在固相pH梯度4~7范围内海洛因成瘾者血浆蛋白质组分析(英文)

目的比较鉴定海洛因成瘾者和正常人血浆蛋白质组差异,为研究海洛因成瘾相关血浆蛋白提供线索。方法海洛因成瘾者(n=5)和正常对照者(n=5)血浆蛋白经剔除白蛋白和免疫球蛋白IgG后,以固相pH梯度4~7胶条等电聚焦为第一向,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向,进行蛋白双向电泳。图像分析软件Image Master Elit 5.0分析蛋白质2维图谱。手工挖取组间相差1.5倍的差异点,串联质谱分析鉴定。结果每张图谱平均检测到350±21个蛋白(亚基)斑点,其中5个蛋白点在2组图谱中差异1.5倍以上,鉴定结果分别为γ纤维蛋白原、人α1B糖蛋白、α1-抗胰蛋白酶原、视黄醇结合蛋白载体蛋白四聚体单体和铜蓝蛋白。结论海洛因成瘾者血浆与正常人血浆对比存在蛋白质组差异。某些差异蛋白可能与海洛因成瘾造成的神经损伤相关。     

1型糖尿病大鼠肾脏皮质的蛋白质组学研究

通过研究1型糖尿病(T1DM)大鼠肾皮质和正常大鼠肾皮质蛋白质表达的差异,进一步探讨T1DM引起肾脏病变的可能机制。实验采用链脲佐菌素(STZ)诱发SD大鼠产生高血糖,建立T1DM模型,应用双向凝胶电泳技术分离大鼠肾皮质蛋白。电泳图谱结果:正常组分辨出蛋白斑点468±34个;DM组分辨出蛋白斑点423±23个,其中差异显著的蛋白斑点43个,与正常组比较,DM组有15个蛋白斑点表达上调,24个表达下调,2个失表达,2个蛋白斑点只在DM组表达。本实验证明了T1DM大鼠肾皮质蛋白质表达发生了显著变化,差异蛋白质点的进一步鉴别研究将有助于探讨T1DM肾病的发病机制。     

脑脊液S-100B与儿童病毒性脑炎脑脊液蛋白组学关系的研究

目的分析病毒性脑炎(VE)患儿和对照组儿童脑脊液(CSF)蛋白质组的表达差异,筛选VE特异性蛋白,探讨其与VE的关系,为VE的早期诊断提供线索。方法以三氯醋酸/丙酮沉淀法提取VE患儿和对照组儿童CSF总蛋白,固相pH梯度二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白质,应用双向电泳凝胶分析软件(PDQuest 7.3.1)对2-DE凝胶进行量化比较分析,识别差异表达明显的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到肽质量指纹图谱(PMF),在Mascot数据库中进行蛋白质匹配,鉴定部分差异蛋白质。结果VE患儿和对照组CSF蛋白2-DE凝胶图谱上分别平均显示442和401个点,有23个点蛋白质表达存在2倍以上的差异,选取5个表达明显上调的蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定出钙结合蛋白S100B。结论钙结合蛋白S100B在VE患儿和无中枢神经系统病变的对照组儿童CSF的蛋白表达上存在明显差异,可能是VE密切相关的疾病特异性蛋白,并有可能成为VE诊断的分子标志物。     

蜂蜇伤战士血清相关蛋白分析

目的分析蜂蜇伤战士与正常人血清中蛋白质图谱之间表达差异。方法分别收集来源于解放军181医院于2008年10月—2010年2月收集的11例蜂蜇伤国防战士标本和8例健康人的血清标本进行双向凝胶电泳（2-DE）检测。通过基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析鉴定蜂蜇伤患者的血清蛋白质中存在显著差异的蛋白质点。结果在蜂蜇伤战士的血清中存在5个新增蛋白质点,3个蛋白点上调,7个蛋白点下调,其中包括KRT10角蛋白Ⅰ型、KRT1角蛋白Ⅱ型、触珠蛋白相关蛋白、触珠蛋白HP、HPR蛋白、α2-巨球蛋白、β血影蛋白brain1。结论采用固相pH梯度2-DE分离鉴定血清蛋质组能够获得很好的实验重复性。蜂蜇伤患者与正常人血清存在差异表达蛋白,为进一步研究蜂蜇伤相关生物标记提供理论基础及指导。     

卵巢恶性肿瘤组织高丰度蛋白质分析

目的：研究卵巢正常、恶性肿瘤组织蛋白质表达的差异，构建卵巢恶性肿瘤组织的蛋白质表达谱，为临床早期诊断奠定基础。方法：取人卵巢正常及恶性肿瘤组织，提取蛋白质，进行双向电泳分离，银染获得其蛋白质电泳分离图谱对蛋白质斑点进行初步鉴定。结果：双向电泳图谱显示2-DE图谱上高丰度蛋白质有36个点，低丰度的蛋白质有176个，对其中3个高丰度蛋白质斑点初步鉴定可知这些蛋白质为：PSE1，IRX5，RN5A。结论：高丰度蛋白质054917、P70351、P15091可能与卵巢恶性肿瘤的发生及发展有关。     

脑梗死大鼠脑组织的二维凝胶电泳及质谱分析

目的探讨二维凝胶电泳和质谱分析在脑组织分析的应用价值。方法采用大脑中动脉阻塞建立大鼠脑梗死模型。采用二维凝胶电泳对正常大鼠脑组织和脑梗死后大鼠脑组织进行蛋白分离和图像分析;分离蛋白后进行质谱分析及数据库搜索,从而鉴定部分蛋白质斑点。结果筛选出5种差异性蛋白斑点,并通过数据库比对分析各自的功能。结论二维电泳凝胶图谱并作质谱分析可为研究脑梗死发病过程中蛋白质表达改变提供新的方法及途径。     

鼻咽癌血清蛋白质双向电泳图谱分析

目的:探讨和分析鼻咽癌(NPC)差异表达的血清蛋白质。方法:以NPC和正常血清标本为研究对象,利用双向电泳(2-DE)分离NPC和正常血清蛋白质,银染显色,Umax扫描仪获取图像,Melanie4软件分析图像,寻找鼻咽癌相关差异蛋白质。结果:建立了较稳定的NPC和正常血清蛋白质2-DE图谱,平均蛋白质点数约400个。软件分析显示2组共有11个差异蛋白质点,10个仅在NPC血清中出现,1个仅在正常血清中出现。结论:差异蛋白质的分离为NPC的相关血清蛋白质的鉴定和其他肿瘤血清蛋白质组学研究奠定了基础。     

茅莓总皂苷对局灶性脑缺血/再灌注大鼠的比较蛋白质组学研究

目的采用蛋白质组学技术研究茅莓总皂苷对脑缺血/再灌注大鼠脑组织差异蛋白的影响,进一步揭示茅莓总皂苷的脑保护作用及抗损伤修复机制。方法建立脑缺血/再灌注大鼠动物模型,分别提取蛋白质后进行2-DE电泳分离,应用相关软件比较分析,找出差异蛋白,酶切消化后进行肽指纹图谱分析,通过数据检索,初步鉴定差异蛋白质。结果与模型组比较,茅莓总皂苷组找到29个差异点,其中18个蛋白点表达上调,11个蛋白点表达下调,鉴定了其中7个蛋白。结论茅莓总皂苷对脑保护作用及抗损伤修复机制的机制是多个蛋白质共同参与的结果。     

膀胱癌BIU-87细胞羟基喜树碱耐药的蛋白质组学研究

目的研究与膀胱癌BIU-87细胞羟基喜树碱（HCPT）耐药相关的蛋白质。方法应用二维凝胶电泳（two-dimensionalelectrophoresis，2-DE）和基质辅助激光解吸电离一串行飞行时间质谱（matrix-assistedlaserdesorption-ionizationtimeofflighttandemmassspectrometry，MALDI-TOF-TOF）寻找羟基喜树碱耐药的膀胱癌BIU-87细胞与非耐药细胞的差异表达蛋白质。结果通过对2组细胞总蛋白质二维凝胶电脉图谱进行分析，找到差异蛋白质点12个；通过质谱分析，12个蛋白质均得到鉴定。这些蛋白质包括热休克蛋白27、细胞角蛋白8、nm23蛋白等。结论通过蛋白质组学技术，发现了膀胱癌羟基喜树碱耐药细胞和非耐药细胞之间差异表达蛋白质12个，这些差异蛋白质可能参与膀胱癌细胞羟基喜树碱耐药的过程。     

马蹄内翻足胎大鼠胫骨后肌组织的蛋白质组学分析

目的寻找马蹄内翻足畸形相关蛋白。方法提取全反式维A酸诱导的单纯马蹄内翻足畸形胎大鼠及正常对照胎大鼠胫骨后肌群总蛋白,进行双向电泳,考马斯亮蓝染色;经PDQuest软件分析,选择重复出现的差异点,质谱分析鉴定蛋白。结果获得了分辨率及重复性均好的双向电泳图谱。畸形胎大鼠与正常对照比较,有蛋白质点缺失、额外增加及明显上调或下调。质谱鉴定发现畸形胎大鼠肌组织慢骨骼肌肌钙蛋白T(sTnT)缺失,X连锁凋亡蛋白抑制因子(XIAP)下调,羧酸酯酶AY034877额外表达。结论畸形胎大鼠胫骨后肌组织与正常胎大鼠比较存在蛋白质组差异,畸形胎大鼠sTnT,XIAP及羧酸酯酶AY034877表达改变,可能与马蹄内翻足畸形相关。     

Ⅰ期非小细胞肺癌相关血清差异表达蛋白的研究

目的:寻找Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)与健康人血清的差异表达蛋白.方法:收集天津市胸科医院经手术、病理证实的6例Ⅰ期NSCLC患者血清,等量混合后设为肺癌组;同期15例健康体检血清,等量混合后设为健康对照组.利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分离、筛选和鉴定2组间的差异表达蛋白.结果:成功获得了2组的双向凝胶电泳图谱,PDquest软件分析显示,2组间差异大于2倍的蛋白质点共有128个,质谱鉴定后确定了10种蛋白质,其中7种表达量上调,分别为α1-酸性糖蛋白、C1酯酶抑制物、血管紧张素原、转铁蛋白、转甲状腺素蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H2及无花果酶-3;3种表达量下调,分别为纤连蛋白、补体C4-A及补体C3.结论:应用2-DE及MALDI-TOF-MS在Ⅰ期NSCLC血清中鉴定出4种与肿瘤关系密切的差异表达蛋白,可作为开发NSCLC早期诊断标志物的候选蛋白.     

姜黄素对人正常肝细胞角蛋白1和内质网蛋白19表达的影响

目的应用双向凝胶电泳、质谱技术和蛋白免疫印迹研究姜黄素(Curcumin,CUR)对人正常肝细胞蛋白质组的影响。方法随机将人正常肝细胞L-02分成两组,对照组不作任何处理,姜黄素组以25μmol.L-1姜黄素处理L-02细胞24 h。用双向凝胶电泳建立姜黄素组和对照组的双向凝胶电泳图谱,并用Image Master 2D Platinum 6.0软件进行差异蛋白质组分析,所获得的明显差异蛋白质用MALDI-TOF-MS进行鉴定分析,最后用蛋白免疫印迹法进行验证。结果姜黄素作用于人正常肝细胞后,有2个蛋白质的表达发生明显变化,角蛋白1与内质网蛋白19表达均上调。结论上调角蛋白1和内质网蛋白19可能是姜黄素抗肿瘤、抗氧化作用的机制之一。     

Differential protein expression in Corbicula fluminea upon exposure to a Microcystis aeruginosa toxic strain

Changes in protein expression induced by a Microcystis aeruginosa toxic strain in the freshwater clam Corbicula fluminea were studied using a proteomic approach in an effort to identify new molecular biomarkers. Clams were fed with 1 × 10⁶ cells mL⁻¹ of a M. aeruginosa toxic strain (IZANCYA 2), during 24 h. Cytosolic fractions of gills and digestive tract were analyzed by two-dimensional (2D) electrophoresis in 7 cm IPG strips (pH 4-7). On average, about 400 spots were resolved using Coomassie staining. Altered protein expression was quantitatively detected in 16-13 spots in gills and digestive tract, respectively. In 2D electrophoresis gel protein maps from gills, 10 of 16 spots were down-regulated. In the digestive tract, the general tendency was an increase in the protein expression level after the exposure. The altered protein spots were excised and analyzed by MALDI-TOF-MS, with identification of 8 proteins in gills and 5 in the digestive tract. Most of the identified proteins are involved in cytoskeleton assembly. Metabolic proteins were also detected. These results are in agreement with predicted effects of PP1 and PP2A phosphatase inhibition as major effect of microcystins-related toxicity.     

Proteomic analysis of rat aorta during atherosclerosis induced by high cholesterol diet and injection of vitamin D3

1. Atherosclerosis (AS) in rats displays important clinical similarities to human AS. 2. After the experimental model of AS in rat was established and using a proteomic approach, we compared the protein profiling of aorta tissues from healthy and AS rats. 3. Using two-dimensional electrophoresis (2-DE), over 1878 protein species were separated; among them, 1239 protein spots were matched between different gels with average matching rate of approximately 66%. Gel analysis and protein characterization have identified 58 protein spots whose abundance is significantly altered in AS rats. 4. By using matrix-associated laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometer (MALDI-TOF-MS) and NCBInr database, 46 proteins were successfully identified. Among them, 18 proteins were of increased abundance in diseased tissues including a group of oxidization-related enzymes such as peroxiredoxin2 and NADH dehydrogenase Fe-S protein 6, components of inflammatory pathways such as lamin A, while 28 proteins were of decreased abundance in the diseased state, including CaM-KII inhibitory protein, transferring, fructose-bisphosphate aldolase. 5. We believe that these results would give insights into the cellular and molecular mechanisms involved in AS development and might lead to the discovery of novel diagnostic markers and new therapeutic opportunities.     

重组hFGF-10腺病毒对HaCat细胞影响的蛋白质组学研究

研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子10 (hFGF-10) 对HaCat细胞蛋白质组的影响, 由鉴定的差异蛋白质推测hFGF-10对HaCat细胞作用的可能机制。采用双向凝胶电泳结合串联飞行时间质谱技术, 对空载体腺病毒Ad感染细胞和重组腺病毒rAd-hFGF-10感染细胞的总蛋白图谱上的差异蛋白点进行鉴定, 并通过半定量RT-PCR和Western blotting在转录和翻译水平对差异蛋白进行确证。结果显示, 获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱, 鉴定了4种与细胞凋亡、细胞骨架调控、蛋白质降解等相关的差异蛋白质, 并在转录和翻译水平确证了差异蛋白质VDAC2在导入目的基因hFGF-10的HaCat细胞中表达上调, 提示VDAC2可能在hFGF-10的生物学功能中发挥作用。     

大鼠局灶性脑缺血脑组织的比较蛋白质组学研究

目的建立局灶性脑缺血模型,从蛋白质整体水平探讨脑缺血/再灌注的损伤机制。方法建立大鼠脑缺血2 h再灌注24 h的模型;提取脑组织总蛋白质,以双向电泳技术进行蛋白质分离,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,利用专门的软件筛选出差异蛋白质,用MALDI-TOF-MS获得肽指纹图谱,MS-Fit数据库进行搜索,获得有关的蛋白质信息。结果局灶性脑缺血模型组与正常组脑组织的比较蛋白质组学研究。与模型组比较筛选出23个差异表达蛋白斑点,其中13个低表达,10个高表达,鉴定其中6个蛋白质,发现白细胞三烯A-4水解酶、促甲状腺激素释放激素降解胞外酶等与脑缺血相关的蛋白质。结论从蛋白质组学角度发现了一些与脑缺血相关的蛋白,有助于今后进一步研究脑缺血性损伤的保护机制。     

表阿霉素对肝癌细胞蛋白质表达影响的研究

目的 以体外培养的人体肝癌细胞为研究对象,运用蛋白质组学的研究方法,对比分析表阿霉素作用前后肝癌细胞细胞质蛋白质的差异表达情况,为抗癌药物作用机制的阐释提供信息.方法 体外培养的肝癌细胞(包括抗癌药物处理前后的肝癌细胞)以超离心分离细胞质,双向电泳分离细胞质蛋白质,图像分析药物处理前后肝癌细胞的差异表达蛋白质,MALDI-TOF-MS鉴定差异蛋白质.结果 从抗癌药物处理前后的肝癌细胞中筛选出5个差异表达蛋白质.这些差异蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、凋亡调控等方面.结论 抗癌药物作用后肝癌细胞细胞质中蛋白质的表达发生了许多改变,可为抗癌药物作用机制的阐释提供有价值的信息.     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞分化的差异蛋白质分析

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞分化过程中蛋白质的差异表达。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离DADS处理前后人胃癌MGC803细胞总蛋白,凝胶经过银染后用PDQuest软件进行分析,差异蛋白质点经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的数据进行生物信息学处理。结果 DADS处理MGC803细胞前后的总蛋白质的双向电泳银染图谱,经扫描成像及PDQuest软件分析,对照组与处理组蛋白质点与平均匹配率分别为(576±14)个和(583±4)个与76%和70%,421个匹配,200个未被匹配。经相关数据库查询,在初步鉴定的差异蛋白质点中,发现24个与细胞分化、肿瘤转移、细胞凋亡、细胞周期、细胞免疫及代谢等相关的蛋白质,如gastric mucin、nM23、CDC2、uPAR、LIMK、RORα、MHC DR-beta-1 chain、TCR等,这些蛋白质可能在胃癌的发生发展中起着潜在的作用。结论 DADS可能通过多种途径诱导MGC803细胞分化。蛋白质组差异表达的初步分析为进一步研究胃癌分化的相关蛋白质及标记物奠定一定基础。