射频热疗荷H22肝癌小鼠后脾淋巴细胞增殖及细胞毒性的动态变化

已有的少量研究表明,射频治疗原发性肝癌后患者外周血CD4^＋T淋巴细胞数目增加,CD8^＋T淋巴细胞数目减少,CD4^＋/CD8^＋比值升高.这些研究没有以手术组为对照,不能证明免疫变化为射频治疗所特有;同一表型T细胞可能具有不同功能,仅测定CD4^＋和CD8^＋T细胞表型,不能充分说明体内T细胞的功能状态,没有从淋巴细胞功能角度来动态研究射频治疗对机体细胞免疫功能的影响.淋巴细胞增殖及其细胞毒性检测是评价淋巴细胞功能的重要指标,本研究通过该两项指标的测定评价射频治疗荷H22肝癌小鼠后脾淋巴细胞免疫功能的动态变化,观察射频治疗对机体免疫功能的影响.     

枯否细胞分泌的细胞因子在肝纤维化中的作用

枯否细胞可分泌多种细胞因子，如转化生长因子，肿瘤坏死因子，白介素，血小板源生长因子等。这些细胞因子对肝脏细胞外基质的合成与降解起着调控作用，在肝纤维化的发生发展过程中起着重要作用。     

吴茱萸碱对小鼠树突状细胞分泌细胞因子的影响

目的:利用抗体芯片技术和ELISA检测吴茱萸碱(EVO)对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)分泌相关细胞因子的影响,研究EVO的生物学调节功能。方法:体外诱导培养未成熟DC细胞(iDC),经LPS和EVO处理后,通过混合淋巴反应检测DC诱导异源T细胞的应答能力,ELISA检测上清中IL-12p40、IL-12p70和IL-10,小鼠抗体芯片检测细胞上清中细胞因子。结果:EVO促进了iDC和成熟DC(mDC)抗原提呈功能(P0.05),对iDC、mDC的细胞因子IL-10、IL-12分泌功能无影响(P0.05),另外EVO处理iDC后上调大于2倍的细胞因子有7个(VEGF、DPPIV/CD26、IGF-Ⅰ、IL-17BR、MDC、Pro-MMP-9、Eotaxin-2),处理mDC后上调大于2倍的细胞因子有2个(Eotaxin-2、IL-13)。结论:EVO处理mDC和iDC后,细胞因子的分泌功能发生了明显改变,这些细胞因子影响着DC的抗原摄取、迁移、抗原提呈,为进一步寻找药物靶点提供了线索。     

细胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性研究

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的生物学特性。方法:健康人非贴壁单个核细胞用含IFN-γ、IL-1β、IL-2、CD3单抗诱导CIK细胞。以LAK细胞作为对照。流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测细胞表型特征;乳酸脱氢酶释放法分析细胞毒活性。结果:诱导2周后,CIK细胞的增殖率达到高峰,CD3⁺细胞占95％以上;第3周细胞生长进入平台期。诱导15d时,CD3⁺CD56⁺NKT亚群占16.5％,比例在2-4周区间内无明显变化。LAK细胞增殖缓慢,显著低于同期CIK细胞增殖率(P＜0.01)。不同效:靶比例CIK细胞对肝癌细胞BeL-7402的特异性溶解率显著高于LAK细胞(P＜0.01)。免疫细胞化学染色结果显示,CIK细胞高度表达HLA-DR和CD54抗原,NKT细胞体积较CD3⁺CD56^-细胞略大,细胞表面有大量伪足。结论:CIK细胞具有高度增殖能力,其体外杀瘤活性明显优于LAK细胞。诱导14-21d,CIK细胞增殖率和CD3⁺CD56⁺阳性细胞率均达到高峰,此时期的CIK细胞适合临床应用。     

利用超声射频实现肿瘤热疗实时无创测温方法

无创测温是肿瘤热疗的技术难题,超声射频测温技术是一种临床应用前景较好的无创测温方法。本文根据4种超声射频参数对超声射频测温方法进行了综述。诸多特征参数均与温度存在一定的相关性,测量方法中超声回波时移测温技术最为成熟,测温精度达到0．24℃。频移、能量、声衰减测温方法分别受不同因素的影响,定量测温尚存在一定困难。超声特征参数提取精度的提高将有效改善测温效果,多参数融合分析和凝固区定征识别也是超声无创测温技术的发展方向。     

双频双对电极射频热疗比吸收率及温度场模拟

针对双频双对电极射频热疗的比吸收率和瞬态温度分布进行了物理、数学建模和数值模拟计算。该模型能真实反映电磁波在生物组织中的衰减。在非稳态温度场模拟中考虑了血液灌流量随温度变化和肿瘤区低血液灌流的特点。对双频双对电极射频热疗电磁能量分布和温度分布的特点、电极位置和电极功率对有效治疗深度的影响作了细致的分析讨论。     

肝癌射频消融术后的血管改变与疗效及残癌监控

目的 探讨射频消融术（RFA）后肿瘤血管改变与疗效的相关性及残癌的监控。方法 35例肝脏肿瘤41个病灶，在接受RFA术后1-12月行CT、肝动脉及间接门静脉造影检查，根据术后CT及DSA造影表现及临床随访，评估RFA术的疗效，并对残留及再生肿瘤病灶实施介入干预。结果 RFA术后，在12个月的随访中。24个病灶完全坏死；17个病灶出现残留，13个出现肿瘤再生，表现为残留的肿瘤血管和肿瘤染色，以及新生肿瘤血管和不规则新肿瘤染色灶。经过肝动脉化疗和栓塞治疗后，残留和再生病灶得到控制。结论 肝脏肿瘤的供血血管的再通或血管的再生（侧支循环的产生），与肿瘤残留及再生有直接相关性，DSA血管造影应作为监控肿瘤残留的金标准。     

不同刺激剂诱导肺癌患者引流淋巴结细胞分泌细胞因子的研究

目的:探讨多种刺激剂对肿瘤引流淋巴结(TDLN)细胞分泌细胞因子的影响及其抗肿瘤效应和机制。方法:采用ELISA和Griess法测定不同刺激组(分别为IL2、IL2 自身肺癌细胞抗原、IL2 GMCSF IL4 自身肺癌细胞抗原和IL2 GMCSF IL4 LPS)刺激TDLN后第7、14、21天,分泌IL12p70、IFNγ、TNFα和NO的水平。结果:IL2 GMCSF IL4 自身肺癌细胞抗原和IL2 GMCSF IL4 LPS组刺激的TDLN细胞中,CD83 细胞的比率明显增多,分泌IL12p70、IFNγ及TNFα的水平也明显高于IL2和IL2 自身肺癌细胞抗原刺激组,IL2 GMCSF IL4 LPS组刺激的TDLN细胞分泌NO的水平明显高于其他3组。各种刺激剂刺激TDLN细胞后,分泌IL12p70、IFNγ和NO的水平在第14天时达到高峰。结论:不同刺激剂诱导TDLN细胞中的CD83 细胞数量不同,故具有不同的抗肿瘤活性。     

原花青素A-1调节ConA刺激小鼠脾细胞分泌Th1/Th2细胞因子的影响

目的研究从碎米花杜鹃叶中分离得到的化合物原花青素A-1(proanthocyanidin A-1,简称PAA-1)对Con A刺激的小鼠脾细胞细胞因子分泌水平的调节作用,确定其免疫增强的作用机制。方法采用双抗夹心ELISA法,通过不同浓度PAA-1协同Con A体外刺激,检测其对小鼠脾细胞分泌的各种细胞因子分泌量的影响。结果 1)PAA-1各浓度在体外能增加Con A刺激的脾细胞分泌的辅助性T细胞亚群(Th1)细胞因子(IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α)的分泌量;2)PAA-1对Con A刺激的脾细胞分泌的抑制Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的分泌量起抑制作用。结论 PAA-1是通过增加Con A刺激的小鼠脾细胞Th1细胞因子的分泌量,来发挥免疫增强作用,并使Th1/Th2的平衡向Th1方向移动,这对许多的Th2占优势的免疫紊乱性疾病的治疗具有重要的意义,为其开发为新型免疫增强剂提供试验依据。     

唑来膦酸钠加射频热疗治疗转移性骨肿瘤

研究双膦酸盐加射频热疗治疗转移性骨肿瘤有效性及毒副作用。将48名转移性骨肿瘤患者分为两组,双膦酸盐加热疗治疗组23例,单纯双膦酸盐治疗组25例。所有患者均静脉用唑来膦酸钠治疗,双膦酸盐加热疗组于骨转移局部射频热疗6次,治疗后以主诉分级法（VRS）评价疼痛治疗疗效,CT、MRI或单光子发射计算机断层（SPECT）评价局部骨骼破坏,以χ2检验法比较组间差异。结果表明：双膦酸盐加热疗组,疼痛6例完全缓解（CR）,5例部分缓解（PR）,8例稳定（SD）;双膦酸盐治疗组2例完全缓解,5例稳定,6例部分缓解;疾病控制率（CR＋PR＋CR）分别为82.6%及52.0%（P〈0.05）;CR或MRI提示骨质损害减少分别为26.1%,28.0%（P〉0.05）。两组肝、肾功能、血常规变化未见明显差异（P〉0.05）。本研究提示双膦酸盐加射频热疗治疗骨转移疼痛及骨质破坏较单纯双膦酸盐治疗临床效率高,副作用未见明显差异。     

Thrombocytopenia represents a risk for deterioration of liver function after radiofrequency ablation in patients with hepatocellular carcinoma

Background/Aims

We evaluated changes in liver function parameters and risk factors for the deterioration of liver function 12 months after percutaneous radiofrequency ablation (RFA) therapy in patients with hepatocellular carcinoma (HCC).

Methods

The subjects in this retrospective study comprised 102 patients with HCC who had undergone RFA therapy and exhibited no recurrence of HCC 12 months thereafter. Serial changes in serum total bilirubin and albumin, prothrombin time, and Child-Pugh score were evaluated before RFA and 3, 6, 9, and 12 months thereafter. Deterioration of liver function was defined when the Child-Pugh score increased by at least 2 at 12 months after RFA therapy. We determined the factors related to aggravation of liver function after RFA therapy.

Results

Liver function had deteriorated 12 months after RFA in 29 patients (28.4%). Serum albumin levels decreased significantly from before (3.7±0.1 g/dL, mean±SD) to 12 months after RFA therapy (3.3±0.1 g/dL, P=0.002). The Child-Pugh score increased significantly during the same time period (from 6.1±0.2 to 7.2±0.3, P<0.001). Pre-RFA thrombocytopenia (≤100,000/mm³) was revealed as a significant risk factor for the deterioration of liver function after RFA. However, no patients had episodes of bleeding as a complication of RFA.

Conclusions

Among the liver-function parameters, serum albumin level was markedly decreased in HCC patients over the course of 24 months after RFA therapy. A pre-RFA thrombocytopenia represents a major risk factor for the deterioration of liver function.     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察

目的 动态观察细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化.方法 疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫Balb/e鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EgAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-у、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照.结果 口服免疫组的IL-2、IFN-у、TNF-α和IL-4水平分别在免疫后4～10周、2～10周,2～18周和10周升高,分别在免疫后10、10、6和10周达最高水平;鼻腔内接种组的IL-2、IFN-у、TNF-α和IL-4水平分别在免疫后2～18周、2～10周、2～18周和10周升高,分别在免疫后10、8、12和10周达最高水平.结论 细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗在免疫早期(2～10周)可诱导小鼠脾细胞产生Th1和Th2.混合型细胞因子.     

肝脏特异HPPCn转基因小鼠的建立及表型分析

目的建立高表达HPPCn转基因小鼠,为研究该基因在肝癌发生发展中的功能提供研究模型。方法显微注射外源基因pGEM-A1b/his-HPPCn至FVB/N小鼠原核,注射受精卵移植到假孕受体出生个体。PCR和Southern blot鉴定转基因小鼠基因型,Western blot和Realtime-PCR检测转基因阳性和阴性小鼠肝脏HPPCn蛋白表达情况,HE染色和透射电镜观察肝脏病理改变。结果经检测,显微注射共产生2只首建鼠,转入的重组HPPCn基因能在肝脏中特异表达,并能够稳定遗传。转基因小鼠肝脏内HPPCn含量明显增高。转基因后并未对小鼠造成不良影响。结论 HPPCn参与了肝癌发生发展的过程,其在体内的高水平表达,为在体内研究该基因的功能提供了工具。     

Foxp3转染对哮喘小鼠脾淋巴细胞功能的影响

目的: 转染Foxp3至哮喘小鼠脾淋巴细胞,探讨Foxp3表达对脾淋巴细胞功能的影响。方法: 卵白蛋白(OVA)致敏激发制作哮喘小鼠模型,收集培养脾脏淋巴细胞;使用电穿孔法转染真核表达载体pcDNA3.1(-)-Foxp3至脾脏淋巴细胞,并设转染空质粒组和对照组;RT-PCR和Western blotting检测Foxp3的表达;流式细胞术检测转染后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞/CD4⁺细胞比例;MTT法检测转染后的脾脏淋巴细胞增殖反应,ELISA检测脾淋巴细胞上清中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的含量。结果: 转染组Foxp3 mRNA 和蛋白的表达水平显著高于空质粒组和对照组;转染Foxp3后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞/CD4⁺细胞比例显著高于空质粒组和对照组;与空质粒组和对照组相比,转染pcDNA3.1(-)-Foxp3质粒明显抑制了脾淋巴细胞增殖;转染组细胞上清中IL-4和IFN-γ含量低于空质粒组和对照组。结论: 转染pcDNA3.1(-)-Foxp3至哮喘小鼠脾淋巴细胞,Foxp3得到有效表达。Foxp3的高表达能增加CD4⁺CD25⁺ T细胞的数量,抑制哮喘小鼠脾淋巴细胞的增殖以及Th1和Th2细胞因子的产生。     

裸鼠荷人鼻咽癌细胞株后免疫状态的动态观察

本实验选用4～6周龄NC系裸鼠,原代用双侧颈背部皮下接种CNE-2细胞株,鼠间传代用套针双侧接种上代的新鲜瘤块,共传8代,成功率100%。动态观测裸鼠荷瘤后免疫状态变化的结果如下:(1)净体重显著减轻;(2)脾系数增大,瘤重增加,两者间高度正相关(r=0.8395);(3)脾NK活性在第5天时轻度升高,10天时开始下降,15天后显著下降;NK活性与瘤重及脾系数均呈高度负相关(r_1=-0.7132,r_2=-0.8237);(4)第5天时,脾NK细胞体外对人干扰素反应性良好,10天时仍有一定的反应性,15天后失去反应性;(5)荷瘤裸鼠牌细胞自然转化率高于对照组,而对ConA刺激的反应性低于对照组;(6)“癌克星”通过降低血清MDA、提高NK活性及增加瘤组织中单核细胞浸润而起抑瘤生长的作用。揭示在T细胞缺陷的裸鼠,其脾NK细胞是抗移植瘤生长的重要免疫活性细胞。     

Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用

目的：研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）对人肝癌耐药细胞株移植裸鼠皮下后，移植瘤生长的抑制作用。方法:将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM裸鼠移植瘤模型，随机分为：空白对照组、单纯脂质体转染组、正义链转染组、200 μg/L ASODN组、400 μg/L ASODN组和600 μg/L ASODN组，观察裸鼠移植瘤体积，计算抑瘤率。免疫组化检测Survivin蛋白的表达。结果:A组、B组和C组移植瘤随时间增长而增大，但3组间无显著差异（P>0.05）。D组、E组和F组注射ASODN后，裸小鼠移植瘤的体积随着注射ASODN时间的延长和ASODN浓度的增加，移植瘤生长越来越小，并呈时间-剂量-效应依赖性。实险第20 d D组、E组和F组的肿瘤抑制明显大于A组、B组和C组（P<0.05）。HE染色见对照组移植瘤细胞密集成群，核大深染，而ASODN组见肿瘤细胞少，癌细胞皱缩变圆，胞核固缩深染。免疫组化见对照组肝癌细胞浆Survivin蛋白表达较强，而ASODN组Survivin蛋白表达较弱。结论:Survivin反义寡核苷酸能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。     

利用基因敲除小鼠研究发热机制的进展

Increasing evidence suggests that a complex net-work of fever induction pathways in mammalian exists.In this article,the overview of recent studies on the mechanism of fever induced by different pyrogens using IL-1,IL-1R,ICE,IL-1ra,IL-1RacP,IL-6,IL-10,TNFR,cPLA2,COX,EP,AT2,iNOS and D2/3 knockout mice is presented.Hyperthermia respond to localized infection/inflammation(e.g.,scinjection of turpentine) is mediated by IL-1β and IL-6 in turn.While fever induced by systemic infection/inflammation(e.g.,treatment with LPS intraperitoneally)varies with the different doses of pyrogens administered.Fever caused by a low dose of LPS administered ip is IL-6 dependent,but the IL-6 independent pathway is crucial for the fever evoked by a high dose of LPS.Febrile responses during both local and systemic infection/inflammation develop totally through central PGE2 dependent mechanism,but some stress induced hyperthermia otherwise.     

脑外伤小鼠海马水通道蛋白-9表达的变化

目的探讨脑外伤小鼠海马水通道蛋白-9(aquaporin 9,AQP9)表达的变化。方法40只Balb/c小鼠随机分为假手术组(10只)和脑外伤组(30只)。脑外伤组依据脑外伤的不同时间点再分6 h、1 d、3 d三个小组,每组10只。免疫组化和Western blot检测各组小鼠海马AQP9蛋白的表达。RT-PCR方法检测各组小鼠海马AQP9 mRNA的表达变化。结果免疫组化和Western blot结果发现,脑外伤组小鼠海马AQP9蛋白表达量明显高于假手术组(P<0.05);RT-PCR结果也发现,脑外伤组小鼠海马AQP9 mRNA表达量明显高于假手术组(P<0.05)。结论脑外伤小鼠海马AQP9表达明显升高。     

TRAIL对CIA小鼠脾细胞表达Th1/Th2细胞因子的影响

 摘要：目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand , TRAIL）对胶原诱导型关节炎（Collagen-induced arthritis, CIA）小鼠的治疗效果,探讨TRAIL治疗类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的可能机制。方法 牛Ⅱ型胶原蛋白加弗氏完全佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA模型,采用重组腺相关病毒AAV-TRAIL关节腔内注射进行治疗。CBA和流式细胞术检测Th1/Th2细胞因子的分泌。结果 AAV-TRAIL可改善CIA小鼠的病情,体外研究其机制发现TRAIL可抑制CIA小鼠的脾细胞分泌Th1型细胞因子,但对Th2型细胞因子没有作用。结论TRAIL对CIA小鼠的治疗作用可能和TRAIL抑制Th1型细胞因子分泌相关。