溴氰菊酯对大鼠卵巢甾体激素合成的影响

目的探讨溴氰菊酯(Deltamethrin,DLT)对大鼠卵巢甾体激素合成的影响及相关的分子机制。方法不同剂量DLT暴露处理大鼠和原代颗粒细胞;取DLT暴露后的大鼠血清和培养上清液,电化学发光法测定雌二醇和孕酮的水平;Western Blot法检测DLT暴露后大鼠卵巢组织及原代培养颗粒细胞中甾体激素合成关键酶:甾体激素合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、芳香化酶的表达量,同时检测组蛋白去乙酰化酶Sirt1的蛋白表达。结果体、内外实验中,DLT各处理组大鼠血清、原代颗粒细胞培养上清液中雌二醇水平均显著升高(体内实验P<0.05,体外实验P<0.001);体内实验中DLT各处理组大鼠血清孕酮水平均显著降低(P<0.05),而体外实验中DLT各处理组原代颗粒细胞培养上清液孕酮水平无显著变化(P>0.05);体、内外实验中DLT各处理组大鼠卵巢组织、原代培养颗粒细胞中StAR、P450scc、芳香化酶以及Sirt1的表达量均显著升高(P<0.01)。结论 DLT能影响大鼠卵巢雌二醇和孕酮的合成,其机制可能与其关键酶表达的变化有关。     

GnRH拮抗剂联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人颗粒细胞功能的影响

目的探讨促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人卵巢颗粒细胞功能及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人原代卵巢颗粒细胞及人卵巢颗粒细胞系KGN,根据所用药物不同分为GnRH-ant、来曲唑、米非司酮以及上述三种药物联合用药组,药物干预后检测细胞活力、细胞凋亡、培养液中雌二醇(E 2)及孕酮(P)水平及VEGF的表达。结果(1)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞的活力、促进颗粒细胞凋亡,其中联合用药组的作用最强(P<0.05);(2)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞E 2、P分泌水平,其中联合用药组E 2、P水平最低且差异有统计学意义(P<0.05);(3)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞VEGF表达,其中联合用药组VEGF mRNA及蛋白表达水平最低(P<0.05)。结论GnRH-ant联合来曲唑和米非司酮可以有效地抑制颗粒细胞活力、减少类固醇激素分泌及降低VEGF的表达水平。     

CTRP6在小鼠卵巢中的定位、表达以及FSH对CTRP6的调控作用

目的探究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在小鼠卵巢中的定位、表达以及FSH对其调控作用。方法免疫组化对56日龄小鼠卵巢中的CTRP6蛋白进行定位,实时定量PCR检测3 d、10 d、21 d和56 d小鼠、21日龄小鼠注射了孕马血清促性腺激素(PMSG)0 h、12 h、36 h、48 h及注射HCG 4 h、8 h、12 h卵巢中CTRP6 mRNA的表达水平。分别向人卵巢颗粒细胞(KGN)中加入0 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml和100 ng/ml的FSH和LH,培养24 h后检测CTRP6 mRNA水平。结果小鼠卵巢免疫组化结果显示CTRP6可以在颗粒细胞和卵母细胞中表达,尤其在窦卵泡颗粒细胞中表达水平较高。另外,小鼠CTRP6 mRNA的表达水平随着年龄增加而升高(P0.05),且经PMSG处理不同时长后,CTRP6 mRNA相对表达量较PMSG处理前显著增加(P0.05),而与PMSG处理48 h比较,HCG处理后CTRP6 mRNA的相对表达水平显著降低(P0.05),且随着处理时间的延长呈降低趋势。不同浓度梯度(1、10、100 ng/ml)的FSH处理KGN细胞24 h后均使CTRP6 mRNA表达水平显著增高(P0.05),浓度为10 ng/ml时CTRP6 mRNA水平达峰值。选择10 ng/ml FSH于不同时间梯度(6、12和24 h)处理KGN细胞后,CTRP6 mRNA相对表达量均较未处理前显著增加(P0.05),且随着时间延长呈升高趋势。不同浓度梯度(1、10、100 ng/ml)的LH处理KGN细胞24 h后,CTRP6 mRNA的表达均较LH处理前无显著差异(P0.05)。结论 CTRP6可能参与了卵泡生长发育的调控,是卵泡形成的重要因子。     

四种中药对大鼠黄体细胞分泌雌、孕激素的影响

目的探讨中药蜈蚣、紫草、莪术、水蛭的乙醇提取物对大鼠卵巢妊娠黄体细胞分泌孕酮(P)与雌二醇(E2)的影响。方法在大鼠妊娠第4天取卵巢,收集黄体细胞体外培养2 h后,分别加入3个浓度(0.01、0.1及1 mg/ml)的蜈蚣、紫草、莪术、水蛭乙醇提取物,乙醇的总浓度<5%;对照则代之以5%的乙醇生理盐水。在药物作用4 h后,收集部分上清,采用放射免疫法测定P与E2的含量,继续培养4 h,用MTT比色法反映活细胞数量。结果在四种中药作用下,各浓度的吸光度值均有增加。其中莪术、水蛭、蜈蚣均有增加黄体细胞分泌的趋势,尤以水蛭刺激黄体细胞分泌E2的作用最为显著,3个浓度与对照比较差异均有显著性(P<0.01,P<0.05,P<0.01),E2/P比值显著高于对照组(P<0.01,P<0.05,P<0.001);而紫草则有降低黄体细胞分泌E2的作用,随着浓度的降低,抑制作用逐渐增强(P>0.05,P<0.05,P<0.01)。结论提示莪术、水蛭和蜈蚣刺激黄体细胞分泌E2与P,增加E2/P比值,紫草则抑制黄体细胞分泌E2与P,降低E2/P比值,其中紫草与水蛭的作用较强,主要表现在对E2分泌的影响。     

小鼠卵巢不同发育时期SDF-1/CXCR4轴的动态变化

目的分析基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体(CXCR4)在不同发育时期雌性ICR小鼠卵巢组织中的表达及意义。方法选择4周龄、7周龄和10周龄雌性ICR小鼠共30只,根据典型发育时期分为3组:性成熟前期(4周龄)组、性成熟期(7周龄)组及适龄繁殖期(10周龄)组,每组各10只。每组取5只收集卵巢组织,一侧卵巢提取RNA后利用qPCR检测SDF-1和CXCR4 mRNA表达水平;一侧卵巢固定包埋后切片,采用HE染色观察卵巢组织形态并进行各级卵泡计数,采用免疫组化方法观察SDF-1及CXCR4蛋白在小鼠卵巢组织的表达。余下每组5只促排卵后获取卵丘卵母细胞复合物(COCs),分离卵丘颗粒细胞与卵母细胞并提取RNA,利用qPCR分别检测两种细胞中SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平。结果 3组小鼠中性成熟前期组卵巢SDF-1 mRNA表达量显著高于其他两组(P0.05),而CXCR4 mRNA表达量显著低于其他两组(P0.01)。HE染色显示3个发育阶段小鼠卵巢均可见发育正常的各级卵泡;适龄繁殖期组的卵巢总卵泡数目及初级卵泡数量显著高于其余两组(P0.01),次级卵泡数显著多于性成熟期组(P0.01)。免疫组化结果表明:SDF-1及CXCR4蛋白在卵巢各级卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中都有表达,而在卵泡膜细胞中几乎不表达。COCs的qPCR结果显示:卵母细胞中,性成熟期组SDF-1 mRNA表达水平显著高于性成熟前期组(P0.05);卵丘颗粒细胞中,适龄繁殖期组SDF-1 mRNA表达水平显著高于其余两组(P0.01),性成熟前期组CXCR4 mRNA表达水平显著低于其余两组(P0.05)。结论 SDF-1及其受体CXCR4在不同发育阶段小鼠卵巢卵泡中均有表达且表达水平存在显著差异,提示其可能参与调控小鼠卵泡发育和性腺成熟的过程。     

转铁蛋白抑制FSH刺激大鼠卵泡颗粒细胞分化的细胞内主要机制

前期的研究已经证实了转铁蛋白(TRF)能抑制FSH诱导的抑制素、雌二醇和孕酮的产生以及芳香化酶活性。本实验用已烯雌酚处理后分离的大鼠卵泡颗粒细胞的体外培养方法,进一步观察TRF对FSH、霍乱毒素(cholera toxin,CT)及Forskolin诱导的cAMP、雌二醇及孕酮产生的影响。结果:TRF抑制了FSH诱导的cAMP、雌二醇及孕酮产生TRF能抑制CT及Forskolin诱导的雌二醇产生,但不影响这些因子刺激cAMP和孕酮生成。说明TRF抑制FSH对大鼠卵泡颗粒细胞功能性分化刺激作用的主要细胞内机制是通过减少cAMP生成而介导的,但还有cAMP以外的作用部位。     

颗粒蛋白前体在高脂饮食诱导的肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达

目的研究颗粒蛋白前体(PGRN)在肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达情况,初步探讨PGRN在PCOS发病中的作用。方法选择SPF级23日龄SD雌性大鼠38只,使用随机数字表随机分为3组:正常对照组(n=8)、PCOS组(DHEA组,n=15)及肥胖PCOS组(DHEA+HFD组,n=15)。采用脱氢表雄酮联合高脂饲料(DHEA+HFD)诱导肥胖PCOS大鼠。HE染色光镜下观察PCOS大鼠卵巢的病理结构改变。酶联免疫吸附法测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)含量等,比较各组间的水平差异。采用免疫组织化学法检测各组卵巢PGRN的表达水平及分布情况。结果造模结束时,DHEA+HFD组体重显著高于对照组(P<0.01)及DHEA组(P<0.05)。DHEA组及DHEA+HFD组的FINS、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均显著高于对照组(P<0.05)。DHEA组及DHEA+HFD组的睾酮(T)、FSH水平均显著升高(P<0.01)。DHEA组及DHEA+HFD组卵巢组织光镜下均表现出典型的多囊样改变。免疫组化结果显示各组大鼠卵巢中均可见PGRN蛋白表达,主要分布于卵泡的颗粒细胞层及黄体;DHEA组PGRN表达水平显著高于对照组(P<0.01),DHEA+HFD组PGRN表达水平显著高于DHEA组及对照组(P<0.01)。结论 PGRN在卵巢颗粒细胞层有表达。其在PCOS大鼠和肥胖PCOS大鼠卵巢组织中的差异性表达,提示PGRN可能通过作用于局部卵泡微环境,参与PCOS肥胖及慢性代谢性炎症的发生。     

PCOS患者血清miR-320a、miR-145表达水平及其与雌孕激素的关系探讨

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清微小RNA-320a(miR-320a)、miR-145表达水平及其与雌、孕激素的关系。方法 采用前瞻性研究,选取2019年5月至2021年7月于本院就诊的92例PCOS患者作为PCOS组,另招募同期健康体检的90例育龄期女性作为对照组。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测并比较两组患者血清miR-320a和miR-145表达水平,采用电化学发光法检测并比较两组患者血清E₂和孕酮水平;采用Pearson相关性分析探讨PCOS患者血清miR-320a、miR-145表达水平与雌孕激素的关系。结果 电化学发光检测结果显示,PCOS组血清E₂和孕酮水平显著低于对照组(P<0.05);Real-time PCR检测结果显示,PCOS组血清miR-320a和miR-145表达水平均显著低于对照组(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,PCOS组血清miR-320a和miR-145表达水平与E₂和孕酮水平均呈显著正相关(P<0.05)。结...     

瘦素、神经肽Y对离体人卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的　探讨瘦素、神经肽Y(NPY)对离体人卵巢颗粒细胞雌、孕激素生成的影响。　方法　将来自体外受精 胚胎移植的 2 5例离体人卵巢颗粒细胞纯化后 ,在不同浓度瘦素 (1、10、10 0 μg/L)、NPY(1× 10 -8、1× 10 -7、1× 10 -6mol/L)单独或与人绒毛膜促性腺激素 (hCG ,0、2 0IU/L)联合作用下体外培养 ,采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇 (E2 )、孕酮(P)的水平。　结果　 (1)无论单独或与hCG联合不同浓度瘦素组E2 、P水平均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;(2 )NPY浓度 1× 10 -7mol/L时 ,E2 水平显著低于空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,但与hCG联合组显著高于单独组 (P <0 .0 5 ) ;(3)NPY浓度 1× 10 -7mol/L、瘦素浓度 10 μg/L组 ,E2 水平明显高于相应浓度NPY单独作用组 (P <0 .0 5 )。　结论　 (1)瘦素不直接影响体外培养颗粒细胞E2 、P的分泌 ,可能通过影响其它因子的作用而间接调节卵巢功能 ;(2 )NPY单独作用时 ,对颗粒细胞E2 的分泌有一定抑制作用 ,但当hCG存在时作用消失 ,说明在正常月经周期中NPY对黄体的生成和维持可能无明显不利影响 ;(3)瘦素可能阻断NPY对颗粒细胞分泌E2 的抑制作用 ,表明二者可能对卵巢功能有相互协调作用。     

MMP-2,-9及其抑制物TIMP-1在多囊卵巢综合征患者黄素化颗粒细胞上的表达

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者黄素化颗粒细胞上基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9)及其组织抑制物TIMP-1的蛋白及mRNA在不同培养时间的表达水平,了解与细胞外基质合成、降解相关的MMPs/TIMPs系统参与PCOS的病理生理机制。方法收集2011年9月到2012年1月行体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS患者30例,对照组为同期行IVF或ICSI治疗的不孕症患者30例。密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,细胞贴壁培养,分别在培养24、48和72h收集颗粒细胞。采用Western blotting方法检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-PCR检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果 (1)PCOS组黄素化颗粒细胞MMP-2,-9蛋白表达在各培养时间点(24、48、72h)均显著高于对照组(P均0.05);且MMP-2蛋白表达水平在48、72h相对于24h的比值,以及MMP-9蛋白表达水平在72h相对于24h的比值,PCOS组均显著高于对照组(P均0.01)。(2)PCOS组MMP-2mRNA在24、48、72h的表达,MMP-9mRNA在48、72h的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05);MMP-2,-9mRNA表达水平在48、72h相对于24h的比值,PCOS组高于对照组,差异均有统计学意义(P均0.05)。(3)PCOS组TIMP-1蛋白及mRNA表达在24、48、72h与对照组比较无统计学差异(P0.05)。结论 PCOS患者黄素化颗粒细胞中MMP-2和MMP-9的表达升高,其MMPs/TIMPs的平衡状态向蛋白酶的活性增强方向移动,可能与PCOS患者黄体功能不足有关。     

目前国内普通外科临床科研中存在的主要问题

自1978年恢复研究生招生工作以来,同其他临床医学学科一样,普通外科的临床科研工作取得了长足进步,获得了一些有创造性的科研成果,为推动我国普通外科事业的发展作出了较大的贡献。近年,我国普通外科领域的科研论文数量增长较快,但不可否认的是,目前我国普通外科研究领域仍存在     

2015年乳腺癌辅助化疗进展

【摘要】〓乳腺癌是危害我国女性健康的头号杀手,尽管近年来辅助化疗的研究进展突飞猛进,但临床中仍有不少问题未能明确,如辅助化疗的合适人群、化疗的开始时间、蒽环及紫杉类的地位和用法、强化维持治疗的作用、疗效及预后的生物标志物等。本文结合乳腺癌辅助化疗在临床上的常见问题和2015年各大乳腺癌会议阐述乳腺癌辅助化疗的最新进展。     

Changes in neuroendocrine elements in bronchial mucosa in chronic lung disease in adults.

BACKGROUND--It is not clear whether there is any association between metaplasia of the bronchial epithelium and changes in the distribution of neuroendocrine cells. This study examined, by immunohistological techniques, the distribution of neuroendocrine cells and juxtamucoscal nerve fibres in bronchial biopsies showing metaplastic changes. METHODS--Bronchial biopsies from 12 subjects with epithelial metaplasia associated with bronchiectasis and diffuse pulmonary fibrosis were examined by conventional light microscopy and immunohistological techniques for protein gene product 9.5 (PGP), chromogranin A and B (CAB), serotonin, vasoactive intestinal peptide (VIP), substance P (SP), calcitonin gene-related peptide (CGRP), calcitonin (CT), and gastrin releasing peptide (GRP). RESULTS--Regions of non-metaplastic epithelium contained numerous PGP and serotonin immunoreactive cells. Sub-populations of these cells displayed CAB, CGRP, CT, and GRP immunoreactivity. Metaplastic epithelium contained only a few weakly stained PGP, serotonin, CAB, GRP, CT and CGRP immunoreactive cells in six cases. Metaplastic epithelium was characterised by a high number of CAB-containing cells in six cases and in these biopsies prominent PGP-containing nerve bundles were seen in the subepithelial layer beneath the metaplastic epithelium. CONCLUSIONS--The distribution patterns of neuroendocrine cells and neuronal elements vary between areas of normal and metaplastic epithelium and within areas of metaplastic epithelium. Neuronal hyperplasia was associated with an increase in the number of CAB-containing cells within the metaplastic epithelium.     

Disparities in Amputations in Minorities

Background  

As a result of the impact of health disparities on the healthcare system such as their influence on arenas significant to healthcare distribution, including cost, quality, and access, identification and resolution of health disparities is a primary national agenda item. Resolution of disparities in amputation is an area of opportunity that warrants further consideration.