低氧对白血病细胞株Raji细胞侵袭转移能力的影响

目的研究低氧对白血病细胞株Raji细胞侵袭转移能力的影响。方法Raji细胞体外常规培养,用体积分数为1%、3%、5%的氧分别处理Raji细胞24h,以常氧培养Raji细胞为对照组,通过细胞黏附实验检测细胞黏附力,细胞迁移实验检测细胞运动力,肿瘤细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭力,RT-PCR检测细胞VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Western Blot检测细胞HIF 1α蛋白的表达。结果与对照组相比,3%、5%的氧均能增强Raji细胞黏附力、运动力和侵袭力(P<0.05或P<0.01),而且还能上调Raji细胞HIF-1α蛋白、HIF-1α mRNA、VEGF mRNA、MMP 9 mRNA的表达(P<0.01),各组MMP 2 mRNA均无明显表达;而1%氧与对照组相比各检测指标无明显变化(P>0.05)。结论适度低氧可增强白血病细胞株Raji细胞侵袭转移能力,其机制可能是通过HIF-1α上调VEGF、MMP-9表达实现的。     

HGF和VEGFR-3在大肠癌中的表达及其在淋巴管生成和转移中的作用

目的观察肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）在大肠癌组织中的表达,检测大肠癌组织中的微淋巴管密度(LMVD),探讨HGF和VEGFR-3 在大肠癌淋巴管生成及转移中的作用。方法应用免疫组织化学（SABC）法检测52例大肠癌、20例大肠息肉组织和20例健康对照组织中HGF和VEGFR-3的表达,并应用podoplanin标记淋巴管,检测各组组织中的淋巴管密度,结合大肠癌患者的临床病理资料,分析其相关性。结果(1)大肠癌组织中HGF和VEGFR 3均被染成棕褐色或棕黄色,阳性表达率分别为75%、67.3%,相对表达量分别为(0.36±0.07)、(0.41±0.10),均明显高于大肠息肉组[25%、30%; (0.24±0.06)、 (0.28±0.03）] 和正常大肠组织[15%、10%;(0.23±0.06)、(0.21±0.03）]的表达(P<0.01)。且微淋巴管密度(LMVD)也明显增多[(4.13±1.99) vs. (2.59±1.46) vs. (2.40±1.44),P<0.01]。(2)大肠癌组织中HGF、VEGFR 3的相对表达量,LMVD三者间呈两两正相关。39例HGF表达阳性的大肠癌,其LMVD明显大于HGF表达阴性者[(4.25±2.13) vs. (2.73±1.54),t=3.051,P=0.003];35例VEGFR-3表达阳性的大肠癌,其LMVD也明显大于VEGFR 3表达阴性者[(3.79±1.26) vs. (2.64±1.32),t=3.235,P=0.002]。(3)HGF、VEGFR 3和LMVD的表达与大肠癌患者年龄、性别以及肿瘤分化程度无关(P>0.05),但与Dukes分期(P=0.034,P=0.021,P=0.006)、淋巴管有无转移明显相关(P=0.015,P=0.012,P=0.001)。结论HGF与大肠癌的淋巴管生成及转移有一定的相关性,并可能通过VEGF-C、D/VEGFR-3 信号途径间接促进淋巴管增生,从而促进肿瘤细胞的淋巴转移。     

45例间变性大细胞淋巴瘤临床病理特点及疗效分析

目的 分析间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）的临床病理特点、远期效果和影响预后的因素。方法 回顾性分析2000年1月—2008年12月我院收治的45例ALCL患者的临床资料,并分析远期疗效, 用Cox模型分析预后因素。结果 原发皮肤和系统性ALCL分别有7例（84.4%）和38例（15.6%）。20例（44.4%）伴有B症状者,乳酸脱氢酶升高者8例（21.6%）,低危组、中低危组共31例（68.9%）,28例（62.2%）ALK阳性。26例（57.8%）为T细胞来源,6例（13.3%）为B细胞来源,11例（22.2%）T细胞和B细胞标记均为阴性,为null型,2例T细胞和B细胞标记均为阳性。原发皮肤和系统性ALCL治疗后的有效率分别为100%和92.1%,5年OS率分别为83.3%和63.9%（χ²=0.707,P＝0.401）。ALK阳性和阴性患者的5年OS率分别87.5%和46.9%（χ²=10.992,P＝0.01）。单因素分析ALK表达状况（P＝0.01）、国际预后指数评分（P＝0.000）、临床分期（P＝0.005）对生存期的影响有统计学意义,ALK的表达状况（P＝0.012）和国际预后指数评分（P＝0.000）是影响总生存期的独立因素。结论 ALCL中约80%为原发系统性,近期和远期疗效较好,约60%的患者ALK阳性,ALK和国际预后指数为独立的预后因素。     

外周T细胞淋巴瘤中VEGF表达和MVD水平及其临床意义

目的 探讨外周T细胞淋巴瘤（PTCL）中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达和微血管密度（MVD）水平及其与临床特征和预后的相关性。方法 采用免疫组化法检测47例初治PTCL患者肿瘤组织中VEGF及MVD表达,分析其与临床特征、疗效和预后的关系。结果 PTCL组织中VEGF阳性表达率为93.6％（44／47）,其中高表达率为55.3％（26／47）;MVD值为（97.99±48.45）／mm²,其中MVD高表达者24例。MVD水平与VEGF表达呈正相关（r=0.329,P=0.024）。VEGF表达与临床分期、骨髓浸润、国际预后指数 （IPI）评分及ECOG评分相关（P＜0.05）;MVD仅与临床分期相关（P=0.028）。VEGF高表达组的5年生存率、5年无进展生存率分别为11.5％、11.5％,低于VEGF低表达组的57.1％、28.6％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。MVD高水平组的5年生存率、5年无进展生存率分别为20.8％、8.3％,低于MVD低水平组的43.5％、 30.4％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Log-rank检验显示,VEGF表达、MVD水平、临床分期、IPI评分、LDH表达水平、骨髓浸润、B症状均为影响PTCL预后的因素。结论 PTCL肿瘤组织中VEGF表达和MVD水平较高,这与肿瘤的侵袭性以及疗效和预后相关。     

蟾毒灵对裸鼠大肠癌原位移植瘤的抗肿瘤作用及其对凋亡相关基因Bcl-xL、Bax表达的影响

目的探讨蟾毒灵对裸鼠大肠癌原位移植瘤的抗肿瘤作用及其可能诱导凋亡的机制。方法将60只人结肠癌细胞株HCT-116建立的裸鼠原位移植瘤模型随机分为生理盐水（NS）组、5-Fu组、蟾毒灵低（BL）、中(BM)、高(BH)5组,每组12只,腹腔注射给药持续7d。用药结束后第24天每组分别处死6只裸鼠,完整取出肿瘤,测量肿瘤大小,计算肿瘤抑制率;剩余裸鼠观察带瘤生存期;TUNEL法检测原位移植瘤细胞的凋亡指数;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-x_L、Bax mRNA和蛋白的表达。结果5-Fu组、BL组、BM组、BH组的肿瘤抑制率分别为69.6%、45.6%、56.2%、58.5%,肿瘤体积与NS组比较明显缩小（P＜0.01);BL组、BM组带瘤生存期与NS组相比较明显延长(P< 0.05)。TUNEL结果显示蟾毒灵用药组的凋亡指数明显高于NS组(P＜0.01）;荧光定量PCR和Western结果显示蟾毒灵可抑制Bcl-x_L基因表达,促进Bax基因表达（P＜0.05）。结论蟾毒灵对裸鼠大肠癌原位移植瘤有显著的抗肿瘤作用,能够抑制Bcl-xL基因和促进Bax基因表达,诱导肿瘤细胞凋亡可能是蟾毒灵抗肿瘤的重要机制之一。     

STAT5和c-myc在大肠癌中的表达及意义

目的探讨大肠癌中STAT5和c-myc蛋白表达与肿瘤病理特征的关系及两者的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测56例大肠癌组织STAT5和c-myc蛋白的表达,同时选取16例大肠腺瘤组织作对照。结果STAT5在结肠癌组织中的阳性表达率（34/56,60.7%）明显高于大肠腺瘤组织（3/16,18.8%）,P<0.01。STAT5表达与肿瘤Dukes临床分期及淋巴结转移均呈正相关（P<0.05）。c-myc在结肠癌组织中的阳性表达率（35/56,62.5%）明显高于大肠腺瘤组织（4/16,25.0%）,P<0.01。c-myc表达与肿瘤分化程度、Dukes临床分期及淋巴结转移等均无明显相关（P>0.05）。STAT5和c-myc在大肠癌中表达呈正相关(r=0.359,P<0.01)。结论STAT5和c-myc在大肠癌的发生发展中起重要作用;STAT5检测可作为判断大肠癌恶性程度的指标;大肠癌中c-myc表达可能受STAT5调控。     

63例Ⅰ~Ⅲ期肾细胞癌患者术后辅助治疗疗效及预后因素分析

目的研究肾细胞癌术后辅助治疗的疗效及影响患者远期生存的因素。方法回顾性分析63例肾细胞癌患者术后辅助治疗的效果,多因素分析影响生存期的因素。结果全组5年生存率为71.0%;病理分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期患者5年生存率分别87.7%、70.3%和42.9%（χ²=11.629,P=0.003）,T1、T2和T3期患者的5年生存率分别为88.7%、63.9%和37.0%（χ²=11.850,P=0.003）,N0和N1患者的5年生存率分别为78.0%和35.6%（χ²=8.599,P=0.003）,有、无静脉瘤栓的患者5年生存率分别为31.3%和76.0%（χ²=8.108,P=0.004）。全组局部复发率和远处转移率分别为15.9%（10/63）和23.8%(15/63)。多因素分析表明T分期（P=0.021）、N分期（P=0.040）、手术切除（P=0.032）、术后生物化疗（P=0.022）、术后放疗（P=0.042）是影响患者总生存期的独立预后因素。结论TNM分期是患者能否远期生存的决定性因素,术后辅助生物化疗和辅助放疗可提高总生存率,但需要进一步大样本随机对照研究。     

苦参碱提高白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤敏感性及其机制

目的研究苦参碱（Matrine）作用前后白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法应用CCK-8法检测苦参碱对KG1a细胞50%抑制量IC₅₀值,以此量的苦参碱作用于KG1a细胞,LDH释放法检测作用前后对NK细胞的杀伤敏感性。RT-PCR检测KG1a细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)五种基因的表达,流式细胞仪检测作用前后KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子表达变化。结果苦参碱作用前后在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P＜0.05)。KG1a细胞在mRNA水平五种基因均表达,苦参碱作用前KG1a细胞表面NKG2D各配体几乎不表达,作用后各配体显著升高,与作用前相比差异有统计学意义(P＜0.05),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P＞0.05)。结论苦参碱能提高KG1a细胞对NK细胞的杀伤敏感性,其机制可能与苦参碱提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。     

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性（P<0.05）,但两转染组之间相比,差异无统计学意义（P>0.05）;无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应（P>0.05）;两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G₀/G₁期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。     

三氧化二砷对宫颈癌的抑制作用与ＮＤＲＧ１基因的相关性

目的　探讨三氧化二砷（Ａｓ_２Ｏ_３）对人宫颈癌ＨｅＬａ细胞株生长的影响及其机制,以及ＨｅＬａ细胞株ＮＤＲＧ１基因的表达变化情况。方法　采用不同浓度Ａｓ_２Ｏ_３作用于人宫颈癌ＨｅＬａ细胞,光镜和电镜观察细胞形态改变,ＭＴＴ比色法和流式细胞仪检测细胞生长和凋亡情况,半定量ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ａｓ_２Ｏ_３对ＨｅＬａ细胞ＮＤＲＧ１基因表达的影响。结果　Ａｓ_２Ｏ_３能够抑制宫颈癌ＨｅＬａ细胞的生长,呈浓度和时间依赖性（Ｐ＜０.０５）。半定量ＲＴ-ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,Ａｓ_２Ｏ_３能够使宫颈癌ＨｅＬａ细胞ＮＤＲＧ１基因的表达上调。结论　Ａｓ_２Ｏ_３能够抑制宫颈癌ＨｅＬａ细胞生长,该抑制作用与ＮＤＲＧ１基因的表达上调相关。     

SCHIP1促进Hippo通路的激活抑制结肠癌的发生发展

目的:检测SCHIP1在结肠癌的组织和细胞中的表达水平以及其在结肠癌中对Hippo通路的影响。方法:利用TCGA数据库分析SCHIP1在结肠癌中的表达情况;免疫组化的方法检测SCHIP1在结肠癌组织标本中的表达情况;采用Transwell试验、集落实验及MTS检测对细胞迁移和增殖能力进行检测;采用Western blot检测YAP、P-YAP、CTGF在结肠癌中的表达情况。结果:TCGA数据库显示结肠腺癌中SCHIP1的表达低于正常组织;SCHIP1在结肠癌组织及细胞系中表达较低;SCHIP1过表达抑制了RKO细胞迁移和增殖能力;SCHIP1低表达促进了RKO细胞的迁移和增殖;过表达SCHIP1的RKO细胞明显抑制了YAP、CTGF的表达,促进了P-YAP的表达。低表达SCHIP1的RKO细胞促进了YAP、CTGF的表达,抑制了P-YAP的表达。结论:SCHIP1增强了结肠癌中Hippo通路活性,抑制结肠癌的发生进展;SCHIP1可能作为结肠癌治疗的一个潜在靶向分子。     

表皮生长因子调节水通道蛋白3表达对结肠癌细胞迁移能力的影响

目的:探讨EGF调节AQP3表达对结肠癌细胞迁移能力的影响。方法:Western blot检测EGF不同条件作用下结肠癌细胞株HCT116 AQP3的表达情况;划痕实验检测不同AQP3表达程度下结肠癌细胞迁移能力的变化。结果:Western blot检测显示EGF上调AQP3表达并且呈时间和剂量依赖,在不同剂量EGF刺激下和不同作用时间下,AQP3的表达强度具有统计学差异(P<0.05);划痕实验示不同AQP3表达各组结肠癌细胞株HCT116迁移能力具有统计学差异(P<0.05),AQP3高表达可以促进结肠癌细胞迁移能力增强并且这一作用可以被AQP3抑制剂CuSO4阻断。结论:AQP3在EGF结合EGFR后上调表达并增强结肠癌细胞的迁移能力。     

Reduction in gap junction intercellular communication promotes glioma migration

Glioblastoma Multiforme (GBM), an aggressive form of adult brain tumor, is difficult to treat due to its invasive nature. One of the molecular changes observed in GBM is a decrease in the expression of the gap junction protein Connexin43 (Cx43); however, how a reduction in Cx43 expression contributes to glioma malignancy is still unclear. In this study we examine whether a decrease in Cx43 protein expression has a role in enhanced cell migration, a key feature associated with increased tumorigenicity. We used a 3D spheroid migration model that mimics the in vivo architecture of tumor cells to quantify migration changes. We found that down-regulation of Cx43 expression in the U118 human glioma cell line increased migration by reducing cell-ECM adhesion, and changed the migration pattern from collective to single cell. In addition gap junction intercellular communication (GJIC) played a more prominent role in mediating migration than the cytoplasmic interactions of the C-terminal tail. Live imaging revealed that reducing Cx43 expression enhanced relative migration by increasing the cell speed and affecting the direction of migration. Taken together our findings reveal an unexplored role of GJIC in facilitating collective migration.     

Modulation of POPDC1 Expression by Phenothiazine and Trifluoperazine Suppress Colon Cancer Growth and Migration

Objective: The aim of this study was to investigate the effects of CaM antagonist, PTZ, and TFP on cell proliferation and migration of colon cancer cells and its impact on POPDC protein expression. Methods: The 50% inhibitory concentration (IC50) of PTZ and TFP in SW1116, SW480, HCT-15, and COLO205 colon cancer cell lines are measured using MTT. Western blot and immunocytochemistry were used to determine the expression of PCNA, cyclin D1 (CD1), and POPDC proteins. Cell migration was observed using a scratch wound-healing assay. Results: Treatment with PTZ and TFP inhibited colon cancer cells growth in a dose-dependent manner. PTZ and TFP significantly inhibited the activation of proliferation markers, PCNA and CD1, and the migration of colon cancer cells. Furthermore, POPDC protein was significantly suppressed in all cell types of colon cancer, particularly in SW480. Finally, the CaM antagonist upregulates the POPDC1 expression in colon cancer cells. Conclusion: These findings suggest that CaM antagonists suppress colon cancer cells proliferation via downregulation of CD1 and PCNA. In addition, POPDC protein could be used as a biomarker in colon cancer, and CaM antagonist could be used to regulate POPDC1 expression. This study suggests that targeting POPDC1 with CaM inhibition could be a potential therapeutic strategy for colon cancer treatment.     

CSE1/CAS overexpression inhibits the tumorigenicity of HT-29 colon cancer cells

We previously reported that CSE1/CAS (CAS) overexpression in HT-29 human colon cancer cells enhances the formation of the E-cadherin/beta-catenin complex, stimulates intercellular junction formation, and stimulates polarization of HT-29 cells. Since both E-cadherin/beta-catenin interaction and epithelial cell polarization are critically related to the tumorigenicity of carcinoma cells, we studied the role of CAS in the tumorigenicity of HT-29 colon carcinoma cells. CAS overexpression in HT-29 cells decreased the intercellular gaps and increased the compactness of cell colonies. Our results show that CAS expression inhibited migration and growth of HT-29 cancer cells. In the soft agar anchorage-independent growth assays, CAS overexpression inhibited the colony size of HT-29 cells by 74%, and inhibited colony formation number of HT-29 cells by 38%. CAS overexpression also inhibited the growth of HT-29 cells in nude mice. Our results indicate that CAS inhibits the tumorigenicity of HT-29 human colon cancer cells and, thus, it is worthwhile to further study CAS's possible role in the control of human colon cancer.     

miR－647在结肠癌细胞中的表达及临床意义

目的：分析miR－647在结肠癌组织及细胞系中的表达情况,探讨其对结肠癌细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的作用机理。方法：利用Real－time quantitative Polymerase Chain Reaction（qPCR）技术检测17例结肠癌患者癌及癌旁组织中miR－647的表达;利用qPCR技术检测正常人肠上皮细胞HIEC及结肠癌细胞HT－29中miR－647的表达;将miR－647 antagomir及对照分别转染至结肠癌细胞中,应用MTT实验检测细胞增殖,体外划痕实验检测细胞迁移能力,评价转染miR－647抑制剂对结肠癌细胞增殖能力和迁移能力的影响。结果：qPCR结果显示,与癌旁组织相比,miR－647在结肠癌肿瘤组织中表达明显升高;与正常人肠上皮细胞相比,人结肠癌细胞系HT－29中miR－647表达明显升高;MTT结果显示miR－647抑制剂可以显著抑制SW480和SW620细胞的增殖能力和细胞迁移能力。结论：miR－647通过促进结肠癌细胞的增殖和迁移能力,参与结肠癌的发生发展进程。     

SHCBP1基因在结肠癌组织中表达及对结肠癌细胞增殖迁移的影响

目的:探讨SHCBP1基因在结肠癌组织中的表达情况及结肠癌进展过程中的作用。方法:荧光定量PCR、免疫组织化学法检测SHCBP1基因在57例临床结肠癌样本的癌及癌旁组织中表达情况、SHCBP1蛋白表达与定位;构建SHCBP1过表达质粒及合成特异性靶向SHCBP1的siRNA、shRNA并转染结肠癌细胞株,Real-time PCR、Western blot检测细胞株SHCBP1 mRNA和蛋白的表达量,CCK8法、克隆形成检测SHCBP1对结肠癌细胞株增殖能力的影响;划痕实验、Transwell实验检测过表达、干扰后SHCBP1对细胞迁移能力的影响。结果:在57对样本中,结肠癌组织中SHCBP1的表达高于癌旁组织（P<0.001）;SHCBP1主要表达于结肠癌细胞的胞质中。过表达SHCBP1后可显著促进结肠癌细胞株增殖迁移,干扰SHCBP1可抑制结肠癌细胞株增殖迁移。结论:SHCBP1在结肠癌组织中起到促进细胞增殖迁移的作用,在结肠癌的发生发展起到促进作用。