过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

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过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

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过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

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人PAX8与PPARγ的融合基因（PPFP）的克隆及其重组质粒的构建

目的 探讨人PAX8/FPARγ融合基因(PPFP)表达质粒在甲状腺上皮细胞中的表达及作用.方法 从含有PAX8基因和PPARγ基因的质粒克隆模板PAX8-pOTB7及PPARγ-pCMV-SPORT6中,利用PCR方法 调取目的 基因PAX8和PPARγ,将PAX8和PPARγ定向连接后克隆到pEGFP-C1载体上,构建融合基因的真核表达质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ,在大肠杆菌E.coli DH5α中转化并提取质粒,通过PCR和测序、分析比对验证PPFP融合基因后,将真核表达载体pEGFP-C1-PAX8/PPARγ的质粒用脂质体包合并转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1,通过RT-PCR和Western blot鉴定PPFP融合基因于靶细胞内在mRNA和蛋白水平上的表达.结果 构建的质粒通过鉴定证实正确;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后,经验证显示PPFP融合基因在mRNA和蛋白水平上顺利表达.结论 成功克隆了PPFP融合基因并构建其重组质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后可顺利表达PPFP蛋白,为进一步研究PPFP基因致瘤作用的分子机制提供了实验基础.     

激活BMP信号的骨细胞对骨髓基质细胞成骨及成脂分化的作用研究

目的激活骨细胞系MLO-Y4细胞中BMP信号检测培养上清对骨髓基质细胞系ST2成骨、成脂分化的影响,进一步探讨其机制。方法 0.5‰DMSO,0.5μmol/L BMP激动剂FK506分别处理MLO-Y4 24 h后,使用CCK-8检测细胞活力变化,实时荧光定量PCR检测BMP下游靶基因ID1及ID2 mRNA表达变化;用20%MLO-Y4培养上清与80%新鲜培养基混合后培养ST2细胞,分为DMSO组、FK506组。碱性磷酸酶染色代表其成骨分化能力,通过实时荧光定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OCN)、骨唾液酸蛋白(BSP)、Runx2等成骨细胞标志基因,过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)和C/EBP成脂分化标志基因。免疫印迹试验(Western blotting)检测ST2细胞内Wnt信号下游β-catenin、BMP信号下游p-smad5蛋白表达水平。结果与DMSO作用的MLO-Y4细胞相比,FK506激动的MLOY4细胞内BMP信号靶基因ID1、ID2上调,但不影响细胞活力。FK506组ST2细胞同DMSO组对比,成骨分化相关标志物,包括ALP、OCN、BSP、Runx2(P0.001)均显著升高;成脂分化标志物PPARγ及C/EBP表达则显著降低(P0.001); ST2细胞内β-catenin蛋白表达量上调(P0.05)。结论 BMP信号激动后MLO-Y4细胞上清可以促进ST2细胞成骨分化、抑制成脂分化,其成骨能力增强与细胞内Wnt信号增强有关。     

复发及多源发大肠癌多药耐药基因检测

目的 :研究多药耐药基因 (Mdr- 1)与复发及多源发大肠癌的关系。方法 :采用逆转录 -多聚酶链式反应 (RT- PCR)技术对81例复发和多源发大肠癌 Mdr- 1基因进行了检测。结果 :复发大肠癌 Mdr- 1基因表达率 6 1.5 % ,多源发大肠癌 Mdr- 1基因表达 5 5 .1% (P >0 .0 5 )。结论 :复发大肠癌 Mdr- 1基因表达的阳性和阴性与耐药与否的总符合率达 (2 8+17) /5 2 (P <0 .0 5 )。     

探讨SFRP2基因甲基化在大肠癌筛查中的作用

目的:探讨粪便中分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2,SFRP2)基因超甲基化作为筛查大肠癌的非侵袭性工具的可行性.方法:用甲基化特异性PCR(MSP)技术分析69例大肠癌、34例腺瘤和26例增生性息肉患者的瘤组织和粪便中SFRP2基因启动子甲基化状态,30例内镜下正常的健康者作为对照.其中大肠癌患者的粪便分别于术前及术后第9天采集.同时分析SFRP2基因甲基化与肿瘤临床病理因素之间的关系.结果:SFRP2基因在91.3%(63/69)的大肠癌组织、79.4%(27/34)的腺瘤组织和53.8%(14/26)的增生性息肉组织中发生超甲基化,并在同一患者所对应的粪便中有87.0%(60/69)、61.8%(21/34)和42.3%(11/26)检测到发生超甲基化.在正常对照的结肠黏膜中没有检测到SFRP2基因甲基化,但在粪便中有2例发生了SFRP2基因甲基化.在大肠癌患者术前和术后第9天的粪便中SFRP2基因超甲基化比较差异有统计学意义(P<0.001).此外,SFRP2超甲基化与肿瘤的临床特征包括性别、年龄、肿瘤分期、位置及病理分级等无显著相关性.结论:粪便中SFRP2基因超甲基化是大肠癌的一种新的分子标志,对于非侵袭性检测大肠癌具有高度的潜力.     

大肠癌发病风险与细胞间黏附分子-1基因多态性的关系

目的 探讨中国华北地区汉族人群中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)基因编码区单核苷酸多态性(SNPs)与大肠癌发病风险的关系.方法 采用序列特异-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法检测87例大肠癌患者(大肠癌组)和102例正常对照者(对照组)ICAM-1基因型和等位基因频率的分布.结果 大肠癌组和对照组ICAM-1-241G/R多态的基因型均为G/G,未检测出R241等位基因.ICAM-1-469K/E多态3种基因型频率(K/K,K/E,E/E)在大肠癌组和对照组中分别是57.47%(50/87)、32.18%(28/87)、10.35%(9/87)和42.16%(43/102)、43.14%(44/102)、14.70%(15/102),与K/E+E/E基因型比较,K/K基因型罹患大肠癌的风险明显增加(OR=1.85,x2=4.406,95%CI:1.04～3.31,P＜0.05);与E等位基因比较,K等位基因携带者增加大肠癌的发病风险(OR=1.58,x2=4.194,95%CI:1.02～2.46,P＜0.05).ICAM-1-469K/E多态的K/K基因型在大肠癌组中与肿瘤分化程度有关(x2=4.564,P＜0.05);而与临床其他病理参数包括性别、年龄、肿瘤部位及Dukes分期无关(P＞0.05).结论 ICAM-1-241G/R多态在我国华北地区汉族人群中不存在多态性;ICAM-1-469K/E多态K等位基因或K/K基因型的存在可明显增加大肠癌的发病风险;ICAM-1-469K/E多态K/K基因型与肿瘤分化程度有关.     

过氧化物酶增殖体激活受体-α对重要脏器缺血/再灌注损伤保护作用的研究进展

过氧化物酶增殖体激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)-α是一类与维甲酸类、类固醇类、甲状腺激素受体有关的配体依赖的转录因子,属核受体超家族一员,由相应配体激活后和视黄醇X受体(retinoid X receptors,RXRs)形成异二聚体,与位于靶基因启动子区域的特异性DNA序列(PPRE)结合而调控基因的表达.在脂代谢、糖代谢、细胞增殖和凋亡等方面发挥作用.近年来的研究表明,还可能对重要脏器如心、肝、肾、脑、肠等缺血/冉灌注损伤有保护作用.     

核不均一性核糖核蛋白和C-myc在大肠癌中的表达及其相关性

目的 检测大肠癌组织中核不均一性核糖核蛋白(hnRNPA1)和原癌基因(C-myc)的表达,探讨两者在转录调控通路中的相互作用.方法 收集60例大肠癌组织标本,免疫组织化学及半定量聚合酶链反应法(RT-PCR)检测hnRNPA1和C-myc蛋白及基因表达情况.结果 60例大肠癌标本中有35例(58.3%)hnRNPA1蛋白阳性表达,且表达强度随大肠癌分化程度降低而递增(P<0.05);C-myc蛋白共有38例(63.3%)阳性表达;RT-PCR见hnRNPA1阳性标本占96.7%(58/60),C-myc基因阳性标本占91.7%(55/60),两者表达均随大肠癌的分化程度递减而增加(P<0.05);hnRNPA1和C-myc在基因和蛋白质水平呈正相关,r值为0.32和0.42.结论 hnRN-PA1和C-myc在不同分化程度的大肠癌中表达差异有统计学意义,两者在基因和蛋白表达水平上均呈正相关.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ1基因转染诱导肝星状细胞表型及功能的变化

目的 用慢病毒介导PPARγ1基因在HSC中过表达,观察对HSC的增殖及细胞外基质合成的影响.方法 用慢病毒质粒系统在293T细胞中包装出重组慢病毒Lent/PPARγ1并感染HSC,用RT-PCR及WB检测目的 基因及目的 蛋白的表达,用噻唑蓝(MIT)比色法观察对HSC增殖的影响,用RT-PCR观察对Ⅰ型胶原、TCFβ1表达的影响.结果 成功构建Lent/PPARγ1并感染HSC,RT-PCR及WB检测到目的 基因及蛋白的表达,MTT检测表明Lent/PPARγ1组12、96 h的A值分别为0.420±0.031、0.638±0.040,与对照组0.448±0.019、0.810±0.070比较差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测表明Lent/PPARγ1组I型胶原、TGFβ1的2-△△Ct值分别为1.496±0.359、0.667±0.153,与对照组2.602±0.301、1.008±0.102比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成功构建携带PPARγ1的重组慢病毒载体并感染HSC,PPARγ1基因过表达可抑制HSC的增殖和活化.     

核内不均一性核糖核蛋白A2/B1在胰腺癌中的表达及其对B细胞淋巴瘤/白血病-X选择性剪切的调控机制

目的 探讨核内不均一性核糖核蛋白(hnRNP) A2/B1作为下游靶蛋白参与Fyn诱导的胰腺癌细胞B细胞淋巴瘤/白血病-X(bcl-X)选择性剪切调控的作用及其机制.方法 通过免疫组织化学方法观察28例胰腺癌标本hnRNP A2/B1的表达,并探讨其与胰腺癌临床病理参数之间的关系.通过RNA-免疫共沉淀技术,探讨受Fyn活性调控的hnRNP A2/B1的下游靶基因.通过改变hnRNP A2/B1的表达,观察对bcl-X选择性剪切的影响.结果 28例胰腺癌组织标本中有23例出现hnRNP A2/B1的表达,表达水平与胰腺癌TNM分期(R =0.854,P＜0.05)、是否发生远处转移(R =0.698,P＜0.05)相关等因素有关.RNA-免疫共沉淀证实,hnRNP A2/B1能够与BxPC3细胞中bcl-X基因的Pre-mRNA结合.hnRNP A2/B1表达水平的改变参与BxPC3胰腺癌细胞中bcl-X两种剪切体比例的调控.结论 hnRNP A2/B1的表达水平与胰腺癌组织侵袭转移能力密切相关;hnRNPA2/B1可以与胰腺癌细胞中bcl-X基因结合,从而影响bcl-X选择性剪切.