免疫球蛋白超家族分子CD54在各种恶性淋巴增殖性疾病的表达

目的　为了探讨免疫球蛋白超家族分子CD5 4(细胞间粘附分子 1)在恶性淋巴增殖性疾病的表达及其意义。方法　用免疫荧光方法检测 2 4例急性淋巴细胞白血病 (acutelymphoblasticleukemia ,ALL) ,15例多发性骨髓瘤 (multi plemyeloma ,MM) ,2 6例非霍杰金氏淋巴瘤 (non Hodgkinslymphoma ,NHL) ,4例慢性淋巴细胞白血病 (chroniclymphocyticleukemia ,CLL) ,4例霍杰金氏淋巴瘤 (Hodgkinslymphoma)及 16例正常人造血干细胞CD+ 3 4细胞表面CD5 4的表达。结果　( 1)除多发性骨髓瘤、霍杰金氏淋巴瘤外 ,非霍杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病细胞膜表面CD5 4表达低于正常造血细胞CD+ 3 4细胞 (分别为 12 .9± 5 .7%、10 .2± 2 .8%、11.2± 5 .8%VS47.7± 12 .1%)。 ( 2 )细胞间粘附分子 1与细胞类型有关 ,在T ALL表达明显低于B ALL表达。 ( 3) )细胞间粘附分子 1与非霍杰金氏淋巴瘤 (NHL)部分临床特征有相关性 ,有结外病变、骨髓浸润、Ⅳ期患者表达水平下降 (P <0 .0 5 )。结论　不同的恶性淋巴增殖性疾病粘附分子CD5 4的表达存在不同的改变并与NHL临床特征有关。     

干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达

目的：检测干细胞相关标志物在卵巢癌SKOV3细胞系侧群（side population,SP）细胞和非侧群（Non-SP）细胞中的表达差异,确定卵巢癌干细胞特异性标志物。 方法： Hoechst 33342染色检测SKOV3细胞中SP细胞的比例,流式细胞术检测SKOV3细胞的SP和Non-SP细胞中干细胞标志物CD133、CD117、CD44、ABCG2、ALDH1 的表达情况,荧光定量PCR检测SP和Non-SP细胞中 ABCG2、ALDH2、NANOG、OCT4、SOX2、CD133、CD117 mRNA的表达水平。 结果： SKOV3细胞中SP细胞比例为(1.56±0.35)%。 ALDH1、ABCG2在SP细胞中表达率分别为（87.3±5.76）%、（29.48±4.43）%,在Non-SP的表达率分别为（5.32±0.47）%、（3.01±1.69）%,差异有统计学意义（ P <0.01）;CD44在这两种细胞亚群中的表达率均高于99%（ P >005）;CD133、CD117在这两种细胞亚群中均不表达。 ALDH1、ABCG2、 NANOG、OCT4和SOX2 mRNA在SP细胞中的表达分别是Non-SP细胞的21.03倍（ P =0.001）、3.14倍（ P =0.001）、23.94倍（ P =0.001）、10.73倍（ P =0.009）和21.46倍( P =0001), CD133、CD117 mRNA在两种细胞亚群中均不表达。 结论： 人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞亚群, ALDH1、ABCG2和NANOG、OCT4、SOX2 mRNA可能是卵巢癌干细胞标志物,为诊断及治疗卵巢癌提供了潜在的靶点。     

卵巢癌细胞株SKOV-3ipl缺氧与凋亡及其与细胞周期的关系

目的 :研究卵巢癌细胞株SKOV 3ipl细胞在缺氧条件下的凋亡与适应性及其与细胞周期的关系。 方法 :贴壁培养卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧条件下培养 ,于 0小时、8小时、16小时、2 4小时分别收集细胞 ,应用FITCAnnexinV/PI双染色 ,PIDNA染色流式细胞检测细胞凋亡及细胞周期的改变。结果 :缺氧培养 0小时、8小时、16小时、2 4小时凋亡细胞百分率分别为 (0 32± 0 0 1) % ,(8 2 9± 0 87) % ,(4 2 3± 0 75 ) % ,(0 5 9± 0 0 8% )。8小时及 16小时缺氧与 0小时相比 ,凋亡增加 (P值 <0 0 1) ;2 4小时后凋亡与 0小时无差异 (P >0 0 5 )。各时相细胞周期的变化表现为 :G1期阻滞 ,S期缩短 (8小时及 16小时缺氧与 0时相比 ,P <0 0 1) ,缺氧 2 4小时后 ,各细胞周期与 0小时相比无差异。结论 :卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧培养 8到 16小时内发生凋亡与细胞周期G1期阻滞 ,2 4小时后对缺氧耐受、细胞周期阻滞解除 ;SKOV 3ipl细胞对缺氧的耐受及抗凋亡与细胞周期阻滞无关。     

卵巢癌细胞株SKOV-3ipl对缺氧的适应及其与VEGF、Bcl-2蛋白表达的关系

目的 :研究卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧条件下的适应力及其与VEGF、Bcl 2蛋白表达的关系。方法 :贴壁培养卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧条件下培养 (85 %N2 ,5 %CO2 ,1 0 %H2 ,极低氧浓度 :<1 0 0×1 0 - 6 ) ,在不同缺氧时相收集细胞 ,应用免疫细胞化学PARP标记检测细胞凋亡、免疫细胞化学检测VEGF的表达 ,Westernblot检测PCNA及Bcl 2蛋白表达的改变。结果 :缺氧培养 8至 1 6小时后 ,凋亡细胞增加 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 ) ,PCNA表达下降 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 )、VEGF无表达 ;缺氧 2 4小时后细胞凋亡与 0小时相比 ,差异无显著性 ,PCNA表达回升 ,Bcl 2蛋白及VEGF表达明显升高 (与缺氧 0小时相比 ,P <0 .0 1 )。结论 :卵巢癌细胞株SKOV 3ipl在缺氧培养 8至 1 6小时内发生凋亡、细胞增殖抑制 ,2 4小时后对缺氧耐受 ,细胞增殖 ;细胞对缺氧的适应可能与VEGF及Bcl 2蛋白表达增加有关     

结直肠癌中cyclin D1和CD44V6及E-cadherin蛋白的表达及其意义

目的 :探讨结直肠癌中cyclinD1、CD44V6、E cadherin(E cad)蛋白的表达。方法 :采用免疫组化SP法测定 48例结直肠癌中cyclinD1、CD44V6、E cad蛋白的表达。结果 :48例结直肠癌中cyclinD1、CD44V6、E cad表达的阳性率分别为5 8 3 % ( 2 8/4 8)、75 0 % ( 3 6/4 8)和 45 8%( 2 2 /4 8)。cyclinD1蛋白表达的阳性率 60岁以上年龄组高于 60岁以下年龄组 ,P<0 0 5 ,cyclinD1蛋白的表达与肿瘤组织分化程度呈负相关 ,P <0 0 1。CD44V6高表达及E cad低表达与结直肠癌Duke’s分期、浆膜浸润、淋巴结转移呈正相关 ,P<0 0 5。结论 :cyclinD1蛋白的表达与分化程度相关 ;CD44V6、E Cad蛋白的表达与结直肠癌浸润转移密切相关 ,检测cyclinD1、CD44V6、E cad蛋白是判断结直肠癌预后的客观指标。     

ATP7B基因反义寡核苷酸对卵巢癌SKOV3ipl细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨ATP7B基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODNs)片段对卵巢癌SKOV3ip1细胞顺铂敏感性的影响。方法人工合成包含ATP7B mRNA翻译起始位点的ASODNs片段及作为对照的正义寡核苷酸(sense ol-igodeoxynucleotide,SODNs)片段。脂质体lipofectamine2000(LF)将ASODNs及SODNs转染卵巢癌SKOV3ip1细胞后,用RT-PCR法、流式细胞测定法、Western blot及MTT法检测SKOV3ip1细胞转染后,ATP7B基因mRNA、蛋白表达及半数抑制浓度(IC50)的变化。结果SKOV3ipl细胞以及转染ASODNs后,ATP7B与β-actin mRNA的光密度比值分别为0.831±0.06和0.203±0.07(P<0.01)。流式细胞法检测细胞内ATP7B蛋白的荧光强度由转染前的79.42±4.04下降到50.87±5.47(P<0.05)。Western blot检测SKOV3ipl细胞以及转染ASODNs后,ATP7B与actin蛋白的光密度比值分别为2.60±0.44和1.01±0.06(P<0.01)。MTT检测IC50由转染前的(126.63±12.06)μmol/L下降为(80.90±20.09)μmol/L(P<0.01)。而转染SODNs及LF的SKOV3ip1细胞中,上述指标无统计学差异(P>0.05)。结论ATP7B基因反义寡核苷酸能显著抑制卵巢癌SKOV3ip1细胞ATP7B mRNA和蛋白表达,并能增加SKOV3ip1细胞对顺铂的敏感性。     

茶多酚诱导膀胱癌细胞凋亡及上调PTEN、E-Cadherin表达的研究

目的 :探讨茶多酚抑制膀胱癌细胞生长的可能分子机制。方法 :采用MTT法和流式细胞术 ,观察膀胱癌细胞系 (T2 4及SCaBER)经不同浓度的茶多酚处理后对细胞生长以及PTEN、E cadherin蛋白表达的影响。结果 :茶多酚以剂量依赖的方式抑制膀胱癌细胞的生长 ,加入 0、5 0、10 0、2 0 0、4 0 0 μg·ml-1茶多酚的T2 4细胞和SCaBER细胞抑制率分别为 0 %、11 2 %、33 4 %、36 9%、6 7 5 %和 0 %、16 5 %、19 1%、30 3%、31 4 %。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰 ,癌细胞出现凋亡 ,凋亡率分别为 6 8%、2 5 1%、2 8 6 %、36 6 %、4 1 1%和 2 1 4、2 7 2 %、2 8 5 %、36 8%、4 7 7% ;同时 ,随茶多酚作用浓度的增加 ,出现G1/S阻滞细胞逐渐增多 ,细胞分裂增殖指数 (PI)降低 ;而细胞PTEN蛋白表达水平由 (37 6 6± 0 4 9)、(38 2 8± 0 6 1)逐渐增加至(16 3 92± 3 36 )、(177 36± 10 79) ,E cadherin蛋白表达水平由 (37 5 2± 1 14 )、(38 5 9± 4 2 4 )逐渐增加至 (12 1 86± 1 5 0 ,15 3 5 8± 2 5 1) (P <0 0 1,P <0 0 1)。结论 :茶多酚对T2 4及SCaBER细胞生长具有抑制作用 ,其机制可能是通过上调PTEN蛋白表达影响细胞周期和诱导细胞凋亡。PTEN、E cadherin蛋白表达水平的上调可能具有逆转细胞恶性生     

MMP-9、EGFR和E-cadherin在非小细胞肺癌中的表达及意义

 目的　探讨基质金属蛋白酶 9(MMP 9)、表皮生长因子受体 (EGFR)和上皮性钙黏附蛋白 (E cadherin ,E cad)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及临床意义。方法　采用免疫组织化学 (SP)法检测MMP 9、EGFR和E cad在 6 2例NSCLC组织和 18例正常肺组织中的表达。结果　 (1) 6 2例NSCLC中MMP 9和EGFR阳性表达率分别为 6 7.7%和 5 8.1% ,E cad的异常表达率为 5 1.6 % ,显著高于癌旁正常肺组织 (P <0 .0 0 5 ) ;(2 )MMP 9、EGFR和E cad的表达水平在NSCLC不同病理分级、不同临床TNM分期以及有无淋巴结转移间比较均有显著差异 (P均 <0 .0 5 )。 (3)MMP 9、EGFR、E cad的表达水平在NSCLC不同病理类型间比较无明显差异 (P均 >0 .0 5 )。结论　检测MMP 9、EGFR、E cad的表达水平 ,对判断NSCLC恶性程度有重要意义。     

Initial Study on Immune Escape Mechanism of Mouse Acute Myelomonocytic Leukemic Cell Line WEHI-3

目的研究小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞系表面Fas、Fas配体(FasL)、CD80分子表达以及FasL的功能。方法应用流式细胞仪检测WEHI-3细胞表面Fas、FasL、CD80分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测FasL功能。结果WEHI-3细胞表面CD80和Fas表达率分别为5．06％±0．41％、6．75％±2．31％(n=5),但FasL表达率高达63．73％±5．23％(n=5),当WEHI-3(效应细胞,E)和Fas+YAC-1细胞(靶细胞,T)以3:1、10:1和30:1混合培养时,YAC-1细胞的凋亡率分别为26％±4．5％,35％±3．2％和45％±2．7％(n=5)。结论WEHI-3细胞高表达FasL、低表达Fas和CD80,并能诱导Fas+YAC-1细胞凋亡。     

CD5, CD10, and CD23 expression in Waldenstrom's macroglobulinemia

CD5, CD10, and CD23 are cell surface antigens used to distinguish B-cell disorders. The expression of these antigens and their clinical significance in Waldenstrom's macroglobulinemia (WM), an uncommon B-cell disorder, remains to be clarified. We therefore determined expression of CD5, CD10, and CD23 by flow cytometric analysis on bone marrow lymphoplasmacytic cells (CD19+ k/l light chain restricted) for 171 serially biopsied patients with findings of the consensus panel definition of WM. Importantly, we also correlated laboratory and clinical data, as well as existence of a familial history of a B-cell disorder in view of reports suggesting familial predisposition in WM. These studies demonstrated tumor cell expression of CD5, CD10, and CD23 in 15 of 171 patients (9%), 11 of 161 patients (7%), and 37 of 105 patients (35%), respectively. Coexpression of CD23 with CD5 or CD10 was common. Tumor Lymphoplasmacytic from 10 of 15 (66%) and 3 of 11 (27%) patients with WM that expressed CD5 and CD10, respectively, also showed expression of CD23 (P = 0.01 and P = 0.08, respectively). Among patients with CD23 expression, increased serum immunoglobulin (Ig) M levels were observed compared with patients without CD23 expression (P = 0.05). No differences in age at diagnosis; presence of adenopathy and/or splenomegaly; bone marrow involvement; serum IgA, IgB, and b2 macroglobulin levels; hematocrit; platelet count; or familial history of WM or a related B-cell disorder were observed among patients with and without CD5, CD10, and CD23 expression. These studies demonstrate that CD5, CD10, and CD23 are commonly found in WM and that their expression should not exclude the diagnosis of WM. Moreover, expression of CD23 may define a clinically distinct subset of patients with WM.     

CD46 CD55 CD59在结肠癌组织中的表达及意义

目的：检测CD46、CD55、CD59在结肠癌组织中的表达情况,分析其与结肠癌临床病理参数间的相关性及意义。方法：选取有详细性别、年龄、组织分化、病理分期、肿瘤部位、组织类型资料的组织芯片标本,包括121 例结肠癌和121 例癌旁结肠组织,均为2004年10月至2006年6 月第四军医大学西京消化病医院胃肠外科手术切除标本。应用免疫组织化学改良二步法分别检测CD46、CD55、CD59的表达情况。结果：CD46、CD55及CD59在结肠癌组织中的阳性表达率均显著高于对应的癌旁组织（P < 0.001）。 CD46表达水平与性别、年龄、组织分化、TNM 病理分期、肿瘤位置、病理组织类型均无关（P > 0.05）。 CD55、CD59的表达水平与性别、年龄、肿瘤位置、病理类型无关（P > 0.05）,而与组织分化、TNM 病理分期有关（P < 0.05）。 其表达强度阳性率中低分化组明显高于高分化组（P < 0.05）。 TNM 分期中Ⅲ、Ⅳ期患者肿瘤病理组织强阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期阳性表达率,两者比较有统计学意义（P < 0.05）。 结论：CD46、CD55及CD59在结肠癌组织中高表达,特别是CD55、CD59的表达与肿瘤分化、病理分期相关,提示三者表达水平与结肠癌生物学行为密切相关。     

人CD46、CD55和CD59与肿瘤免疫逃逸及免疫治疗

膜结合补体调节蛋白CD46、CD55和CD59在肿瘤细胞膜上表达或过表达,保护肿瘤细胞免受免疫系统的攻击,成为肿瘤细胞免疫逃逸的途径之一.如何下调肿瘤细胞表面三者表达或抑制其功能以增强其对补体依赖的细胞毒作用的敏感性备受关注.     

白血病CD20、CD33、CD45及MDR表达和靶抗原筛选

目的观察白血病患者CD20、CD33、CD45及MDR表达及抗原强度的变化,筛选特异的靶抗原,探讨抗体靶向治疗的应用价值。方法应用间接免疫荧光法检测白血病细胞CD20、CD33、CD45及MDR表达和抗原强度变化。结果CD20、CD33、MDR阳性率分别为38.1%、81.5%、13.3%;髓性白血病中CD33抗原表达比CD45强,差异有显著性(P<0.05);CD33与MDR表达,差异无显著性。CD20与CD45、MDR在淋巴细胞白血病细胞上表达,差异无显著性。结论CD33特异性强,抗原性强,适合作靶抗原,MDR也是耐药白血病治疗的较好靶抗原。抗体靶向治疗将是白血病治疗的一条新途径。     

血管内皮标记物在乳腺癌演变中的表达及意义

目的探讨乳腺癌演变中新生血管表达状况，旨在选择乳腺癌发生发展中新生血管的特异性标记物。方法采用免疫组化（SP）法，分别以CD105、FⅧ、CD31、CD34为标记，对100例乳腺不同病变组织，包括乳腺导管上皮不典型增生（ADH）、导管内癌（DCIS）、微浸润导管癌（MDC）各20例，40例非特殊类型浸润型导管癌（IDC，NOS），计算微血管密度（MVD）。结果ADH、DCIS、MDC和IDC（NOS）中，CD105标记的MVD分别为8．25&#177;5．78、10．05&#177;4．23、25．35&#177;7．62和37．33&#177;5．86，FⅧ标记的MVD分别为10．60&#177;8．99、16．60&#177;3．47、16．90&#177;5．62和17．90&#177;5．62，CD31标记的MVD分别为16．80&#177;3．90、19．40&#177;4．58、20．74&#177;6．67和22．74&#177;6．67，CD34标记的MVD分别为14．40&#177;12．82、25．20&#177;5．39、26．32&#177;4．89和40．32&#177;4．89，仅CD105标记的MVD各组间两两比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CD105标记MVD用来评估乳腺癌发生发展中的新生血管表达，可能更具价值，这将为今后抗血管生成的治疗提供理论依据。     

补体调节蛋白CD46、CD55及CD59在肿瘤免疫治疗中的研究进展

以往对肿瘤逃避补体攻击的免疫机制并不是非常清楚,因而对肿瘤的传统免疫治疗,尤其是体液免疫治疗,往往效果并不理想。随着免疫学的发展,经研究发现不同的肿瘤细胞表面往往高表达补体调节蛋白(CD46/MCP,CD55/DAF,CD59/potectin)中的一类或几类分子,由于补体调节蛋白的高表达,从而抑制机体的补体系统对肿瘤细胞的攻击,使肿瘤逃避机体免疫防御。近年来随着对补体调节蛋白在肿瘤中表达及机制的进一步研究,针对补体调节蛋白的单克隆抗体及细胞因子的免疫治疗开始应用于动物实验和临床实验,取得了一定成功。本文阐述补体调节蛋白在肿瘤免疫治疗的研究中所取得的一些认识和进展。     

A child case of CD34, CD33, HLA-DR, CD7, CD56 stem cell leukemia with thymic involvement

It has been reported that the CD56⁺/CD7⁺/CD3⁻ phenotype of natural killer (NK) cells develop from the CD34⁺/HLA-DR⁻ bone marrow (BM) mononuclear cell population in long-term BM culture (LTBMC). An HLA-DR⁻/CD33⁺/CD56⁺/CD16⁻ myeloid/natural killer cell acute leukemia has been described. We report here a 7-year-old boy who developed stem cell acute leukemia with superior vena cava syndrome secondary to thymic involvement. Surface marker analyses revealed that the leukemia cells showed CD34⁺/HLA-DR⁻/CD33⁻/CD7⁺/CD56⁺ phenotype. When stimulated with phorbol ester in vitro the leukemic cells morphologically differentiated to myeloid cells developing CD13, CD15 and CD56 antigens. Our results suggest that CD34⁺/HLA-DR⁻/CD7⁺/CD56⁺ stem cell leukemia may arise from transformation of a pluripotent precursor cell, which could differentiate to both myeloid and NK cell lineages.