脑缺血再灌注大鼠GAP-43和RhoA蛋白表达及NEP1-40对其的影响

目的 观察侧脑室注射NEP1-40对脑缺血再灌注大鼠轴突再生、患肢功能恢复和RhoA信号通路活动的影响,探讨其可能的机制.方法 将60只成年雄性SD大鼠分为假手术组、脑缺血对照组、侧脑室注射PBS组和侧脑室注射NEP1-40组;采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型;用Western blot方法检测缺血灶周边脑组织生长相关蛋白(GAP-43)和RhoA蛋白表达;用Montoya设计的"楼梯测试"方法对患肢运动功能进行测试.结果 ①侧脑室注射NEP1-40组大鼠缺血灶周边脑组织GAP-43在术后7 d和14 d均高于脑缺血对照组和侧脑室注射PBS组,以术后7 d最显著.②侧脑室注射NEP1-40组大鼠缺血灶周边脑组织RhoA在术后各时相点显著低于脑缺血对照组和侧脑室注射PBS组.③侧脑室注射NEP1-40组大鼠在术后各时相点"楼梯测试"结果显著高于脑缺血对照组和侧脑室注射PBS组.结论 NEP1-40能够促进脑缺血再灌注大鼠损伤后轴突再生和运动功能恢复,其机制可能与抑制RhoA信号通路活动有关.     

视网膜神经节细胞轴突再生相关神经胶质酸性蛋白和生长相关蛋白-43基因研究

目的 探索视神经移植后,再生的视网膜神经节细胞中基因表达的变化.方法 将39只Listed Hooded大鼠分为正常对照组、神经截断组和截断+移植组.采用外周神经缝接模型,用免疫组化技术检测GFAP、GAP-43在各组不同时期表达的变化.通过采用RT-PCR技术检测大鼠视网膜中13个基因的mRNA浓度的变化,使用ANOVA进行统计比较.结果 视网膜切片显示了神经截断组GFAP有明显的表达上调;截断+移植组的GFAP表达下调,GAP-43在不同时点在GCL出现不同程度的表达上调.Real-time PCR结果,5d后,视网膜中的GFAP、GAP-43表达在截断组和截断+移植组与对照组相比有显著的增加.在其后的时点,GAP-43的表达在两个实验组都比对照组有显著降低.结论 再生的视网膜可能调节GFAP合成.再生的RGCs表达GAP-43.GAP-43上调的结果为神经再生提供了依据.     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马生长相关蛋白-43 mRNA和蛋白表达的影响

目的：观察托吡酯（TPM）对戊四氮点燃大鼠海马生长相关蛋白．43（GAP-43）蛋白和mRNA表达的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只。模型对照组大鼠灌胃给予生理盐水（10mL／kg）,低、高剂量TPM组分别按40mg／kg和100mg／kg给予10g／LTPM生理盐水溶液,空白对照组给予等量生理盐水,1h后,前3组大鼠腹腔注射10g／L戊四氮（35mg／kg）建立戊四氮点燃大鼠癫痫模型,空白对照组给予等量生理盐水。当模型对照组大鼠行为达到点燃时,应用RT．PCR方法半定量检测GAP-43mRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测齿状回、海马CA3区和CA1区内GAP-43蛋白的表达强度。结果：与空白对照组相比,模型对照组,低剂量TPM组和高剂量TPM组大鼠齿状回与CA3区的GAP-43mRNA和蛋白表达强度升高（P〈0．05）;与模型对照组相比,低剂量TPM组和高剂量TPM组大鼠齿状回和CA3区的GAP-43mRNA和蛋白表达强度降低（P〈0．05）。结论：戊四氮点燃大鼠海马GAP-43表达增强,表明突触重建参与了癫痫发生的病理过程。TPM可抑制GAP-43的过表达,2种剂量的抑制作用无差异。     

血清生长相关蛋白-43、α-突触核蛋白对小儿癫痫诊断价值研究

目的 探讨癫痫患儿血清生长相关蛋白-43(GAP-43)、α-突触核蛋白(α-Syn)水平,分析两者对小儿癫痫的诊断价值。方法 纳入2019年4月—2022年4月临汾市人民医院儿科诊治小儿癫痫患者80例为癫痫组,晕厥患儿50例为晕厥组,腹股沟斜疝患儿50例为对照组。利用酶联免疫吸附试验检测血清GAP-43、α-Syn水平;比较3组患儿间及不同临床特征癫痫患儿血清GAP-43、α-Syn水平差异;Pearson相关分析血清GAP-43、α-Syn与癫痫发作严重程度量表评分(NHS3)的相关性;受试者工作特征曲线分析血清GAP-43、α-Syn对小儿癫痫的诊断价值。结果 血清GAP-43水平比较,癫痫组<晕厥组<对照组(F/P=821.793/<0.001),血清α-Syn水平比较,癫痫组>晕厥组>对照组(F/P=419.176/<0.001);癫痫患儿血清GAP-43在癫痫局灶性发作、无认知功能损害者中升高(t/P=8.745/<0.001,10.070/<0.001),α-Syn水平在癫痫局灶性发作、无认知功能损害者中降低(t/P=4.2...     

促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经生长蛋白43和微管相关蛋白-2表达的影响

目的 观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的保护作用及神经细胞神经生长蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白-2(MAP-2)表达的影响。方法 制作SCI模型,分为假手术组、生理盐水组、EPO治疗组。用免疫组织化学染色方法检测神经细胞内GAP-43和MAP-2的表达变化,同时通过BBB运动评分检测动物的运动功能。结果 EPO治疗组较生理盐水组GAP-43和MAP-2表达水平高,EPO治疗组的BBB运动评分明显优于生理盐水组。结论 EPO能够通过增加GAP-43和MAP-2表达,促进神经细胞生长。     

生长相关蛋白GAP-43多肽抗体的制备

目的对生长相关蛋白-43（growth associated proteins-43,GAP-43）进行抗原表位分析并制备兔多克隆抗体。方法通过对GAP-43 cDNA序列及氨基酸序列的结构进行生物信息分析,依据蛋白质的二级结构、亲水性、疏水性、抗原性及理化特性,经过同源性检索后,综合考虑抗体设计的其他因素,选出具有免疫活性的抗原决定簇多肽片段,采用有机固相多肽合成法合成了GAP-43的多肽片段,并与载体蛋白血蓝蛋白（KLH）偶联制备成抗原,免疫新西兰家兔。结果 ELISA测定GAP-43抗体效价为1∶32 000;Western blot检测结果显示：在分子量25kDa出现单一条带;免疫组织化学法检测显示：GAP-43蛋白在小鼠海马神经元中有表达;免疫细胞化学法检测显示：GAP-43蛋白在人神经母细胞瘤株SH-SY5Y中存在表达。结论利用生物信息学软件比较准确地预测GAP-43的抗原决定簇,并成功制备了高效价、高特异性的多肽抗体。     

生长相关蛋白43与脊髓损伤

生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP-43)是一种胞膜磷酸蛋白质,它广泛存在于神经组织中,尤其是在生长、分化和再生的轴突末端以及突触前膜,被认为是神经元发育和再生的一个内在决定因子.GAP-43对于神经系统发育过程中的轴突生长和突触形成具有重要作用,周围神经损伤后.其含量可增加20～100倍[1-2].增强损伤脊髓组织中GAP-43的表达水平,能促进损伤脊髓神经元的再生和修复,对脊髓损伤起保护作用,近年对其研究日渐深入.     

姜黄素对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用及GAP-43蛋白表达的影响

目的 观察姜黄素对阿尔茨海默病(AD)细胞模型的保护作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响.方法 以Aβ25~35作用于原代培养大鼠海马神经元,建立AD细胞模型,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;实验分为空白对照组、模型组、10和20μmol/L姜黄素组,采用流式细胞术检测姜黄素对凋亡的影响;采用免疫细胞化学分析观察细胞突起生长情况,计算GAP-43阳性细胞率;采用Western印迹法检测GAP-43蛋白的表达.结果 与模型组比较,姜黄素能显著减轻Aβ25~35的毒性损伤,神经元细胞存活率升高,凋亡率下降(P<0.01);可显著增加平均突起长度,增高GAP-43阳性细胞率和GAP-43表达(P<0.05或P<0.01).结论 姜黄素对AD细胞模型有保护作用,其机制可能与上调GAP-43的表达有关.     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马生长相关蛋白-43 mRNA表达的影响

目的:观察托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马结构内生长相关蛋白(GAP)-43mRNA表达的影响.方法:健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只.I组大鼠胃内注入生理盐水(10 mL/kg)后1 h腹腔注射10 g/L 戊四氮(35 mg/kg);Ⅱ组和Ⅲ组大鼠腹腔注射戊四氮(剂量同I组)前1 h分别按100 mg/kg和40 mg/kg胃内注入10 g/L 托吡酯生理盐水溶液;Ⅳ组大鼠按10 mL/kg和3.5 mL/kg分别胃内注入和腹腔注射生理盐水,间隔1 h.各组选取2个研究时间点,第1个时间点为I组大鼠疒间性发作达到Ⅲ级,第2个时间点为Ⅰ组大鼠疒间性发作达到Ⅴ级,每个时间点各组大鼠为5只.应用RT-PCR半定量检测不同时间点各组大鼠齿状回、海马CA3区及CA1区GAP-43 mRNA的表达.结果:2周和4周时I 组大鼠疒间性发作分别达到Ⅲ级和V级.GAP-43 mRNA RT-PCR 产物经溴乙啶显色后显示出256 bp和385 bp 2个预期的条带.在同一时间点,Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组大鼠齿状回及CA3区的GAP-43 mRNA表达强于Ⅳ组,差异有统计学意义(P＜0.05);各组在CA1区GAP-43 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅱ组和Ⅲ组大鼠齿状回和CA3区的GAP-43 mRNA表达水平较Ⅰ组降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组大鼠之间GAP-43 mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).与2周时相比,4周时Ⅰ组大鼠GAP-43 mRNA表达水平进一步增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:戊四氮点燃大鼠海马GAP-43 mRNA表达增强,表明突触重建参与了癫(癎)发生的病理过程;托吡酯可抑制GAP-43的表达,可能是托吡酯抗癫(癎)作用的机制之一.     

微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白-43表达的影响

目的 :探讨微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后再生的促进作用。方法 :A组微囊化坐骨神经组织细胞组、B组坐骨神经组织细胞组、C组空囊组、D组明胶海绵组及E组损伤对照组。无菌条件下取家兔坐骨神经 ,过滤后加入生理盐水制成悬液。将悬液与 1.5 %海藻酸钠溶液充分混合 ,经双腔喷头喷入 2 0mmol/L的氯化钡溶液制得微囊化坐骨神经组织细胞。同法制备空囊 ,但不包被细胞。以T10为中心打开椎管 ,虹膜刀自脊髓后正中沟插入并向左半侧横向切开 ,去除约 2mm脊髓组织 ,分别将浸有微囊化坐骨神经组织细胞、坐骨神经组织细胞及空囊的明胶海绵植入A、B、C组损伤处 ,D组植入明胶海绵 ,E组不作移植。分别于术后不同时间 ,每个时相 4只大鼠 ,取出脊髓损伤平面为中心的 8mm脊髓 ,分别行Nissl及GAP -4 3组化染色。结果 :A组尼氏体恢复 ,7天时GAP -4 3阳性表达达高峰 ,以后渐下降。结论 :微囊化异种坐骨神经组织细胞移植可促进损伤脊髓的再生     

不同穴位电针对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质GAP-43表达的影响

目的:比较督脉取穴法("人中"、"百会"穴)和背俞穴取穴法("肝俞"、"肾俞"穴)抗急性脑缺血损伤的效果.方法:成年健康雄性SD大鼠80只,采用线栓法造成右侧大脑中动脉阻断(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型后,随机分为假手术组(n=5)、模型组(n=25)、电针人中+百会...     

早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马GAP-43表达的影响

目的 探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain injury, HIBI)新生大鼠海马生长相关蛋白(Growth-associated protein-43, GAP-43)表达的影响.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBI模型,随机分为干预组和非干预组,假手术大鼠作为对照组.干预组大鼠于HIBI后第2天开始丰富环境干预,分别于术后第3、7、14、21、28天取各组大鼠脑组织进行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,观察不同时间点各组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达的差异.结果 非干预组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达强于对照组(P＜0.01),干预组海马GAP-43表达于术后第14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05),GAP-43mRNA表达于术后第7、14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05). 结论 早期丰富环境干预可以增强HIBI新生大鼠海马GAP-43及其mRNA的表达,提示GAP-43表达的增多可能参与了丰富环境影响HIBI新生大鼠损伤修复的机制.     

意向运动疗法对大鼠脑缺血再灌注损伤后NT-3及GAP-43表达的影响

目的观察意向运动疗法对脑缺血再灌注损伤后缺血区脑组织NT-3及GAP-43蛋白表达的影响,探讨意向运动疗法对神经再生和修复的作用。方法运用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,随机分为大脑中动脉栓塞模型组(MCAO组)、饲养环境改变组(EM组)、意向运动疗法组(WM组),再灌注后3、7、15 d 3个时间点进行神经功能缺损评分、免疫组化法检测脑缺血区脑组织NT-3、GAP-43蛋白的表达。结果再灌注15 d时WM组神经功能缺损评分显著低于MCAO组及EM组(P<0.05);再灌注7、15 d时WM组的NT-3及GAP-43蛋白表达均显著高于MCAO组和EM组(P<0.05);EM组与MCAO组比较:NT-3及GAP-43蛋白的表达无明显差异(P>0.05);NT-3与GAP-43蛋白的表达变化呈正相关。结论意向运动疗法可促进脑缺血再灌注损伤大鼠缺血区脑组织NT-3、GAP-43蛋白的表达,可能与缺血损伤神经元的再生和修复有关。     

雌激素对去卵巢大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨雌激素对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与Bcl-2表达的影响.方法:雌性Wistar大鼠30只均于脑缺血手术前7 d切除双侧卵巢,随机等分为假手术组、手术对照组及雌激素用药组.采用大脑中动脉阻断制成局灶性脑缺血模型.缺血2 h再灌注24 h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及Bcl-2的表达.结果:假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及Bcl-2阳性细胞.雌激素用药组较手术对照组脑梗死体积缩小((59.32±8.95)mm3 vs(96.93±11.63)mm3,P＜0.05),凋亡细胞数减少((96±12)个vs(126±9)个,P＜0.05);Bcl-2表达增强(P＜0.05).结论:雌激素通过上调Bcl-2的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用.     

降纤酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的:观察降纤酶对大鼠脑缺血再灌注后脑细胞凋亡的影响。方法:96只雄性SD大鼠,随机分为降纤酶治疗1,2组和对照组1,2组,制造大鼠脑中动脉栓塞模型,降纤酶治疗1,2组于缺血3h经腹腔注射降纤酶治疗,对照1,2组在相同时间点给予等量生理盐水。降纤酶治疗和对照1组利用流式细胞仪检测缺血3h再灌注3h、6h、24h、72h后脑组织中凋亡细胞百分率。降纤酶治疗和对照2组利用Tunel方法检测神经元凋亡数目及利用免疫组化方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:降纤酶治疗和对照1组凋亡细胞率、降纤酶治疗和对照2组凋亡细胞数均随再灌注时间延长而渐增多,于24h达高峰,以后逐渐减少,2组6h、24h和72h差异均有统计学意义(P<0.05)。降纤酶治疗和对照2组bcl-2蛋白表达于24h明显减低,bax蛋白表达于24h升至最高,Bcl-2和Bax蛋白表达时相与神经细胞凋亡高峰基本一致,降纤酶治疗2组24hBcl-2和Bax蛋白表达较对照2组明显减少(P<0.05)。结论:降纤酶有降低大鼠脑缺血再灌注后脑细胞凋亡的作用,对脑组织有保护作用。     

天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用

目的探讨天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用机制。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2h,再灌注24h后取大鼠大脑组织进行HE染色观察病理改变,TUNEL法计数凋亡细胞,Real time RT-PCR检测胱天蛋白酶3(casepase-3)mRNA的表达。结果天麻素能明显改善中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理变化,减少细胞凋亡(P<0.01),降低caspase-3mRNA的表达(P<0.05)。结论天麻素可通过下调caspase-3mRNA的表达减少大脑神经细胞凋亡,对缺血再灌注损伤大鼠脑组织发挥保护作用。     

高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响.方法:选取健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组(10只)、缺血对照组(25只)及缺血再灌注加高压氧治疗组(HBO组,25只).采用动脉线栓法制成大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血再灌注模型.用四氮唑染色观察局灶性脑缺血再灌注后120 h各组大鼠脑梗死灶的大小,应用TUNEL法及免疫组化方法检测缺血3 h再灌注6 h、24 h、48 h、72 h、120 h大鼠脑组织神经细胞凋亡及bcl-2蛋白的表达.结果:假手术组未发现脑梗死灶,凋亡细胞及bcl-2蛋白表达阴性.HBO组缺血再灌注后120 h大鼠梗死灶体积(15.9±4.2)明显小于缺血对照组(26.8±4.9)(P＜0.01);HBO组大鼠再灌注24 h,48 h,72 h各时点凋亡指数均低于缺血对照组,bcl-2蛋白表达均高于缺血对照组(P＜0.05).结论:脑缺血再灌注后凋亡细胞增多,bcl-2蛋白表达增强,高压氧治疗可以上调bcl-2蛋白的表达,抑制脑神经细胞凋亡,具有脑神经保护作用.     

新生鼠脑缺血预处理后海马CA1区GAP-43的表达

目的:观察新生Wistar鼠脑缺血再灌注后海马CA1区生长相关蛋白43(GAP-43)的表达和意义. 方法:通过阻断7日龄新生Wistar大鼠右侧颈总动脉45 min制备脑缺血模型,设置假手术组、缺血再灌注组和预缺血-缺血再灌注组. 采用免疫组化方法和计算机图像分析技术检测三组新生鼠不同时点海马CA1区脑组织GAP-43的动态变化及三组光镜下脑组织病理改变. 结果: ①脑组织病理改变:假手术组大鼠无异常病理改变,缺血再灌注组神经细胞变性、坏死,预缺血组-病理损伤较缺血再灌注组轻. ②GAP-43表达:缺血再灌注组海马GAP-43表达在再灌注后24 h时开始增高,7 d达高峰,至14 d与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);预缺血-缺血再灌注组GAP-43表达较缺血再灌注组增加更明显,与假手术组和缺血再灌注组比较均差异有统计学意义(P＜0.05). 结论: 新生鼠脑缺血预处理可减轻再次严重脑缺血对神经细胞的损伤,脑缺血预处理后海马CA1区GAP-43表达和合成增加,GAP-43表达增加可能与神经元再生和轴突重塑有关,是脑缺血后神经细胞内源性代偿机制之一.     

亚低温对脑缺血性损伤后凋亡诱导因子表达变化的影响

目的 观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)表达的影响,研究凋亡诱导因子从线粒体释放与神经细胞凋亡的关系.方法 用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶脑缺血再灌注模型,随机分为假手组、常温缺血组和亚低温缺血组,于缺血2h再灌注3h、6h、12h、24h、72h、7天后处死,其中亚低温组于缺血后30min实施病灶侧脑亚低温并持续4h.处死前进行神经功能缺陷评分;HE染色;免疫组化检测AIF的表达,TUNEL检测凋亡细胞.结果 ①神经功能缺陷评分:亚低温缺血组大鼠各时间点均明显低于常温缺血组(P＜0.05).②AIF表达:常温组随再灌注时间的延长而表达逐渐增强,至24h达高峰;亚低温缺血组各时间点表达明显少于常温缺血组(P＜0.05).③凋亡细胞的检测:常温组凋亡阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72h达高峰;亚低温缺血组各时间点的表达明显减少(P＜0.05).结论 AIF随缺血再灌注时间的延长,表达逐渐增强并出现核转移,相应时间点亚低温组降低,同时凋亡阳性细胞数也呈相似的趋势,亚低温抑制缺血后神经元凋亡通过抑制AIF从线粒体释放及核转移起作用.     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达

目的：观察局灶性脑缺血再灌注（FCIR）大鼠大脑皮质Caspase-3的表达。方法：雄性SD大鼠42只，分为假手术组和缺血再灌注（IR）组，IR组又分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组6只。IR组采用线栓法建立FCIR模型，假手术组仅插线1cm；于脑视交叉平面向后7～11mm处取脑组织。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化，免疫组织化学SP法观察不同时间Caspase-3的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：脑缺血2h再灌注6hCaspase-3表达升高，再灌注24h达到高峰，再灌注72h开始下降。凋亡细胞数的变化与Caspase-3表达变化一致。结论：Caspase-3参与了脑缺血再灌注神经元的死亡过程，该作用可能与细胞凋亡有关。