NS-398调节HepG2细胞P53和组蛋白H3乙酰化抑制细胞增殖的研究

背景与目的:研究NS-398对HepG2细胞组蛋白H3和非组蛋白P53的乙酰化和细胞增殖的作用,并探讨NS-398的抗肿瘤机制.材料与方法:应用不同浓度(0,100,200,300,400 μmol/L)的NS-398作用HepG2细胞不同时间(0,12,24,36,48 h)后,采用MTT法测定NS-398对HepG2细胞增殖的影响,用Western blot法检测乙酰化组蛋白H3和乙酰化P53的水平.结果:NS-398可抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,在24h、36 h和48 h的IC50值分别为300 μmol/L、200 μmol/L和150 μmol/L;NS-398能明显上调组蛋白H3的乙酰化水平,促进P53的表达和P53的乙酰化.结论:NS-398具有去乙酰化酶抑制剂作用,能上调组蛋白H3乙酰化水平,促进肿瘤抑制因子P53表达和活化,抑制肿瘤细胞增殖.     

姜黄素对膀胱癌细胞的p300 表达的影响

 目的 了解姜黄素对p300表达的影响，探讨其抗膀胱癌的机制。方法 用不同浓度的姜黄素作用膀胱癌细胞T24，MTT检测细胞增殖抑制率，RT-PCR法检测p300、c-fos、c-jun-的mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测乙酰化组蛋白H3、H4、c-fos、叫un、p300蛋白表达。结果 姜黄素能抑制T24细胞增殖，且具有量效关系和时效关系。姜黄素能抑制p300、c-fos、叫unmRNA和蛋白的表达，抑制组蛋白H3、H4的乙酰化，也具有量效关系。结论 姜黄素可以抑制p300的表达，此可能是姜黄素抗膀胱癌的机制之一。     

丙戊酸钠对白血病细胞Jurkat的增殖抑制作用

 目的　探讨丙戊酸钠（VPA）对Jurkat细胞增殖抑制作用及对组蛋白乙酰化修饰调控的影响。方法　采用CCK-8法检测VPA对Jurkat细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测VPA作用前后Jurkat细胞周期的变化情况;半定量RT-PCR检测VPA作用前后Jurkat细胞中组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）mRNA的表达变化;Western blotting检测VPA作用前后HDAC1及组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果　VPA对Jurkat细胞的增殖抑制作用呈时间-浓度依赖性;不同浓度的VPA处理细胞48 h后,细胞周期检测显示随浓度增加,G0／G1期比例增高,S期比例下降,细胞被阻滞在G0／G1期（P＜0.05）;RT-PCR证实VPA能够抑制HDAC1 mRNA水平的表达;Western blotting方法分析证实,不同浓度VPA作用细胞48 h后降低HDAC1蛋白水平,提高组蛋白H3、H4乙酰化表达水平。结论　VPA能抑制Jurkat细胞增殖,阻滞细胞周期于G0／G1期,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞增殖及凋亡的影响

目的： 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制。 方法： 以MS-275（0、5、10、20 μmol/L）作用于人宫颈癌SiHa细胞,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blotting法检测细胞内乙酰化组蛋白H4（acetylhistone4,Ac-H4）水平,RT-PCR检测p21和p53 mRNA的表达。 结果： MS-275作用后,人宫颈癌SiHa细胞增殖受到抑制、细胞凋亡增加,20 μmol/L MS-275作用下,细胞增殖率仅为（1395±891）%,凋亡率高达（3838±178）%,显著高于其他各组（P< 001）。MS-275作用后,细胞内Ac-H4水平增加（P< 001）,p21和p53 mRNA表达增加（均P< 001）。 结论： MS-275可抑制人宫颈癌SiHa细胞的增殖,诱导SiHa细胞凋亡;上调p21和p53表达、提高组蛋白乙酰化水平可能是其作用机制之一。     

姜黄素对子宫颈癌HeLa细胞增殖抑制作用及其机制的研究

目的:探讨姜黄素(Curcum in)对体外培养人子宫颈癌HeLa细胞抗癌作用及分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,W estern b lot法检测细胞凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax蛋白的表达。结果:姜黄素对HeLa细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;流式细胞仪分析证实姜黄素能使HeLa细胞阻滞在S期,并出现亚二倍体凋亡峰;荧光双染法可见凋亡细胞;W estern b lot结果显示Bax蛋白表达均上调,而Bc l-2的表达无明显影响。结论:姜黄素对人子宫颈癌HeLa细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡;Bax蛋白的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

NS-398调节HepG2细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达

背景与目的:研究非甾体药物NS-398对人肝癌细胞株HepG2细胞组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制p21WAF1/CIP1表达的影响.材料与方法:用不同浓度(100、200、300、400μmol/L)的NS-398处理HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞增殖抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,应用NS-398分别作用HepG2细胞4、8、12、24、48 h,非药物作用组作为对照,提取细胞的总RNA和总蛋白,采用RT-PCR技术检测p21WAF1/CIP1 mRNA表达情况,并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平.结果:NS-398抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性,并诱导其凋亡.且呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,一方面增高G0/G1期细胞比例,另一方面降低S期和G2/M期细胞比例,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).NS-398对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化,可引起组蛋白H3的乙酰化.NS-398对p21WAF1/CIP1 mRNA和p21WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间依赖性.结论:NS-398明显上调HepG2细胞组蛋白H3的乙酰化水平,促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1的表达.     

姜黄素对人淋巴瘤Raji细胞组蛋白H3乙酰化作用的影响

背景与目的:表观遗传改变是肿瘤发生的一个重要原因,具有表观遗传修饰作用的甲基化转移酶抑制剂和去乙酰化酶抑制剂可以抑制肿瘤增殖诱导凋亡。本研究探讨姜黄素对Raji细胞组蛋白H3的乙酰化作用和细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21WAF1/CIP1基因表达的影响。方法:用25μmol/L姜黄素作用Raji细胞不同时间,Westernblot分析乙酰化组蛋白H3和p21WAF1/CIP1变化;RT-PCR检测p21WAF1/CIP1基因表达;染色质免疫沉淀分析p21WAF1/CIP1的启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平;流式细胞术检测细胞周期变化。结果:姜黄素提高p21WAF1/CIP1的启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平1.9倍;使p21WAF1/CIP1mRNA合成增加和蛋白表达上调,在24h时分别增加了4.2倍和5.1倍;24h阻滞细胞在G2/M期,36h阻滞在G0/G1期。结论:姜黄素通过表观遗传修饰作用,调节p21WAF1/CIP1启动子基因位点组蛋白H3乙酰化水平,促进p21WAF1/CIP1基因转录,阻滞Raji细胞周期进程。     

姜黄素抑制HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖作用及其机制研究

目的:研究姜黄素对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖的抑制作用及其机制.方法:采用台盼蓝排染法计数人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞,MTT法测定不同浓度姜黄素对ECV304细胞和HeLa细胞诱导的ECV304细胞增殖的抑制,采用RT-PCR和Western blot检测40 μmol/L姜黄素作用于HeLa细胞诱导的血管内皮细胞4、8、16和24 h后,血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR2(KDR)基因及蛋白的表达.结果:姜黄素直接作用于ECV304细胞,其细胞计数较对照组显著减少(P<0.05),并呈浓度依赖性.MTT法测得不同浓度姜黄素作用后,可产生显著的细胞增殖抑制作用,48 h体外半数抑制浓度(IC50)值为(38.4±0.031) μmol/L.随着姜黄素浓度的增加,其时ECV304细胞和HeLa细胞诱导的ECV304细胞的增殖有明显的抑制作用,P值分别为0.000 0和0.000 1.姜黄素作用于HeLa细胞诱导的血管内皮细胞4、8、16和24 h后,能明显下调VEGF与KDR的mRNA和蛋白表达.结论:姜黄素能直接抑制血管内皮细胞的增殖,对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞的增殖也有抑制作用.此作用可能是通过押制VEGF及其受体KDR的mRNA和蛋白表达来实现的.     

去甲二氢愈创木酸抑制宫颈癌SiHa细胞的生长与上调p21基因组蛋白乙酰化相关性的研究

目的:研究去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid, NDGA)对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及作用机制.方法:MTT法检测NDGA对SiHa细胞生长的影响,FCM法检测NDGA对SiHa细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR检测NDGA对p21基因转录的影响,Western印迹法检测NDGA对组蛋白H3总乙酰化水平的影响,染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)-PCR法检测NDGA对p21基因近启动子区域组蛋白H3乙酰化的影响.结果:NDGA能明显抑制SiHa细胞的生长,且呈时间和剂量依赖性;可使SiHa细胞的细胞周期阻滞于G1期,而凋亡率却下降;能明显提高p21基因的转录水平和组蛋白H3的总乙酰化水平,ChIP-PCR检测结果表明NDGA可明显促进p21基因近启动子区域组蛋白H3的乙酰化水平.结论:NDGA促进p21基因近启动子区域及细胞内总体组蛋白H3的乙酰化可能是其抑制宫颈癌SiHa细胞生长的潜在机制.     

神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究外源性神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和VEGF表达的影响.方法 不同浓度GM3干预HeLa细胞24 h后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞学技术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术检测细胞VEGF mRNA表达水平,Western blot技术检测细胞VEGF蛋白水平.结果 (1) GM3浓度分别为2、10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞生长抑制率分别为9.8％、32.9％、50.7％和78.6％,半数抑制浓度(IC50)为49.8 μmol/L.(2) GM3浓度分别为10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞凋亡率分别为(4.9±0.4)％、(15.1±0.3)％、(24.4±0.7)％.(3)当GM3浓度高于10 μmol/L时,HeLa细胞VEGF mRNA表达水平以及VEGF蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05).结论 外源性神经节苷脂GM3能呈浓度依赖性抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,促进HeLa细胞凋亡,下调HeLa VEGF mRNA水平和蛋白水平,提示GM3可能通过调节肿瘤细胞凋亡和肿瘤血管生成而发挥双重抗肿瘤作用.     

激活Notchl信号对宫颈癌细胞生长的影响及其机制

目的 研究Notch1（ICN）基因对人宫颈癌细胞生长的影响，并对其作用机制进行探讨。方法 采用脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞，MTT比色法测定瞬时表达Notch1（ICN）对细胞生长的影响，用流式细胞仪分析细胞周期分布的变化，Western blot法检测P53蛋白的表达改变。结果 瞬时表达Notch1（ICN）基因可以抑制HeLa细胞的生长，使细胞周期停滞在G1期，并上调细胞周期调控蛋白P53的表达水平。结论 通过影响细胞周期的分布及细胞周期调控蛋白的表达，激活Notch1基因可抑制人宫颈癌细胞的生长。     

EFFECTS OF CURCUMIN ON PROLIFERATION AND APOPTOSIS OF HUMAN CERVICAL CARCINOMA HeLa CELLS IN VITRO

Curcumin,adeferuloymethane,isamajoractivecomponentofthefoodflavorturmetric(CurcumalLonga).Becauseofitsstablecolourandlusterandlowtoxicity,curcuminhasbeenwidelyusedasfoodadditiveandstain.Recently,ithasbeenreportedtopossesantiinflammatory,antioxidationandantiviralactivities.Now,attentionhasbeenfocusedonitsantitumoractivity[1].InvitrocurcuminwasfoundtoinduceapoptosisofawidevarietyoftumorcellsincludingmicesarcomaS180cells,humancoloncarcinomaHT-29cells,humanrenalcarcinoma293cells,humanlivercarcin…     

鳞盖肉齿菌的抗肿瘤细胞增殖活性及其机制的研究

背景与目的：从鳞盖肉齿菌（Sarcodon scabrosus karst）的二氯甲烷提取物中分离纯化得到Sarcodonin G,对Sarcodonin G进行抗肿瘤细,胞增殖活性及其机制的研究。材料与方法：利用四唑盐（MTT）比色法测定Sarcodonin G对HeLa细胞增殖的抑制率;利用流式细胞术检测Sarcodonin G对HeLa细胞的凋亡和P53基因蛋白表达的影响;利用电镜技术观察Sarcodonin G对HeLa细胞形态学改变。结果：Sarcodonin G对体外培养的HeLa细胞的增殖具有明显地抑制作用,其半数抑瘤率（IC50）为7.19mol/L,并有较好量效关系;流式细胞学检查发现Sarcodonin G处理后的HeLa细胞出现凋亡现象、对P53基因蛋白表达影响与对照组比较有统计学意义（P＜0.01）;超微结构发现Sarcodonin G处理后的HeLa细胞的胞核染色质浓缩,边集,核固缩及形成新月体,线粒体肿胀,空泡样变,胞浆出现大量空泡等凋亡的形态学改变。结论：鳞盖肉齿菌的纯化物Sarcodonin G能抑制体外培养的HeLa细胞的增殖,可能是通过调节HeLa细胞P53蛋白表达,诱导HeLa细胞的凋亡来实现其抗肿瘤增殖作用的。     

Effects of curcumin on proliferation and apoptosis of human cervical carcinoma HeLa cells <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

Objective: To investigate the regulatory effect of curcumin on profiferation and apoptosis in human cervical carcinoma ceil fine HeLa in vitro. Methods: Human cervical carcinoma cell line Hela was cultured in vitro. HeLa cells were treated with 10-50μmol/L cureumin for 24-72 h and the growth inhibition rates of HeLa ceils were measured by MTT method. Cell apoptosis was inspected by electron microscopy. In addition, the expression of bcl-2, bcl-x1 and caspase-3 protein in HeLa cell were observed by SP immunohistochemistry. Results: Curcumin inhibited the proliferation of HeLa cells on a dose-depending manner.Peak of subG1 appeared on DNA histogram in FCM. A portion of the cells presented the characteristic morphological changes of apoptosis under the electron microscope. The bcl-2, bcl-x1 expression was decreased while Caspase-3 expression was increased. Conclusion:Curcumin could significantly inhibit the growth of HeLa cells; inducing apoptosis through up-regulating Caspase-3 and down-regulating expression of bcl-2 and bcl-x1 was probably one of its molecular mechanisms.     

RNAi沉默p53基因对HeLa细胞核转录因子3表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的：探讨RNAi沉默p53基因对宫颈癌HeLa细胞核转录因子3（STAT3）的表达,及对HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：构建3种靶向p53基因的shRNA1~3序列,并转染HeLa细胞,采用逆转录PCR和Western blot检测细胞p53 mRNA和蛋白的表达,以筛选有效沉默p53的shRNA序列。将筛选的序列转染HeLa细胞后,采用逆转录PCR和Western blot检测STAT3 mRNA和蛋白的表达;采用四甲基噻唑蓝法（MTT）检测细胞增殖;采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果：构建的3种p53-shRNA均可沉默宫颈癌HeLa细胞p53的表达,尤以shRNA3的沉默效果最好,转染shRNA3后,HeLa细胞p53 mRNA和蛋白的表达量分别为0.23±0.05和0.41±0.11,显著低于未转染组、空质粒组、p53-shRNA1组和p53-shRNA2组（P均 < 0.05）,故后续试验均以shRNA3转染HeLa细胞。将shRNA3序列转染HeLa细胞沉默p53基因后,p53-shRNA3组STAT3 mRNA和蛋白表达量分别为1.09±0.21和1.46±0.25,显著高于未转染组（0.53 ±0.10和0.74±0.14）及空质粒组（0.55±0.11和0.73±0.15）（P均 < 0.05）。MTT法分析结果显示,在孵育24、36、48和72 h时,p53-shRNA3组HeLa细胞增殖能力均显著大于未转染组和空质粒组（P均 < 0.05）。Transwell法分析结果显示,转染12 h后p53-shRNA3组穿膜细胞数目（59.36±5.33）显著高于未转染组（15.73±1.29）和空质粒组（16.01±1.34）（P均 < 0.05）。结论：RNAi沉默p53基因能够上调宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达,并促进细胞的增殖及侵袭能力。     

慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制

目的：研究慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及其机制。方法：构建4种靶向TPX2基因的慢病毒表达载体（LV-TPX2-shRNA-1/2/3/4）,同时构建阴性对照质粒,将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2 mRNA和蛋白的沉默效果。选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验。分别采用CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况。Western blot检测TPX2-shRNA转染前后Ki-67、cyclin B2、Aurora-A及P53的表达。结果：与对照组比较,构建的靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制HeLa细胞TPX2基因的表达,尤其以LV-TPX2-shRNA-1最为明显（P < 0.01）,故选择LV-TPX2-shRNA-1进行后续实验。与对照组比较,沉默TPX2基因的表达能降低HeLa细胞增殖及迁移能力（P < 0.05）,使G2及S期细胞比例明显增加（P < 0.05）,且上调P53蛋白的表达水平,下调Ki-67、cyclin B2及Aurora-A蛋白的表达水平（P均 < 0.05）。结论：沉默TPX2基因蛋白表达能抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力,可能与其改变细胞周期分布及下调Ki-67、cyclin B2、Aurora-A蛋白表达水平,上调P53蛋白表达水平有关。     

姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响

目的： 研究姜黄素对人永生化表皮HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。方法：通过免疫细胞化学法和免疫印迹检测姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。结果：免疫细胞化学染色结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达增强。Western blot检测结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达上调。结论：姜黄素诱导HaCaT细胞凋亡过程中伴随着抑凋亡基因bcl-2表达的抑制和促凋亡基因p53、Bax和Fas基因的激活。由此证明姜黄素通过多种凋亡相关基因的调控,激活凋亡信号传导途径,诱使细胞凋亡。     

Small-interfering RNA-mediated silencing of the MAPK p42 gene induces dual effects in HeLa cells

The genesis and progression of cervical cancer involve the mutation or deviant expression of numerous genes, including the activation of oncogenes (Ha-ras, C-myc, C-erbB2 and Bcl-2) and inactivation of tumor-suppressor genes (p53 and Rb). Previous studies showed that small-interfering RNAs (siRNAs) targeting the MAPK p42 gene partly inhibit proliferation and increase apoptosis in human cervical carcinoma HeLa cells. Results of a microarray analysis showed that MAPK p42 siRNA inhibited cell growth through the regulation of cell cycle control and apoptosis and induced interferon-like response in HeLa cells. In order to confirm the dual effects of MAPK p42 siRNA, we compared the roles of siRNA and U0126, an inhibitor of MAPK p42, in HeLa cells. Short 21-mer double-stranded/siRNAs were synthesized to target MAPK p42 mRNA in HeLa cells. The siRNAs were transfected into HeLa cells using Lipofectamine. The cells were treated with siRNA or U0126 at different concentrations for a period of 48 h. The biological effect of siRNA and U0126 on HeLa cells was measured by MTT and flow cytometry. MAPK1, NUP188, P38, STAT1, STAT2, PML and OAS1 were analyzed by real-time quantitative PCR. HeLa cell growth was inhibited by siRNA or U0126, and the effect of siRNA inhibition was greater than that of U0126. Cell cycle phases were different for siRNA or U0126, but HeLa cell growth was arrested at the S phase by siRNA and at G1 phase by U0126. A down-regulation in MAPK p42 expression by siRNA and up-regulation by U0126 were noted. The results of real-time quantitative PCR showed that P38 was up-regulated and NUP188 was down-regulated by siRNA in comparison with the control groups, and the results were consistent with those of U0126. Expression levels of STAT1, STAT2, PML and OAS1 induced by siRNA differed from those induced by U0126. siRNA-mediated silencing and deactivation induced by U0126 in MAPK p42 led to growth inhibition in the HeLa cells. The effects of siRNA on HeLa cell growth were different from those of U0126. Dual effects of MAPK p42 siRNA-2 on HeLa cell growth were noted: one consisted of a specific effect induced by siRNA-mediated p42 MAPK silencing and the other exhibited a non-specific interferon-like response.     

重组蛋白P53联合紫杉醇在宫颈癌中的抑制作用

目的 探讨P53联合紫杉醇在宫颈癌中的抑制作用.方法 利用宫颈癌细胞系HeLa细胞进行实验研究,利用MTT实验对单独加入P53重组蛋白、紫杉醇和P53联合紫杉醇对细胞增殖进行检测,两者均不加为对照组,同样的设计思路对细胞单克隆进行检测,最后用western-blot进行4种细胞蛋白的检测.结果 重组蛋白联合紫杉醇时抑制宫颈癌细胞的生长,且抑制作用具有统计学差异;细胞单克隆形成数目也是减少,在初步探讨其作用机制时发现VEGF表达减少.结论 P53重组蛋白联合紫杉醇能有效抑制宫颈癌细胞生长,其潜在作用机制是抑制VEGF的表达.