自体DC治疗对大肠癌术后患者免疫功能的影响

目的探讨热休克凋亡的人自体大肠癌细胞致敏的树突状细胞（DC）疫苗对大肠癌术后免疫功能的影响。方法从大肠癌患者外周血单核细胞中诱导DC，并用重组人粒细胞-噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和白介素4（IL-4）刺激活化，经热休克凋亡自体大肠癌细胞致敏制备DC疫苗。将26例大肠癌术后患者随机分为DC疫苗治疗组13例，化疗对照组13例。对两组病例治疗前后免疫功能、临床疗效进行观察比较。结果DC疫苗治疗后外周血CD3^＋、CD4^＋／CD8^＋及NK细胞比率较治疗前明显升高，P〈0．05，且明显高于对照组化疗后的CD3^＋、CD4^＋／CD8^＋及NK细胞比率，P〈0．05；DC疫苗治疗后血清IL-2／IL-12／IFN-r水平较治疗前明显升高，P〈0．05，且明显高于对照组化疗组，P〈0．05。结论大肠癌术后行热休克凋亡自体大肠癌细胞致敏的DC疫苗治疗，可改善患者的细胞免疫水平，且不良反应少，值得推广应用。     

中国HIV感染者细胞毒性淋巴细胞内穿孔素的差异性表达

目的 了解中国HIV感染者细胞毒性相关的NK细胞及CD8^＋T细胞内穿孔素表达水平，探讨HIV感染过程中穿孔素表达与机体免疫功能的关系。方法 采集31例未经抗病毒治疗的HIV感染者和经过高效抗逆转录病毒疗法（HAAS）治疗的17例HIV／AIDS患者以及15例健康对照的抗凝全血，应用流式细胞仪胞内染色法检测CD56^＋／CD3^-、CD3^-／CD16^＋NK细胞及CD8^＋／CD3^＋内穿孔素表达的百分数，分析其与NK细胞绝对值、NK细胞百分数、CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞绝对值及血浆病毒载量的相关性。结果 中国HIV感染者的NK细胞CD56^＋／CD3^-及CD3^-／CD16^＋亚群穿孔素表达百分数（平均13．17％，平均24．05％）高于CD8^＋T细胞穿孔素表达百分数（平均9．03％）；NK细胞内穿孔素表达低于健康对照（P〈0．05，P〈0．05），CD8^＋T细胞内穿孔素表达高于健康对照（P〈0．05）；NK细胞及CD8^＋T细胞内穿孔素表达水平与其绝对计数显著相关，与疾病进展不相关。HAART治疗组NK细胞内穿孔素表达升高，CD8T^＋细胞内穿孔素表达无显著变化。结论 中国HIV感染者NK细胞内穿孔素表达降低，抗病毒治疗后升高；CD8^＋T细胞内穿孔素表达升高，抗病毒治疗后无显著变化。     

树突状细胞标志分子在人乳腺癌中的表达及与T细胞的关系

目的通过观察人乳腺癌组织中CDlc、S-100、HLA-DR阳性细胞数和表达强度的变化及其与T细胞的关系,了解乳腺癌局部微环境的免疫状态,探讨树突状细胞与乳腺癌发生、发展的关系,为乳腺癌的生物治疗提供实验依据。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织,用免疫组织化学方法和图像分析技术对20例乳腺癌标本进行检测。结果乳腺癌组织中CDlc、S-100和HLA—DR的表达强度均较相对正常乳腺组织明显减弱（P〈0．05）;CDlc^＋ DC、S-100^＋ DC、HLA—DR^＋ DC、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞的数量均较相对正常乳腺组织明显减少（P〈0．05）,且乳腺癌组织中CDlc^＋DC细胞的数量比S-100^＋DC细胞的数量减少更明显,HLA-DR^＋DC与CD4^＋T细胞的数量呈明显相关关系（r=0．998）;结论树突状细胞表面标志分子在人乳腺癌组织中的表达总量下降,树突状细胞在抗乳腺癌的免疫反应中可能起重要作用;这为临床开展乳腺癌的生物治疗提供了实验依据。     

重肌灵片对ⅡA型重症肌无力外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子IFN-γ、IL-4、TGF-β水平的影响

目的：探讨重肌灵片对重症肌无力（MG）患者的细胞免疫调节机制。方法：将60例MG患者随机分为治疗组30例、对照组30例，治疗组服用重肌灵片及泼尼松模拟片；对照组服用泼尼松片及重肌灵模拟片，疗程12周。应用流式细胞仪检测重症肌无力患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群分布的变化情况；ELISA法测定患者外周血单个核细胞培养上清液中细胞因子IFN-γ、IL-4和TGF-B的水平。结果：两组患者治疗后CD4^＋T细胞百分率、CD4^＋／CD8^＋比值均有明显下降，治疗组CD4^＋／CD8^＋比值与对照组比较有显著差异（P〈0．05）。治疗组治疗后CD8^＋T细胞百分率明显增加，与治疗前比较有显著性差异（P〈0．05），而对照组治疗后CD8^＋T细胞百分率无明显变化（P〉0．05）。与治疗前比较，治疗组治疗后IFN—γ、IL-4水平降低（P〈0．01），TGF-β水平升高（P〈0．01），而对照组三者水平皆降低。结论：通过调节T淋巴细胞亚群比例分布以及IFN-γ、IL-4、TGF-β等细胞因子的分泌，可能是重肌灵片发挥免疫调节作用机制之一。     

休克期大面积切痂对严重烧伤大鼠细胞免疫功能影响的研究

目的 观察休克期大面积切痂对严重烧伤大鼠细胞免疫功能的影响，探索改善烧伤后机体免疫功能紊乱的有效方法。方法 将大鼠分成休克期切痂组（A组）、常规切痂组（B组）和正常对照组（C组）。A、B组造成30％TBSAⅢ度烫伤，C组不烫伤。A组伤后第6h、B组伤后第4d切痂，并于伤后第1、5、9d各活杀10只，取材送检，观察其免疫指标的变化。结果 （1）A、B组与C组比较：A、B组烫伤大鼠各时相点CD3^＋T细胞变化不大（P〉0．05），但CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显下降、CD8^＋T细胞增高（P〈0．05或P〈0．01）。NK细胞活性明显下降（P〈0．05或P〈0.01），外周血CD25^＋T淋巴细胞表达及经活化后脾脏CD25^＋T淋巴细胞表达明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。（2）A组与B组比较：A组CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显升高、CD8^＋T细胞降低（P〈0．05或P〈0．01），NK细胞活性明显升高（P〈0．05或P〈0．01），外周血CD25^＋T淋巴细胞表达及经活化后脾脏CD25^＋T淋巴细胞表达均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。结论 （1）大鼠烫伤后细胞免疫状况发生了明显变化。（2）休克期切痂可以改善烫伤大鼠T淋巴细胞亚群分布，提高NK细胞活性，增加外周血CD25^＋T淋巴细胞的表达。提高经活化后脾脏CD25^＋T淋巴细胞数。从而改善烫伤大鼠伤后机体的细胞免疫功能。     

非霍奇金淋巴瘤患者T细胞亚群、NK细胞检测的临床意义

目的：研究非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞检测结果的变化与该病的关系及与慢性淋巴腺炎患者细胞免疫功能的不同变化。方法：采用流式细胞仪（FCM）检测非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者、慢性淋巴腺炎及正常人外周血T淋巴细胞亚群比例、NK细胞的变化。结果：非雹奇金淋巴瘤患者与正常人比较总的T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞及CD4^＋／CD8^＋比值明显下降（P〈0．05），细胞毒性T淋巴细胞明显升高（P〈0．05），NK细胞则无明显变化（P〉0．05）。非霍奇金淋巴瘤患者与慢性淋巴腺炎患者比较，细胞毒性T淋巴细胞、NK细胞明显升高（P〈0.05），而总的T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞无明显改变（P〉0．05），CD4^＋／CD8^＋比值略有下降但无明显统计学意义。结论：非霍奇金淋巴瘤患者细胞免疫功能明显受到抑制，T细胞亚群及NK细胞的检测对NHL的诊断、治疗、预后判断有一定的临床价值。     

发作期哮喘患者外周血T细胞亚群、B细胞和NK细胞的变化及临床意义

目的：探讨发作期哮喘患者外周血T细胞亚群、B细胞和NK细胞变化及临床意义。方法：采用直接免疫荧光法,用流式细胞术检测30例发作期哮喘患者和30例正常人对照的T细胞亚群、B细胞和NK细胞的变化。结果：与正常对照组比较,发作期哮喘患者CD4^＋T细胞、CD19^＋B细胞和CD4^＋／CD8^＋比值显著增高（P〈0．01）,CD8^＋T细胞显著下降（P〈0．01）和CD56^＋CD16^＋NK细胞下降（P〈0．05）。CD3^＋T细胞无明显变化。结论：发作期哮喘患者的免疫功能紊乱在哮喘发病中起着重要作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞与系统性红斑狼疮病情活动性关系的研究

目的：检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD8^＋调节性T细胞亚群，探讨其与疾病活动性、肾脏损伤、血清抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白和补体C3含量的关系。方法：采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊SLE患者（n=37）外周血CD4^＋CD25^＋T、CD4^＋CD8^＋T细胞群比例，以15例RA和15例SS组成自身免疫性疾病对照，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与SLE患者疾病活动性指标SLEDAI、IgG、C3及血清抗ds-DNA抗体的关系。结果：①疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞群比例显著低于正常对照组（P〈0.01），疾病稳定期和风湿性疾病对照组与正常对照组结果差异无统计学意义。疾病活动期和稳定期SLE患者CD4＋CD8＋T细胞群比例都略高于正常对照组，但未发现结果差异有统计学意义（P〉0.05）。②疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于稳定期患者（P〈0.01）。SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值与SLEDAI、补体C3呈低度相关（r分别为-0.491、0.368，P〈0.05），CD4^＋CD25^＋T细胞数量与SLEDAI呈负相关（r=-0.578，P〈0.05）。③SLE并发肾病组外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于非肾病组（P〈0.01；P〈0.05）。同一SLE患者治疗前后CD3^＋CD4^-CD8^-细胞和NK细胞降低，CD4^＋CD25^＋细胞、CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值及CD8^＋T细胞增加，但未发现这些结果差异有统计学意义。本次研究未发现NK细胞、CD4^＋CD8＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞群比例在ds-DNA＋组与ds-DNA-组之间结果差异有统计学意义。结论：SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例与SLEDAI成负相关，与肾脏的损害也有密切关系，但与血清抗ds-DNA抗体产生的关系不明显。活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞减少，稳定期CD4^＋CD25^＋T细胞比例回升，因此推测CD4^＋CD25^＋T细胞的变化可能是导致疾病发生和病情发展及相关器官（如肾脏）损伤的关键环节之一。     

糖基化修饰的DC疫苗特异性抗骨髓瘤活性的体外研究

目的：探讨经过糖基化修饰改造过的肿瘤相关糖抗原冲击树突状细胞（DC）制备的DC疫苗特异性抗骨髓瘤作用。方法：采用化学方法及肿瘤细胞的生物工程法使骨髓瘤细胞表达新肿瘤相关抗原N-丙酰多聚唾液酸（NPrPSA）；在无血清培养条件下，采用GM—CSF／IFN-α及TNF-α从MM患者外周血单核细胞诱导培养DC。然后用表达新抗原的肿瘤细胞冲击DC制备DC疫苗，将其刺激T细胞后，通过LDH释放法观察其对骨髓瘤细胞的杀伤效力，并采用ELISA法测定了T细胞分泌细胞因子IFN-γ的能力。结果：糖基化修饰的CD138^＋Npr—DC组LDH释放率较CD138^＋未修饰DC组明显增高（P〈0．01）。CD138^＋Npr—DC组T细胞分泌IFN-γ与CD138^＋未修饰DC组相比亦明显增加（P〈0．05），而CD138^＋Npr—DC组与CD138^-未修饰DC组之间无统计学意义（P〉0．05）。结论：糖基化修饰的DC疫苗可以有效地激活Th1细胞免疫应答，分泌高水平的细胞因子IFN-γ；可诱导出较普通DC疫苗更明显的抗骨髓瘤作用，并具有一定的安全性。     

鼻咽癌患者树突状细胞对EBV特异性细胞毒T细胞的免疫反应

目的：用负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的鼻咽癌患者树突状细胞（DC）诱导自身CD8^＋T细胞，观察其细胞毒性T细胞的免疫应答能力。方法：在体外分离并诱导成熟HLA—A2基因型鼻咽癌患者自身的DC，分别负载EB病毒抗原LMP-2的HIA—A2限制型两个表位肽段CLGGLLTMV（CLG）和LTAGFIFL（LTA）后，诱导自身CD8^＋T细胞，培养2周后，运用酶联免疫斑点法（Elispot）和HLA-肽四聚体法（Tetramer）检测诱导后T细胞的免疫应答情况。结果：经DC抗原呈递后分泌IFN-γ的CLG和LTA特异性CD8^＋T细胞数，分别为（42．67±33．79）个／孔和（25．67±18．25）个／孔，而呈递前分别为（2．67±1．97）个／孔和（5．33±1．86）个／孔。两者IFN-γ^＋CD8^＋T细胞数均有明显增加（P〈0．05）。CLG和LTA肽段特异性细胞毒性T细胞（CTL）的中位数在呈递前分别为0．135％和1．14％；呈递后则为1．045％和1．945％。两者较呈递前均明显增加（P〈0．05）。结论：负载EB病毒抗原LMP-2表位肽段的DC诱导鼻咽癌患者自身CD8^＋T细胞，可产生特异性CTL，对鼻咽癌患者的免疫治疗具有潜在的应用价值。     

三联叠加疗法对慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒复制和变异的影响

目的观察疗效确切的抗病毒药物和免疫调节剂,叠加伍用对慢性乙型肝炎病人HBV复制和变异的影响.方法应用拉米夫定、干扰素α-2b、黄芪注射液三联叠加疗法,对慢性乙型肝炎病人进行抗病毒治疗,并与单独应用拉米夫定的抗HBV效果进行比较评价.检测HBVDNA阴转率和HBeAg-抗HBe血清转换率;血清HBVDNA浓度;HBVDNA的YMDD变异率和前C区变异率.结果A组(叠加用药组)与B组(拉米夫定单药组)比较,HBVDNA阴转率分别在第12周、36周及48周差异有显著性(P<0.05),HBeAg阴转率在第36周、48周差异有显著性(P<0.05),抗HBe阳转率仅在第48周差异有显著性(P<0.05);两组患者血清HBVDNA浓度比较,治疗12周时降低程度差异有显著性(P<0.05),治疗第36周和48周时差异有非常显著性(P<0.01);治疗后12周,A组出现前C区BCP变异;疗后24周、36周和48周,两组均出现YMDD和前C区变异.结论与拉米夫定单独用药比较,三联叠加疗法可增加慢性乙型肝炎患者HBVDNA阴转率和HBeAg-抗HBe血清转换率,更显著降低血清HBVDNA浓度,并减少YMDD变异,故其抗HBV疗效优于拉米夫定单独用药.     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎2年临床疗效

目的 研究拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床疗效和安全性。方法 选取72例慢性乙型肝炎病人,第一阶段为随机、双盲、安慰剂对照的研究共12周,分为拉米夫定组（n=54）和安慰剂组（n=18）;第二阶段为开放研究,所有病人均服用拉米夫定100mg/d至104周。观察指标包括临床症状、肝功、乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物、HBV DNA和病毒YMDD变异等。结果 拉米夫定治疗12周时,HBV DNA阴转率显著高于安慰剂组（61％对6％,P＜0.01）,ALT持续复常率也高于安慰剂组（65％对11％,P＜0.05）;治疗52周时,两组病人总的HBV DNA阴转率为785,ALT持续复常率为39％,HBeAg阴转率和血清转换率分别为8.2%和6.1%;治疗104周时,两组病人总的HBV DNA阴转率36％,ALT持续复常率为33％,HBeAg阴转率和血清转换率分别为12.2%和6.1%。两组病人总的YMDD变异率在52周时为13.7%,104周时为39.7%。第一阶段拉米夫定和安慰剂组不良瓜在的差异不显著（P＞0.05）,治疗期间未发生与药物有关的严重不良反应。结论 拉米夫定100mg/d可以迅速降低血清HBV DNA和ALT水平,安全性良好。但应严密监测以及时发现YMDD病毒变异引起的HBV DNA反跳。     

肾综合征出血热CD178 +T淋巴细胞本质的临床研究

目的探讨肾综合征出血热(hemorrhagicfeverwithrenalsyndrome,HFRS)患者CD178 T淋巴细胞的本质及其在致病过程中的作用。方法应用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)对56份HFRS患者外周血标本进行检测,分析CD178在HFRS淋巴细胞亚群和活化淋巴细胞中的表达及其动态变化。结果HFRS发热期和多尿期CD4 CD178 及CD8 CD178 T淋巴细胞与对照组比较明显增加,差异具有统计学意义。HFRS发热期和多尿期CD178在CD4 HLADR T淋巴细胞群及CD8 HLADR T淋巴细胞群表达均明显增高,与正常对照组比较,差异具有统计学意义;而发热期与多尿期之间比较,差异无统计学意义。结论HFRS的发病过程中CD178表达于活化CD4 淋巴细胞亚群,主要表达于CD8 T细胞亚群,且病程早期和后期均有高表达。推测在发病早期细胞毒T细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)通过CD178介导的细胞调亡清除病毒感染的靶细胞,在疾病末期则通过清除活化的抗原特异性T细胞,维持机体免疫自身的稳定。     

Retherapy with lamivudine in hbeag-negative chronic hepatitis B patients unresponsive to interferon/peginterferon treatment

The paper gives data on retherapy with lamivudine in seven HBeAg-negative chronic hepatitis B patients previously unresponsive to interferon-alpha and peginterferon-alpha2b therapy (6 unresponsive patients and 1 with recurrence). Prior to lamivudine therapy, hepatic biopsy and HBV genotyping were carried out and the baseline level of viremia and the presence of YMDD mutations were determined in all the patients. Its therapeutic efficiency was based on viremia level and AIAT activity at 6, 12, 18, and 24 weeks of treatment. Six of the 7 patients, including 2 receiving peginterferon-a2a, achieved a virological response. Trends in viremia within the first 12 weeks of treatment were a major factor to assess the virological response. Positive predictors during retreatment with lamivudine are discussed.     

Emergence of YMDD motif mutants of hepatitis B virus during lamivudine treatment of immunocompetent type B hepatitis patients

Lamivudine is an effective antiviral agent for the treatment of chronic type B hepatitis. Recent studies have shown the appearance of lamivudine resistant viruses with mutations at the tyrosine-methionine-aspartate-aspartate (YMDD) motif of the viral polymerase in hepatitis B virus (HBV) infected patients who received orthotopic liver transplantation. In order to confirm the appearance of such mutant HBV in immunocompetent patients, the HBV sequences in and around the YMDD motif of HBV DNA polymerase were examined in the sera from 16 lamivudine treated and 10 untreated control patients. Approximately 200 bases including the YMDD motif of HBV DNA polymerase were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and sequenced directly by an automated sequencer. Of the 16 patients receiving lamivudine, mutant viruses with mutations in the YMDD motif were found in 3 of 8 patients treated with lamivudine for 52 weeks. However, this mutation was not found in any of the 8 patients treated for 32 weeks or a shorter period. Mutant viruses appeared after 40 weeks of treatment and were undetectable within 12 weeks after the cessation of the treatment. Such mutant viruses were not detected in any of the 10 untreated patients. This study confirms the emergence of YMDD mutant viruses during long-term lamivudine treatment in immunocompetent type B hepatitis patients. The results from this study suggest the need for combination therapies to reduce the levels of such mutant viruses in some patients.     

Management of hepatitis B in China

A randomised, multicentre, double-blind, placebo controlled trial was conducted in Chinese patients with chronic hepatitis B to compare the efficacy of once-daily lamivudine and placebo on serum HBV DNA, and to assess the long-term efficacy and safety of lamivudine. Patients received lamivudine 100 mg (n = 322) or placebo (n = 107) once daily for 12 weeks, and were then offered open-label lamivudine treatment for 2 years. Lamivudine therapy resulted in increased hepatitis B e antigen (HBeAg) loss and seroconversion (loss of HBeAg plus the development of antibodies to HBeAg) in patients with high baseline serum alanine aminotransferase (ALT) concentrations. At 2 years, loss of HBeAg was achieved by 27% (38/140), 38% (25/66) and 60% (9/15), and seroconversion was achieved by 17% (24/140), 24% (16/66) and 33% (5/15) of patients with baseline serum alanine aminotransferase (ALT) concentrations of >1 x upper limit of normal (ULN), >2 x ULN and >5 x ULN, respectively. With lamivudine treatment, serum HBV DNA decreased rapidly to very low concentrations and remained low throughout the 2 years of the study. At 1 year, 15% (43/295) of patients in the lamivudine group had developed YMDD (tyrosine-methionine-aspartate-aspartate amino acid motif of HBV polymerase) variant HBV. These patients derived clinical benefit with continued lamivudine therapy, demonstrated by serum HBV DNA and ALT concentrations below baseline, or normal serum ALT concentrations. Lamivudine was well tolerated and an effective once-daily oral therapy for Chinese patients with chronic hepatitis B with viral replication and liver disease.     

拉米夫定治疗中乙型肝炎病毒基因序列变异特点及其准种研究

目的研究拉米夫定治疗中乙型肝炎病毒（HBV）逆转录酶区核苷酸序列变异、特点、含量及其与基因型和病毒载量的关系。方法普通DNA测序法检测拉米夫定治疗的117份慢乙肝患者血清HBV逆转录酶区基因序列及其基因型;其中99份用TaqMan法定量HBVDNA;64份用焦磷酸测序（Pyrosequencing）检测YMDD基序中碱基的频率。结果HBVYMDD变异组中C型43例,B型10例,A／B混合型1例;YMDD不变异组中C型54例,B型8例,D型1例,HBVDNA含量平均对数值在变异组和不变异组分别为：6．5699和6．6165;YMDD变异与其基因型及病毒载量无统计学意义;rtL180M位点变异与rtM204I／V位点变异高度相关;并且HBV野生株与变异株均同时存在。结论结合两种测序方法可以用来研究拉米夫定治疗中HBV基因序列变异情况及对YMDD耐药株进行定量。