泡型包虫病患者病灶组织(L组)、病灶旁组织(P组)及正常肝组织(N组),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各肝脏组织中T-bet和GATA-3 mRNA的表达,采用两两比较的t检验和Pearson相关性检验分析结果。结果 T-bet mRNA在L组、P组和N组的表达量分别为3.98、0.89和0.27,其中L组与P组比较差异无统计学意义(t=0.307,P>0.05),L组与N组比较差异有统计学意义(t=3.695,P<0.01),P组与N组比较差异有统计学意义(t=3.492,P>0.05)。GATA-3mRNA在L组、P组和N组的表达量分别为119.23、6.30和0.53,其中L组与N组比较差异有统计学意义(t=5.190,P<0.01),P组与N组比较差异有统计学意义(t=4.649,P<0.01),L组与P组差异无统计学意义(t=1.711,P>0.05)。肝脏不同组织中,T-bet和GATA-3mRNA的表达量呈正相关(相关系数为0.730~0.932)。结论 Th1细胞转录因子T-bet基因和Th2细胞转录因子GATA-3基因在肝脏病灶组织中的表达升高,这些变化或与泡型包虫病发病过程中寄生虫肉芽肿的形成有关。     

肝细胞癌患者PBMCs中T-bet、GATA3和Foxp3 mRNA水平及其意义

目的探讨肝细胞癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3和Foxp3 mRNA水平变化及意义。方法在肝细胞癌患者20例和健康对照人群10例,采用RT-PCR法检测PBMC中T-bet、GATA3和FoxP3mRNA水平。结果 HCC患者和健康对照T-bet水平分别为0.554±0.030和0.514±0.071(P=0.391);HCC患者和健康对照GATA3水平分别为0.956±0.030和0.535±0.028(P<0.01);HCC患者和健康对照FoxP3水平分别为0.976±0.073和0.772±0.083(P<0.01);HCC患者和健康对照T-bet/GATA3比值分别为0.697±0.078和0.963±0.133(P<0.01)。结论肝细胞癌患者PBMC中GATA3和FoxP3 mRNA水平上调,可能参与了HCC的发生和发展过程。     

基于T-bet和GATA-3表达研究特异性免疫治疗对过敏性哮喘患者治疗机制

目的 探讨屋尘螨特异性免疫治疗 (SIT)过程中,转录因子 T-bet 和 GATA-3在外周血单个核细胞 (PBMCs)中的表达变化,分析该治疗方案的作用机制.方法 纳入2015年1月至12月我院收治的过敏性哮喘患者89例,进行回顾性分析,根据治疗方案及转归划分为4组:接受SIT治疗,且显效患者纳为观察 A组,共22例;接受 SIT治疗,且未达显效标准者纳为观察 B组,共12例;未接受 SIT治疗,且显效患者纳为对照 A 组,共15例;未接受 SIT 治疗,且未达显效标准者纳为对照B组,共40例.检测对比4组治疗前、治疗12个月时 PBMCs 中 T-bet和 GATA-3 mRNA 表达水平、外周血Th1和Th2细胞比率.结果 观察 A 组、对照 A 组在治疗后 GATA-3 mRNA、Th2细胞比率明显下降,T-bet mRNA/GATA-3 mRNA、Th1/Th2明显上升,观察 A 组在治疗后 T-bet mRNA、Th1细胞比率明显升高.观察B组在治疗后T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、Th1细胞比率、Th2细胞比率明显升高,上述差异均有统计学意义 (P <0.05).②各时点所有患者 T-bet mRNA/GATA-3 mRNA与Th1/Th2均呈显著正相关 (治疗前r=0.811,P=0.004;治疗后r=0.801,P =0.000).检测对比4组治疗前、治疗12个月时PBMCs中T-bet和GATA-3 mRNA表达水平、外周血Th1和Th2细胞比率.结论 仅采用常规疗法,有助于抑制哮喘患者 GATA-3 mRNA 过表达,协同采用特异性免疫治疗则能同时促进T-bet mRNA表达,发挥双向治疗作用,从而提升疗效.     

核转录因子FOXP3在胃癌患者体内的表达及意义

目的:检测核转录因子FOXP3在胃癌患者体内的表达情况及其临床意义.方法:使用RT-PCR检测30例胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)和肿瘤组织淋巴细胞中FOXP3 mRNA表达, 与20例健康志愿者PBMC及20例病灶旁正常胃组织淋巴细胞中FOXP3mRNA的表达进行对比和统计分析. 采用免疫组织化学SP法检测30例胃癌组织和20例正常胃组织中FOXP3蛋白表达.结果:FOXP3 mRNA在胃癌患者PBMC和胃癌组织淋巴细胞中的表达明显高于其在健康对照组PBMC和正常胃组织淋巴细胞中的表达(t=25.615, 23.894, 均P<0.01). FOXP3蛋白在胃癌组织中的的表达显著其在高于正常胃组织中的表达(t=4.868, P<0.01).结论:高表达的FOXP3可能导致胃癌细胞免疫逃逸, 参与胃癌的发展过程.     

支气管哮喘大鼠转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症的关系

目的探讨支气管哮喘(简称哮喘)转录因子T-bet/GATA-3表达量比值的变化及其与气道炎症的关系。方法24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组,每组12只。用动物肺功能仪测定大鼠气道反应性;用苏木精-伊红染色观察气道病理改变;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、γ干扰素(IFN-γ)含量;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测肺组织中IL-4、IL-5、IFNγ-、T-bet和GATA-3 mRNA的表达水平;用免疫印迹(W estern b lot)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果用同等剂量氯化乙酰胆碱(20、40、80、160μg/m l)激发时平均呼气阻力哮喘组分别为(6.26±0.85)、(11.55±3.09)、(28.74±5.94)、(3 710.83±197.49)cm H2O.m l-1.s-1,对照组分别为(1.51±0.18)、(2.15±0.36)、(6.08±1.06)、(37.17±6.12)cm H2O.m l-1.s-1,两组不同激素剂量比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞数,管壁面积/支气管管腔内周长(WA/P i)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/P i)哮喘组分别为(26.0±1.6)个/mm2、(45.2±3.2)个/mm2、12.0±1.4、6.7±0.6,对照组分别为(2.9±1.2)个/mm2、(8.8±1.8)个/mm2、6.4±0.8、2.7±0.5,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);BALF中IL-4、IL-5和IFN-γ含量哮喘组为(23.4±0.7)pg/m l、(24.8±0.5)pg/m l和(21.7±1.1)pg/m l,对照组为(9.3±0.3)pg/m l、(12.5±0.3)pg/m l、(65.8±2.1)pg/m l,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01);肺组织中IL-4、IL-5和IFN-γmRNA表达水平哮喘组分别为2.260±0.210、0.510±0.100、0.100±0.020,对照组分别为0.060±0.020、0.160±0.020、0.850±0.260,两组比较差异有统计学意义(P均<0.01)。肺组织中T-bet/GATA-3 mRNA表达量比值对照组为0.73±0.32,哮喘组为0.06±0.09,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);肺组织中T-bet/GATA-3蛋白表达量比值哮喘组为0.09±0.04,对照组为0.75±0.25,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。两组大鼠T-bet/GATA-3蛋白表达量比值与20、40、80μg/m l氯化乙酰胆碱激发时的呼气阻力呈负相关(r分别=-0.959、-0.919、-0.943,P均<0.01);与EOS数、淋巴细胞数呈负相关(r=-0.832、-0.831,P均<0.01);与WA/P i、ASM/P i呈负相关(r=-0.837、-0.863,P均<0.01);与BALF中IL-4和IL-5含量呈负相关(r=-0.921、-0.920,P均<0.01);与IFN-γ含量呈正相关(r=0.934,P<0.01);与肺组织中IL-4、IL-5mRNA表达水平呈负相关(r=-0.964、-0.931,P均<0.01);与IFN-γmRNA表达呈正相关(r=0.983,P<0.01)。结论转录因子T-bet/GATA-3失衡表达与气道炎症密切相关,能客观反应哮喘免疫失衡,很可能是哮喘气道炎症形成的重要原因之一。     

罗格列酮对支气管哮喘急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet/GATA-3表达的调控

目的 探讨罗格列酮对支气管哮喘（简称哮喘）急性发作期患者T淋巴细胞转录因子T-bet与转录因子GATA-3表达的调控、对Th1／Th2细胞因子的影响及与地塞米松（DXM）作用机制的异同。方法 哮喘急性发作期患者（A组）10例及健康自愿者（B组）10名。分离、纯化、培养外周血T淋巴细胞，根据实验要求将两组分为3、24h组，再根据不同的干预分为：未干预对照组（A1组、B1组）、罗格列酮干预组（A2组、B2组）及DXM干预组（A3组、B3组）；用酶联免疫吸附（ELISA）法检测T淋巴细胞培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）及白细胞介素4（IL-4）的水平，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测T淋巴细胞T-bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达水平。结果 A组3、24hT淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IFN-γ／IL-4和T淋巴细胞的T-bet mRNA、T-bet mRNA／GATA-3 mRNA水平分别为357±31、783±47、5．5±1．0、8．4±1．5、18．7±3．7、11．9±2．9、1．20±0．11、0．290±0．020．与B组3、24h（659±41、1394±120、11．5±3．0、17．4±4．0、29．0±4．0、18．9±4．0、3．82±0．81、0．870±0．090）比较差异有统计学意义（t值分别为18．59、5．95、14．87、6．25、6．06、4．63、10．23、18．67，P均〈0．05），A组3、24h IL-4、GATA-3 mRNA水平分别为65±6、96±9、16．4±4．2、41±6，与B组3、24h（57±5、83±7、7．8±2．2、23±4）比较差异有统计学意义（t值分别为3．19、3．90、5．77、7．76，P均〈0．05）；A、B组T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4、IFN-γ／IL-4在3h水平分别为357±31、65±6、5．5±1．0、659±41、57±5、11．5±3．0，与24h（783±47、96±9、8．4±1．5、1394±120、83±7、17．4±4．0）水平比较差异有统计学意义（t值分别为23．8、9．48、5．03、18．21、9．01、3．53，P均〈0．05）：A、B组T淋巴细胞T-bet mRNA和T-bet mRNA／GATA-3 mRNA在3h时分别为18．7±3．7、1．20±0．11、29.0±4．0、3.82±0．81，与24h（11．9±2．9．0．290±0．020、18．9±4．0、0．870±0．090）水平比较差异有统计学意义（t值分别为4．62、5．66、29．67、11．5，P均〈0．05），但A、B组GATA-3 mRNA在3h（16．4±4．2．7．8±2．2）的水平，分别低于24h（41±6、23±4）水平（t值分别为10．70、10．11，P均〈0．05）；A组T淋巴细胞T-bet mRNA表达与T淋巴细胞培养上清液中IFN-γ呈正相关r=0．581，P〈0.05），与IL-4呈负相关（r=-0．493，P〈0．05）；A组GATA-3 mRNA表达与IFN-γ呈负相关（r=-0.501，P〈0．05），与IL-4呈正相关（r=0．579，P〈0．05）；A组T—bet mRNA／GATA-3 mRNA比值与IFN-γ/IL4比值呈正相关（r=0．696，P〈0．05）。结论 罗格列酮通过影响哮喘急性发作期患者T淋巴细胞T-bet和GATA-3的表达，从而调控IFN-γ和IL-4的平衡。     

支气管哮喘患者Th2细胞过度分化与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用

目的　探讨支气管哮喘 (简称哮喘 )患者是否存在Th2细胞过度分化以及转录因子T bet和GATA 3的调控作用。方法　将 32例哮喘患者 (A组 )和 2 0名健康对照者 (B组 )纳入研究。A组中儿童型 (A1组 )和成人型 (A2 组 )分别为 12、2 0例 ,变应原皮试阳性 (AⅠ 组 )和阴性 (AⅡ 组 )者分别为 18、14例。采用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测哮喘患者外周血淋巴细胞培养上清液中白细胞介素 4 (IL 4 )和γ干扰素 (INF γ)浓度 ,用直接免疫荧光标记法测定淋巴细胞中CCR3 和CCR5 阳性细胞率 ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和流式细胞术 (FCM)测定淋巴细胞中T bet、GATA 3mRNA表达水平。结果　A组和B组患者淋巴细胞培养上清液中IL 4、INF γ浓度分别为 (118± 2 5 ) μg/L、(75± 12 ) μg/L、(6 5 1± 85 ) μg/L、(1179± 332 ) μg/L ,A、B两组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 0 1) ;A1组和A2 组淋巴细胞培养上清液中IL 4浓度分别为 (12 1± 2 5 ) μg/L、(118± 2 5 ) μg/L ;INF γ浓度分别为 (6 39±132 ) μg/L、(6 6 1± 84 ) μg/L ,A1和A2 组分别与B组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 1) ,但A1组与A2 组间比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。AⅠ 组与AⅡ 组IL 4浓度分别为 (12 6± 2 3) μg/L、(10 7± 2 6     

IgA肾病外周血单个核细胞T-betGATA-3ROR-γt和Foxp3mRNA的表达及其意义研究

目的 在mRNA水平探讨IgA肾病患者外周血Th1、Th2、Th17和Treg细胞免疫失衡及其与IgA肾病(IgAN)牛津分型的相关性。方法 以2010年11月至2011年11月在大连医科大学附属第一医院肾内科经肾活检病理确诊的原发性IgAN患者为研究对象,应用实时荧光定量PCR检测IgAN患者(20例)和健康对照组(10名)外周血单个核细胞的特异性转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γt、Foxp3的mRNA表达水平。结果 与对照组比较,IgAN组ROR-γt表达明显升高(P<0.05)、Foxp3表达明显下降(P<0.05),且ROR-γt/Foxp3比值明显升高(P<0.05);而T-bet、GATA-3的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。按IgAN牛津分型病理指标分组结果比较显示,M1组T-bet表达及T-bet/GATA-3的比值较M0组明显升高(P<0.05)。进一步相关分析显示,IgAN组T-bet表达与系膜增殖积分呈显著正相关(r=0.541,P<0.01)。S1组T-bet表达显著升高(P<0.01),ROR-γt表达无明显差异(P>0.05),T-bet/ROR-γt比值明显升高(P<0.05);而GATA-3、Foxp3无变化(P>0.05)。结论 IgAN患者外周血单个核细胞在mRNA水平出现了偏向Th17极化,而Treg的应答被抑制。IgAN系膜增殖程度与Th1极化呈正相关,而肾小球节段硬化的Th1/Th17的比值明显升高。