印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因-生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb 10与胚胎发育以及辅助生殖的关系.方法应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达.结果4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达.结论印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关.     

黄体生成素在人类卵母细胞和种植前胚胎的表达

[目的]研究人类卵母细胞和种植前胚胎黄体生成素的表达.[方法]应用免疫荧光标记激光共聚焦显微镜方法对不成熟和成熟卵母细胞及种植前胚胎进行黄体生成素表达的观察.[结果]人类卵母细胞和种植前胚胎均存在黄体生成素的表达.不成熟和成熟卵母细胞及2～8细胞期种植前胚胎阶段主要分布在细胞膜;桑葚胚和囊胚阶段分布在细胞膜和细胞浆.多精受精组和正常受精组、新鲜胚胎组和冻融胚胎组黄体生成素的表达没有差异.[结论]人类卵母细胞和种植前胚胎存在黄体生成素的表达.黄体生成素可能以旁或/和自分泌方式影响人类卵母细胞和胚胎发育,并在种植过程胚胎与母体子宫内膜的对话中起直接作用.     

关于人类胚胎种植前遗传学诊断的伦理问题

人类辅助生殖技术的广泛应用,为广大不孕不育患者带来了福音,但同时也引起了一系列相关伦理讨论.胚胎种植前遗传学诊断作为一项新兴辅助生殖技术,同样备受关注.     

印迹基因SGCE在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的 探讨印迹基因SGCE在原发性肝细胞癌中的表达及其意义.方法 构建肝癌组织的基因表达谱文库,并对肝癌和正常肝脏组织基因表达谱的数据进行比较分析,寻找差异表达基因.收集临床组织样本,应用荧光定量PCR方法,检测肝癌和相应癌旁组织中SGCE和PEG10基因的表达水平.结果 基因表达谱数据提示,印迹基因SGCE的表达水平...     

印迹基因PEG10在胃腺癌组织中的表达及意义

目的：研究印迹基因PEG10在胃癌及癌旁组织中的表达情况,探讨其对胃癌细胞生长的影响。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测40例胃癌、癌旁组织及6例正常胃组织中印迹基因PEG10 mRNA表达;构建表达PEG10质粒,并将其转染到不表达内源性PEG10的胃癌细胞系MKN45中,应用噻唑蓝比色分析法（MTT）,测定转染PEG10后MKN45细胞的生长情况。结果：20例胃癌组织中9例（45.0%）PEG10表达阳性,对应的癌旁组织仅有2例（10.0%）表达阳性,2组间PEG10表达率比较差异有显著性(Ｐ<0.05),正常胃组织无PEG10表达;胃癌细胞系MKN45无内源性PEG10表达,经质粒转染PEG10基因后的MKN45细胞的生长速度加快。结论：印迹基因PEG10在胃癌组织中高表达,具有促进胃癌细胞生长的作用。     

辅助生殖技术子代印迹基因IGF2与H19mRNA表达的初步研究

目的 通过研究辅助生殖技术(ART)子代印迹基因IGF2mRNA与H19的表达水平及其与出生情况的关系,初步评估ART操作对子代的生长发育情况及出生缺陷的影响,以探索ART操作的安全性.方法 以58例ART子代(40例异卵双胎与18例单胎)作为研究组,同期32例自然妊娠子代(30例单胎与2例异卵双胎)作为对照组,记录母龄、分娩孕周、出生体重及有无出生缺陷等,收集新生儿脐带血,使用real-time PCR技术检测其印迹基因IGF2mRNA与H19的表达水平.结果 所有纳入研究的新生儿均未发现有出生缺陷.研究组与对照组比较,印迹基因IGF2mRNA的表达差异有统计学意义(P＜0.05),主要表现为ART双胎与自然妊娠单胎比较差异有统计学意义(P＜0.05),单胎之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);研究组与对照组H19表达差异有统计学意义(P＜0.05),但ART双胎/单胎与自然妊娠单胎比较H19表达差异无统计学意义.出生体重与H19 表达水平呈负相关 (P＜0.05);分娩周数与IGF2表达水平呈负相关 (P＜0.05);印迹基因IGF2与H19表达水平呈正相关 (P＜0.05).结论 ART双胎妊娠率较高,继而引起早产并低体重儿发生率较高,印迹基因表达水平的改变亦可能与此有关,但并未增加出生缺陷的风险,对于ART操作的远期安全性需要做更进一步的研究.     

辅助生殖技术子代印迹基因IGF2与H19表达的初步研究

目的：通过研究辅助生殖技术（ART）子代印迹基因IGF2mRNA与H19的表达水平及其与出生情况的关系,初步评估ART操作对子代的生长发育情况及出生缺陷的影响,以探索ART操作的安全性 。方法：以58例ART子代（40例异卵双胎与18例单胎）作为研究组,同期32例自然妊娠子代（30例单胎与2例异卵双胎）作为对照组,记录母龄、分娩孕周、出生体重及有无出生缺陷等,收集新生儿脐带血,使用real-time PCR技术检测其印迹基因IGF2mRNA与H19的表达水平 。结果：所有纳入研究的新生儿均未发现有出生缺陷。研究组与对照组比较,印迹基因IGF2mRNA的表达差异有统计学意义（p<0.05）,主要表现为ART双胎与自然妊娠单胎比较差异有统计学意义（p<0.05）,单胎之间比较差异无统计学意义（p>0.05）; 研究组与对照组H19表达差异有统计学意义（p<0.05）,但ART双胎/单胎与自然妊娠单胎比较H19表达差异无统计学意义。出生体重与H19 表达水平呈负相关 （p<0.05）;分娩周数与IGF2表达水平呈负相关 （p<0.05）;印记基因IGF2与H19表达水平呈正相关 （p<0.05）。结论：ART双胎妊娠率较高,继而引起早产并低体重儿发生率较高,印迹基因表达水平的改变亦可能与此有关,但并未增加出生缺陷的风险,对于ART操作的远期安全性需要做更进一步的研究。     

印记基因H19在不同质量精子和胚胎中的甲基化状态

目的 对印记基因H19在三种不同质量的精子中的甲基化状态以及精卵结合后形成胚胎的甲基化状态进行比较, 初步探索精子甲基化状态与受精后胚胎甲基化状态的关系.方法 收集在云南省第一人民医院生殖医学科行IVF-ET治疗中废弃的精子91份和D3期低质量胚胎171份, 依据WHO第5版根据精子参数将精子样本分为3组, 分别分析3组的精子及受精后胚胎H19的甲基化状态.结果 B组在精子中和胚胎中H19甲基化状态异常比例显著高于另外2组 (P<0.05) .结论 印记基因H19甲基化状态异常主要集中在异常参数精子组中, 提示其异常状态与精子质量降低有关;通过IVF、ICSI受精后的胚胎都出现同等比例的异常状态, 没有显著差异;异常精子的胚胎未出现异常, 这可能与胚胎自身的自我修复功能有关;而个别正常精子受精后的胚胎出现甲基化印记异常的原因可能与体外培养条件有关, 也有可能与卵子质量本身有关.     

胚胎种植前遗传学检测助孕妊娠结局的影响因素研究

背景 育龄期女性胚胎着床失败及流产的最常见原因是胚胎异常,但移植经胚胎种植前遗传学检测(PGT)筛选后的正常胚胎后,仍出现种植失败或流产的原因目前并没有形成统一的结论。目的 分析PGT助孕后种植失败及流产的影响因素。方法 回顾性分析2018年12月至2021年2月在安徽医科大学第一附属医院生殖中心行PGT助孕的329例患者的临床资料,根据患者是否临床妊娠分为临床妊娠组(n=218)和种植失败组(n=111),并将临床妊娠组患者根据妊娠结局分为活产亚组(n=175)和流产亚组(n=43)。比较临床妊娠组和种植失败组,活产亚组和流产亚组的一般情况、促排卵及体外胚胎发育情况。采用多因素Logistic回归分析探讨PGT患者种植失败及流产的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析多因素Logistic回归分析筛选出的影响因素对PGT患者发生种植失败及流产的预测价值。结果 多因素Logistic回归分析显示,既往流产次数≥2次〔OR=4.032 0,95%CI(2.423 0,6.710 0)〕、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低〔OR=3.890 0,95%CI(1.455 0,10...     

实时荧光定量PCR检测传代培养细胞Grb10的表达

目的 建立一种可靠的Grb10印迹基因实时荧光定量PCR方法,检测传代培养鼠尾成纤维样细胞中Grb10表达的差异.方法通过实时荧光PCR,选择合适的"相对标准品"绘制相对标准曲线,检测传代培养细胞中印迹基因Grb10的表达水平.结果相对标准曲线有较好的线性(r=0.999及0.984);实时荧光定量PCR方法检测出随着细胞培养代数的增加印迹基因Grb10表达水平上升.结论双标准曲线的实时荧光定量PCR法用于检测Grb10的表达准确可靠;传代培养可能影响鼠尾成纤维样细胞中印迹基因Grb10的表达水平.     

Trophinin在人卵母细胞及着床前胚胎细胞上的表达与意义

目的 研究trophinin在人卵母细胞、着床前胚胎细胞上的表达与意义.方法 采用间接免疫荧光技术、应用激光扫描共聚焦显微镜对9个卵母细胞、16个分裂胚胎及12个囊胚进行了荧光检测.结果 trophinin蛋白在人卵母细胞、分裂胚胎以及囊胚上均有表达,且表达逐渐显著增强(P＜0.05).结论 人囊胚可能通过trophinin与表达有相同粘附分子的着床窗期子宫内膜发生同种粘附,从而在人胚胎着床过程中起重要作用.     

玻璃化冻融囊胚助孕妊娠妇女娩出胎盘Grb10表达分析研究

目的 对玻璃化冻融囊胚助孕妊娠妇女娩出胎盘中生长因子受体结合蛋白10(Grb10)表达进行分析,评价其安全性.方法 收集2012年1月至2014年5月在福建省妇幼保健院产科门诊玻璃化冻融囊胚助孕妊娠的妇女(观察组)50例及同期自然妊娠妇女(对照组)50例病例数据和胎盘标本.采用免疫组织化学、Western blot检测胎盘Grb10蛋白的表达,Real-time PCR检测Grb10 mRNA表达.对两组妊娠妇女的产科结局及胎盘Grb10的表达进行比较分析.结果 两组孕龄、胎龄,胎儿性别、体质量、身长、头围、腹围比较差异均无统计学意义(P＞0.05),娩出胎盘面积、胎盘质量比较差异有统计学意义(P＜0.05).两组胎盘组织Grb10蛋白表达率、表达强度、免疫组织化学评分比较差异均无统计学意义(P＞0.05).Real time PCR、Western blot分析结果进一步显示两组胎盘组织中Grb10 mRNA与蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 玻璃化冻融囊胚助孕有可能会增加娩出胎盘的面积与质量.但发育相关分子Grb10在胎盘的表达未见明显改变.     

人结直肠癌组织中EGFR/Grb2/p-mTOR/VEGF的表达及意义

目的:观察人结直肠癌组织磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)、表皮生长因子受体(EGFR)、生长因子受体结合蛋白2 (Grb2)和血管内皮生长因子(VEGF)等的表达,并探讨其可能的临床意义。方法:构建含有185例结直肠癌标本的组织芯片,免疫组化法检测结直肠癌组织及癌旁组织中EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF的表达,并分析不同结直肠癌临床病理学特征下(如年龄、性别、浸润深度、淋巴转移、临床分期和分化程度)各自的表达情况,探讨可能的临床意义。结果:EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF在结直肠癌旁组织中呈少量表达或不表达,在结直肠癌组织中的表达率分别为21.1%、44.9%、42.2%和54.1%,明显高于癌旁组织(P<0.05)。结直肠癌患者不同性别、年龄、肿瘤分化程度下EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF表达率无统计学差异;不同浸润深度和临床分期下EGFR的表达率有统计学差异(P<0.05);不同浸润深度、淋巴转移和临床分期下p-mTOR、VEGF表达率均有统计学差异(P<0.05)。结直肠癌组织EGFR/Grb2/p-mTOR/VEGF蛋白两两间均有一定的相关性(r=0.245~0.567,P<0.05)。结论:EGFR、Grb2、p-mTOR和VEGF表达与结直肠癌的发生、发展相关,值得进一步研究以作为结直肠癌肿瘤靶向治疗新的作用靶点。     

胰岛素样生长因子在植入前胚胎细胞中的表达

目的 :研究胰岛素样生长因子 1,2 (IGF 1,IGF 2 )在植入前胚胎的表达及其生物学意义。方法 :采用原位杂交法 ,检测人植入前胚胎细胞IGF 1,IGF 2mRNA的表达情况。结果 :IGF 1及IGF 2mRNA于不同阶段的植入前胚胎细胞中表达不同 ,各表达量有差异。结论 :不同阶段的植入前胚胎细胞分泌IGF 1、IGF 2 ,参与早期人类胚胎的生长、发育。     

胰岛素样生长因子-1受体在植入前胚胎细胞中的表达

目的 :研究胰岛素样生长因子 1受体 (IGF 1R)在植入前胚胎的表达及其生物学意义。方法 :采用免疫组化ABC法 ,检测人植入前胚胎细胞IGF 1R的表达情况。结果 :不同阶段的植入前胚胎细胞均有IGF 1R表达 ,各表达程度无明显差异。结论 :IGF 1R在植入前胚胎中均有表达 ,提示IGF 1R可结合IGF 2、IGF 1,参与人植入前胚胎的生长、发育和着床。     

两例Silver-Russell综合征的临床特征和H19印迹基因甲基化分析

目的探讨Silver-Russell综合征的遗传学异常,提高对该病的认识并指导临床诊断。方法以2例疑似Silver-Russell综合征患者为研究对象,详细采集病史并进行归纳,同时取其外周血用基因组DNA试剂盒提取DNA并用亚硫酸氢盐转化处理,然后用PCR扩增目标序列,采用焦磷酸测序法检测11P15区的H19印迹基因上游的DMR区的甲基化状态。另收集10例健康儿童外周血标本作为对照组。结果2例患儿的临床特征及辅助检查均符合Silver-Russell综合征临床诊断,所测的H19印迹基因上游的DMR区6个甲基化位点的甲基化水平分别为16％～21％和15％-23％,该区域均表现出低甲基化状态;而正常对照组的6个甲基化位点的甲基化水平为48％～55％,明显高于病例组。结论Silver-Russell综合征临床表现多样,运用焦磷酸测序技术联合甲基化分析操作方便、定量准确,可考虑对临床诊断或疑似Silver-Russell综合征病例运用该技术进行检测。