ACAT-1在单核细胞向泡沫细胞分化过程中的表达变化

目的研究单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中脂酰CoA胆固醇酯酰转移酶-1(ACAT-1)表达及活性的变化。方法复苏、培养人单核细胞株THP-1细胞,与乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、PMA+氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育1～4 d,RT-PCR方法检测单核细胞分化过程中ACAT-1 mRNA表达,Westernblotting检测ACAT-1蛋白表达的变化。结果(1)单核细胞复苏后加入PMA诱导48 h后,分化为巨噬细胞。经PMA+ox-LDL诱导24 h后分化为泡沫细胞。(2)与无血清培养单核细胞对照组比较,在PMA诱导单核细胞株THP-1向巨噬细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平明显增高(P<0.05),呈时间依赖效应。(3)巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,ACAT-1 mRNA、蛋白表达及酶活性水平增高,呈时间依赖效应。但和无血清培养巨噬细胞比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论单核细胞株THP-1经PMA,PMA/ox-LDL诱导后,可分化为巨噬细胞、泡沫细胞。ACAT-1的表达及活性增高在单核细胞向泡沫细胞诱导分化过程中起着重要作用。     

Vaspin对巨噬细胞THP-1向泡沫细胞转变的抑制作用

目的 腹腔脂肪型丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor, vaspin)是新发现的脂肪因子,对代谢性疾病具有改善作用。该研究旨在研究vaspin对体外培养的THP-1细胞泡沫化的影响。方法 100nM佛波酯孵育THP-1巨噬细胞48h后分为对照组,氧化低密度脂蛋白组(ox-LDL浓度50μg/ml,48h),vaspin干预组(vaspin终浓度100ng/ml,预孵24h);采用油红0染色法检测vaspin对THP-1细胞泡沫化的影响;Real-time PCR和Western blot法检测vaspin对THP-1细胞中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(acy1-coenzyme A:cholesterol acyltrasferase-1,ACAT-1)、ATP结合盒转运体A1(ATP binding casstte transporterA1,ABCA1)及细胞清道夫受体-A1(scavenger receptor-A1, SR-A1)mRNA及蛋白表达水平的影响。结果 与ox-LDL组比较,ox-LDL+vaspin组巨噬细胞泡沫化程度明显下降(P＜0.05);ox-LDL+vaspin组ACAT-1和SR-A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05)。结论 vaspin能够抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,发挥抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, As)的作用。     

Visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制研究

目的观察内脂素(visfatin)对人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞胆固醇代谢相关基因ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法 THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度和不同作用时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞质脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及ACAT1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果与对照组比较,visfatin干预组细胞质脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(均P<0.05),CE与TC的比值明显增加(>50%),ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),ACAT1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05)。相关分析显示,visfatin呈浓度和时间依赖性下调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,上调ACAT1 mRNA和蛋白的表达。结论 visfatin下调巨噬细胞ABCA1的表达,上调ACAT1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导THP-1源性泡沫细胞的形成,这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据。     

罗格列酮对泡沫细胞中胆固醇贮存与运输相关蛋白ACAT-1、ABCA-1表达的影响

目的观察罗格列酮对RAW264.7巨噬源性泡沫细胞形成中胆固醇含量及酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶-1(acyl coenzyme A cholesterol acyl transfer enzyme 1,ACAT-1)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A-1(ATP combination box oftransporter 1,ABCA-1)表达的影响,探讨罗格列酮对泡沫细胞形成的影响及可能的作用机制。方法在DMEM高糖培养基中培养RAW264.7巨噬细胞,按完全随机分组方法分为:①空白对照组(常规培养基培养巨噬细胞);②氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)组(用终浓度为30 mg/L的oxLDL孵育48 h);③oxLDL+罗格列酮组(分别用终浓度5、10、20μmol/L的罗格列酮+30 mg/L oxLDL共同孵育48 h)(n=10)。采用油红O染色观察泡沫细胞,胆固醇检测试剂盒测定各组细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)和游离胆固醇(free cholesterol,FC)的含量,Western blot法检测各组细胞ACAT-1和ABCA1的表达水平。结果 oxLDL组中大量泡沫细胞的胞质被油红O染色,oxLDL+罗格列酮组泡沫细胞胞质染色明显浅于oxLDL组的细胞;与oxLDL组相比,oxLDL+罗格列酮组TC及FC显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性;Western blot检测结果表明,不同浓度(5、10、20μmol/L)oxLDL+罗格列酮组ACAT-1蛋白表达分别为(0.94±0.11)、(0.86±0.13)、(0.58±0.12),与oxLDL组(1.19±0.12)相比有显著差异(P<0.05),不同浓度oxLDL+罗格列酮组ABCA1蛋白表达分别为(0.72±0.08)、(0.91±0.15)、(1.15±0.11),与oxLDL组(0.63±0.05)相比有显著差异(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论罗格列酮可能通过抑制ACAT-1的表达及促进ABCA-1的表达减少泡沫细胞形成,从而发挥其抗动脉粥样硬化的作用。     

苦参碱对单核细胞源性泡沫细胞形成及PPAR-γ,caveolin-1表达的影响

目的:观察苦参碱对ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇脂和PPAR-γ,小凹蛋白-1表达的影响.方法:用荧光分光光度法测定胆固醇浓度;采用TBARS法检测细胞内脂质过氧化产物;用油红O染色法检测泡沫细胞的形成;用荧光RT-PCR和Western Blot检测PPARγ,caveolin-1的表达.结果:单核细胞经PMA及oxLDL共同孵育后,细胞内形成大量脂滴,胆固醇酯(CE)和细胞内脂质过氧化产物(MDA)含量由(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L升至(64.8±6.8) mg/L,(8.50±1.23) nmol/L (P＜0.05),泡沫细胞由(4.7±2.2)%升至(77.8±7.0)% (P＜0.05),而PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达由(4.4±0.8),(0.5±0.09),(0.6±0.09)降至(1.6±0.4),(0.33±0.09),(0.33±0.09)(P＜0.05),苦参碱低、中、高干预组细胞内积聚的CE和MDA含量分别为 (29.7±4.9) mg/L,(1.92±0.46) nmol/L,(5.8±1.3) mg/L,(0.6±0.08) nmol/L,(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L;泡沫细胞为(46.2±5.8)%,(16.3±3.4)%,(4.8±1.5)%,PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达为(6.4±2.2),(0.6±0.08),(0.5±0.09),(7.4±2.2),(0.6±0.08),(0.6±0.07),(8.6±2.7),(0.6±0.06),(0.7±0.06),与ox-LDL PMA组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:苦参碱减少ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞的形成及细胞内胆固醇聚集,增加泡沫细胞内PPAR-γ,小凹蛋白-1的表达.     

PMA促进人单核细胞分化及ACAT1基因表达

目的研究人单核细胞系在佛波酯（PMA）作用下分化为巨噬细胞的过程中酰基CoA：胆固醇酰基转移酶1（ACAT1）活性的改变及其机制。方法体外培养人THP-1单核细胞系，PMA作用使其分化为巨噬细胞。以放射性同位素标记底物法检测ACAT1活性．用Western blot法和RT—PCR法分别检测ACAT1蛋白和mRNA。结果PMA使THP-1单核细胞的形态和生长状态巨噬细胞化．在此过程中ACAT1 mRNA和蛋白明显增加（P〈0．01），酶活性升高（P〈0．05）。结论PMA可促进单核细胞分化为巨噬细胞，上调ACAT1基因的表达，促进酶活性提高。     

实时定量PCR检测胰岛素和高糖对巨噬细胞ACAT-1表达的影响

目的利用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)mRNA的表达。探讨胰岛素和高糖对人THP-1细胞分化的巨噬细胞ACAT-1mRNA表达的影响。方法体外培养人单核细胞株THP-1细胞,由佛波醇肉豆蔻酸乙酸盐(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者再由胰岛素和高糖共同干预不同时间(0、6、12、24、48h),用实时定量PCR检测ACAT-1mRNA表达。结果胰岛素和高糖共同作用不同时间后巨噬细胞ACAT-1mRNA的表达量间差别有显著性意义(P<0.01),作用12h与0、6、24、48h的ACAT-1mRNA表达量间差别均有显著性意义(P<0.01),作用48h的ACAT-1mRNA表达量与0h相比差别无显著性意义(P>0.05)。结论胰岛素和高糖共同作用下,巨噬细胞ACAT-1mRNA表达逐渐增加,12h达到高峰,然后逐渐下降,48h恢复到0h时水平。成功建立和应用实时定量PCR检测巨噬细胞ACAT-1mRNA水平是准确评价巨噬细胞功能的方法之一。     

TREM-1、TNF-α和IL-8在单核细胞源性泡沫细胞中的表达

目的：探讨髓系细胞触发受体1(TREM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)在巨噬细胞源性泡沫细胞产生过程中的表达情况。方法：人单核细胞株（U937）经佛波酯（PMA）诱导贴壁后,分为PMA诱导组、低密度脂蛋白（LDL）诱导组及氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导组。应用RT-PCR法检测上述3组细胞中TREM-1 mRNA表达;用ELISA法检测上述3组细胞培养上清中TNF-α和IL-8含量。结果：与PMA诱导组、LDL组细胞比较,ox-LDL组细胞TREM-1 mRNA表达水平均明显增高（P<0.05）;ox-LDL组培养上清中TNF-α、IL-8含量明显高于LDL组及PMA诱导组（P<0.05）。结论：TREM-1、TNF-α和IL-8在动脉粥样硬化（AS）发生发展中可能存在相互诱导、相互协同作用,共同参与AS的形成。     

IL-10对TNF-α诱导的泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的抑制作用

目的:观察白介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的干预作用.方法:THP-1单核细胞经诱导转化为巨噬细胞源性泡沫细胞后随机分为4组:对照组,培养液中不加任何其他物质;TNF-α组,培养液中加10μg/L TNF-α;IL-10组,培养液中加10μg/L IL-10;IL-10 TNF-α组,培养液中加10μg/L IL-10预先孵育2 h后,再加10μg/L TNF-α.采用RT-PCR和Western-Blot检测各组0 h、6 h、12 h、24 h、48 h ABCA1 mRNA和蛋白表达.结果:TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达呈时间依赖性降低(F=782.94,F=768.12,P均＜0.05).IL-10组ABCA1 mRNA表达在24 h和48 h有轻微增加(P＜0.05),但ABCA1蛋白表达在各时间点无明显变化.IL-10 TNF-α组ABCA1 mRNA和蛋白表达也呈时间依赖性降低(F=697.23,F=749.64,P均＜0.05),但同TNF-α组相比,其下降程度有所减轻(P＜0.05).结论:IL-10可部分抑制TNF-α所引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调.     

IL-1β反义RNA表达载体的构建及对肝癌细胞中IL-1β水平的影响

目的构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体，观察对肝癌细胞中IL-1β表达的阻断效果。方法提取细胞总RNA，RT-PCR扩增IL-1β1和IL—1β2，将其反向连接到肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP，构建Pafp IRES2-antilIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体，利用jetPEI转染H22肝癌细胞和YAC-1淋巴细胞，荧光显微镜下观察反义RNA载体的表达，RT—PCR方法分析H22细胞中IL-1β表达水平的变化。结果RT—PCR扩增到两条长度分别为264和284bp的片段，与IL-1β1和IL—1β2相符，将其反向与Pafp IRES2-EGFP连接，经菌落PCR和DNA序列分析证实，获得了PafpIRES2-antiIL-1β1和Pafp IRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体。上述载体转染H22细胞后，荧光显微镜下可见细胞表达出明亮绿色荧光，而YAC-1细胞则未见荧光。RT—PCR分析证实转染反义RNA后H22细胞中IL-1β表达水平明显下降，尤以IL-1β2反义RNA的阻断效果更为显著。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌细胞特异性反义RNA表达载体PafpIRES2-antiIL-1β1，PafpIRES2-antiIL—1β2，两载体能有效地阻断肝癌细胞中IL-1β的表达。     

哮喘患者抗炎治疗与IL-8、IL-10在外周血单个核细胞表达的关系

目的:观察哮喘病人IL-8和IL-10水平的变化,探讨判断哮喘气道炎症及治疗效果的指标。方法: 选择41例哮喘病人和29名健康对照者,通过竞争性PCR检测其外周血单个核细胞IL-8 mRNA和IL-10 mRNA 的表达量。其中17例哮喘病人在抗炎治疗后也进行了上述检测。结果:哮喘组IL-8 mRNA表达量[(23．0± 5．9)pg/μg总RNA]明显高于健康对照组[(1．9±0．6)pg/μg总RNA,P<0．05]。健康对照组均有IL-10 mR- NA表达[(5．5±1．2)pg／μg总RNA];哮喘组在治疗前多数无IL-10 mRNA表达。17例哮喘病人治疗后IL-8 mRNA表达量[(7．0±1．6)pg/μg总RNA]比治疗前[(39．9±12．6)pg/μg总RNA]明显降低(P<0．05),激发试验阴性者均有IL-10 mRNA表达[(0．8±0．3)pg／μg总RNA],激发试验阳性者仅3例有IL-10 mRNA表达 [(0．2±0．6)pg／μg总RNA]。结论:动态观察IL-8水平变化,对哮喘病情判断有一定价值;而IL-10表达水平在某种程度上反映了对抗炎治疗的反应。     

肿瘤坏死因子-α在胎膜细胞白细胞介素-18表达调控中的作用

目的:探讨原代培养人胎膜细胞中白细胞介素(IL-18)的表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的胎膜细胞IL-18表达的调控及其在胎膜早破发生中的作用。方法:取16例剖宫产产妇胎膜,将胰蛋白酶消化而得到的胎膜细胞进行原代培养。采用ELISA法对TNF-α(20μg/L)刺激前后细胞培养液中IL-18的含量进行检测。结果:无TNF-α刺激的胎膜细胞IL-18表达为(235.74±29.59)μg/L,经TNF-α刺激后表达为(392.46±89.82)μg/L,表达量明显增高,差异有显著性(P<0.05)。结论:TNF-α刺激胎膜组织生成IL-18可能与胎膜早破密切相关,在胎膜早破的发生中可能起一定作用。     

IL-1和IL-6在绝经后骨关节炎患者滑膜上的表达及临床分析

目的 探讨IL-1和IL-6在绝经后骨性关节炎患者滑膜上的表达及临床意义.方法 随机选30例绝经后骨性关节炎患者为观察组,再根据其软骨损伤程度分为轻、中、重3组;以同期在本院行半月板修补或交叉韧带重建的未绝经的20例女性患者为对照组.用HE染色法观察大体标本形态学变化,用酶联免疫法检测滑膜上IL-1、IL-6的含量.结果 对照组与观察组IL-1含量差异有统计学意义（P＜0.01）,观察组不同分级组间差异也具有统计学意义（P＜0.01）.对照组与观察组IL-6含量差异有统计学意义（P＜0.05）,轻度组与中度组中IL-6含量明显高于对照组及重度组.结论 绝经后骨性关节炎患者滑膜中IL-1含量明显高于健康者,可作为区分绝经后骨性关节炎严重程度的标志物,也可以作为评价药物治疗绝经后骨性关节炎疗效的参考指标;绝经后骨性关节炎患者滑膜中IL-6含量早期明显升高,晚期呈下降趋势,IL-6可以作为诊断绝经后骨性关节炎的辅助指标.     

儿童急性淋巴细胞白血病MOST-1基因表达研究

目的 研究MOST-1基因在儿童急性淋巴细胞白血病骨髓单个核细胞中的表达,了解其与免疫分型和治疗反应的关系。方法 采用半定量RT-PCR方法测定了17例新发儿童急性淋巴细胞白血病(其中ALL-L3 3例)患者骨髓单个核细胞MOST-1基因的表达水平;PCR产物经DNA序列测定证实。结果 MOST-1基因仅表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,而L1和L2均无表达;3例ALL-L2患者治疗前外周血幼稚细胞比例分别为72％、67％和12％,骨髓白血病细胞比例分别为98％、94％和67％,前两例L2患者MOST-1 mRNA的表达水平分别为另一例L3患者的3倍和2倍。2例L3患者经正规诱导完全缓解后无MOST-1基因表达。结论 MOST-1基因表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,其表达水平与患者治疗前外周血幼稚细胞比例可能有关。     

肝癌患者外周血单个核细胞TGF-β1 mRNA表达水平的检测

目的探讨外周血单个核细胞（PBMCs）转化生长因子-β1（transforming growth factorbeta1,TGF-β1）mRNA表达水平在肝癌（HCC）发病中的作用。方法分离20例肝癌患者和20例健康体检者外周血单个核细胞,提取总RNA。利用半定量RT-PCR方法逆转录并扩增TGF-β1,通过凝胶图像扫描系统对PCR产物的电泳条带进行密度扫描。结果肝癌患者组PBMCs中TGFβ1mRNA表达水平明显高于健康对照组（P〈0.01）。结论TGFβ1mRNA表达水平升高与肝癌发病相关。     

细胞因子IL-1β和TNF-α在骨关节炎软骨中mRNA表达的变化及意义

目的探讨IL-1β和TNF-α mRNA在大鼠实验性骨关节炎软骨表达的变化和意义。方法采用Hulth法制作大鼠膝关节0A动物模型，于术后8周取标本并观察关节软骨形态，RT—PCR技术检测mRNA表达。结果0A模型侧关节软骨的IL-1β和TNF-α mRNA表达均高于对照侧。结论OA软骨中存在IL-1β和TNF-α mRNA表达的上调，可能是OA的发病机制之一。     

IL-1B及IL-1RN基因多态性与胃癌遗传易感性的关系

目的探讨炎症因子IL-1B（T-31C和C-511T）及其拮抗基因IL-1RN基因多态性与胃癌遗传易感性的关系。方法采用病例对照研究,对经组织学确诊的胃腺癌病例180例及其年龄和性别频数匹配的对照308例,以限制性片段长度多态性（RFLP-PCR）方法进行多态性检测,比较不同基因型以及环境因素与胃癌发病风险的关系。结果IL-1B启动子区域T-31C和C-511T基因多态性呈高度连锁不平衡（D’=0.862,R^2=0.721,P=0.000）,未发现IL-1B（T-31C和C-511T）基因多态性与胃癌之间存在显著性关联,显性模型调整比值比（OR）及其95%可信区间（C I）分别为0.95（0.62-1.47）和0.85（0.55-1.31）;IL-1RN变异基因型（1/2和2/2）可增加胃癌的患病风险,但未达到统计学差异（调整OR=1.32,95%C I=0.71-2.36）;分层结果显示在幽门螺旋杆菌（H.pylori）感染组中,IL-1RN变异基因型（1/2、2/2）显著增加胃癌的患病风险（调整OR=2.03,95%C I=1.02-4.80）。结论IL-1RN基因多态性和H.pylori感染可能在胃癌的发生和发展中具有协同作用。     

同型半胱氨酸对神经小胶质细胞IL-1β、IL-6表达的影响

目的：研究同型半胱氨酸（HCY）对神经小胶质细胞（bv-2细胞）白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）表达的影响。方法：在细胞培养液中加入HCY、半胱氨酸（DL-CY）、空白对照组及溶剂对照组干预后,用细胞计数试剂盒（CCK8法）观察各组细胞增殖活性,并用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定细胞培养上清液IL-1β、IL-6浓度,用实时荧光定量核酸扩增检测系统（QPCR）的方法评价IL-1β、IL-6 mRNA表达改变。结果：实验各组中细胞增殖活性差异均无统计学意义（P＞0.01）,而HCY组IL-1β、IL-6的mRNA表达及上清液中蛋白表达与其他各组相比均有显著增加（P＜0.01）。结论：HCY上调神经小胶质细胞IL-1β、IL-6的表达。