冷冻前平衡处理对人精子冻融后相关参数的影响

目的:研究冻前平衡处理对冷冻精子复苏率的影响,优化一步熏蒸法,以寻找人类精子冷冻的最优方法。方法:使用50例自愿供精者的正常精液标本,同1例供精者的精液一式3份,分别采用不平衡直接冷冻法、室温平衡10 min后冷冻与4℃平衡10 min后冷冻的方法进行处理。复苏后用计算机辅助精液分析(CASA)系统分析3组标本冷冻前后精子运动参数的变化,并检测各组标本精子的畸形率和存活率。结果:4℃平衡组的前向运动精子复苏率[(61.88±16.94)%]显著高于未平衡组[(48.61±16.44)%]和室温平衡组[(49.41±13.77)%](P<0.05),而室温平衡组与未平衡组前向运动精子复苏率则无显著性差异。3组标本经冷冻复苏后其精子畸形率和存活率无显著性差异。结论:冻前4℃平衡10 min的冷冻前处理方法操作简单,实验条件易控,对提高精子复苏率有重要意义。     

电刺激取精术获取精子经体外培养后冻存方法研究

目的:优化电刺激取精术获取的精子处理和冷冻复苏方法,为临床不射精症的治疗和生育力保存提供新途径。方法:将20例同房不射精患者电刺激获取的精液(或尿液)样本分为两组,其中6例采用PBS洗涤并用Modified-HTF重悬(A组),另外14例用Modified-HTF直接洗涤并重悬(B组),对处理后精子行CASA,分析精子浓度和活动率;采用麦管载体和一步熏蒸法冷活动率为(1.12±0.41)%,M-HTF处理组的精子活动率为(9.23±9.43)%;冷冻复苏后,A组精子复苏后活动率和冷冻复苏率分别为(0.24±0.41)%、8.37%;B组的精子活动率和复苏率显著增加,分别为(4.11±2.33)%、35.41%。同样,电刺激尿液样本中,PBS处理组的精子活动率为(1.30±0.51)%,M-HTF处理组的精子活动率提高至(5.48±5.32)%;冷冻复苏后,A组的精子活动率和复苏率分别为(0.26±0.40)%、6.31%;B组的精子活动率和复苏率,分别为(3.02±1.64)%、45.88%。结论:本研究所建立的电刺激精子经体外培养及冷冻复苏的方法,可以显著增加精液和尿液样本中精子的活力,改善精子的冷冻复苏率,为临床不射精症的治疗和生育力保存提供新途径。     

冷冻保存对人类精子线粒体DNA的影响

目的探讨常规精液冷冻技术对人类精子线粒体DNA的影响。方法收集符合精子库捐精条件的正式志愿者精液样品,将每份样品分为2份:1份进行精液冷冻复苏处理,为实验组;1份新鲜精液,为对照组。采用Markler计数板联合CASA法评估冷冻复苏前后精子活力;两组精液均采用实时荧光定量PCR和长链PCR技术,分别检测精子线粒体DNA的拷贝数和完整性。结果共收集22份精液标本,纳入志愿者年龄为(27.8±3.0)岁,禁欲天数(6.1±0.9)d;精液体积(5.0±1.5)ml,精子浓度(75.8±15.8)×106/ml,前向运动精子百分比为(68±6)%,总活动精子复苏率为(72±8)%。冷冻保存后,精子活力显著降低:前向运动精子百分比减少[(49.0±6.5)%vs.(68.0±6.1)%,P0.05),平均路径速率(VAP)[(35.8±6.8)vs.(46.8±9.5),P0.05]、直线速率(VSL)[(27.3±3.3)vs.(35.1±8.3),P0.05]和曲线速率(VCL)[(57.6±6.9)vs.(91.8±10.2),P0.05]较前下降。与新鲜精液相比,冷冻复苏后精子的线粒体DNA拷贝数显著增加[(10.12±8.41)vs.(5.66±5.53),P0.05],完整性比较无统计学差异[(29.69±15.04)vs.(32.78±16.0),P=0.077]。结论在正式捐精志愿者人群内,常规精液冷冻技术降低精子活力,增加人类精子mtDNA的拷贝数,但未显著改变mtDNA的完整性。     

冻储时间对冷冻精子复苏率的影响

目的 :探讨冻储时间对冷冻精子复苏率的影响 ,以期找到最佳复苏时间。　方法 :取 88份正常供精者标本进行精液常规分析 ,精液用程序降温仪通过三步降温法冻存后置 - 196℃液氮中冻储 ,88份冻存标本随机分成 5组 ,分别于冻存后的 1d(Ⅰ组 ,n =14 )、7d(Ⅱ组 ,n =2 4 )、30d(Ⅲ组 ,n =19)、180d(Ⅳ组 ,n =18)、30 0d(Ⅴ组 ,n =12 )取出 ,37℃水浴复苏 ,再次进行精液常规分析。计算冷冻复苏率。　结果 :5组间的复苏率差异均无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ,冻储时间与复苏率之间无相关性 (r=- 0 .0 5 ,P >0 .0 5 )。　结论 :程序降温仪冻存精液标本置 - 196℃液氮后 2 4h即可复苏分析 ,便于人类精子库耐冻实验批量筛查     

精子形态与精子冷冻复苏率的关系研究

目的 了解精子形态与精子冷冻复苏率之间的关系.方法 135例浙江省人类精子库筛选合格的供精者精液标本,按前向运动精子冷冻复苏率分为冷冻不合格组(<60%)40例和冷冻合格组(≥60%)95例.对所有精液标本进行精子形态学分析.结果 冷冻不合格组正常形态精子百分率(23.53±4.87)%,明显低于冷冻合格组正常形态精子百分率(28.54±544)%,(P<0.01);冷冻不合格组精子头部异常率、畸形精子指数(TZI)及精子畸形指数(SDI)明显高于冷冻合格组(P<0.05);颈部及中段异常率、尾部异常率及胞质小滴两组无明显差异(P>0.05).结论 精子形态对前向运动精子冷冻复苏率有影响,正常形态精子对低温的耐受性好;头部畸形以及同时含有多种畸形的精子对低温冷冻的耐受性差.     

番茄红素对人精子冷冻损伤的保护作用及机制研究

目的:通过在人精子冷冻保护液中添加不同浓度的番茄红素,研究番茄红素对精子冷冻损伤的可能保护作用及机制。方法:选择吉林省人类精子库捐精者的精液标本25份,每份精液一式4份,3∶1加入冷冻保护液后混匀,不含番茄红素者设为对照组(Ly0),而Ly2、Ly5、Ly10实验组混合液中分别含有2、5、10μmol/L的番茄红素,冷冻复苏精液进行常规分析,采用流式细胞术分析冻融后各组精子的凋亡率;采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法检测精子中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)浓度。利用JC-1标记法检测线粒体膜电位。结果:冻融后各组精子运动参数较新鲜精液参数均明显下降(P<0.01),Ly5组冻融后精子凋亡率[(25.68±4.36)%]较对照组[(33.26±4.78)%]显著下降(P<0.05);Ly5组线粒体膜电位水平[(66.18±14.23)%]显著高于对照组[(55.24±12.31)%],P<0.05;Ly2、Ly5、Ly10组的MDA水平与对照组比较,无统计学差异(P>0.05)。结论:在精液冷冻保护液中添加一定浓度的番茄红素可以减少线粒体氧化损伤,减轻活性氧对精子质膜的氧化应激损伤,从而提高精子的抗凋亡能力。     

捐精者精子冷冻复苏率影响因素分析

目的:探讨季节、血型及精液参数等对捐精者精子冷冻复苏率的影响。方法:回顾性分析陕西省人类精子库捐精者4 088份精液标本,研究季节、血型、禁欲时间、精液量、精子形态、冷冻前精子活力及浓度对精子冷冻复苏率的影响。结果:捐精者精子冷冻复苏率随着精子浓度增高而增加,相关性分析提示精子浓度与冷冻复苏率呈正相关(r=0.247,P0.01)。而精子冷冻前活力和精子冷冻复苏率呈负相关(r=-0.262,P0.01)。禁欲第6天组的精子冷冻复苏率[(70.2±5.4)%]明显高于其他禁欲时间组(P0.01)。精子正常形态率20%组的精子冷冻复苏率[(71.4±5.1)%]要高于其他各组(P0.01)。A型血精子冷冻复苏率明显高于B型血[(69.1±4.8)%vs(69.8±4.7)%,P0.01];季节、精液量与精子冷冻复苏率之间无明显相关性(P0.05)。结论:捐精者的精子浓度、活力、形态及禁欲时间对于预测精子冷冻复苏率有一定的价值,而季节、血型、精液量与捐精者精子冷冻复苏率无明显相关性。     

新型冷冻管承载设计对人类精子复苏率的影响

目的探讨精液冷冻管承载工具对人类精液活动力及复苏率的影响,优化精子冷冻保存的方案.方法取本库20例健康自愿供精的精液,同一例供精者的精液分成两份:实验组冷冻管用棉花包裹,对照组不做任何处理.通过相差显微镜镜检,利用计算机辅助精液分析(CASA)系统分析两组冷冻前后人类活动精子的运动参数,并作相关的统计学分析及比较.结果实验组冷冻复苏率为(66.71±6.51)%,对照组冷冻复苏率为(59.67±7.74)%(平均提高了7.04%)(P<0.01).结论冷冻管包裹棉花的冷冻前处理对精子有一定的保护作用,因而冷冻管承载工具的专门设计对精液冷冻有实质性意义.     

RHO/ROCK信号通路在精子抗冷冻损伤中的作用

目的:探讨RHO/ROCK信号通路在人精子抗冷冻损伤中的作用,为高效精液冷冻保护剂的研制提供理论依据。方法:选取健康精液25份,每份精液分为新鲜组、对照组与RHO通路抑制剂组(抑制剂组)。检测冷冻前后各组精液精子活力、精子存活率、精子膜完整率、正常形态精子百分率、精子DNA碎片指数(DFI)、精子顶体酶活性及精子线粒体膜电位变化;免疫荧光染色检测RHOa/ROCK蛋白在精子中的表达。结果:抑制剂组精液冷冻复苏后精子活力[(57.50±6.83)%vs(51.20±7.70)%,P=0.002]、精子存活率[(60.24±5.53)%vs(52.87±5.07)%,P=0.001]、精子膜完整率[(67.10±4.43)%vs(59.78±5.56)%,P=0.001]、正常形态精子百分率[(7.46±1.28)%vs(4.83±1.11)%,P=0.001]、精子DFI[(18.87±4.07)%vs(27.64±6.64)%,P=0.001]、精子线粒体膜电位(63.11±2.97 vs 56.30±4.28,P=0.001)指标均明显优于对照组;抑制剂组冷冻后精子顶体酶活性与对照组差异无统计学意义(98.30±11.33 vs 97.65±9.31,P0.05)。免疫荧光染色显示RHOa/ROCK蛋白在精子头、颈部广泛表达。结论:RHO/ROCK信号通路在精子冷冻损伤中具有一定作用,抑制其通路活性可明显提高精子抗冷冻损伤的能力。     

左卡尼汀对冷冻精子运动参数和精子线粒体功能的影响

目的:探讨左卡尼汀(LC)对人冷冻精子的影响。方法:将每份供精志愿者精液分为6组:新鲜精液组(FE组);常规冷冻组(Non-LC组,冷冻保护剂中未添加LC); LC 1～4组,冷冻保护剂中LC浓度分别为:1、2. 5、5、10 mmol/L。通过观察冷冻复苏后精子活力和运动参数改变,筛选最佳LC工作浓度。伊红-苯胺黑染色法评估精子质膜完整性(PMI),JC-1法评估精子线粒体膜电位(MMP),DCFH-DA法评估活性氧(ROS),探索LC对精子冷冻损伤的影响机制。结果:与FE组相比,冷冻复苏后精子(Non-LC组和LC各组),前向运动精子百分率(PR%)和运动参数(VAP、VSL、VCL)均明显下降(P 0. 05)。与Non-LC组相比,LC 3组PR%[(47. 0±4. 3)%vs(41. 9±4. 6)%,P=0. 0261)]和VAP [(38. 9±4. 2)μm/s vs (34. 9±2. 6)μm/s,P=0. 0152)]改善明显,确定5 mmol/L为实验最佳LC工作浓度。与FE组比较,Non-LC组冷冻复苏后精子PMI[(52. 7±5. 7)%vs (75. 5±5. 4)%]、MMP[(44. 5±3. 5)%vs(57. 3±4. 4)%]明显降低(P 0. 01),ROS[(12. 5±3. 9)%vs(6. 8±2. 4)%]明显升高(P 0. 01);与Non-LC组比较,LC组精子PMI[(70. 1±8. 2)%]和MMP[(50. 3±3. 4)%]明显升高(P 0. 01、0. 05),ROS[(8. 4±5. 3)%]明显降低(P 0. 05)。结论:LC可能通过降低精子ROS,提高精子MMP,保护精子质膜,改善冷冻后精子活力和运动参数。     

人类精液一步熏蒸法冻融的实验研究

目的:研究一步熏蒸法对冷冻精子复苏率的影响,以探索人类精子的最优冷冻方法。方法:选择100例符合WHO第5版正常参考值的精液标本,按照程序降温法和一步熏蒸法分2组进行冷冻。利用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测冷冻前后精子前向活动力,同时比较2种方法对精子膜功能完整性、畸形率的影响。结果:冷冻后程序降温法和一步熏蒸法前向运动精子百分率差异有显著性[(34.0±18.4)%vs(43.0±19.5)%,P<0.05],均较冷冻前的(57.0±16.7)%显著下降(P<0.05);2种冷冻方法前向运动精子复苏率差异显著[(52.2±20.6)%vs(67.1±20.0)%,P<0.05];与冷冻前[(84.5±7.5)%]相比,2种方法冷冻后低渗肿胀精子百分率明显下降[分别为(67.1±11.1)%和(70.6±10.0)%,P<0.05],2种冷冻方法间差异也显著(P<0.05);而畸形率冷冻后显著增加[(85.0±8.7)%和(85.7±9.1)%vs(77.8±9.6)%,P<0.05],但2种冷冻方法之间差异无显著性(P>0.05)。结论:与程序降温法相比,一步熏蒸法操作简单方便,适用于不同时间段的精液标本冷冻,具有较高的冷冻复苏率,是一种值得推荐的快速冷冻方法。     

男性肿瘤患者精液冷冻保存后常规参数分析

目的:了解男性肿瘤患者精液质量现状,探索保存男性肿瘤患者生育能力的方法。方法:对来源于2005~2013年浙江省人类精子库43例肿瘤自精保存患者的精液质量进行回顾性分析,检测项目包括精液体积、精子浓度、精子活力、精子冷冻复苏率等指标。比较肿瘤患者与供精志愿者(248例)之间精液质量的差异;并将肿瘤患者分为睾丸肿瘤组(22例)和非睾丸肿瘤组(21例),比较两组之间精液质量的差异。结果:43例肿瘤患者精液的平均精子浓度(60.90×106/ml)、前向运动精子百分率(41.07%)及精子冷冻复苏率(49.98%)均显著低于供精志愿者(分别为74.27×106/ml、51.79%和57.33%),P均<0.05;睾丸肿瘤组的冻后平均前向运动精子百分率(15.68%)与冷冻复苏率(42.81%)均显著低于非睾丸肿瘤组(分别为28.36%和57.53%),P均<0.05。结论:肿瘤患者精液质量普遍下降,进行自精保存的时机非常重要,应该加强自精保存的宣传力度。另外,睾丸肿瘤患者精液冷冻保存效果较差,精子库应对其冷冻复苏率低下的原因进行深入研究,优化冷冻保存技术,为患者提供更好的生育力保护。     

小鼠微量圆形精子细胞冷冻保存方法研究

目的:探讨小鼠微量圆形精子细胞的冷冻方法和条件。方法:比较玻璃化冷冻和常规慢冷冻,不同浓度冷冻保护剂(5%、7%、9%甘油)及不同平衡时间(0、15、30、45、60 min)对体外培养所获微量小鼠圆形精子细胞的冷冻效果。结果:玻璃化冷冻和常规慢冷冻在7%甘油中平衡时间30 min均可获得较高的细胞复苏率,且玻璃化冷冻小鼠圆形精子细胞的复苏率显著高于常规慢冷冻方法[(72.9±15.4)%vs.(58.2±17.7)%,P0.05]。结论:采用玻璃化冷冻方法,在7%浓度的甘油保护剂中平衡30 min,可获得较满意的微量圆形精子细胞冷冻效果。     

冷冻技术对精子印记基因DNA甲基化影响的研究

目的检测常规精液冷冻技术中冷冻保护剂、冷冻过程及冷冻时间长短对精子父源印记基因H19及母源印记基因MEST印记控制区域(imprinting control region,ICR)的DNA甲基化的影响程度。方法以10例符合精子库捐精条件的正式志愿者为研究对象,将每份精液样品平均分为4组:A组为新鲜精液,作为对照;B组加入同体积冷冻保护剂,不冷冻;C组加同体积冷冻保护剂,冷冻2d;D组加同等体积冷冻保护剂,冷冻两个月。通过亚硫酸氢盐克隆测序法分析H19及MEST ICR的DNA甲基化状态。结果四组(A、B、C、D组)H19基因ICR区的DNA甲基化率以克隆数计算时分别为58.70%、53.85%、49.46%和45.74%,以CpG岛数计算时分别为97.57%、97.33%、97.13%和96.56%,两者都有降低趋势,但组间差异均无统计学意义(P0.05);四组MEST基因ICR区甲基化率以克隆数计算时分别为41.10%、45.33%、47.30%和50.68%,以CpG岛数计算甲基化率时分别为1.77%、1.74%、2.00%和2.26%,有升高趋势,但差异亦无统计学意义(P0.05)。结论常规精液冷冻复苏技术对精子父源印记基因H19及母源印记基因MEST的ICR区甲基化程度未见明显影响。     

高、低生育力捐精者复苏精液功能指标的比较性研究(附40例报告)

目的:探讨可以全面有效评估捐精者生育力的精子功能指标,运用于复苏精液标本的筛选,旨在提高辅助生殖技术成功率。方法:根据捐精者精液使用的妊娠结局,收集上海市人类精子库高、低生育力捐精者的冷冻精液标本各20例,比较两组精液标本复苏后的精子浓度、活力、正常形态率、顶体完整率、DNA完整性以及线粒体膜电位。结果:高、低生育力组精液复苏经系列评估后,正常形态率分别为(18.50±6.10)%、(14.42±6.44)%;顶体完整率分别为(86.17±4.49)%、(80.04±7.52)%;精子DNA碎片率分别为(9.21±3.22)%、(15.72±8.20)%,以上指标经统计学分析两组之间具有显著性差异(P0.05)。但线粒体膜电位高生育力组[(56.75±18.80)%]与低生育力组[(52.23±18.86)%]之间无显著性差异(P0.05)。精子线粒体膜电位与精子活力呈显著正相关(r=0.760,P0.05),其他功能指标与精子浓度、活力无显著相关。结论:精子浓度、活力与正常形态率、顶体完整率以及DNA完整性可以有效评估捐精者复苏精液生育能力。     

精液保存和优化处理方法对精子DNA完整性的影响

目的:探讨不同精液保存和处理方法对精子DNA完整性的影响。方法:筛选2015年1~12月就诊的100例精液正常志愿者,将每例志愿者的精液混匀后分别对其进行不同的保存和优化处理;保存方法包括直接冷冻法、试剂冷冻法、室温保存4 h和24 h等,优化处理方法包括简单洗涤法、直接上游法和非连续密度梯度离心法。保存和处理后均采用精子染色体扩散实验(SCD)分析其精子DNA碎片指数(DFI);优化处理各组继续培养24 h,培养后再分析其精子活动率和DFI。结果:精液保存条件两两组间分析显示,直接冷冻法、试剂冷冻法和室温保存4 h的精子DFI分别为(27.3±6.4)%、(26.9±6.1)%和(24.7±6.8)%,结果无显著性差异(P0.05),而室温保存24 h则显著增加精子DFI[(35.6±9.0)%](P0.05)。与简单洗涤法的精子DFI[(13.7±2.0)%]相比,直接上游法的精子DFI[(9.1±1.3)%]和非连续密度梯度离心法的精子DFI[(8.0±2.5)%]均显著降低(P0.05);再培养24 h后,非连续密度梯度离心法处理的精子DFI[(11.5±4.2)%]最低(P0.05)。结论:保存条件和优化处理方法对精子DNA完整性有影响,临床工作中需选取最合适的精液处理方法。     

不同浓度稀少精子冷冻技术效果的观察

目的:回顾性分析常规精子冷冻技术和稀少精子冷冻技术对重度少精子症患者精子冷融效果,探索稀少精子冷冻保存的有效方法。方法:收集82例重度少精子症患者精液,采用稀少精子冷冻技术冷冻标本,与24例采用常规冷冻技术冷冻的少精子症(精子浓度15×10~6/ml)标本进行比较。前者又根据按不同浓度分为A组(精子浓度1×10~6/ml,n=54)、和B组(1×10~6/ml≤精子浓度5×10~6/ml,n=28),后者为C组。比较3组精子冷冻复苏率和回收率。结果:A、B、C组3组复苏率分别为(62.8±18.7)%、(61.9±17.2)%、(50.7±13.5)%,回收率分别为(68.7±18.4)%、(70.7±15.5)%、(29.2±12.4)%;以上指标,A、B组之间均无显著差异(P0.05),但A组和B组均显著高于C组(P0.05)。结论:稀少精子冷冻技术在临床中已趋于成熟,冻融结局相对稳定,是一种值得推广的男性生育力保存方式。     

超深低温处理的异体肌腱移植

目的建立一种新的保留人体异体肌腱活性的超深低温处理技术,临床应用后长期随访其疗效。方法将新鲜人体肌腱置入由10%二甲基亚砜及纯小牛血清组成的冷冻保护液中,在室温下平衡后置入液氮罐气液面6h,再浸入液氮中贮存不少于3个月。临床应用前,用40℃水浴快速复苏及洗涤去除冷冻保护剂,复苏肌腱作腱细胞活力测定。临床应用11例共修复指(趾)伸、屈肌腱26根。结果超深低温处理的腱细胞活力为(78.7±6.3)%,(±s,下同)。临床应用后异体肌腱无排斥反应,术后3根肌腱粘连明显。结论超深低温处理的肌腱是活体肌腱。临床应用效果满意,可推广使用。     

维生素E和B12对冷冻精子活力和DNA的保护作用

目的探讨维生素E(Vit E)和Vit B12对冷冻精子活力和DNA的保护作用。方法收集在我院生殖医学中心就诊的32例正常男性精液标本,按照添加维生素的不同分为3组:对照组:精液中只添加常规冷冻保护剂;Vit E组:添加常规冷冻保护剂和5mM的VitE;Vit B12组:添加常规冷冻保护剂和0.5%的Vit B12。比较3组精子复苏后的精子活动力、存活率、顶体酶活性、精子DNA碎片率(SDF)等指标。结果经液氮冷冻72h复苏后,Vit E组活动力(a+b)级的精子数、精子存活率均显著高于对照组(P0.01);顶体酶活性在各组间比较无显著性差异(P0.05);Vit E组和Vit B12组的SDF[分别为(12.16±0.50)%、(13.02±0.48)%]均显著低于对照组的(15.18±0.78)%(P0.01);Vit E组的精子DNA平均晕轮直径[(6.76±0.14)μm]显著高于对照组[(6.09±0.18)μm](P0.01),Vit B12组与对照组比较无显著性差异(P0.05)。结论精子冷冻保护剂中添加适当浓度的Vit E可以缓解冻融过程对精子造成的伤害,在一定程度上提高冻融后精子活动力、存活率及精子DNA完整性。     

线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone对人精子冻融氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone(Mito Q)对冻融人精子的保护作用。方法:选取60份健康生育男性精液标本,每份精液一式6份,不含Mito Q者设为对照组(G0),而G1、G2、G3、G4、G5实验组混合液中分别含有2 nmol/L、20 nmol/L、200 nmol/L、2μmol/L、20μmol/L Mito Q,37℃孵育1 h后检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和线粒体膜电位(MMP)变化。选取合适Mito Q浓度B1、B2组用于精子冷冻保存,B0组未添加Mito Q,B1、B2组在精子冷冻保护液中分别含有200 nmol/L和2μmol/L Mito Q,进行冷冻保存,检测冷冻复苏后的ROS水平、MDA含量和MMP改变。结果:新鲜精液添加Mito Q孵育后,G3组和G4组前向运动精子百分率[(30.8±10.2)%和(32.7±13.5)%]和总活动率[(70.6±9.0)%和(70.3±11.9)%]显著高于G0组[(17.6±5.0)%、(54.9±11.5)%](P0.05);随着Mito Q浓度的增加,ROS水平呈下降趋势,G3、G4、G5组(分别为86.5±31.6、93.6±42.0、45.1±15.0)显著低于G0组(160.8±39.7)(P0.05);MDA含量G3、G4组[分别为(0.9±0.5)、(0.9±0.5)μmol/mg]明显低于G0组[(1.9±1.1)μmol/mg](P0.05),而G5组[(1.7±0.7)μmol/mg]不但没有降低,反而显著高于G3、G4组(P0.05);与G0组MMP(1 701±251)相比,G5组(1 156±216)显著降低(P0.05),而G1、G2、G3、G4组(分别为1 810±298、1 995±437、1 950±334、1 582±314)无明显变化。冷冻复苏后各组前向运动精子百分率和总活动率均较新鲜精液明显下降(P0.01),B1组前向运动精子百分率[(3.2±2.3)%]较B0组[(0.8±0.6)%]明显改善(P0.05);B1组精子总活动率[(43.0±9.5)%]较B0组[(26.5±11.4)%]明显改善(P0.05);B1组ROS[(34.6±12.3)]和B2组ROS[(37.0±10.5)]均较B0组[(56.9±14.3)]显著下降(P0.05),B1组MDA[(1.4±0.5)μmol/mg]和B2组MDA[(1.4±0.6)μmol/mg]均较B0组[(2.6±1.0)μmol/mg]显著下降(P0.05),B1组MMP[(1 010.0±131.5)]和B2组MMP[(880.6±128.6)]均显著高于B0组[(721.1±24.8)](P0.05)。结论:在精液冻存液中添加200 nmol/L的Mito Q能有效提高人精子质量,可作为精液冷冻保护添加剂用于精液的冷冻保存。