南蛇藤提取物通过调控基质金属蛋白酶组及其抑制因子抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制。方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。Western blotting检测经COE作用后的SGC-7901细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9和金属基质蛋白酶抑制因子(TIMPs)TIMP1、TIMP3的蛋白水平。RT-PCR检测经COE作用后的SGC-7901细胞中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3的m RNA表达情况。结果 Transwell实验显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞穿膜数明显减少并呈一定的浓度依赖性。Western blotting结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞,MMP2、MMP9蛋白的表达水平明显降低,而TIMP1、TIMP3蛋白表达水平明显上调。RT-PCR结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞中MMP2和MMP9的m RNA水平有轻微升高趋势,而TIMP1和TIMP3的m RNA水平明显大幅上调(P0.001)。结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关。而其作用的实现,很可能是通过直接上调TIMP1和TIMP3的m RNA转录水平从而提高TIMPs蛋白表达水平实现的。     

加味茵陈四逆汤对实验性肝纤维化小鼠MMP1和TIMPs表达的影响

目的:观察预防性使用加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠肝组织中基质金属蛋白酶-1(MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)基因表达的影响。方法:将48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组。30%CCl4(1.5 mg/kg,溶解于橄榄油)腹腔注射建立肝纤维化模型,同时给予药物灌胃处理。用药14 d后,各组行HE染色,观察肝脏病理组织学改变。RT-q PCR法检测MMP1、TIMP1和TIMP2 mRNA表达。结果:(1)病理结果显示模型组肝纤维化明显,中药高、中、低剂量组较模型组纤维化减轻;(2)MMP1 mRNA模型组表达量与正常组比较明显减少(P0.05),与阳性药物组、中药中剂量和低剂量组相较表达量同样明显减少(P0.05);(3)TIMP1 mRNA、TIMP2 mRNA模型组表达量比正常组明显增多(P0.05),与阳性药物组和中药中、低剂量组相较均表达量减少(P0.05)。结论:加味茵陈四逆汤可上调肝纤维化小鼠MMP1表达,抑制TIMP1、TIMP2表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。     

脑络通颗粒对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化血管重构的影响

目的观察脑络通颗粒(制首乌、黄精、海藻等)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的影响。方法高脂饲料饲养30只ApoE-/-小鼠10个月,随机分为模型组、脑络通组(6.67 g/kg)、辛伐他汀组(6.67 mg/kg),每组10只。给药后小鼠取血清,生化法检测血脂;取主动脉,Masson染色法观察血管胶原/面积比;Wetern blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)的水平。结果脑络通能调整血脂水平,使血管胶原/面积比增加(P0.01),明显降低MMP2、MMP9、MT1-MMP水平(P0.05),明显升高TIMP1、TIMP2水平(P0.05)。与辛伐他汀组相当。结论脑络通具有改善血管重构的作用,其机制可能与降低MMP2、MMP9、MT1-MMP水平,增加TIMP1、TIMP2的表达有关。     

参附强心胶囊抗充血性心力衰竭大鼠心肌纤维化的作用

心肌纤维化是心脏基质成分合成与降解失衡的结果,为心肌重构的关键。基质金属蛋白酶（MMPs）是一组锌离子（Zn2＋）依赖的内肽酶家族,能特异性降解细胞外基质（ECM）并为基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）及细胞因子所调控。MMPs的正常表达及MMPs／TIMPs的适当比例是维持心肌胶原纤维及心脏结构正常的重要因素。     

铜绿假单胞菌外膜囊泡对肺上皮细胞分泌细胞因子的影响

目的:观察铜绿假单胞菌外膜囊泡(OMVs)对肺上皮细胞分泌细胞因子的影响。方法:培养肺上皮细胞BEAS–2B,采用1、10和30μg·mL-1浓度OMVs刺激12、16或24 h,实时定量聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF–α)和白细胞介素8(IL–8)和mRNA表达。ELISA检测培养上清TNF–α和IL–8分泌的变化;提取核蛋白,采用ELISA测定OMVs处理前后核因子κB(NF–κB)活性,并采用NF–κB抑制剂处理细胞,观察对OMVs诱导TNF–α和IL–8分泌的影响。结果:采用1μg·mL~(-1)、10μg·mL~(-1)和30μg·mL~(-1) OMVs处理BEAS–2B细胞12 h后,TNF–α和IL–8的mRNA水平均高于阴性对照组,呈一定的剂量依赖性。30μg·mL~(-1) OMVs作用细胞4 h后即可上调TNF–α和IL–8 mRNA表达,并持续至16 h。30μg·mL~(-1) OMVs处理细胞后,NF–κB的活性明显增强,NF–κB抑制剂(PDTC)预处理细胞后,TNF–α和IL–8分泌水平降低。结论:OMVs可诱导BEAS–2B表达TNF–α和IL–8,其机制可能与激活NF–κB有关。     

泻火平突散对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞的影响

目的:通过观察泻火平突散对干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)刺激后人球后成纤维细胞的影响来探讨其治疗甲状腺相关眼病(Thyroid Associated Ophthalmopathy,TAO)的机制。方法:将人眼球后成纤维细胞(Retro-ocular Fibroblasts,RFs)作为靶细胞,用泻火平突散进行干预,通过体外培养RFs,观察各组RFs增殖,透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成,基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMP)-1、MMP-2、金属蛋白酶组织抑制因子(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2活性及细胞间粘附分子-1(Intercellular Adhesion Molecule-1,ICAM-1)、人类白细胞DR抗原(Human Leukocyte Antigen DR,HLA-DR)、CD40表达的情况,对实验数据进行统计分析,探讨泻火平突散治疗TAO的作用机制。结论:泻火平突散可通过抑制RFs的增殖和ICAM-1、HLA-DR、CD40的表达,调节MMPs/TIMPs平衡,减少HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成来治疗TAO。     

肺纤维化模型鼠MMP/TIMP基因表达异常及复方甘草酸苷的调控机制研究

目的研究复方甘草酸苷(SNMC)对博莱霉素造模肺纤维化大鼠之基质金属蛋白酶(MMP)活性及其基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)基因表达的调控机制。方法SPF级SD成年大鼠174只,随机分成SNMC大、中、小剂量组,模型组,阳性组及正常组。采用博莱霉素造模肺纤维化大鼠,然后分别腹腔注射SNMC、阳性药物醋酸泼尼松龙或生理盐水;每日1次,至处死前1 d。收集肺组织标本,提取总RNA,采用RT-PCR法检测MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2等基因的相对表达水平。结果SNMC促进纤维化模型大鼠体质量明显下降、肺脏器系数明显上升(P<0.05或0.01)。MMP2/9基因表达在造模12 d后达最高值,随后有较大程度回落。SNMC能够显著性抑制MMP2/9基因表达的异常亢进,且呈一定程度剂量依赖性。TIMP1/2在造模后持续呈显著上升状态,SNMC能够显著性抑制TIMP1/2基因不断升级的异常亢进表达。结论SNMC通过对MMP2/9以及TIMP1/2的系统调控,阻止了肺泡胞外基质的过度增生与异常沉积,促进胞外基质降解,从而拮抗肺纤维化进程。     

血清MMP-2检测的临床应用

基质金属蛋白酶类 (MMPs)可以降解细胞外基质 (ECM )中的主要生物大分子。笔者对MMPs结构分类来源、作用底物及血清MMP - 2检测在慢性肝病、肿瘤、遗传性血色病、急性胰腺炎、血管球性肾炎等疾病中的应用做一综述。1　MMPs的结构、分类来源及作用底物MMPs是一类含有锌原子的、其活性依赖于钙离子的蛋白酶 ,可以降解ECM中的主要大分子。其按作用底物不同主要分为 5大类 :①间质胶原酶 (196 2年发现 ) ,可分为成纤维细胞型 (间质胶原酶MMP - 1)和中性粒细胞型 (MMP -8)。MMP - 1分子量 5 5kD ,来源于结缔组织细胞 (CT)、肝星状…     

化纤复肝方对慢性肝炎患者MMP-1、TIMP-1及其抑制因子表达的影响

目的:观察中药复方化纤复肝方对慢性肝炎患者基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMPs)表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:选取42例肝纤维化患者随机分为两组,治疗组23例,对照组19例,连续治疗6个月。观察治疗前后两组患者肝组织中基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMPs)的不同表达。结果:化纤复肝方能抑制慢性乙型肝炎患者MMP-2和TIMP-1、TIMP-2的表达,其效果明显优于对照组(P<0.05)。结论:化纤复肝方良好的抗肝纤维化的效果与调节肝组织中基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达有关。     

红芪黄酮对肺纤维化模型大鼠基质金属蛋白酶-2及其抑制剂-1蛋白表达的影响

目的探讨红芪黄酮防治肺纤维化的作用机制。方法 SPF级Wistar大鼠216只,分为正常组、模型组、强的松组及红芪黄酮高、中、低剂量组。采用气管内滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型,从造模后第2日起,各药物组分别给予相应剂量药物,按时间点连续灌胃治疗7、14、28 d,免疫组化法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1蛋白的表达。结果红芪黄酮高剂量组第7、14、28日及红芪黄酮中剂量组第14日MMP-2蛋白的表达较模型组明显减轻,差异有统计学意义(P0.05),红芪黄酮高剂量组表达水平与强的松组相似;红芪黄酮高、中剂量组第14日及红芪黄酮高剂量组第28日TIMP-1蛋白表达均较模型组明显减轻,差异有统计学意义(P0.05)。结论红芪黄酮在各个时点调整MMP-2和TIMP-1的蛋白表达,使MMPs/TIMPs趋于平衡,可能是其抑制肺纤维化进程的一种有效机制。     

葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织MMP-10与TIMP-1表达的影响

目的 探讨葛根素对糖尿病大鼠肾小球结构、功能及肾组织基质金属蛋白酶10(MMP—10)、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP—1)表达的影响。方法 ip链脲佐菌素(65mg／kg)诱发糖尿病大鼠模型，每日ip葛根素注射液，共16周。给药结束后，收集尿液，测定尿蛋白(Upro)，尿肌酐(Ucr)含量；腹主动脉取血，测定血糖(Glu)，血肌酐(Scr)，尿素氮(BUN)含量；采用原位杂交法检测肾小球MMP—10，TIMP—1 mRNA表达，流式细胞术和免疫组化检测肾皮质MMP—10、TIMP—1及Ⅳ型胶原、层黏连蛋白(LN)表达。结果 糖尿病组较对照组肾小球MMP—10、TIMP—1 mRNA及蛋白表达增加，肾皮质MMP—10，TIMP—1及Ⅳ型胶原、LN表达亦增加；反映肾功能的各项生化指标水平升高。葛根素用药组较糖尿病组MMT—10、TIMP—1 mRNA、蛋白及Ⅳ型胶原、LN表达减少；肾功能有所改善。结论 葛根素对糖尿病大鼠肾结构功能具有保护作用，除降低血糖外，调节肾小球MMP—10，TIMP—1表达从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

血府逐瘀汤对大鼠血管平滑肌细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的 观察血府逐瘀汤含药血清对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移、侵袭的影响,以及其生成MMP -2、TIMP -1情况,探讨其作用机制.方法 通过划痕损伤实验、Boyden - chamber细胞侵袭实验观察VSMCs的迁移、侵袭,RT - PCR检测血府逐瘀汤含药血清对基质金属蛋白酶-2(MMP -2)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的mRNA表达.结果 与空白对照组比较,血府逐瘀汤高剂量组和中剂量组能显著抑制VSMCs的增殖和迁移(P＜0.05);与空白对照组比较,血府逐瘀汤组均能明显下调MMP-2 mRNA的表达同时上调TIMP-1 mRNA的表达(P＜0.01).结论 血府逐瘀汤含药血清有抑制VASMCs迁移和侵袭的作用,MMP -2表达降低、TIMP -1的表达升高可能是其机制之一.     

MMP/TIMP平衡与缺血性脑卒中的关系

基质金属蛋白酶(MMP)是一类含Zn2+的降解细胞外基质(ECM)的内切蛋白水解酶家族,MMP的表达和酶活性受组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)、酶原活化等多种因素调节,多种因素可导致MMP和TIMP的平衡失调.MMP和TIMP的平衡失调在缺血性脑卒中发病及溶栓治疗中起重要作用,调控MMP和TIMP之间的平衡为缺血性脑卒中的治疗提供了新的思路.     

黄芩苷锌对改善缺血性视神经损伤中氧化应激反应及激活血源性因子修复血神经屏障的作用和机制

目的:探讨黄芩苷锌(HBZn)改善缺血性视神经损伤模型中氧化应激损伤及修复血神经屏障(BNB)的作用及机制。方法:单侧夹闭颈总动脉法建立小鼠视神经损伤模型,随机分为缺血损伤组、假手术组、黄芩苷锌组(3.75,6.5,13 mg·kg-1),黄芩苷组及葡萄糖酸锌(zinc gluconate)组。超微电镜观察视神经细胞线粒体的结构;比色法检测缺血损伤2 h后各组小鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO)的变化。RNA实时荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶(MMPs)/基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定视神经组织中免疫球蛋白G(Ig G)(缺血后12 h),纤维蛋白原(Fibrinogen,缺血后28 h),MMP-9(缺血后2 d)蛋白表达水平。结果:黄芩苷锌(6.5 mg·kg-1)组能保护缺血导致的线粒体损伤,增强机体的抗氧化应激能力,激活SOD活性,降低MDA,MPO水平。能修复血神经屏障,Ig G,Fibrinogen,MMP-9等血源性因子蛋白表达量增加,调节MMPs/TIMPs的平衡。结论:黄芩苷对缺血性视神经损伤有保护作用,作用明显优于单独用药的等摩尔浓度HB组和等摩尔浓度锌的葡萄糖酸锌组,其作用机制可能与保护线粒体,抑制小鼠视神经组织中血源性因子Ig G,Fibrinogen,MMP-9的激活,抑制MMPs家族的表达,调节MMPs/TIMPs的平衡和异常沉积来修复血神经屏障有关,同时证明黄芩苷和锌的络合物增强了单体抗氧化应激和缺血性损伤的能力。     

芪参益气滴丸干预大鼠心肌梗塞后蛋白表达的动态观察

目的探讨心肌梗塞后大鼠心肌肿瘤坏死因子α表达、基质金属蛋白酶(MMPs)及基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)及转化生长因子(TGF)蛋白表达。方法结扎大鼠冠状动脉前降支复制心肌梗塞模型,为心肌梗塞组。同时设假手术组,分别于术后3 d、2周、4周、8周对梗塞区心肌组织采用Western-blot法检测TNF、明胶酶(MMP-9)、TGF及TIMP-1蛋白表达。结果心肌梗塞组不同时相心肌较同期非治疗组肿瘤坏死因子α蛋白表达显著增加,呈时间依赖性;MMP-9、TIMP-1蛋白表达及TGF均较同期非治疗组明显增加。结论肿瘤坏死因子α基因过度表达与MMPs、TGF蛋白表达增加及其活性增强变化相一致,心肌肿瘤坏死因子α表达增加可能是心肌梗塞后心肌间质重塑和心力衰竭发生发展的重要机制之一。     

MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及中药对其作用研究进展

<正>肝纤维化是细胞外基质(ECM)的合成与降解失衡,导致其在细胞间质的过度沉积而引起的,是许多慢性肝病的共同病理过程[1-3]。许多细胞因子参与了这一过程,其中主要由金属蛋白酶(MMPs)及其抑制因子(TIMP)共同调节肝脏ECM的代谢[4]。MMPs几乎能降解ECM的所有成分,而其天然抑制剂-TIMPs能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性[5]。近年来中药通过调节MMPs/TIMPs治疗肝纤维化成为人们研     

桃仁膝康丸对骨性关节炎相关细胞因子和软骨细胞凋亡的影响

目的：用细胞学方法探讨桃仁膝康丸治疗骨性关节炎的作用和机制。方法：人滑膜成纤维细胞采用肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF)-α诱导建立急性炎症模型,采用脂多糖诱导建立巨噬细胞M1极化模型,人软骨细胞采用CoCl₂诱导建立缺氧凋亡模型,通过CCK-8法检测桃仁膝康丸对细胞的毒性,Western Blot检测全长基质金属蛋白酶9(Full-length Matrix Metalloproteinase-9,Full MMP9)、裂解基质金属蛋白酶9(Cleaved Matrix Metalloproteinase-9,Cleaved MMP9)、TNF-α、白细胞介素(Interleukin,IL)-6、全长半胱氨酸蛋白酶3(Full Caspase-3)和裂解半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果：1μL/mL及以下浓度的桃仁膝康丸不影响细胞活力;Western Blot结果显示,桃仁膝康丸显著抑制滑膜成纤维细胞MMP9生成、活化,以及M1巨噬细胞炎症因子生成和软骨细胞Caspase-3活化。结论：桃仁膝康...     

脑梗死病人梗死面积与MMP1、MMP9、TIMP1的关系探讨

目的探讨脑梗死病人基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶9（MMP9）及其组织抑制因子1（TIMP1）与脑梗死面积的关系。方法选择20名正常人作对照组,分别于第1天、第3天、第7天采集肘静脉血;脑梗死组40例,分别于发病后第1天、第3天、第7天采集肘静脉血。两组均应用酶联免疫吸附法检测血清MMP1、MMP9及TIMP1的浓度变化,通过头颅CT评估脑梗死的面积。结果脑梗死组第1天、第3天、第7天血清MMP1、MMP9及TIMP1水平均高于正常对照组（P〈0.01）;随着脑梗死面积的不同变化,则MMP1、MMP9、TIMP1数值存在相应变化。结论脑梗死病人MMP-1、MMP-9、TIMP1在不同的时间窗存在一定规律的改变。     

参草通脉颗粒对AngⅡ诱导的心衰心肌细胞ACE 2、MMP 2及TIMP 2影响的实验研究

目的研究参草通脉颗粒对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞ACE 2、MMP 2、TIMP 2的影响。方法取1~3 d的Wistar大鼠心脏并剪成1 mm3大小的组织块,经消化、振荡制成细胞悬液,离心分离心肌细胞,计数后接种于培养皿。将培养皿中心肌细胞加入6孔板,应用AngⅡ诱导心肌细胞。将36只Wister大鼠随机分为正常组、模型组、西药组和中药高、中、低剂量组,每组6只。正常组大鼠常规等容积蒸馏水灌胃,西药及中药组大鼠按人鼠剂量换算给予药物灌胃,用药5 d后心脏采血,自然分离血清。按组别加入AngⅡ诱导的心衰心肌细胞中。培养36 h后,Elisa法检测各组心肌细胞氨基末端脑钠尿肽(NT-proBNP)水平,Western Blot法检测各组心肌细胞基质金属蛋白酶2(MMP 2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP 2)、血管紧张素转化酶2(ACE 2)蛋白含量,实时荧光定量法(PCR)检测MMP 2 mRNA、TIMP 2 mRNA、ACE 2 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组NT-proBNP、MMP 2蛋白含量、MMP 2 mRNA表达显著升高,TIMP 2、ACE 2蛋白含量及TIMP 2、ACE 2 mRNA表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,西药组、中药组NT-proBNP、MMP 2蛋白含量、MMP 2 mRNA表达显著降低,TIMP 2、ACE 2蛋白含量及TIMP 2、ACE 2 mRNA表达显著升高(P<0.05),具有统计学意义;与西药组比较,中药组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论参草通脉颗粒能调节AngⅡ诱导的大鼠心衰心肌细胞中MMP 2、TIMP 2、ACE 2表达。     

益气养阴活血方对肺纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的 观察益气养阴活血方对肺纤维化大鼠的影响，探讨其改善肺纤维化的作用机制。方法 采用博来霉素气管滴注制备肺纤维化大鼠模型，将大鼠随机分为模型组、醋酸泼尼松组和益气养阴活血方高、中、低剂量组（中药高、中、低剂量组），每组8只，另取8只正常大鼠作为空白组，给药组予相应药物灌胃28 d，空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃。末次给药后，行肺功能检测，HE和Masson染色观察肺组织病理改变，免疫组化染色检测肺组织纤连蛋白（FN）和层粘连蛋白（LN）表达，RT-PCR检测肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA表达，Western blot检测肺组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3、MMP9和TIMP1蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠吸气时间和呼气时间显著缩短，每分钟通气量和呼吸频率显著增加（P<0.01），肺组织结构损伤明显，肺泡塌陷、萎缩、间隔变宽，有大量胶原纤维沉积，肺组织FN和LN表达显著升高（P<0.01）,TGF-β1、Smad3、MMP9 mRNA和TGF-β1、p...