多柔比星葡聚糖纳米粒对卵巢癌细胞SKOV3的杀伤作用及研究

目的制备载多柔比星葡聚糖纳米粒（DOX／DEX-PLA）,观察其药物缓释规律,探讨其对卵巢癌细胞的杀伤作用。方法以双乳化剂蒸发法制备DOX／DEX-PLA载药纳米粒,透射电镜观察纳米粒形态,分光光度法计算载药率,体外药物释放实验考察纳米粒对DOX的缓释作用。MTT法观察对卵巢癌细胞的体外杀伤作用,动物实验观察其体内抑瘤效应。结果DOX／DEX-g-PLA纳米微粒呈球形,粒径约83nm,药物包封率约67．1％。体外释放实验提示,纳米制剂中约50％的药物持续缓慢释放,可持续达7天;体内抑瘤实验显示,纳米缓释制剂间隔给药疗效优于未包载药物每日给药的疗效。结论DOX／DEX-PEA纳米粒可有效抑制卵巢痛细朐的毕长．     

载5-FU免疫纳米微粒的体外释药及其抗癌效应研究

目的：研究生物可降解抗癌药载5-FU免疫纳米微粒的释药特点，鉴定其体外杀伤肿瘤细胞的活性、方法：采用恒温振荡透析法和一阶导数紫外分光光度法测定了载5-FU免疫纳米微粒的药物释放特性；MTT法测定了不同时相载5-Fu免疫纳米微粒对5种肿瘤细胞株的杀伤活性结果：载5-FU免疫纳米微粒具有良好的缓释功能，半量释放期t1/2为10．4天，载5-FU免疫纳米微粒对5种肿瘤细胞株均有较强的杀伤活性，且杀伤活性与作用时间和释药量呈正相关关系，结论：载5-FU免疫纳米微粒中药物分布均匀；载5-FU免疫纳米微粒制备和溶蚀过程对5Fu的药效无影响载5-FU免疫纳米微粒具有良好的缓释功能能在较长时间内维持有效的杀伤活性。     

MAGE-3多肽纳米疫苗对小鼠胃癌种植瘤抑瘤效应研究

背景与目的:纳米颗粒作为疫苗载体可保护抗原免受酶解,增强免疫原性,是一类极具开发潜力的新型疫苗载体。本实验制备负载CD4+CD8+T细胞表位MAGE-3多肽抗原的纳米疫苗,探讨其相关特性及抗肿瘤免疫。方法:利用自组装技术制备多肽/Chit-DC(壳聚糖-脱氧胆酸)载药纳米胶束,透射电镜观察纳米微观形态,荧光分光光度法计算负载率、载药量,并测定药物释放规律。流式细胞仪检测DC(树突状细胞)对药物的吞噬率,酶联免疫斑点实验(ELISPOT)和细胞毒性实验检测MAGE-3多肽纳米疫苗激活机体细胞免疫反应的状况。动物实验观察其体内抑瘤效应。结果:成功制备多肽/Chit-DC纳米胶束,药物包封率约为37%,载药量为17%。载药纳米颗粒中的多肽在pH7.4的PBS中释放缓慢,于48h达释放平台;在2mg/mL溶菌酶溶液中,药物有一定的突释现象,于24h达释放平台。ELISPOT和细胞毒性实验显示MAGE-3多肽纳米疫苗可以激活体内免疫反应而产生针对MAGE-3的CTL,特异性杀伤表达MAGE-3的肿瘤细胞。体内抑瘤实验显示,多肽纳米疫苗组相对肿瘤抑制率为37.81%。结论:MAGE-3多肽/Chit-DC纳米疫苗能有效激活体内的抗肿瘤免疫效应,抑制MFC小鼠前胃癌细胞的生长。     

去甲斑蝥素纳米控释制剂抗肿瘤的实验研究

目的 研究不溶于水的抗癌药物去甲斑螯素纳米控释静脉注射制剂的制备工艺及其体内抗肿瘤作用。方法 以聚乳酸－聚乙醇共聚物（PLGA）作为基质材料,采用超声乳化／溶剂挥发法制备PLGA包载去甲斑蝥的纳米级微粒（NP）,对PLGA－去甲斑螯素－NP进行表征,借助扫描电镜观察微粒形态,通过激光光散射实验测定纳米微粒的粒径分布;利用高效液相色谱（HPLC）测定纳米微粒制剂的载药率及体外释放曲线;以MTT方法做体外杀伤癌细胞实验;进行两种肿瘤瘤谱在不同剂量、给药频度及制剂工艺条件下体内抑瘤实验;委托完成动物急性生试验。结果 经电镜观察PLCA－去甲斑螯素－NP为表面光滑的球形微粒,粒径分布平均值是126．4nm, 呈正态分布,PLGA－去甲斑螯素－NP载药率为36．3％;体外释放实验提示,7天可释放出所载60％左右的药物,12天基本释放完全,没有显著的爆破释放;体内抑瘤实验表明：控释制剂间隔给药 疗效已优于未包载药物每日给药的疗效,量－效关系明显,且毒性低,经静脉途径试用无任何不良反应。结论：PLGA纳米粒子可以作为抗肿瘤药物去甲斑螯素的有效载体,并可成功制备其静脉注射剂型,发挥药物更佳的抗肿瘤作用。     

新型汉防己甲素纳米微球的体外抗肿瘤作用

目的:全面考察我们前期工作中采用mPEG-PCL自行合成的汉防己甲素(Tetradrine,Tet)载药纳米微球的体外抗肿瘤活性,并对其机理进行探讨,并评价mPEG-PCL作为药物载体的生物相容性.方法:通过开环聚合法,制备mPEG-PCL两嵌段聚合物作为载体, 采用乳化-挥发法,制备负载Tet的纳米微球.以MTT法,评价该纳米微球在体外对于胃癌细胞株MKN-28、BGC-823的抗肿瘤活性,并与汉防己甲素裸药相比较.在MKN-28、BGC-823及LO2细胞株上验证空白微球的毒性.采用荧光标记粒子细胞摄取实验,探讨Tet纳米微球抗肿瘤作用不同于裸药的机制.结果:Tet载药微球在作用48h后对于体外培养的肿瘤细胞生长的抑制率与裸药相似,空白微球在极高浓度时,对于肿瘤细胞系及人肝细胞株LO2均无明显毒性.荧光标记粒子的细胞摄取实验证实,微球可通过胞吞作用进入细胞,在细胞内释放药物,这是微球不同于裸药的抗肿瘤机制.结论:Tet微球具有良好的抗肿瘤活性,载体无毒,具有良好的生物相容性.其抗肿瘤作用的机制可能和细胞对于纳米粒子的直接摄取有关,因此可能提高汉防己甲素的体内抗肿瘤效果.     

α-干扰素与5-FU联合作用对肝癌细胞HepG2.2.15生物学特性的影响

目的:探讨α-干扰素(IFN-α)联合5-FU对肝癌细胞HepG2.2.15生物学特性的影响及其作用机制.方法:采用MTT法观察5-FU和IFN-α对HepG2.2.15细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡变化及细胞表面Fas表达变化;RT-PCR检测凋亡抑制基因Bcl-xL表达变化.结果:IFN-α单独应用对HepG2.2.15细胞增殖抑制作用较弱,与5-FU联合应用时对细胞的增殖抑制作用明显增强,P<0.01;两者联合应用对HepG2.2.15细胞周期的影响表现为与对照组和IFN-α、5-FU单用药组相比,联合用药组G0/G1期细胞比率升高(78.33%vs54.95%、60.08%和72.50%),S期比率降低(10.97% vs 29.04%、18.69%和17.44%),P<0.01;经药物处理48h后,联合用药组的细胞凋亡率为(25.08±2.54)%,与对照组及IFN-α和5-FU单独应用组相比,细胞凋亡率明显增高,P<0.01.IFN-α对HepG2.2.15细胞表面Fas表达没有影响,但可协同5-FU明显提高细胞表面Fas的表达,P<0.01.联合用药组HepG2.2.15细胞Bcl-xL的表达较对照组和单药组明显下降,P<0.05.结论:IFN-α和5-FU联合应用可抑制HepG2.2.15细胞的增殖并诱导凋亡,其机制之一可能是调节凋亡抑制基因Bcl-xL的表达,影响内源性凋亡信号传导通路来发挥作用.     

聚乳酸载药纳米微粒制备及其释药效能

背景与目的:医用纳米微粒作为药物传递和控释的载体,是一种新型的控释体系。它与微米粒子的主要区别是超微小体积,能穿过组织间隙并被细胞摄取,可通过毛细血管壁和血脑屏障,因而作为一种新的控释体系而被广泛研究。本研究拟制备聚乳酸纳米微粒,并对其表面形貌、粒径分布、微粒结构、表面元素、体外释放等微粒性能进行应用评估。方法:以可溶性聚乳酸为载体,5鄄氟尿嘧啶(5鄄fluorouracil,5鄄FU)为模型药物,采用超声乳化法制备聚乳酸载纳米微粒,通过电子显微镜观察纳米粒外形结构,用X射线光电能谱仪(X鄄rayphotoelectronspectroscopy,XPS)测定纳米微粒表面元素,用紫外分光光度计测纳米粒载药量和包封率,并测定体外释放量。结果:聚乳酸载纳米微粒呈规则球形,平均粒径(191±17)nm,载药量为15.2%,包封率为45.6%。体外释放实验表明纳米微粒具有缓释特性,在模拟体液中,10天的累积释药达94.27%。结论:以聚乳酸纳米微粒作为5鄄FU载体,可改变5鄄FU在体内的药代动力学行为,具有缓释作用,可制备为静脉用药,延长药物在体内的循环时间,发挥更好的抗肿瘤效应。     

叶酸修饰埃洛石纳米管负载姜黄素对乳腺癌细胞及移植瘤的放射增敏作用

目的:探究叶酸修饰埃洛石纳米管负载姜黄素（HNTs-PEG-FA/Cur）对乳腺癌MCF-7细胞及4T1荷瘤鼠的靶向放射增敏作用。方法:用化学改性和物理吸附的方法合成纳米放疗增敏药物HNTs-PEG-FA/Cur，采用透射电子显微镜、傅里叶红外光谱仪和X射线光电子能谱仪进行形貌和化学组分表征，MTT法检测不同浓度纳米药物对人乳腺癌MCF-7细胞活性的影响，流式细胞术、活/死细胞荧光染色和克隆形成实验评估HNTs-PEG-FA/Cur联合放疗对MCF-7细胞的促凋亡作用和放射增敏作用。最后，通过建立乳腺癌4T1细胞小鼠移植瘤模型，评估联合治疗对小鼠肿瘤体积生长的抑制效果。结果:成功将姜黄素负载于叶酸修饰的HNTs管腔内。所制备的HNTs-PEG-FA/Cur在等效姜黄素浓度为5 μmol/L时对MCF-7细胞无明显毒性，并能有效增强X射线诱导的细胞凋亡和杀伤作用（增敏比为1.25）。体内抑瘤实验结果显示HNTs-PEG-FA/Cur联合放疗对小鼠肿瘤生长抑制率（56.75%）>单独射线组（24.16%）>单独药物组（6.67%）。结论:HNTs-PEG-FA作为姜黄素的新型纳米药物载体，能有效提高姜黄素生物利用度并且对乳腺癌具有靶向放射增敏潜力。     

瘤内原位转导UPRT基因治疗小鼠胃癌的实验研究

背景与目的:5-FU是临床上重要的化疗药物,但总体疗效有限,如何提高其抗癌疗效一直是临床上亟待解决的难题。本研究采用基因治疗的原理与方法,探讨UPRT(uracilphosphoribosyltransferase)基因对5-FU杀伤效应的增敏作用。方法:采用PCR技术从大肠杆菌K12基因组中扩增UPRT基因,并构建pLXSN逆转录病毒表达载体,进一步转染小鼠胃癌细胞株MFC。采用MTT法检测转导UPRT基因前后MFC对5-FU敏感性的变化。建立615小鼠胃癌皮下移植瘤模型,瘤内反复多次注射携带UPRT基因的浓缩、纯化的逆转录病毒,同时腹腔内给予5-FU,观察抑瘤效果。结果:体外MTT法检测结果显示,转导UPRT基因后可使MFC对5-FU的敏感性提高约17.26倍。以逆转录病毒介导UPRT基因瘤内原位转导,同时联合应用5-FU进行治疗,结果肿瘤生长明显受抑(P<0.005),抑瘤率为87.18%。结论:UPRT基因修饰小鼠胃癌细胞株MFC,能明显提高MFC对5-FU杀伤的敏感性,以逆转录病毒载体介导UPRT基因肿瘤原位基因转导,同时联合应用5-FU,能获得良好的抑瘤效应。     

Polyporus sp.MO5多糖的抗肿瘤作用

目的研究真菌Polyporus sp.M05多糖PSM-a体内对荷瘤小鼠S180的抑瘤作用及其机制.方法 MTT法检测PSM-a体外对S180细胞株的增殖抑制作用.建立S180小鼠模型,灌胃治疗,每日检测肿瘤体积并计算瘤体比和抑瘤率.实验结束后处死小鼠,MTT比色法测定小鼠自然杀伤(NK)细胞及淋巴因子活化杀伤细胞(LAK)的杀伤活性.HE染色检测肿瘤组织细胞坏死情况.结果 PSM-a在体外能抑制S180细胞生长;在体内能显著降低荷瘤小鼠的瘤重和瘤体比,250μg/ml的PSM-a对肿瘤抑制率高达80%以上;PSM-a能促进NK细胞及LAK细胞的杀伤活性;病理切片显示PSM-a作用后引起肿瘤组织坏死.结论 PSM-a对S180荷瘤小鼠肿瘤的生长有明显的抑制作用,其机制可能与提高机体免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性有关.     

5-FU核-壳型共聚物纳米胶束的制备及其体内释药的研究

背景与目的:5-氟尿嘧啶(5-FU)属抗代谢类的抗癌药,其在体内半衰期仅为5min,临床上为了维持长时间的稳态浓度,往往采取持续静脉滴注(48h、72h、28d)的给药方式,因此,有必要开发新型5-FU缓释制剂。本研究的目的是探讨两亲嵌段共聚物聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯(PEG-PBLG)为载体的5-FU核-壳型缓释型纳米胶束的制备、形态特征及体内释药特性。方法:用阴离子聚合法制备PEG-PBLG纳米聚合物;透析法制备5-FU纳米胶束;透射电镜、扫描电镜观察5-FU胶束形态;紫外分光光度法测定载药量;高效液相色谱法检测5-FU纳米胶束在体内的释药特性。结果:PEG-PBLG包裹的5-FU纳米胶束呈圆形或椭圆形,直径约为180～250nm,中间药库区大小约为200nm,周围亲水区厚度约为30nm,载药量为(29.500±0.015)%。5-FU对照组在体内呈一室模型,半衰期(t1/2)仅为5.3min,最高浓度(Cmax)17047.3μg/L,峰浓度时间(Tmax)为给药后即刻,浓度-时间曲线下面积(AUC)为6263.7μg/(L·min);而5-FU/PEG-PBLG纳米胶束注射入体内后呈典型的纳米胶束释药模型即突释-缓释模型,t1/2为63.2min,Cmax为4563.5μg/L,Tmax为1.25h,AUC为5794.5μg/(L·min)。5-FU/PEG-PBLG纳米胶束比普通的5-FU制剂Tmax长(P<0.01),Cmax较低(P<0.01),t1/2较长(P<0.01),而同样剂量5-FU和5-FU/PEG     

体外联合应用NS-398与5-FU抑制肝癌HepG2细胞生长的研究

目的研究体外联合应用选择性COX-2抑制剂NS-398与5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌细胞生长的抑制作用.方法应用MTT法观察NS-398、5-FU及NS-398 5-FU对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用;通过荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪研究NS-398、5-FU及NS-398 5-FU对HepG2的凋亡诱导作用.结果NS-398和5-FU对肝癌细胞HepG2的生长有显著抑制作用,NS-398和5-FU联合应用时抑制效应较单一应用更为明显.透射电镜、荧光显微镜观察和流式细胞仪检测显示,HepG2细胞经NS-398、5-FU及NS-398 5-FU处理后出现典型的细胞凋亡形态变化和Sub-G1峰.结论联合应用选择性COX-2抑制剂NS-398有增强5-FU抑制肝癌细胞生长的作用.     

Synergistic effect of 5-fluorouracil and the flavanoid oroxylin A on HepG2 human hepatocellular carcinoma and on H22 transplanted mice

Aim

To investigate the synergistic inhibitory effects of the combination of 5-fluorouracil (5-FU) with the natural flavanoid oroxylin A on human hepatocellular carcinoma cells HepG2 in vitro and on transplanted murine hepatoma 22 (H₂₂) tumors in vivo and the preliminary mechanisms.

Methods

The inhibitory effects of 5-FU combined with the natural flavanoid oroxylin A in vitro were detected by MTT assay and the effects in vivo were investigated by transplanted H₂₂ mice model. DAPI staining and Annexin V/propidium iodide (PI) double staining were used to detect the cell morphological changes and apoptosis. The mRNA levels of thymidine synthetase (TS) and dihydropyrimidine dehydrogenase (DPD) in HepG2 cells after oroxylin A and 5-FU combination treatment were observed by quantitative real-time PCR. Western blotting assay was used to reveal the expressions of apoptotic-inducing proteins P53, cleaved PARP, COX-2, Bcl-2, and pro-caspase3.

Results

Oroxylin A in combination with 5-FU presented synergistic effect (CI < 1) on HepG2 cells in vitro when the inhibitory rate was higher than 7.5%. The inhibitory rate on H₂₂ murine solid tumor in vivo in the combination group was higher than monotherapy. 5-FU combined with oroxylin A exerted stronger apoptotic induction in HepG2 cells than either single drug treatment. Quantitative real-time PCR discovered the downregulation of TS mRNA and DPD mRNA in HepG2 cells after combination treatment. Western blotting assay revealed oroxylin A enhanced 5-FU-induced apoptosis in HepG2 cells by elevating the expressions of apoptotic-inducing proteins P53 and cleaved PARP and decreasing the expression of apoptotic-inhibitory proteins COX-2, Bcl-2, and pro-caspase3.

Conclusion

The anti-hepatocellular carcinoma effects in vitro and in vivo of 5-FU and oroxylin A combinations were synergistic and oroxylin A increased the sensitivity of HepG2 cells to 5-FU by modulating the metabolic enzymes of 5-FU and apoptotic-related proteins.     

Manumycin抗人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的作用及其对肿瘤血管生成的影响

背景与目的:法尼基转移酶抑制剂manumycin体内外抗胰腺癌、结肠癌和退行性甲状腺癌的研究已见报道。我们先前的体外研究发现,manumycin能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖通路和生存通路。本研究拟探讨manumycin在裸小鼠体内的抗肝癌作用及其对肿瘤的血管生成的影响。方法:建立人肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤模型,接种后第8天按肿瘤大小随机分为5组:生理盐水对照组(20ml/kg)、阳性药对照组(CTX,25mg/kg)、0.1%Me2SO阴性对照组(20ml/kg)、manumycin低剂量组(2.5mg/kg)和高剂量组(5mg/kg)。测量各组肿瘤体积观察manumycin的体内抗瘤作用。采用免疫组化方法观察移植瘤的微血管密度(MVD),应用Westernblot法检测VEGF和b鄄FGF的蛋白水平变化,RT鄄PCR法检测VEGFmRNA的水平。结果:manumycin低剂量组和高剂量组的平均肿瘤体积比(V/V0)分别为0.68±0.09和0.59±0.04(n=5),与0.1%Me2SO阴性对照组(V/V0为1.38±0.21)相比,manumycin处理组肿瘤体积明显缩小(P<0.01)。与对照组相比较,manumycin处理组肿瘤组织MVD明显降低(P<0.01)。manumycin能明显抑制HepG2细胞及HepG2细胞裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达,而对b鄄FGF蛋白的表达影响不大。manumycin也明显抑制了HepG2细胞裸小鼠移植瘤VEGFmRNA的表达。结论:manumycin能明显抑制人肝癌HepG2细胞裸小鼠移植瘤的生长。下调VEGF表达,抑制肿瘤的血管生成可能是manumycin抗肿瘤作用的重要机理之一。     

氟尿嘧啶和奥沙利铂在胃癌中的体外化疗敏感性检测

目的：探讨氟尿嘧啶（5-FU）和奥沙利铂（OX）在胃癌中的体外化疗敏感性。方法：纳入病理确诊并自愿接受检测的胃癌患者,采用ATP肿瘤化疗敏感性检测法（ ATP-TCA）检测新鲜手术标本对5-FU和OX的体外化疗敏感性。结果：纳入27例,男性21例、女性6例,中位年龄60．0岁,远侧部胃癌14例（51．9%）,低分化及印戒细胞癌共20例（74．1%）,TNM Ⅲ＋Ⅳ期21例（77．8%）。 ATP-TCA检测显示5-FU＋OX在各药物浓度的肿瘤生长抑制率均显著高于5-FU或OX（P〈0．05）,5-FU＋OX的抑制曲线下面积显著高于5-FU或OX（P〈0．05）;而其化疗敏感指数、IC90和IC50显著低于5-FU或OX （ P〈0．05）。5-FU、OX和5-FU＋OX的体外化疗敏感性依次为18．5%、14．8%和55．6%,5-FU＋OX的敏感性显著高于5-FU或OX（5-FU＋OX vs．5-FU：P=0．001和5-FU＋OX vs． OX：P=0．003）。 Logistic回归分析显示5-FU的敏感性与临床病理特征无显著相关性,而OX和5-FU＋OX的敏感性分别与Borrmann分型（OR=7．570,P=0．025）和肿瘤位置（OR=3．427,P=0．019）有显著相关性。结论：5-FU＋OX在胃癌中显示出较高的体外化疗敏感性,但其与体内疗效的相关性有待进一步临床观察。     

UPRT/5-FU前药转换酶系统对小鼠胃癌治疗的实验研究

目的　探讨UPRT/ 5 FU前药转换酶系统对小鼠胃癌细胞MFC的杀伤效应。方法　采用PCR技术从大肠杆菌K12基因组中扩增UPRT基因 ,并构建pLXSN逆转录病毒表达载体 ,进一步转染MFC细胞。采用MTT法检测转导UPRT基因前后 ,MFC对 5 FU的敏感性的变化。建立 6 15小鼠胃癌皮下移植瘤模型 ,腹腔内给于 5 FU ,观察治疗效果。结果　体外MTT法检测结果显示 ,转导UPRT基因后可使MFC对 5 FU的敏感性提高约 17.2 6倍。动物实验的结果表明 ,转导UPRT基因不影响MFC的致瘤性 ;经 5 FU治疗后 ,转UPRT基因的肿瘤 ,生长明显受抑 (P <0 .0 0 0 5 ) ,抑瘤率为 89.6 2 %。结论　UPRT基因修饰小鼠胃癌细胞株MFC ,能明显提高MFC对 5 FU杀伤的敏感性 ,增强 5 FU的抗瘤效应。     

Rosiglitazone enhances 5-fluorouracil-induced cell growth inhibition in hepatocellular carcinoma cell line Hep3B

Background and Objective: Rosiglitazone is a peroxisome proliferators-activated receptor γ (PPARγ) ligand, which inhibits tumor growth by activating PPARγ signaling pathways. Fluorouracil (5-FU) is one of the commonly used chemotherapeutic drugs. However, patients develop drug resistance of 5-FU over time. The aim of this study was to investigate whether rosiglitazone can enhance 5-FU-induced cell growth inhibition and to explore its potential mechanisms.Methods: Cell viability was measured using MTT assay....     

三维与二维培养肝癌HepG2细胞的药物敏感性及生物学特性比较

目的：观察肝癌HepG2细胞株在不同培养模式下的生物学性质、耐药性。方法：采用琼脂糖预铺底法建立体外三维细胞模型,通过倒置显微镜、扫描电镜等方法证实三维细胞模型的成功建立;采用透射电镜、流式细胞术等技术方法,比较二维培养及三维培养细胞中细胞间连接、细胞周期、细胞凋亡的差异;采用MTT法获得不同培养模式下药物5-FU、DDP作用的细胞抑制率。结果：三维培养HepG2细胞第7天可形成直径160μm左右的多细胞球,悬浮生长;二维培养的HepG2细胞贴壁生长。三维培养与二维培养相比,存在细胞周期阻滞：G1期细胞增多[（59.23±1.28）%vs（39.45±1.21）%],G2期细胞减少[（12.47±0.14）%vs（36.15±1.09）%],早期自发凋亡细胞比例减少[（1.62±0.50）%vs（6.29±1.61）%],具有统计学差异（P〈0.05）;S期细胞比例变化不大[（28.30±0.93）%vs（24.40±0.96）%,P〉0.05],晚期自发凋亡坏死细胞比例变化不大[（0.65±0.17）%vs（0.66±0.29）%,P〉0.05]。二维培养细胞间连接少见,三维培养细胞连接结构丰富,可见桥粒连接、中间连接及紧密连接结构;三维培养下5-FU、DDP药物的细胞抑制率明显降低（与二维培养相比）。结论：经倒置显微镜和扫描电镜观察证实肝癌HepG2细胞体外三维培养模型成功建立,在三维培养条件下HepG2细胞对5-FU、DDP表现出多细胞耐药;与二维培养相比,三维培养的细胞间的相互作用有明显增强,且多细胞球生物学特性主要表现为细胞周期阻滞和早期凋亡减少,推测其可能与多细胞耐药有关。     

CIK细胞联合贝伐单抗对肝癌HepG2细胞的体内外抗瘤活性

目的:探讨细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞联合贝伐单抗(bevacizuma)对肝癌HepG2细胞的体内外抗肿瘤活性及其作用机制.方法:提取健康供血者外周血的单个核细胞(PBMC),加入多种细胞因子促进CIK细胞成熟,在流式细胞仪上进行CIK细胞的免疫表型分析.CIK细胞与贝伐单抗单独或联合作用于HepG2细胞后,利用CCK-8测定其对HepG2细胞体外增殖活性的影响;利用侵袭小室(Transwell)和划痕实验测定其对HepG2细胞侵袭迁移活性的影响;Western blotting检测HepG2细胞Akt和Erk信号通路相关蛋白磷酸化的变化.建立HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分为生理盐水组、CIK组、贝伐单抗组及CIK细胞联合贝伐单抗组,给药28 d后处死裸鼠,剥取瘤体,免疫组化法检测瘤组织CD31及Ki67蛋白的表达.结果:提取健康人PBMC诱导14 d后,CIK细胞表型分析显示CD3+ CD56+细胞扩增达(36.33±2.58)％.与单独治疗组比较,联合组对HepG2细胞的抗肿瘤增殖活性显著增强(P ＜0.05);CIK细胞和贝伐单抗两药联合比单独给药组对HepG2细胞的侵袭[(75.6 ±9.53) vs (304.8 ±45.73)、(359.8 ±38.10)个,P＜0.01]和迁移[(29.35±8.14)％vs (55.07±6.27)％、(60.50±9.73)％,P＜0.05]能力的抑制更强;CIK细胞和贝伐单抗两药单独及联合都能抑制Akt和Erk的磷酸化;CIK联合贝伐单抗组可显著抑制移植瘤生长以及移植瘤组织平均血管密度和Ki67表达,与单独治疗及对照组细胞比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CIK联合贝伐单抗在体内外对HepG2细胞增殖、侵袭、迁移均有抑制作用,且优于单独治疗组.     

Antitumor effect of intratumoral administration of fluorouracil/epinephrine injectable gel in C3H mice

Fluorouracil/epinephrine injectable gel (5-FU/epi gel) was evaluated in vitro for its drug-release profile characteristics and in a mouse tumor model for its antitumor effectiveness. In vitro chemosensitivity studies with 5-FU in RIF-1 fibrosarcoma cells showed less than 1 log cell kill at 1 mM after 2 h of exposure. Increasing the exposure time to 24 h resulted in greater cell killing ( 2.5 log cell kill at 0.5 mM), suggesting that sustained drug levels in tumors would result in an increased efficacy outcome in vivo. A 5-FU/epi injectable gel was designed, providing drug release in vitro of 50% by 4 h and of 80% by 24 h. The retention of 5-FU in RIF-1 mouse tumors was determined after intratumoral administration of 5-FU/epi gel or various combinations of the formulation components. Area-under-the-curve (AUC_{0–24 h}) calculations resulted in an AUC value of 146.4% h for the 5-FU/epi gel formulation as compared with 45.7% h for 5-FU solution. Tumor growth was significantly delayed (P<0.05) with the 5=FU/epi gel (60 mg/kg) as compared with 5-FU solution given intratumorally or systemically. A fluorouracil dose of 150 mg/kg in the 5-FU/epi gel given weekly for 13 weeks was not lethally toxic, whereas the same dose given as drug solution was 100% lethal, suggesting that the therapeutic index for 5-FU in the gel formulation may be much greater than that for aqueous drug solution delivered intratumorally.