Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用

目的 探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法 利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞,通过RT-PCR检测转染后Noxa基因mRNA的表达,Western blot检测转染后蛋白的表达,MTT 比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33342染色检测细胞的凋亡情况。结果 Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达。转染后mRNA及蛋白表达持续上升,其转染后24h、48h、72h mRNA的相对灰度值分别为(0.347±0.031)、(0.703±0.041)、(1.044±0.033),差异具有统计学意义（P<0.05）。转染24h、48h、72h后蛋白表达的相对灰度值为(1.171±0.086)、(1.013±0.088)、(0.886±0.063),差异具有统计学意义（P<0.05）。Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24h、48h、72h抑制率分别为（23.9±4.2）%、（36.6±3.0）%、（47.0±3.3）%,差异具有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测显示MCF 7细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G0/G1 期。其转染24h、48h、72h的G0/G1期分别为（68.1±2.5）%、（72.6±1.5）%、（75.6±0.9）%,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;其24h、48h、72h凋亡率分别为（11.5±0.9）%、（19.6±0.8）%、（25.4±0.7）%,组间差异有统计学意义（P<0.05）。Hoechst 33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24h、48h、72h凋亡率分别为（7.3±4.1）%、（16.8±3.3）%、（23.8±2.3）%,与阴性对照组相比,其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡。     

一种新型小分子化合物增强PC3细胞的辐射敏感性

目的 检测小分子化合物8-氧-8H-苊并[1,2-b]吡咯-9-腈的氨基取代衍生物（S1）对前列腺癌细胞系PC3辐射敏感性的作用。方法 采用流式细胞术分别检测不同剂量X射线和不同浓度S1化合物以及两者联合作用后,PC3细胞凋亡率的变化;采用Western blot方法检测S1作用后不同时间Bcl-2蛋白在PC3细胞中的表达变化。结果 X射线诱导PC3细胞凋亡具有剂量依赖特性,2Gy、5Gy X 射线照射未发现明显的凋亡,10Gy、20Gy照射组有明显的凋亡产生 (P<0.01);S1化合物能够显著诱导PC3细胞凋亡,并具有剂量依赖特性,其中5μmol/L和10μmol/L组凋亡率明显高于对照组（P<0.01）;S1作用后2~12h PC3细胞中Bcl-2蛋白表达逐渐减低;S1作用后,分别给予PC3细胞2Gy和8Gy X射线照射,细胞凋亡率明显高于单独照射组和单独S1作用组（P<0.01）。结论 S1能够增强PC3细胞对X射线的敏感性,可望为临床提高前列腺癌放疗效果,降低辐射损伤提供新的治疗方案。     

DcR3对乳腺癌细胞凋亡的影响及其在乳腺癌血清中的表达

目的研究诱捕受体3（DcR3）单克隆中和性抗体对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响,以及DcR3在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义。方法将DcR3单克隆中和性抗体作用于体外培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,检测细胞增殖情况及Caspase 3/7活性变化,应用Hoechst 33342及碘化丙啶双重染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态及计算凋亡率。应用ELISA检测乳腺癌患者血清中DcR3的表达。结果DcR3中和性抗体可抑制MCF-7细胞生长并可诱导细胞凋亡（P<0.05）。乳腺癌患者血清DcR3 水平明显高于健康对照组（P<0.01）;DcR3表达水平与肿瘤大小及临床TNM分期有关（P<0.05）。结论DcR3对人乳腺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。DcR3与乳腺癌的发生及恶性进展有关,检测DcR3血清表达有助于乳腺癌诊断及预后判断。     

长链非编码RNA LINC01001 在乳腺癌中的表达及其对MCF-7细胞增殖的影响

目的：探讨长链非编码RNA LINC01001 在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7 细胞增殖能力的影响。方法：筛选2016 年3 月至2017 年6 月于湖北医药学院附属人民医院甲状腺乳腺外科行手术切除的乳腺癌患者癌及癌旁组织12 例,qRTPCR检测乳腺癌组织及癌旁组织LINC01001 的相对表达量;通过重组质粒在人乳腺癌MCF-7 细胞中过表达LINC01001,采用流式细胞术和MTT 法检测过表达LINC01001 后MCF-7 细胞周期分布和增殖能力变化。qRT-PCR 检测miR-485-5p 和CDKN1A mRNA的表达变化,Western blotting 检测CDKN1A、CDK4、CDK6 和Cyclin D1 蛋白表达变化。结果：LINC01001 在乳腺癌组织中表达水平低于对应的癌旁组织（P<0.01）。LINC01001 重组质粒转染MCF-7 细胞后可显著抑制细胞周期进展（P<0.05）,抑制细胞的增殖能力（P<0.05）。过表达LINC01001 后,MCF-7 细胞的miR-485-5p 的表达水平降低（P<0.01）,CDKN1A mRNA表达水平升高（P<0.01）;可促进CDKN1A蛋白的表达和抑制CDK4、CDK6 和Cyclin D1 蛋白的表达。结论：LINC01001 在乳腺癌组织中表达降低,其可能通过下调miR-485-5p 的表达上调CDKN1A的表达来抑制乳腺癌MCF-7 细胞的增殖能力,为lncRNA 的临床应用提供实验基础。     

X射线对人肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响

目的：研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法：用不同剂量（0、2、4、6Gy）的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,2、4、6 Gy X射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;（2 Gy 48 h组除外）,2 Gy组照射后6 h、4 Gy组12 h、6 Gy组24 h升高最显著（P〈0.05）。照射后48 h内蛋白表达升高（4Gy除外）,48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平。各时间点（除4 Gy 48 h和72 h外）的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低。     

FoxO3a在三氧化二砷诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的表达和意义

目的 探讨FoxO3a在三氧化二砷(As2O3)诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡过程中的表达变化及其可能的机制。方法 将不同浓度的As2O3(2.0、4.0、8.0μmol/L)与MCF-7细胞共同培养24h后,采用流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡;采用免疫细胞化学及Western blot技术检测FoxO3a和Caspase 3蛋白的表达,各实验均设相应的阴性对照组。结果 经不同浓度As2O3作用后,MCF-7细胞凋亡率逐渐增加,分别为(6.26±0.94)%、(9.30±1.63)%和(13.02±3.82)%,且呈剂量依赖关系(rs=0.949, P<0.01);免疫细胞化学染色显示FoxO3a蛋白胞核表达增强,且Caspase-3蛋白表达增强（P<0.05);Western blot条带显示FoxO3a蛋白表达水平逐渐升高,且激活型Caspase-3蛋白表达水平逐渐升高（P<0.05)。结论 As2O3可通过增强FoxO3a蛋白的活性,激活Caspase-3蛋白的表达而诱导MCF-7细胞凋亡。     

放疗联合化疗对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及周期分布的影响

[目的]研究放射治疗联合乳腺癌化疗方案NP(NVB+DDP)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及细胞周期分布的影响.[方法]通过形态学和流式细胞术对MCF-7细胞的凋亡诱导效应进行定性及定量观察,并对细胞周期分布进行分析.[结果]单纯放疗组可诱导MCF-7细胞阻滞在G2/M期.单纯放疗组和单纯化疗组的凋亡指数随时间延长而增加.放化组照射后24h,在4Gy、6Gy和8Gy不同照射剂量下,4Gy出现凋亡峰值,凋亡指数4Gy＞6Gy＞8Gy,表现为低剂量辐射联合化疗有较好的凋亡诱导效应.[结论]放疗联合化疗对乳腺癌的凋亡诱导效应明显,并呈一定的时间一剂量选择性.     

miR-155对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药蛋白表达的调控作用研究

目的 探讨microRNA-155（miR-155）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及乳腺癌耐药相关蛋白表达的调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7细胞和人乳腺正常上皮细胞中miR-155的表达水平。将MCF-7细胞分为4组：对照组、空转染组、抑制（转染miR-155 inhibitor）组和过表达（转染miR-155 mimics）组,采用qRT-PCR检测转染24、48、72及96 h后各组的转染效果,噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,采用流式细胞仪PI／Annexin V双染色法检测各组转染24、48 h后的凋亡率,Western blotting法检测各组转染48 h后乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、P-糖蛋白（P-gp）及多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达水平。结果 乳腺癌MCF-7细胞中的miR 155水平高于人乳腺正常上皮细胞（P＜0.05）,且转染miR-155 inhibitor或mimics可呈时间依赖的方式降低或升高MCF-7细胞的miR-155水平（P＜0.05）。与对照组相比,抑制组转染后的细胞增殖率及BCRP、P-gp和MRP1的表达水平均降低,凋亡率升高（P＜0.05）;而过表达组的细胞增殖率及BCRP、P gp和MRP1的表达水平均升高,凋亡率降低（P＜0.05）。结论 MCF-7细胞中miR-155呈高表达,下调miR-155表达可抑制其增殖及耐药相关蛋白的表达,同时诱导凋亡。     

RNA干扰对乳腺癌MCF-7细胞株WT 1基因表达的抑制作用

目的：为探索治疗乳腺癌新途径，研究RNA干扰（RNA interferance，RNAi）对MCF-7细胞株WT 1基因表达的抑制作用。方法：设计制备多对针对WT 1基因的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA），转染MCF-7细胞，采用实时定量PCR（real—time quantitative polymerase chainreaction，RQ-PCR）法测定WT1 mRNA的表达，western blot测定WT1蛋白的表达，流式细胞仪检测加入长春新碱后的MCF-7细胞凋亡率。结果：siRNA能有效抑制WT1基因的表达，但不呈剂量关系，在较低浓度可维持RNAi至少4d时间，WT1基因表达下调的MCF-7细胞凋亡率增加。结论：RNAi能有效抑制MCF-7细胞中WT1基因的表达，同时转染siRNA后细胞对长春新碱敏感。     

快中子及X射线诱导人直肠癌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的:研究及探讨快中子及X射线诱导人直肠癌细胞凋亡及其相关基因表达。方法：不同剂量X射线（0、2、4、6、8、10Gy）及具有同等放射生物学效应的相当于射线1／3剂量的不同剂量快中子（０、０.67、1.34、2.01、2.68、３.34Gy)照射细胞,于３７℃孵育６小时,２４小时,４８小时,７２小时后,进行Ｈoechest33342荧光染色,观察细胞凋亡形态并凋亡指数ＡＩ（凋亡细胞的百分数）;用电子显微镜观察凋亡细胞特有的形态学特征;此外,我们分别对不同剂量（0、2、4、6、8、10Gy)X射线及快中子（0、0.67、1.34、2.01、2.68、3.34Gy)照射后24小时的细胞用免疫组化方法进行基因表达p53及bcl-2)的检测。结果：不同剂量X射线和快中子照射的细胞凋亡指数,随着照射剂量和受照时间的延长而逐渐增加,在同一时间点,快中子诱导的细胞凋亡水平明显高于X射线;不同剂量快中子照射后的细胞,较阳性对照组,p53基因表达下调明显,bcl－2基因表达下调不明显;不同剂量快中子照射后的细胞,p53及bcl-2基因表达下调均不明显。结论：高能X射线和快中子诱导人直肠癌细胞的凋亡具有明确的时间－剂量相关性,随着受照后时间的延长和剂量的逐渐增大,凋亡指数渐趋升高,无明显变缓之势;快中子照射人直肠癌细胞,与X射线相比较,可引起较大的凋亡反应;此外,照射后p53及bcl-2基因表达下调,说明此两类基因都参与了细胞凋亡的基因调控。     

miR-15a诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的作用机制

目的 探讨miR-15a在诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用及机制.方法 采用定量聚合酶链反应检测人乳腺上皮细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7中miR-15a的表达水平.采用软件预测miR-15a的靶点,并通过荧光素酶报告基因系统验证.将miR-15a经脂质体法转染MCF-7细胞,采用Western blot法检测Bcl-2蛋白的表达,并采用流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 miR-15a在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达明显低于乳腺上皮细胞株MCF-10A (0.253∶1,P＜0.0001).miR-15a可显著抑制抗凋亡基因Bcl-2 3′-UTR荧光素酶报告基因的表达(P＜0.05).与未转染组(对照组)相比,miR-15a转染组MCF-7细胞中Bcl-2的表达水平显著下降,凋亡明显增加(P＜0.05).结论 miR-15a 作为一个潜在的抑癌基因,可通过靶向于Bcl-2诱导乳腺癌细胞MCF-7发生凋亡,其可为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点和理论依据.     

Response of malignant B lymphocytes to ionizing radiation: gene expression and genotype

The human malignant B-lymphocyte cell lines Reh and U698 show arrest in G2 phase after ionizing radiation (IR), but only Reh cells arrest in G1 phase and die by apoptosis. We have used cDNA microarrays to measure changes in gene expression at 2, 4 and 6 hr after irradiation of Reh and U698 cells with 0.5 and 4 Gy in order to begin exploring the molecular mechanisms underlying the phenotypic changes. We also investigated whether gene expression changes could be caused by possible aberrations of genes, as measured by comparative genomic hybridization. Reh cells showed upregulation of CDKN1A that likely mediated the G1 arrest. In contrast, U698 cells have impaired function of TP53 protein and no activation of CDKN1A, suppressing the arrest in G1. The G2 arrest in both cell lines was likely due to repression of PLK1 and/or CCNF. IR-induced apoptosis in Reh cells was probably mediated by TP53 and CDKN1A, whereas a high expression level of MCL1, caused by gene amplification, and activation of the NFKB pathway may have suppressed the apoptotic response in U698 cells. Genes suggested to be involved in apoptosis were activated long before this phenotype was detectable and showed the same temporal expression profiles as genes involved in cell cycle arrest. Our results suggest that differences in functionality and/or copy number of several genes involved in IR-regulated pathways contributed to the phenotypic differences between Reh and U698 cells after IR, and that multiple molecular factors control the radiation response of malignant B lymphocytes.     

siRNA沉默DNMT1对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响

目的 靶向人DNMT1（DNA methyltransferase 1, DNMT1）构建RNA干扰载体,研究其对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法 靶向DNMT1基因设计三条短发夹状RNA(short hairpin RNA, shRNA) 的寡核苷酸片段,构建重组体pGCsi-DNMT1,转染至乳腺癌细胞株MCF-7,定量PCR 法检测DNMT1 mRNA表达水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT 法检测细胞生长情况;Annexin V/PI双染法观察细胞凋亡情况;定量PCR 法分析沉默DNMT1基因后对RASSF1A、p16、p21、p27及ERβ基因表达的影响。结果 在构建的靶向DNMT1的shRNA重组质粒pGCsi-DNMT1中,成功筛选到pGCsi-T3能显著下调DNMT1的表达。实时定量PCR检测结果证实重组质粒pGCsi-DNMT1对乳腺癌MCF-7细胞中DNMT1基因的转录有明显的抑制作用。MCF-7细胞转染后,pGCsi-DNMT1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖;大量细胞发生凋亡;细胞周期分析可见S期明显减少,而G₁/G₀期细胞显著增加;定量PCR检测到乳腺癌细胞中RASSF1A、p16、p21及ERβ基因mRNA表达水平明显升高,而p27基因表达水平未见明显变化。结论 重组质粒pGCsi DNMT1能特异有效地抑制MCF-7细胞内DNMT1的表达、 抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,并可通过抑制DNMT1的活性来解除相关基因启动子区的高度甲基化状态,从而促进肿瘤相关基因的表达,提示DNMT1可作为乳腺癌基因治疗的新靶标。     

双自杀基因系统对乳腺癌细胞体外特异性杀伤作用

目的: 探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体外靶向杀伤作用。 方法: 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染率,并以RT-PCR、Westernblot方法检测受感染细胞CD/TK的表达,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响;电镜观察细胞的病变;用流式细胞术观察细胞内DNA含量的变化;分光光度法检测细胞内Caspase-3活性。 结果: 腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR和Westernblot检测发现转染Ad-VEGFP-CD/TK的MCF-7细胞有目的基因和蛋白的表达,而乳腺上皮细胞无表达。MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感。在感染复数为100时,电镜下可见用药组MCF-7细胞有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;且随着前药浓度的升高转基因细胞内Caspase-3活性逐渐升高。 结论: VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,细胞内Caspase-3活性升高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

线粒体融合素基因-2对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究外源性线粒体融合素基因-2(mfn2)对乳腺癌细胞(MCF-7)凋亡的影响。方法在阳离子聚合物的介导下将含有mfn2 cDNA的质粒在体外转染MCF-7,蛋白印记法(Western blot)检测绿色荧光蛋白(GFP),MTT法检测mfn2对MCi-7细胞增殖的影响。采用Annexin-V/PI双标记法检测转染前后细胞凋亡的变化,JC-1标记细胞线粒体,在流式细胞仪上检测线粒体跨膜电位(△ψm)的变化,电镜观察超微结构的变化。结果转染mfn2基因的MCF-7细胞可以稳定高表达GFP蛋白。MTT实验提示,转染mfn2 cDNA后,MCF-7细胞增殖明显受到抑制,转染mfn2 cDNA后48 h,△ψm下降。与转染pEGFlP组和空白对照组相比,转染pEGFP mfn2组明显促进凋亡,其凋亡率分别为:转染组16.0%,转染空质粒组3.6%,空白对照组4.8%(P<0.05)。电镜观察显示,mfn2使线粒体嵴断裂、消失、基质疏松,肿胀的线粒体围绕在核周呈密集排列。结论mfn2基因在体外转染MCF-7细胞,细胞线粒体膜电位降低,线粒体嵴断裂、消失,细胞凋亡明显增加。     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。     

洛铂对ＭＣＦ-７细胞凋亡及ＭＴＤＨ基因表达的影响

目的　研究洛铂对人乳腺癌ＭＣＦ-７细胞凋亡的作用并探讨其对转移基因ＭＴＤＨ表达的影响。方法　ＭＴＴ比色法检测洛铂对ＭＣＦ-７细胞株的增殖抑制作用,流式细胞仪检测洛铂对ＭＣＦ-７细胞的凋亡率,ＲＴ-ＰＣＲ法检测洛铂对乳腺癌转移相关基因ＭＴＤＨ表达的影响。结果　５～４０ｍｇ／Ｌ洛铂对ＭＣＦ-７细胞增殖均具有明显抑制作用,呈药物浓度 时间依赖性（Ｐ＜０.０５）;５ｍｇ／Ｌ、１０ｍｇ／Ｌ、１５ｍｇ／Ｌ洛铂作用于ＭＣＦ-７细胞４８ｈ后凋亡率分别为１９.０８％、２４.２３％和６５.７１％。洛铂可以抑制ＭＴＤＨ基因表达,当浓度≥１０ｍｇ／Ｌ时,ＭＴＤＨｍＲＮＡ表达呈阴性。结论　洛铂可抑制ＭＣＦ-７细胞的增殖并可诱导其发生凋亡,并可能通过抑制ＭＴＤＨ基因的表达抑制乳腺癌细胞的侵袭转移。     

MDR1及MDR3短发夹RNA逆转乳腺癌细胞阿霉素耐药的实验研究

目的 研究靶向多药耐药(MDR)1及MDR3基因的短发夹RNA(shRNA)在逆转人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/Adr耐药中的作用.方法 真核质粒介导的针对MDR1及MDR3基因的shRNA转染细胞,空载体转染作为对照.Annexin-Ⅴ和PI双标法、流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化分别检测细胞凋亡、细胞内阿霉素蓄积、细胞增殖活性及对阿霉素的IC50、MDR1及MDR3 mRNA及P-糖蛋白(P-gp)表达.结果 转染后,MDR1组及MDR3组MCF-7/Adr细胞凋亡率分别为30.21%±1.65%和22.07%±2.17%,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.01);MCF-7/Adr细胞内的阿霉素积聚浓度显著增加;MCF-7/Adr细胞存活率显著下降,MCF-7/Adr细胞对阿霉素IC50显著降低;相对于空载体转染组,MCF-7/Adr细胞中MDR1和MDR3 mRNA最高分别下降89.5%±0.8%和85.1%±1.2%,mRNA下降水平与孵育时间有关;P-gp表达明显降低,与未转染组和空载体转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 shRNA可特异性地沉默MDR1及MDR3基因的表达,逆转P-gp介导的乳腺癌细胞阿霉素耐药,而MDR1的这种作用更为显著.     

Expression profiles of apoptotic genes induced by curcumin in human breast cancer and mammary epithelial cell lines

Curcumin (diferuloyl methane), the yellow-colored dietary pigment from the rhizomes of turmeric, has been recognized as a chemopreventive agent because of its antitumor, antioxidant and antiproliferative effects. The cytotoxic, apoptotic and gene regulatory effects of both turmeric and curcumin were investigated in the MCF-7 human breast cancer carcinoma cell line and compared with the effects in MCF-10A human mammary epithelial cells. MCF-7 cells were more sensitive to turmeric and curcumin than MCF-10A cells. MCF-10A cells retained comparatively less curcumin in the medium than MCF- 7 cells after 24 h, thereby reducing the cytotoxic effect. Curcumin induced a significantly higher percentage of apoptosis in MCF-7 than MCF-10A cells at all doses. Microarray hybridization of Clonetech apoptotic arrays with labeled first-strand probes of total RNA was performed to identify and characterize the genes regulated by curcumin in tumor cells. Of the 214 apoptosis-associated genes in the array, the expression of 104 genes was altered by curcumin treatment. The gene expression was altered up to 14-fold levels in MCF-7 as compared to only up to 1.5-fold in the MCF-10A cell line by curcumin. Curcumin up-regulated (>3 fold) 22 genes and down-regulated (<3-fold) 17 genes at both 25 microg/ml and 50 microg/ml doses in the MCF-7 cell line. The up-regulated genes include HIAP1, CRAF1, TRAF6, CASP1, CASP2, CASP3, CASP4, HPRT, GADD45, MCL-1, NIP1, BCL2L2, TRAP3, GSTP1, DAXX, PIG11, UBC, PIG3, PCNA, CDC10, JNK1 and RBP2. The down-regulated genes were TRAIL, TNFR, AP13, IGFBP3, SARP3, PKB, IGFBP, CASP7, CASP9, TNFSF6, TRICK2A, CAS, TRAIL-R2, RATS1, hTRIP, TNFb and TNFRSF5. While a dose-dependent gene expression change was noticed in some genes, opposite regulatory effects were induced by different curcumin doses in three apoptotic genes. These results suggest that curcumin induces apoptosis in breast cancer cells by regulation of multiple signaling pathways, indicating its potential use for prevention and treatment of cancer.