TRAIL基因修饰脐带间充质干细胞联合5-氟尿嘧啶对U-87MG、A549及HeLa细胞杀伤作用研究

目的 研究TRAIL基因修饰的脐带间充质干细胞（TRAIL-MSCs）联合化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）对人脑胶质瘤细胞U-87MG、人肺癌细胞A549和人宫颈癌细胞HeLa的杀伤作用。方法 通过基因工程手段结合慢病毒转染体系构建高表达十二聚体TRAIL蛋白（dTRAIL）的TRAIL-MSCs,应用流式细胞技术检测TRAIL-MSCs的生物学特性;通过ELISA技术检测TRAIL-MSCs分泌的TRAIL量来评估转染效果;CCK-8法检测低浓度（0、1、2、4、8、16 μg/mL）5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞的增殖抑制率,并计算其对各细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）;CCK-8法检测5-FU（IC₅₀）、UC-MSCs培养上清、TRAIL-MSCs培养上清、5-FU（IC₅₀）＋UC-MSCs培养上清和5-FU（1/4 IC₅₀、1/2 IC₅₀和IC₅₀）＋TRAIL-MSCs培养上清对U-87MG、A549、HeLa细胞的增殖抑制率,计算5-FU和TRAIL-MSCs培养上清的相互作用系数（CDI）;Westernblotting法检测5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞死亡受体DR4、DR5蛋白表达的影响;台盼蓝染色法观察5-FU、UC-MSCs、TRAIL-MSCs、5-FU＋UC-MSCs和5-FU＋TRAIL-MSCs对U-87MG、A549、HeLa细胞的杀伤作用。结果 生物学检测结果表明TRAIL-MSCs在维持UC-MSCs生物学特性的同时能够高表达TRAIL蛋白。5-FU对U-87MG、A549、HeLa细胞均有增殖抑制作用,抑制作用由高到底依次为HeLa细胞（IC₅₀为9.15 μg/mL） >A549细胞（IC₅₀为10.62 μg/mL） >U-87MG细胞（IC₅₀为22.37 μg/mL）。与对照组比较,除A549细胞UC-MSCs培养上清组外,各处理组细胞增殖抑制率均显著升高（P<0.01、0.001）;与相应各5-FUIC₅₀及TRAIL-MSCs培养上清组比较,U-87MG、HeLa细胞5-FU （1/4 IC₅₀、1/2 IC₅₀和IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组细胞增殖抑制率均显著升高（P<0.001）,A549细胞5-FU （IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01、0.001）;5-FU （1/2 IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组对U-87MG的细胞增殖抑制协同效应最显著（CDI<0.7且P<0.001）; 5-FU （1/4 IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组对A549的细胞增殖抑制具有协同作用,但其协同效果并不显著; 5-FU （1/4 IC₅₀） ＋TRAIL-MSCs培养上清组对HeLa细胞增殖抑制的协同效果最显著（CDI<0.7且P<0.01）。经5-FU处理后U-87MG、A549、HeLa细胞DR4和DR5的蛋白表达明显升高,其中DR5的表达水平高于DR4,与对照组比较差异均具有统计学意义（P<0.001）。与对照组比较,5-FU、TRAIL-MSCs和5-FU＋TRAIL-MSCs组对于肿瘤细胞U-87MG、A549、HeLa均具显著的杀伤作用（P<0.001）;与5-FU或TRAIL-MSCs组比较,5-FU＋TRAIL-MSCs组的杀伤效果更显著（P<0.001）。结论 TRAIL-MSCs联合低浓度的5-FU对肿瘤细胞U-87MG、A549和HeLa具有显著的细胞杀伤作用,二者联用协同效果显著,机制可能与5-FU提高DR4、DR5蛋白表达、提高肿瘤细胞对TRAIL-MSCs的敏感性相关。     

槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的 观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制。方法 用不同浓度槲皮素（空白对照、20、40、80 μmol/L）,顺铂（空白对照、5、10、15、20 μg/mL）以及两者联合（槲皮素40 μmol/L+顺铂 10 μg/mL）分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝（MTT法）检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92±3.953）%（20 μmol/L组）、（66.54±3.932）%（40 μmol/L组）和 （52.21±2.970）%（80 μmol/L组）,均低于空白对照组的（98.35±1.230）% ;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为（65.19±7.071）%（20 μmol/L组）、（47.04±8.881）%（40 μmol/L组）和 （29.71±6.505）%（80 μmol/L组）,均低于空白对照组的（96.97±1.788）%。;此外,槲皮素40 μmol/L+顺铂 10 μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为（31.12±2.835）%; 48 h后,细胞活力下降为（17.86±3.182）%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,（31.12±2.835）%; 48 h后,细胞活力下降为（17.86±3.182）%（P<0.05）。细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G₀/G₁期数量,减少S期数量。Western blot结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结论 槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡。     

丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/Akt通路逆转人喉癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的 研究丹参酮Ⅱ_A对人喉癌细胞顺铂耐药的影响作用及机制。方法 以不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞和人喉癌顺铂耐药细胞（Hep-2/DDP）48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度（IC₅₀）和耐药指数（RI）。以不同质量浓度（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L）丹参酮Ⅱ_A干预对数生长期Hep-2细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC₅₀;采用丹参酮Ⅱ_A（IC₅₀5.32 mg/L）＋不同质量浓度（0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L）顺铂干预对数生长期Hep-2/DDP细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算2种药物联用的IC₅₀和逆转倍数（RF）。取对数生长期Hep-2/DDP细胞,设置对照组、顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组、丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组。各组分别给药干预48 h后,采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、激活型半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、cleaved Caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（Akt）蛋白表达情况。结果 顺铂对Hep-2细胞的IC₅₀为4.58 mg/L,对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为14.09 mg/L,RI为3.08;丹参酮Ⅱ_A对Hep-2细胞的IC₅₀为5.32 mg/L;丹参酮Ⅱ_A联合顺铂对Hep-2/DDP细胞的IC₅₀为3.34 mg/L,RF为4.22。与对照组比较,顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.01）;与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.05）;与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著升高,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著降低（P<0.05）。与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化（p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt）水平显著降低（P<0.05）。与顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著降低（P<0.05）。与丹参酮Ⅱ_A＋顺铂组比较,丹参酮Ⅱ_A＋顺铂＋IGF-1组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结论 丹参酮Ⅱ_A可逆转人喉癌细胞顺铂耐药,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路活化而促进喉癌细胞凋亡有关。     

注射用益气复脉（冻干）与9种临床常用药物配伍小鼠类过敏研究

目的 观察注射用益气复脉（冻干）（YQFM）与顺铂（Cisplatin,DDP）联合对肺癌细胞株A549增殖抑制的协同效应及作用机制。方法 采用CCK-8法检测YQFM、DDP以及两药联用对肺癌细胞株A549的增殖影响,并应用两药相互作用指数评价药物的联合效应;采用荧光探针JC-1来检测线粒体膜电位的变化,Wester Blotting检测凋亡相关蛋白Bax、Cleaved-Caspase 3表达。结果 药物作用时间48 h,与DDP等剂量组比较,联合用药（YQFM 16.25 mg/mL+DDP 1.25 μg/mL、YQFM 16.25 mg/mL+DDP 2.5 μg/mL、YQFM 16.25 mg/mL+DDP 5.00 μg/mL）组细胞增殖抑制率显著增加（P<0.05）。与对照组比较,各给药组凋亡率均显著升高（P<0.05）;与DDP组比较,联合用药组凋亡率显著升高（P<0.05）。与对照组比较,DDP 5.0、10.0 μg/mL组和各联合用药组促凋亡蛋白Bax表达显著增加（P<0.05）;DDP质量浓度为5.0、10.0 μg/mL时,联合用药组与DDP单独给药组比较,Bax蛋白表达量显著升高（P<0.05）。与对照组比较,各给药组凋亡蛋白Cleaved-caspase 3表达量显著升高（P<0.05）;DDP质量浓度为5.0、10.0 μg/mL时,联合用药组与DDP单独给药组比较,Cleaved-caspase 3蛋白表达量显著升高（P<0.05）。结论 YQFM联合DDP对A549细胞增殖存在协同抑制作用,机制可能与诱导线粒体凋亡相关。     

银杏达莫注射液联合鼠神经生长因子治疗重型急性颅脑损伤的临床研究

目的 探讨消岩汤逆转肺癌顺铂（DDP）耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;siRNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Werstern blotting检测mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Western blotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药相关蛋白（LRP）蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1（YAP1）、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论 消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

五味子乙素通过ROS介导内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 研究五味子乙素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 用细胞计数试剂(CCK-8)检测不同浓度五味子乙素对MDA-MB-231细胞存活率的影响;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）作用 MDA-MB-231 细胞 24 h,分别用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡情况;用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;用Western blot法检测细胞凋亡及内质网应激相关蛋白（Bcl-2、Bax、CHOP、GPR78、PERK、p-PERK、p-eIF2α、eIF2）的表达。结果 与空白组比较,随着五味子乙素浓度增大,细胞存活率明显降低,其IC₅₀为19.16 μmol/L;与对照组比较,五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均能抑制细胞克隆形成(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均可诱导细胞凋亡（P<0.05）,使抗凋亡蛋白BCL-2的表达显著降低,促凋亡蛋白Bax的表达显著升高(P<0.05);五味子乙素（10、20、40 μmol/L）显著升高细胞内ROS水平(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）能够激发内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP、GPR78、p-eIF2α表达增多(P<0.05),且呈剂量依赖。结论 五味子乙素可能通过ROS介导内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

基于淫羊藿次苷Ⅱ代谢行为的体外药物相互作用研究

目的 应用体外实验方法筛选淫羊藿次苷Ⅱ在肝微粒体中的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）抑制剂,为改善淫羊藿次苷Ⅱ生物利用度提供新思路。方法 首先选择槲皮素、山柰酚、桔皮素、柚皮素、水飞蓟素、草质素、胡椒碱、甘草查尔酮A以及异银杏双黄酮作为抑制剂筛选对象,对以上9种化合物在人肝微粒体、人肠微粒体、大鼠肝微粒体、猴肝微粒体及小型猪肝微粒体中对淫羊藿次苷Ⅱ葡萄糖醛酸化反应的抑制作用进行初步研究。抑制剂分别选择低、中、高3个浓度（1、10、100 μmol/L）,采用超快速高效液相色谱（UFLC）法测定代谢产物生成速率,以UGT代谢酶残余活性评价抑制能力。从中筛选出抑制能力较强的化合物（半数抑制浓度IC₅₀≤10 μmol/L）,对其在人肝微粒体中的抑制机制进行系统研究并计算IC₅₀及抑制常数（K_i）值。IC₅₀值的测定采用单一底物浓度法,在不同浓度代谢酶抑制剂的孵育体系中,代谢产物的生成速率不同,应用非线性回归分析计算而得。K_i的测定需在孵育体系中设计3～4个底物浓度以及4～5个包括0点在内的抑制剂浓度,抑制动力学类型通过Dixon作图法和Lineweaver-Burk作图法确定,采用二次作图法计算K_i。结果 山柰酚、槲皮素及甘草查尔酮A对淫羊藿次苷Ⅱ在不同种属肝微粒体及人肠微粒体中的葡萄糖醛酸化反应均具有较强的抑制作用;对在人肝微粒体中的葡萄糖醛酸化反应抑制作用的IC₅₀值分别为（1.01±0.26）、（4.65±0.51）、（5.34±1.00） μmol/L;Dixon作图法及Lineweaver-Burk作图法表明,甘草查尔酮A能够竞争性抑制淫羊藿次苷Ⅱ在人肝微粒体中的葡萄糖醛酸化反应,K_i值为0.18 μmol/L;槲皮素遵循混合型抑制动力学模型,K_i值为0.23 μmol/L;山柰酚符合非竞争型抑制动力学模型,K_i值为0.36 μmol/L。结论 山柰酚、槲皮素及甘草查尔酮A能够降低淫羊藿次苷Ⅱ在不同种属肝微粒体中的葡萄糖醛酸化反应速率,使代谢产物生成减少,清除减慢。     

乌骨藤中C21甾体苷诱导SACC-83和SACC-LM细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 研究乌骨藤提取物C₂₁甾体苷对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinomacv,SACC）低侵袭细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma-83,SACC-83）和肺高转移细胞株（SACC-LM）增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 用不同浓度（5,10,20,40,60,80,100 μmol·L^-1） C₂₁甾体苷处理SACC-83和SACC-LM细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,并计算药物的IC₂₀和IC₅₀;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测SACC-83及SACC-LM细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测SACC-83和SACC-LM细胞Bcl-2、Bax、caspase 3的mRNA和蛋白的表达。结果 不同浓度的C₂₁甾体苷降低SACC-83和SACC-LM细胞活力,抑制细胞增殖,并且作用于SACC-83细胞C₂₁甾体苷的IC₂₀浓度为7.49 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为38.34 μmol·L^-1;作用于SACC-LM细胞的C₂₁甾体苷IC₂₀浓度为9.30 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为46.04 μmol·L^-1;细胞克隆集落形成明显减少。C₂₁甾体苷IC₂₀浓度分别促进SACC-83及SACC-LM细胞凋亡,且随着给药时间延长,凋亡率增加,具有显著性差异（P<0.05,P<0.01）。经7.49,9.30 μmol·L^-1 C₂₁甾体苷分别处理SACC-83及SACC-LM细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白水平显著降低（P<0.01）,而Bax、Caspase 3的mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论 乌骨藤C₂₁甾体苷抑制SACC-83及SACC-LM细胞增殖、促进凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax和Caspase 3表达有关。     

头风痛胶囊联合倍他司汀治疗血管性头痛的疗效及对血清细胞因子的影响

目的 探究GP73是否通过上皮间质转化（EMT）影响肝癌细胞对奥沙利铂耐药。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blotting实验检测GP73在肝癌患者癌旁和癌组织中的表达变化;Western blotting检测GP73在SMMC7721、Bel-7404和HepG2细胞株中表达差异;采用浓度梯度递增方法建立HepG2奥沙利铂获得性耐药细胞株,通过MTT法检测奥沙利铂（2、4、8、16、32 μmol/L）对亲本细胞和耐药细胞活性的影响;采用Western blotting实验检测HepG2亲本细胞和耐药细胞中GP73及上皮间质转化相关分子N-cadherin、Vimentin、E-cadherin的表达;利用siRNA/质粒分别干扰或过表达GP73,采用MTT法检测奥沙利铂（2、4、8、16、32 μmol/L）对干扰GP73前后耐药细胞活性的影响;通过Westernblotting实验检测Vimentin、N-cadherin和E-cadherin的表达。结果 与癌旁组织比较,GP73 mRNA和蛋白水平在肝癌组织中均显著上调（P<0.05）;与SMMC7721和Bel-7404GP73细胞比较,GP73在HepG2细胞中显著高表达（P<0.05）。奥沙利铂对亲本和耐药细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（12.03±0.06）、（19.26±0.04）μmol/L;干扰GP73后奥沙利铂对耐药细胞的抑制率升高,8、16、32 μmol/L浓度组差异显著（P<0.05）。与亲本细胞比较,耐药细胞中GP73、N-cadherin及Vimentin蛋白表达显著上调（P<0.05）,而E-cadherin蛋白表达显著下调（P<0.05）。干扰GP73后,Vimentin、N-cadherin表达显著下调,E-cadherin的表达显著上调（P<0.05）;过表达GP73后,Vimentin、N-cadherin表达显著上调,E-cadherin的表达显著下调（P<0.05）。结论 GP73对人肝癌细胞奥沙利铂耐药具有促进作用,其作用机制可能与调节EMT相关。     

异钩藤碱调节EGFR/FAK信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和5-FU耐药性的影响

目的 探讨异钩藤碱调节表皮生长因子受体（EGFR）/局部黏着斑激酶（FAK）信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药性的影响。方法 取对数生长期的 HepG2 细胞,分为对照组,异钩藤碱低、中、高浓度（32.5、65.0、130.0 μmol·L^-1）组,异钩藤碱（130 μmol·L^-1）＋EGFR 激活剂 NSC228155（2 μmol·L^-1）组 ;对数生长期的 5-FU 耐药肝癌细胞系 HepG2/5-FU 分为对照组 、异 钩 藤 碱（ 130 μmol · L^-1 ）组 、5-FU（ 60 μmol · L^-1 ）组 、异 钩 藤 碱（ 130 μmol · L^-1）＋5-FU（60 μmol·L^-1）组、异钩藤碱（130 μmol·L^-1）＋5-FU（60 μmol·L^-1）＋NSC228155（2 μmol·L^-1）组。给药处理 24 h,对照组不给药。EdU 染色、CCK-8 检测 HepG2 或 HepG2/5-FU 细胞增殖;划痕实验检测 HepG2 或 HepG2/5-FU 细胞迁移;Westernblotting 检测细胞中细胞周期蛋白 D1（CyclinD1）、迁移侵袭增强子因子 1（MIEN1）、P-糖蛋白（P-gp）、p-EGFR、p-FAK蛋白表达。结果 与对照组相比,异钩藤碱低、中、高浓度组 EdU 阳性率、吸光度（A₄₅₀）值、划痕愈合率、CyclinD1、MIEN1、p-EGFR、p-FAK 蛋白表达显著降低,且呈浓度相关性（P＜0.05）;与异钩藤碱 130.0 μmol·L^-1组相比,异钩藤碱＋NSC228155 组 HepG2 细胞 EdU 阳性率、A₄₅₀ 值、划 痕 愈 合 率 、 CyclinD1、 MIEN1、 p-EGFR、 p-FAK 蛋 白 表 达 显 著 升高（P＜0.05）。与对照组相比,5-FU 组 HepG2/5-FU 细胞 EdU 阳性率、A₄₅₀值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK 蛋白表达显著降低（P＜0.05）;与异钩藤碱组、5-FU 组相比,异钩藤碱＋5-FU 组 HepG2/5-FU 细胞 EdU 阳性率、A₄₅₀值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK 蛋白表达降低（P＜0.05）;与异钩藤碱＋5-FU 组相比,异钩藤碱＋5-FU+NSC228155 组 HepG2/5-FU 细胞 EdU 阳性率、A₄₅₀值、划痕愈合率、P-gp、p-EGFR、p-FAK 蛋白显著上调（P＜0.05）。结论 异钩藤碱抑制 HepG2细胞增殖、迁移及降低 5-FU 耐药性的机制可能与阻断 EGFR/FAK 通路有关。     

竹节香附素A抗肿瘤作用机制的研究进展

竹节香附素A是两头尖中主要含有的三萜皂苷,具有较强的抗肿瘤活性。竹节香附素A可抑制肿瘤细胞增殖,诱导其凋亡和自噬;诱导肿瘤细胞周期阻滞;抑制侵袭和转移;增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。总结了竹节香附素A的抗肿瘤作用机制,以期为竹节香附素A的开发利用和临床应用提供依据。     

基于FAERS的胺碘酮相关失明不良事件信号挖掘研究

目的 基于FAERS对胺碘酮相关失明药物不良事件(adverse drug event,ADE)进行信号挖掘,探索相关失明ADE的发生特点以及胺碘酮与相关失明ADE的相关性。方法 提取FAERS 2016年第1季度-2021年第4季度共24个季度的胺碘酮相关失明ADE报告数据,利用报告比值比法和综合标准法进行数据挖掘。得到有效信号后,再利用MedDRA规范进行汉化及系统归类。结果 获得胺碘酮报告数39 166个,胺碘酮相关失明ADE报告503个,其中失明、单侧盲、黑朦、一过性黑朦4个首选语运用2种方法均提示生成可疑信号。在503份患者报告中,男性所占比例(64.41%)高于女性(31.22%),在已知年龄的患者中,年龄主要集中在 ≥ 65岁(6.16%)。报告人员以律师和消费者为主90.46%,医务人员占比较低;除给药途径未知的患者,其余所有患者给药途径为口服(66.80%)。胺碘酮相关失明ADE的中位发病时间为692 d(四分位间距422.5~1 045.75 d);占比最高的患者结局为其他严重的医疗事件,报告病例279例(55.47%),患者结局为死亡的报告病例73例(14.51%),居第3位。结论 需重视胺碘酮的失明风险,重点关注男性、>65岁老人、给药途径为口服的患者,加强用药前的眼科评估及用药中、用药后的眼部监测,及时诊断和治疗可防止相关失明ADE的发生。     

桂枝汤药理作用研究进展

桂枝汤由桂枝、芍药、甘草、大枣和生姜5味药组成，具有解肌发表、调和营卫的功效，是中医常用治疗外感风寒表虚证之方。现代药理研究表明桂枝汤不仅对体温、汗腺分泌、血压、免疫功能及胃肠运动有调节作用，还具有抗炎、抗菌、抗病毒、降低血糖和心血管保护等作用。就近年来国内外对桂枝汤药理作用的研究进展进行综述，以期为进一步深入研究与综合开发利用桂枝汤奠定基础。     

甘精胰岛素联合西格列汀对首诊2型糖尿病血糖波动炎症因子及低血糖事件的影响

目的 探讨甘精胰岛素联合西格列汀对首诊2型糖尿病（T2DM）患者血糖波动、炎症因子及低血糖事件的影响。方法 选择2017年6月至2018年10月在无锡市第三人民医院接受治疗的124例首诊T2DM患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与观察组,每组62例。对照组给予甘精胰岛素联合瑞格列奈治疗,观察组给予甘精胰岛素联合西格列汀治疗。比较两组患者空腹血糖（FBG）、餐后2 h血糖（2 h PBG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、日内血糖平均波动幅度（MAGE）、日内血糖波动次数（NGE）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）、体质指数（BMI）,以及低血糖发生率和甘精胰岛素用量的差异。结果 观察组患者治疗后的MAGE为（2.53±1.19）mmol/L、NGE为（1.53±0.93）mmol/L,均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者治疗前与治疗后MAGE、NGE的差值进行比较,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组患者治疗后的血清CRP水平为（2.76±1.03）mg/L、TNF-α为（19.83±8.41）ng/L、IL-6为（18.61±4.73）ng/L,均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者治疗前与治疗后血清CRP、TNF-α、IL-6差值进行比较,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组患者治疗后的BMI为（23.24±2.83）kg/m²,对照组为（24.29±3.05）kg/m²,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组患者低血糖发生率为1.60%、甘精胰岛素用量为（25.54±5.09）U/d,均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 甘精胰岛素联合西格列汀能够减少血糖波动,减轻机体微炎症反应,减少低血糖发生率和甘精胰岛素用量。     

茜素型蒽醌基因突变风险评价

目的 使用毒性预测软件及细菌回复突变（Ames）试验评价茜素型蒽醌的基因突变风险。方法 通过毒性软件Toxtree、Derek Nexus和Sarah Nexus对茜素型蒽醌：茜草素、异茜草素、甲基异茜草素、甲基异茜草素-1-甲醚、茜素-1-甲醚、羟基茜草素、光泽汀进行致突变风险预测;每个受试物设置5个给药浓度,分别在有或无S9代谢活化条件下,使用5种鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA100、TA102、TA1535和TA1537开展基于6孔板培养的Ames试验,判断该类化合物苯环上不同取代基对致突变性的影响。结果 软件基于蒽醌环的存在预测该类化合物均具有致突变风险。在非S9代谢活化下,异茜草素和羟基茜草素可导致TA1537回复突变菌落数增加;光泽汀可诱导TA97、TA100和TA1537回复突变菌落数增加。在S9代谢活化下,异茜草素可导致TA97、TA100和TA1537回复突变菌落数增加;羟基茜草素可导致TA1537回复突变菌落数增加;光泽汀可导致TA97、TA100和TA1537回复突变菌落数增加;甲基异茜草素可导致TA97、TA100、TA102和TA1537回复突变菌落数大幅增加;甲基异茜草素-1-甲醚可导致TA100回复突变菌落数增加。结论 茜素型蒽醌受试物在有或无S9代谢条件下表现出不同程度、不同菌株的回复突变,开展相关研究评价其毒性风险对该类化合物合理监管具有重要价值。     

香贝散通过激活AMPK/mTOR信号通路抑制人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231生长

目的 探讨香贝散体外抗乳腺癌作用及其分子机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞 MCF-7、MDA-MB-231,给予香贝散 1、2、3、4、5 mg·mL^-1加药处理,对照组不加药。利用 MTT 法和克隆形成实验检测细胞增殖,利用流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕和细胞侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,借助吖啶橙染色法观察细胞自噬,借助转录组测序技术探索香贝散诱导乳腺癌细胞死亡的作用机制,并采用 Western blotting 法检测 AMP 依赖的蛋白激酶（AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、LC-3、Beclin-1 蛋白表达水平。结果 与对照组比较,香贝散显著抑制人乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231 细胞活力（P＜0.05、0.001）,48 h 半数抑制浓度（IC₅₀）分别为 2.344、1.961 mg·mL^-1,且具有时间、浓度相关性;显著抑制 MCF-7、MDA-MB-231 细胞的集落形成能力;显著诱导 MCF-7、MDA-MB-231 细胞凋亡（P＜0.001）;明显抑制人乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231 细胞的体外迁移能力和侵袭能力;吖啶橙染色实验结果提示香贝散能够诱导 MCF-7、MDA-MB-231 细胞发生自噬,Western blotting 实验结果显示香贝散能够显著上调 MCF-7、MDA-MB-231 细 胞 中 自 噬 关 键 蛋 白 Beclin-1 和 LC3-Ⅱ的表达（P＜0.01、0.001）;转录组测序技术发现差异基因变化最明显的通路包括 mTOR 信号通路、自噬信号通路等 ,Western blotting 实验结果显示香贝散显著下调 mTOR 的磷酸化水平（P＜0.001）,显著上调 AMPK 的磷酸化水平（P＜0.001）。结论 香贝散能够显著抑制人乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,能够诱导凋亡和自噬的发生,激活 AMPK/mTOR 信号通路可能是其重要机制。     

果糖二磷酸钠联合阿替普酶治疗急性脑梗死的临床研究

目的分析果糖二磷酸钠联合阿替普酶治疗急性脑梗死的临床效果。方法选取2017年1月—2019年1月安阳市第二人民医院收治的急性脑梗死患者93例,随机分为对照组(47例)和治疗组(46例)。对照组患者iv注射用阿替普酶,0.9 mg/kg,其中10%药量静脉推注1 min,剩下90%的药物静脉泵注1 h。治疗组在对照组的基础上口服果糖二磷酸钠片,4片/次,3次/d。两组患者均治疗2周。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者生活能力和神经功能及血管内皮损伤情况。结果治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为78.72%和91.30%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者Barthel明显升高(P0.05),而NIHSS评分明显降低(P0.05),且治疗组Barthel、NIHSS评分改善效果明显优于对照组(P0.05)。治疗后,两组患者s TM和v WF水平均显著降低(P0.05),且治疗组明显低于对照组(P0.05)。结论果糖二磷酸钠联合阿替普酶应治疗急性脑梗死患者具有良好临床效果,可明显提高患者生活能力,改善神经功能和血管内皮损伤。     

注射用丹参多酚酸对急性脑梗死患者NIHSS评分、ADL评分和血清NSE、GST的影响

目的 观察注射用丹参多酚酸对急性脑梗死患者美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）、日常生活活动能力（ADL）评分和血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST）的影响。方法 选取2016年1月1日—2017年7月1日南阳医专第一附属医院神经内科住院的急性脑梗死患者100例为研究对象,按照随机数字表法将患者随机分为对照组和观察组,每组50例。对照组患者在入院后常规治疗,观察组患者在对照组治疗的基础上静脉滴注射用丹参多酚酸,100 mg加入0.9%氯化钠液250 mL静脉滴注,1次/d,连续14 d。分别两组患者NIHSS、ADL评分及GST、NSE水平进行测定。结果 两组患者在治疗后14 d NIHSS评分ADL评分均较治疗前明显改善,差别具有统计学意义（P<0.05）;治疗后14 d,与对照组相比,观察组患者NIHSS评分明显下降,ADL评分明显升高,差别具有统计学意义（P<0.05）。两组患者在治疗后14 d,GST、NSE水平均较治疗前明显改善,差别具有统计学意义（P<0.05）;治疗后14 d,与对照组患者相比,观察组GST及NSE水平改善情况更明显,差别具有统计学意义（P<0.05）。结论 注射用丹参多酚酸能明显提高急性脑梗死患者血清GST水平,降低NSE水平,改善患者ADL、NIHSS评分。     

360例小分子激酶抑制剂不良反应报告分析

目的 分析360例小分子激酶抑制剂不良反应（ADR）发生的一般规律和特点,为临床合理用药提供依据。方法 收集陕西省2016—2020年各级医疗卫生机构上报至陕西省食品药品研究院的360例小分子激酶抑制剂ADR报告,从性别、年龄、给药途径、药物种类、临床转归和ADR累及系统/器官进行统计分析。结果 在360例ADR患者中,男性多于女性,好发于40岁以上的中老年人。ADR累及系统/器官以消化系统为主,其次为皮肤及附件、血液系统、心血管系统。引起ADR最多的药品是伊布替尼。在临床转归方面,痊愈和好转占59.5%。1例“新的”ADR表现为全身皮肤变黑,其是否与该类药物有关有待进一步研究。结论 小分子激酶抑制剂ADR的发生与患者年龄、性别、药物种类等密切关联,并且涉及多个系统或器官,临床使用时应根据具体用药情况采取有效预防措施,以减少或避免ADR的发生,从而优化合理用药,确保患者用药安全。     

疾病状态下有机阳离子转运体对底物转运影响的研究进展

有机阳离子转运体家族是一类位于细胞膜上的功能性膜蛋白,负责转运内源性、外源性阳离子底物,在底物的吸收、分布和排泄过程中发挥着重要作用,其中肝脏、肾脏和消化道处有机阳离子转运体的作用最明显。在疾病状态下有机阳离子转运体的表达和功能会发生改变,会影响底物的体内处置过程,使底物的动力学行为及其效应发生改变。综述了肝脏疾病、肾脏疾病和消化道疾病状态下有机阳离子转运体表达和功能改变对底物体内转运的影响及其生理、药理学意义。