荧光定量PCR检测孕妇单纯疱疹病毒的感染

目的探讨荧光定量PCR技术(Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction, FQ-PCR)检测孕妇单纯疱疹病毒(HSV)感染的临床诊断价值.方法45例怀疑HSV-Ⅱ感染的孕妇用ELISA法检测血清HSV-ⅡIgM,同时用FQ-PCR检测血清及宫颈分泌物HSV DNA.结果该组孕妇血清HSV-ⅡIgM阳性率为20.0%,血清HSV DNA阳性率为33.3%,后者检出阳性率明显高于前者(P＜0.05).宫颈分泌物标本HSV DNA阳性率为40.0%,明显高于血清ELISA检测阳性率(P＜0.05),但与血清FQ-PCR检出阳性率无显著性差异(P＞0.05).结论荧光定量PCR检测孕妇HSV DNA感染可以提高诊断率及准确率.     

荧光定量PCR检测HSV合并其他性传播感染结果与分析

目的探讨生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒(HSV)及其他性传播感染的发病率及特点。方法采集182例生殖器疱疹患者的损害部位的组织液或阴道分泌物,用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测单纯疱疹病毒、人乳头状瘤病毒、沙眼衣原体、解脲支原体等性传播病原体,梅毒、抗H IV采用血清学试验。结果182例生殖器疱疹患者中,HSV阳性116例(63.7%),在116例阳性HSV中有32例(27.6%)合并有其他性传播感染,其中合并人乳头状瘤病毒感染11例(9.5%),梅毒8例(6.9%),沙眼衣原体4例(3.4%),解脲支原体9例(7.8%)。结论HSV感染是生殖器疱疹的主要原因,并且容易合并其他性传播感染,应注意检查及治疗。     

检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型荧光定量PCR方法的建立

目的 建立一种高敏感度的检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)DNA的实时荧光定量PCR方法,为针对HSV-2潜伏感染的治疗性疫苗和抗病毒药物疗效提供一个评价方法。方法 依据HSV-2糖蛋白D(gD)基因序列,使用序列比对软件,选取其保守区序列设计引物及TaqMan探针并进行筛选;以gD基因重组质粒pcDNA3-HSV-2 gD作为标准模板,对该检测方法的反应条件进行优化,提高其检测特异性、敏感度和重现性。结果 该检测方法特异性好,检测的最低拷贝数可达到2个拷贝,线性范围为2×10⁰~2×10⁸拷贝/反应,是普通PCR敏感度的10³倍。该检测方法组间和组内变异系数均低于5%,说明该检测方法具有良好稳定性。结论 本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法用于检测痕量HSV-2 DNA具有特异、敏感、定量和重现性好的优点。     

应用荧光探针定量PCR检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型的临床应用

目的:探讨荧光探针定量PCR检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVⅡ)在临床上的应用。方法:采用荧光探针定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对93例临床诊断为生殖器单纯疱疹病毒感染者检测。结果:检出56例HSVⅡ阳性,阳性率60.22%。结论:FQ-PCR在检测生殖单纯疱疹病毒Ⅱ型的临床应用中具有快捷、特异性强的优点。     

单纯疱疹病毒2型ICP4基因荧光实时定量PCR检测方法的建立

目的 建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法.方法 依据HSV2 ICP4基因序列设计引物.PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品.根据测序结果设计荧光定最PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析.结果 测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变.标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10.可靠性测定结果:107-101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%.Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.回归系数为0.998.结论 成功建立了HSV2 ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2 ICP4基因的定量分析.     

荧光定量PCR检测献血人员外周血白细胞中人疱疹病毒DNA

目的 调查献血人员外周血白细胞中8种人疱疹病毒的DNA分布情况,为我国献血者健康标准要求的完善提供参考性实验数据.方法 收集献血人员外周血标本427例,分离外周血白细胞后提取DNA,使用Taqman探针法荧光定量PCR检测方法对8种疱疹病毒DNA的阳性率和病毒载量进行检测.结果 427例标本中未检测到单纯疱疹病毒1型(HSV1)、HSV2、水痘-带状疱疹病毒(vZv)和人疱疹病毒8型(HHV-8)的DNA,EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(HCMV)、HHV-6、HHV-7阳性率分别为51.4％、6.5％、50.6％、21.1％,其中HCMV、EBV和HHV-6均阳性的标本占6.5％,EBV和HHV-6均阳性的标本占25.1％,EBV与HHV-7均阳性的标本占4.0％,HHV-6和HHV-7均阳性的标本占6.9％.EBV、HCMV、HHV-6、HHV-7的病毒载量中位数分别为559、336、4 683、1 126 gqe/ml外周血.在不同性别和年龄组中EBV、HHV-6和HHV-7在三个年龄组中的检出率差异无统计学意义,但CMV的检出率随年龄的增加逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05).市区与郊区人群相比EBV、HCMV、HHV-6和HHV-7的检出率均显著较低(OR=0.657、0.798、0.889、0.721,95％ CI:0.147 ～2.451、0.224～2.196、0.221 ～2.703、0.194 ～ 2.445,P ＜0.05).结论 在献血人员外周血白细胞中可以检出多种疱疹病毒DNA,提示我国献血者健康标准要适时考虑献血者疱疹病毒感染的情况.     

多聚酶链式反应检测生殖器疱疹病毒感染

生殖器疱疹（Ｇｅｎｉｔａｌｈｅｒｐｅｓ,ＧＨ）是由单纯疱疹病毒（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ,ＨＳＶ）感染所致的性传播疾病（ｓｅｘｕａｌｙｔｒａｎｓｍｉｓ－ｓｉｏｎｄｉｓｅａｓｅ,ＳＴＤ）。近年来,生殖器ＨＳＶ的感染人数不断增加,已成为公共卫...     

实时荧光定量PCR鉴别检测单纯疱疹病毒方法的建立

目的:建立快捷、灵敏、特异的单纯疱疹病毒(HSV)的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测及分型方法。方法:选择HSV1和HSV2的糖蛋白B基因设计一对通用引物和对应的探针组建2个FQ-PCR反应体系,应用克隆的质粒建立系列标准品制作标准曲线,进行重复性和敏感性试验,以其他种类的细菌、病毒、真菌进行特异性分析,并用于检测生殖器疱疹患者的HSV1和HSV2。结果:HSV1和HSV2两标准曲线的线性检测范围均为105到1011Copies/L,相关系数均大于0.99,其他种类的细菌、病毒、真菌均未出现特异性扩增;48例生殖器疱疹患者疱液中HSV1和HSV2的检出率分别为6.3%(3/48)和87.5%(42/48)。结论:实时FQ-PCR法鉴别检测HSV1和HSV2,具有快速、特异、灵敏、便捷的特点,有助于HSV感染的流行病学和病理机制的研究;生殖器疱疹患者以HSV2感染为主。     

细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究

目的:比较不同方法检测生殖器疱疹病毒感染的效率。方法:采用病毒培养和PCR法检测疑为生殖器疱疹病毒感染者标本60例,并用PCR作病毒分型。结果:根据病史及临床表现确诊的生殖器疱疹患者标本60例中,病毒培养法阳性36例,阳性率60%(36/60);PCR检测单纯疱疹病毒(HSV)阳性45例,阳性率75%(45/60),和病毒培养相比,差异非常显著(χ2=26.76,P<0.01);PCR分型结果显示阳性标本均为单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)。水疱和脓疱标本的病毒培养和PCR检测阳性率均较高(80.0%~93.3%),糜烂、结痂、斑丘疹标本检测中PCR阳性率(20.0%~66.7%)高于病毒培养(0~33.3%)。结论:对疑为生殖器疱疹患者作病原学诊断,采集水疱、脓疱标本进行病毒分离或PCR检测较佳。     

PCR检测生殖器疱疹患者HSV—2

目的：用聚合酶链反应检测生殖器疱疹患者２型单纯疱疹病毒。方法：对１０１例生殖器疱疹和糜烂患者及２０例对照组用ＰＣＲ法检测ＨＳＶ－１，ＨＳＶ－２。结果：ＨＳＶ－２检出阳性率占６０．４％（６１／１０１），ＨＳＶ－２和ＨＳＶ－１双重感染占４％（４／１０１），对照组均为阴性，并且年龄轻者感染阳性率高于年龄长者，结论：ＰＣＲ具有操作较易，快速，敏感的特点，为临床对生殖疱疹的诊断和鉴别诊断提供了理想的新方法。     

荧光定量PCR同步检测人类疱疹病毒6,7,8型方法的建立

目的:建立同步检测人类疱疹病毒6,7,8型(HHV-6,-7,-8)的多重荧光定量PCR方法。方法:分别针对HHV-6,-7,-8的U67、U36、ORF65基因设计3对引物和3种Taq Man-LNA探针,构建三重荧光定量PCR反应体系,用于同步扩增HHV-6,-7,-8。分别应用HHV-6,-7,-8质粒建立对应标准曲线,并对多重荧光定量PCR方法进行线性范围、灵敏度、特异性、重复性和扩增效率等方法学评价。以DNA测序法为参考方法,检测45例疑似HHV感染者外周血单个有核细胞(PBMC)中的HHV-6,-7,-8,对多重荧光定量PCR方法进行临床特异性和敏感性评估。结果:多重荧光定量PCR方法检测HHV-6,-7,-8的线性范围均在10⁶-106-10⁽¹¹⁾Copies/L,相关系数均>0.99,灵敏度为8×10(11)Copies/L,相关系数均>0.99,灵敏度为8×10⁵Copies/L,最低检测限为5×105Copies/L,最低检测限为5×10⁵Copies/L,无非特异性扩增,线性范围内HHV-6,-7,-8的批间、批内变异系数(CV)均<5.5%;与单重荧光定量PCR相比,检测HHV-6,-7,-8质粒含量的相关性分别为0.980,0.987,0.965。以DNA测序方法为金标准,多重荧光定量PCR检测HHV-6,-7,-8的特异性均为100%,灵敏度分别是93.1%、80%、100%。结论:多重荧光定量PCR能够对HHV-6,-7,-8进行同步、快速和准确的定量检测,将在输血安全筛查方面有着广泛的应用前景。     

荧光定量PCR检测性病的结果分析

目的:通过荧光定量PCR(FQ-PCR)法对支原体(UU)、衣原体(CT)、淋球菌(NGH)检测数据,了解其在男性性病患者中分布状况及流行特征。方法:采用FQ-PCR法对疑有泌尿、生殖系感染及不孕的9804例男性可疑患者男性尿道口分泌物或前列腺按摩液做检测。结果:9804例样本中呈阳性的有4416例,阳性率为45.04%,其中,UU、CT、NGH分别占总例数的43.21%、4.65%、1.71%。结论:性传播疾病已构成流行,其原因可能与混合感染和治疗不彻底有关,应引起全社会的高度重视。     

疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒Ⅱ抗体检测结果分析

目的了解性病门诊生殖器糜烂或溃疡患者单纯疱疹病毒Ⅱ（HSV-Ⅱ）感染情况。方法采用ELISA法检测1294例生殖器糜烂或溃疡患者血清HSV-ⅡIgG、IgM抗体。结果1294例患者HSV-Ⅱ抗体总阳性率为50．46％。其中男性阳性率为44．36％,女性为59．73％,女性阳性率高于男性（P=0．000）。HSV-Ⅱ—IgM阳性率为35．01％,HSV-Ⅱ-IgG阳性率为15．46％。结论性病门诊生殖器糜烂或溃疡患者HSV-Ⅱ阳性率高,HSV-Ⅱ抗体阳性对生殖器疱疹的诊断具有临床意义,如果HSV—Ⅱ-IgM阳性,临床诊断意义更大。     

荧光定量PCR检测梅毒患者假阴性结果分析及对策

目的分析荧光定量PCR（FQ－PCR）检测梅毒患者出现假阴性的原因以及采取的措施。方法用FQ－PCR的方法检测一期梅毒分泌物,二期梅毒、潜伏梅毒血清中的TP－DNA的含量,共38例。结果该方法对一期梅毒分泌物的检出率高,对二期梅毒、潜伏梅毒血清的检出率低。结论 FQ－PCR技术适用于早期梅毒分泌物的快速检测,二期梅毒、潜伏梅毒最好采取血清进行血清学抗体的快速试验。     

FQ-PCR和ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原检测结果比较

本文对FQ-PCR和ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原的检测结果进行比较,为临床诊断治疗提供参考。分析邢台市第三医院皮肤性病科2015~2017年诊治的生殖器疱疹60例患者临床资料。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)和荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测样本中单纯疱疹病毒,检测结果不一致的样本采用单纯疱疹病毒通用引物分析。结果显示60例样本中FQ-PCR法检测阳性为46例,占76.7%,ELISA法检测阳性为48例,占80.0%,检测结果不一致样本为6例,占10.0%;1例FQ-PCR法阳性而ELISA法阴性样本经第二次检测后为阴性,3例ELISA法检测阳性而FQ-PCR法检测阴性样本经第二次检测后阳性为2例,阴性为1例;FQ-PCR法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为92.4%、96.3%、93.7%和94.5%,而ELISA法的上述指标分别为94.4%、96.3%、93.8%和95.8%。因此,ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原敏感性和特异性高,值得临床推广。     

荧光定量PCR检测性传播病原体结果分析

目的了解深圳市女性性服务(FCSW)性传播感染(STIs)的流行现况。方法选取深圳市女性性服务,采集其宫颈和阴道分泌物,采用荧光定量PCR分别检测其中的CT、NG、HPV及HSV-2,评价其感染状况。结果391例FCSW中,STIs病原体总阳性检出率为53．20％(208／391),其中,CT阳性检出率最高,为27．62％;余依次为HPV、NG和HSV-2,阳性检出率分别为26．34％,21．23％和2．81％;在STIs病原体的阳性中,感染2种以上STIs病原体83例,占39．90％(83／208),其中,83例NG阳性中,CT的阳性栓出率为45．78％;108例CT阳性中,NG的阳性栓出率为35．18％。结论深圳市FCSW人群中,STIs流行率较高;加大该人群的STIs筛查及健康教育,是当前预防和控制STIs传播的重要策略。     

HBVDNA荧光定量PCR检测及临床意义

血清HBV-DNA浓度与乙型肝炎病毒感染的严重程度和传染性有关,可用于判断病情和预后,以及观察抗病毒药物的治疗效果.通常血清 HBV-DNA持续阳性超过6个月会转为慢性肝 炎.抗-HBc阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝受损严重,50%以上抗-HBc阳性慢性活动性肝炎患者,经平均4.5年发展为肝硬化,常与HBV-DNA持续阳性有关.     

猫疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用

目的建立猫疱疹病毒I型(FHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和Taq Man探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立FHV-1实时荧光定量PCR方法,并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法;该方法的线性范围为(1×102~1×109)copies/μL,与单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、犬疱疹病毒(CHV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猫细小病毒(FPV)均无交叉反应,检测灵敏度可达到10 copies/μL。批内变异系数均小于5%。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点,适合于临床FHV-1的快速定量检测。     

荧光定量PCR检测220例乙肝病毒DNA结果分析

目前,临床常用ELISA方法进行HBV-M的检测和PCR方法进行HBV-DNA的定性检测来判断HBV的感染或疗效。而传统的定性PCR由于它的易污染、假阳性高、操作者要接触强致癌物等缺点,正逐渐地被荧光定量聚合酶链反应(FQ-DNA)替代。我们采用FQ-DNA法和ELISA法对照检查了220例标本,以研究两     

PCR微板杂交检测生殖器疱疹病毒感染

以 PCR扩增生殖器疱疹病毒 DNA,然后用特异性 DNA探针微孔板检测疱疹病毒扩增产物 ,同时用普通 PCR检测同样的标本。结果 4 3例病例组中 ,PCR微板杂交 35 (83% )例阳性 ,8例 (17% )阴性 ;普通 PCR37(86 % )例阳性 ,6 (14 % )例阴性 ,二者无显著性差异 ;对照组 PCR微板杂交 19例 2例阳性 ,17例阴性。同时 ,普通 PCR则有 5例阳性 ,14例阴性。PCR微板杂交具有快速、灵敏度高、特异性强、抗污染能力强的优点 ,适用于检测可疑 HSV感染 ,具有临床使用价值