大鼠脑缺血再灌注损伤神经元形态观察及川芎嗪治疗作用

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion,CIR)大脑皮质、纹状体神经元的形态学变化及川芎嗪对其影响.方法 参考Bannister′s.方法 复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,利用川芎嗪治疗;在光、电镜下观察了皮质水肿及神经元的超微结构变化.结果 治疗组与模型组相比,大脑皮质和纹状体的血管周围、神经细胞周围水肿带厚度有显著差异(P<0.05),模型组可见神经元凋亡,治疗组凋亡减少.结论 川芎嗪对脑缺血再灌注神经元有明显保护作用.     

川芎嗪联合尼莫地平对脑缺血再灌注皮质神经元膜性结构的保护作用

目的探讨川芎嗪联合尼莫地平治疗脑缺血再灌注损伤的机制。方法采用Bannister's方法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,利用川芎嗪或川芎嗪联合尼莫地平治疗;在透射电镜下观察皮质神经元超微结构变化。结果模型组神经元水肿,质膜、线粒体膜破裂;溶酶体、内质网和高尔基复合体破坏。治疗组神经元质膜、核膜、内质网及线粒体损伤减轻,川芎嗪联合尼莫地平治疗效果更佳。结论川芎嗪及川芎嗪联合尼莫地平对脑缺血再灌注神经元有明显的保护作用。     

川芎嗪联合缺血预处理对脑缺血一再灌注损伤保护作用的研究

目的:探讨川芎嗪联合缺血预处理对脑缺血一再灌注损伤的保护作用。方法:采用Wistar大鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术对照组(组)、脑缺血一再灌注组(组)、川芎嗪治疗组(组)、缺血预处理组(组)和川芎嗪+缺血预处理组(V组)5组。在预定时间点行TUNEL法海马CAI区凋亡细胞检测,免疫组织化学ABC法测定Bcl-2、Bax蛋白在海马CA1区的动态变化。结果:V组各时间点的细胞凋亡指数明显低于除I组外的其他各组(P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显高于其他各组(P<0.01),而Bax蛋白表达升高最少(P<0.05)。结论:缺血预处理与川芎嗪联合应用对抑制脑缺血一再灌注所致的神经细胞凋亡具有显著的协同作用。调控凋亡相关基因Bcl-2表达上调、Bax蛋白表达下调可能是其对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用的机制之一。     

川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨川芎嗪注射液对脑缺血再灌注损伤的防治作用。方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、造模组、川芎嗪治疗组,观察各组大鼠神经功能损伤症状及脑组织细胞形态变化。结果脑缺血再灌注损伤后,大鼠神经功能缺损症状较重,川芎嗪80 mg/kg组在缺血再灌注损伤后12 h、1 d、3 d时间点神经行为学评分明显低于造模组(P<0.05)。川芎嗪给药各组在早期与造模组比较神经元变性坏死变化不明显,7 d后缺血周围变性神经元数量较少,细胞排列逐渐规整。结论脑缺血再灌注损伤后川芎嗪通过改善神经元变性坏死程度,缓解大鼠神经功能损伤症状,起到神经保护作用。     

脑缺血再灌注后动脉阻塞大鼠海马细胞色素C表达的实验研究

目的从形态学角度观察动脉阻塞(MCAO)模型大鼠脑缺血再灌注后海马区神经元细胞色素C的变化.方法应用免疫组化配合 TUNEL 染色方法.结果脑缺血再灌注2h后模型组大鼠海马神经元中细胞色素C蛋白开始表达,再灌注6h表达量达高峰,再灌注12h表达量下降,再灌注24h降至最低点.Tunel在再灌注6h阳性细胞主要集中海马CA2和齿状回区,细胞色素C的阳性细胞表达与Tunel阳性细胞表达部位基本一致.结论脑缺血再灌注后细胞凋亡中存在细胞色素C基因蛋白表达的动态变化.     

三七总皂甙对局灶脑缺血再灌注海马中NGF及TrkA的影响

目的:探讨三七总皂甙对局灶性脑缺血再灌注损伤的海马神经生长因子及酪氨酸激酶A含量变化的影响。方法:120只SD大鼠体重200～220g,随机分为3组:假手术组(n=40),局灶脑缺血再灌注组(n=40)和三七总皂甙治疗组(n=40)。线栓法制备大脑中动脉梗阻(MCAO)模型,药物组在脑缺血再灌注即刻和12h腹腔注射三七总皂甙,模型组和假手术组均注射等量生理盐水。分别在缺血再灌注2h、4h、6h、12h和24h处死动物,运用RT—PCR技术检测缺血侧海马组织内NGF和TrkA的mRNA的表达变化。结果:再灌注损伤后,损伤侧海马组织内NGF和TrkA的mRNA表达均增高。在三七总皂甙治疗组中NGF和TrkA的mRNA于再灌注2h上升,4h达高峰。结论:脑缺血后损伤侧海马神经元内NGF和TrkA的mRNA含量增多,可能有利于受损神经元的修复。     

穴位埋药线和电针干预对脑缺血再灌注大鼠海马热休克蛋白70表达的影响

目的 观察局灶性脑缺血再灌注大鼠海马热休克蛋白70(HSP70)表达及川芎嗪缓释剂穴位埋药线和电针干预对其的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常组、假手术组,模型组、电针组、穴位埋药线组.采用改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,予电针及以胶原川芎嗪制备的缓释剂(药线)在大椎、双侧内关穴位埋药线.应用免疫组化方法检测不同时相(24、72、120h)各组大鼠海马HSP70的表达.结果 正常组及假手术组大鼠海马仅见少量HSP70阳性细胞,治疗各组大脑海马HSP70表达均增加,24 h时HSP70阳性细胞数达到高峰,以后逐渐下降,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01).其中穴位埋药线组大脑海马HSP70表达最为明显,与电针组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 川芎嗪穴位埋药线可诱导脑缺血再灌注后HSP70表达,进而抑制细胞凋亡,作用优于电针组.     

失荅刺知丸对脑缺血再灌注大鼠海马神经元形态学和Caspase-3、Caspase-9表达的影响

目的:观察失荅刺知丸对脑缺血再灌注大鼠海马神经元形态学和Caspase-3、Caspase-9表达的影响。方法:130只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组(模型组)、失荅刺知丸组(实验组)和金纳多组(阳性对照组),其中后三组根据取材时间点又各分为12 h、24 h和72 h共三个亚组,每组13只。采用线栓法制成大鼠大脑中动脉再灌注模型,透射电镜下观察海马区神经元超微结构变化,免疫组织化学法和Western-blot印迹法检测大鼠海马组织凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的变化。结果:与假手术组比较,再灌注组大鼠海马神经元出现胞核及线粒体损伤,并且Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与再灌注组比较,失荅刺知丸组大鼠海马神经元胞核及线粒体损伤明显减轻,而Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:失荅刺知丸可减轻脑缺血再灌注大鼠海马神经元的损伤,其作用机制可能与抑制Caspase-3、Caspase-9蛋白表达有关。     

脑络欣通影响气虚血瘀证脑缺血再灌注模型大鼠海马CA1区神经元凋亡的机制研究

目的：探讨中药复方脑络欣通改善脑缺血损伤的作用机制。方法：采用多因素复合制作气虚血瘀证大鼠脑缺血动物模型，观察中药脑络欣通对脑缺血-再灌注损伤的预防与治疗作用。用免疫组化方法观察缺血-再灌注模型大鼠海马CAI区Bel-2蛋白、Bax蛋白及脑源性神经营养因子的表达；用TUNEL法观察缺血．再灌注模型大鼠海马CAI区神经元的凋亡现象；用硫代巴比妥酸比色法测定海马匀浆丙二醛浓度。结果：(1)预防及治疗给药可以减少缺血-再灌注模型大鼠海马CAI区神经元的凋亡现象，并可以使缺血-再灌注模型大鼠海马CA1区Bcl-2蛋白及脑源性神经营养因子表达升高，使Bax蛋白的表达减少；(2)预防组可以降低缺血急性期病理性升高的丙二醛含量。结论：脑络欣通可以减少缺血-再灌注模型大鼠海马CA1区神经元的凋亡现象，其机制可能与减少脑缺血-再灌注后自由基损伤有关，并通过影响凋亡相关蛋白的表达减少神经元凋亡。     

糖皮质激素在MCAO大鼠海马神经元凋亡中的作用及健脑安干预的研究

目的:观察脑缺血再灌注后24h内的内源性糖皮质激素对海马神经细胞凋亡的影响及中药对此的干预.方法:应用大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,采取甲苯胺兰、TUNEL和免疫组化实验方法,动态观察脑缺血再灌注后24h内的内源性糖皮质激素对大鼠海马神经细胞凋亡的影响及中药对此的干预.结果:TUNEL阳性细胞从再灌注2h开始表达,再灌注6h阳性细胞表达继续增加,再灌注12h达高峰,再灌注24h下降.治疗组、对照组、拮抗剂组与模型组在再灌注各时点均有显著性差别(P＜0.05,),其中治疗组和拮抗剂组差异极显著(P＜0.01).结论:健脑安可有效抑制脑缺血再灌注24内,内源性糖皮质激素对海马神经元的促凋亡作用.     

眼针对急性脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织BDNF表达影响

目的:观察眼针对急性脑缺血再灌注模型大鼠海马脑源性神经因子(BDNF)表达的影响,探讨眼针对急性脑缺血再灌注损伤治疗的机制。方法:应用线栓法复制急性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用眼针治疗,于再灌注后3 h进行神经功能缺损评分,采用Western blot方法、实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)方法测定海马BDNF蛋白及mRNA表达的变化。结果:与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损评分明显下降,眼针组大鼠海马组织BDNF蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05)。结论:眼针具有明显的改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,其机制与上调海马组织BDNF表达有关。     

灯盏花素对大鼠脑缺血-再灌注后脑内NF-κB表达的抑制作用

目的:研究灯盏花素对大鼠脑缺血-再灌注引起脑损伤的保护作用,探讨其作用机制。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分成5组:假手术组、模型组、MgSO4阳性对照组、灯盏花素低、高剂量组。假手术组、模型组于脑缺血-再灌注10min后给予20mL/kg生理盐水,其余3组给予50、75mg/kg灯盏花素及30mg/kgMgSO4。用TUNEL法和免疫组化法分别检测脑组织凋亡细胞和NF-κB阳性细胞的变化。结果:MgSO4组、Bre高、低剂量组在脑缺血-再灌注23h后海马区凋亡神经元/海马神经元分别为(35.4±5.5)%,(27.2±4.3)%和(20.6±3.6)%,均较模型组海马区凋亡神经元/海马神经元(60.4±6.2)%为低,但Bre组比MgSO4组凋亡细胞更低,差异具有显著性意义。MgSO4组、Bre高、低剂量组在脑缺血-再灌注23h后海马区NF-κB表达阳性神经元/海马神经元分别为(45.2±4.2)%、(32.1±5.3)%和(19.5±3.5)%,均较模型组海马区NF-κB表达阳性神经元/海马神经元(73.1±6.2)%为低,但Bre组比MgSO4组凋亡细胞更低,差异具有显著性意义。结论:灯盏花素可显著保护大脑缺血-再灌注引起的脑损伤,可能与其抑制NF-κB蛋白的表达有关。其作用优于单用MgSO4。     

针药对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的影响

目的:观察针药对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的影响,探讨其作用机制。方法:随机将健康成年的SD大鼠进行分组,10只为一组,共5组,分别为正常对照组、模型组、电针组、药物组和针药混合组。用夹闭双侧颈总动脉的方法构建脑缺血再灌注大鼠模型。电针组在"百会"和"神庭"两个穴位给予电针治疗,药物组采用补气化瘀药物进行灌胃治疗,针药混合组利用电针和补气化瘀药物相结合的联合疗法。用药结束后,观察并分析各组大鼠海马神经元的形态学改变及海马神经元凋亡率的变化。结果:针药混合组可有效保护海马神经元的正常形态结构和数量,抑制海马神经凋亡,具有保护脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的作用。     

电针预处理对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马葡萄糖调节蛋白78和生长停滞及DNA损伤基因153表达的影响

目的:探讨电针预处理对短暂性全脑缺血再灌注大鼠海马葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)和生长停滞及DNA损伤基因153(GADD 153)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、缺血组和电针预处理组,每组48只。采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型。电针预处理组于模型建立前5d电针刺激"大椎""百会"两穴,30min/d。分别于再灌注6、12、24、48h处死动物。Western blot方法检测海马GRP 78和GADD 153表达;HE染色法计数存活神经元数目;TUNEL法测定凋亡神经元数目。结果:与假手术组相比,缺血组再灌注12、24、48h海马存活神经元计数减少,各时点凋亡神经元数目增多(P0.05),缺血组在再灌注6、12、24、48h海马GRP 78和GADD 153表达上调(P0.05);与缺血组比较,电针预处理组再灌注24、48h时海马存活神经元计数升高,在12、24、48h凋亡神经元数目减少(P0.05),再灌注各时点GRP 78表达上调,GADD 153表达下调(P0.05)。结论:电针预处理对缺血再灌注大鼠有显著的脑保护作用,这可能与其上调脑缺血区GRP 78表达,下调GADD 153的表达,从而减轻内质网应激反应有关。     

针刺预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察针刺预处理对脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:采用四血管阻断法对实验鼠分组进行全脑缺血及缺血后再灌注模型。神经元尼氏体亚甲蓝特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元尼氏体变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)及电镜观察脑缺血后大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果:针刺预处理组大脑皮质、海马CA1区可见棕色TUNEL染色阳性细胞核,较脑缺血组明显减少,尼氏体染色阳性细胞数针刺预处理组较脑缺血组明显增多。结论:针刺预处理可以减轻缺血后神经元损伤,抑制神经元凋亡。     

EphrinB2在大鼠短暂性前脑缺血再灌注后对海马神经元的保护作用

目的 大鼠前脑短暂缺血再灌注后海马CA1区椎体神经元出现选择性迟发性死亡.目前的研究一致认为在脑缺血再灌注发生后,NMDA受体的过度激活是导致神经元损伤的主要原因.然而,NMDA受体过度激活的潜在机制尚不清楚.本课题旨在研究大鼠前脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡的机制.方法 改进的四血管夹闭法制作大鼠前脑缺血（15 min）再灌注模型,取缺血再灌注后不同时间（6 h、24 h、48 h）的海马CA1区脑组织,用ELISA检测Caspase-3活性变化.同时运用免疫印记方法检测p-ERK、ephrinB2、NMDA受体NR2A及NR2B亚基磷酸化水平的变化.结果 与对照组相比,在脑缺血再灌注后24 h,48 h,p-ERK、ephrinB2、p-NMDA受体表达明显增加,而在ERK1/2抑制剂U0126组表达受到了抑制.结论 本文提供了ephrinB2在脑缺血再灌注后对海马CA1区神经元的保护作用.Eph-ephrin系统可能是脑缺血再灌注后神经元损伤的一个潜在治疗靶点.     

黄芪多糖对大鼠脑缺血再灌注后迟发性神经元死亡影响的实验研究

目的:观察黄芪多糖(APES)对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡(DND)的形态学影响,并探讨黄芪多糖对脑缺血损伤的保护机制。方法:用重复双侧颈总动脉夹闭方法制作不完全前脑缺血再灌注动物模型。于造模后3天取材,HE染色及原位DNA末端标记法观察模型组和APES治疗组动物脑缺血再灌注后海马神经细胞迟发性神经元死亡的情况。结果:造模后3天,模型组海马锥体细胞出现广泛的细胞坏死,以CA1区和齿状回最明显。TUNEL染色法显示模型组CA1区坏死神经元的邻近部位以及齿状回可见大量特征性阳性颗粒的凋亡细胞,治疗组坏死及凋亡细胞明显少于模型组(P<0.05)。结论:黄芪多糖减少缺血再灌注对神经细胞的损害,对缺血再灌注后神经元迟发性死亡具有保护作用。     

针药结合对脑缺血再灌注大鼠血清SOD、MDA及海马组织超微结构的影响

目的:观察脑缺血再灌注大鼠海马组织超微结构的改变及血清中SOD、MDA含量,研究针刺联合川芎嗪注射液对脑缺血再灌注大鼠的疗效及原理。方法:采用MCAO法制作脑缺血再灌注大鼠模型,透射电镜观察海马区神经元超微结构的改变,生化比色法检测血清中SOD、MDA含量。结果:针药结合组海马组织神经元的恢复较其他组有明显改善,血清中SOD的含量显著升高,MDA含量显著降低,优于单纯川芎嗪和针刺组。结论:针药结合能有效升高血清中SOD的含量,降低MDA含量,从而减少神经元的损伤,其作用优于单一疗法。     

针刺预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察针刺预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用4-血管阻断法对实验鼠分组进行全脑缺血及缺血后再灌注模型制作。神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元尼氏体变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)及电镜观察脑缺血后大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果:针刺预处理组大脑皮质、海马CA1区可见棕色TUNEL染色阳性细胞核,较脑缺血组明显减少,尼氏体染色阳性细胞数针刺预处理组较脑缺血组明显增多。结论:针刺预处理可以减轻缺血后神经元损伤,抑制神经元凋亡。     

藏药三味檀香汤散对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元DND和凋亡的影响

目的探讨藏药三味檀香汤散对大鼠全脑缺血/再灌注损伤(I/R)海马CA1区神经元迟发性死亡(DND)、TUNEL凋亡阳性细胞数及相关凋亡蛋白caspase-3表达的影响。方法 48只成年雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术组、全脑缺血/再灌注模型组、藏药三味檀香汤散低、高剂量预处理组(藏药低、高剂量组)。硫堇染色下观察海马CAl区锥体神经元组织学分级(Histological grade,HG)和神经元密度(neuronal density,ND),反映DND程度;分别用TUNEL原位标记法和免疫组织化学法检测各组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡阳性个数和caspase-3表达的变化,反映凋亡程度。结果藏药低、高剂量组HG级别降低、ND数增高、TUNEL凋亡阳性细胞数、caspase-3表达下降,与全脑缺血/再灌注组比较,均有统计学意义(P<0.05);藏药低、高剂量组间比较,后者作用强于前者,其中ND数、TUNEL凋亡阳性细胞数差异有统计学意义(P<0.05)。结论藏药三味檀香汤散预防给药可能有减轻全脑缺血/灌注损伤后海马CA1区DND、抑制caspse-3表达,进而起到神经保护作用。