依达拉奉对脓毒症大鼠心肌细胞肿瘤坏死因子α和一氧化氮的影响

目的:探讨依达拉奉对脓毒症大鼠心肌组织的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的影响.方法:54只SD大鼠随机分成对照组、脓毒症组、治疗组,建立腹腔注射脂多糖大鼠脓毒症模型(LPS 10 mg/kg),治疗组予以腹腔注射LPS 10 mg/kg和静脉注射依达拉奉3 g/kg,每组按造模后6h、12h、24h随机分成三个亚组,检测不同时点各组大鼠血清肌钙蛋白T(CTnT),心肌组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)含量,以及24 h后心肌细胞显微镜下改变.结果:在6h时、12h时和24 h时点各组血清中CTnT浓度、心肌匀浆TNF-α和NO含量,脓毒症组＞治疗组＞对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).脓毒症组和治疗组心肌匀浆中的TNF-α.在6h时达到高峰,随着建模时间的延长,心肌匀浆中的TNF-α逐渐回落;同一组内各时点之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).显微镜显示治疗组与脓毒症组相比,心肌细胞断裂、溶解减轻,间质水肿明显改善.结论:依达拉奉可通过减少心肌TNF-α、NO生成对脓毒症大鼠心肌组织发挥一定的保护作用.     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Caspase-3基因及蛋白表达的影响

目的:研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及其与Caspase-3基因及蛋白表达的关系,同时探讨谷氨酰胺(Gln)对脓毒症心肌损伤的保护作用及机理.方法:采用内毒素(LPS)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,大鼠随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln组,再分为0 h、6 h、12 h、24 h亚组(n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Caspase-3蛋白的含量,同时检测心肌Caspase-3 mRNA表达,对各组结果进行比较.结果:LPS组大鼠心肌细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05);心肌细胞Caspase-3蛋白表达均高于对照组(P<0.05);Caspase-3mRNA较对照组均明显上调(P<0.05).LPS+Gln组与LPS组比较,心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(P<0.05);Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05);Caspase-3 mRNA较LPS组均明显下调(P<0.05).结论:依赖Caspase-3基因的凋亡通路在脓毒症发病机制中起到重要作用,Gln通过阻止Caspase-3 mRNA及蛋白表达而减少脓毒症心肌细胞凋亡程度,可利用它对脓毒症进行早期干预.     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

脓毒症大鼠心肌细胞Toll样受体4和炎症因子基因表达的变化及作用机制

目的 观察脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及与Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)基因表达的关系;同时探讨谷氨酰胺(Gln)在脓毒症心肌损伤治疗中的保护作用.方法 采用内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射法制备脓毒症大鼠模型.将大鼠随机分为对照组、LPS组及Gln组,再分为术后0、6、12、24 h亚组,每组6只.于相应时间点取心肌组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达,并观察心肌组织病理学改变.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡程度增高.LPS组、Gln组各时间点心肌细胞TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达均较对照组明显增加(P均<0.05).而Gln组心肌细胞凋亡程度较LPS组轻,各时间点TLR4 mRNA表达均较LPS组升高幅度明显降低,且于12 h、24 h差异有统计学意义;TNF-α mRNA表达亦降低,于6 h、24 h差异有统计学意义;IL-6 mRNA表达较LPS组升高幅度降低,且于12 h差异有统计学意义(P均<0.05).结论 TLR4信号转导基因及其调控细胞因子TNF-α、IL-6基因表达在脓毒症心肌细胞损伤的发生发展中起重要作用.Gln通过影响相关基因表达干预脓毒症心肌细胞的凋亡.     

生长激素对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 Cleaved caspase-3蛋白表达的影响

目的 研究生长激素(Growth hormone, GH)对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia reperfusion,I/R) 后心肌细胞凋亡及相关基因Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达的影响.方法 24只大鼠随机分为三组,假手术组(sham-operated group,n=8,仅手术24 h)、心肌缺血/再灌注(I/R)组(n=8)、GH组(n=8),后两组均缺血30 min,再灌注24 h,GH组于建立模型前7 d每天给予人重组生长激素(reconbination human growth hormone,rhGH)针剂皮下注射(1 U/kg体质量),其他二组等量生理盐水注射.以TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况, DAB免疫组化法检测心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达并进行心肌组织病理学检查.结果 大鼠心肌I/R 24 h后心肌细胞凋亡指数明显上升(对照于假手术组,P<0.05),心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显升高(P<0.05),心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死灶,缺血心肌间有炎症细胞浸润,心肌排列不整齐(HE染色),而GH组心肌细胞凋亡率及心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显好于I/R组(P<0.05),心肌细胞炎症细胞也明显减少,坏死灶也少于I/R组.结论 GH可以减少心肌I/R后心肌细胞凋亡及细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3染色阳性指数,说明GH对I/R后的心肌具有保护作用.     

二甲双胍对脓毒症大鼠心肌损伤保护作用的相关机制研究

目的:研究二甲双胍对脓毒症大鼠心肌损伤保护作用的相关机制。方法:取40只Wistar雄性大鼠,随机平均分成4组:Sham组、Sham/M组、CLP组、CLP/M组。Sham组仅开腹取出盲肠翻动后还纳腹腔,不进行结扎和穿孔;Sham/M组大鼠在术前1.5h通过灌胃方式灌入二甲双胍(100 mg/kg),其他同Sham组;CLP组采用大鼠盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)方法制备脓毒症模型;CLP/M组大鼠在术前1.5h通过灌胃方式灌入二甲双胍(100 mg/kg),其他同CLP组。在术后12h、24h分别采样检测血浆cTn-I、TNF-α水平、心肌细胞中Caspase-3蛋白表达水平,同时在光镜下观察心肌结构改变。结果:(1)术后12h、24h,血浆中cTn-I、TNF-α水平在Sham组大鼠与Sham/M组中差异无统计学意义(P0.05),CLP组和CLP/M组cTn-I、TNF-α水平较Sham组明显升高(P0.01),同时CLP/M组cTn-I、TNF-α水平较CLP组显著降低(P0.01);(2)术后12h,Caspase-3蛋白表达水平在Sham组和Sham/M组中差异无统计学意义(P0.05),CLP组Caspase-3蛋白表达水平较Sham组明显升高(P0.05),CLP/M组血浆Caspase-3蛋白表达水平较CLP组有所下降(P0.05);(3)光镜下心肌组织:Sham/M组心肌形态与Sham组基本相似。CLP组:12h心肌纤维肿胀,少量溶解;24h心肌纤维溶解,排列紊乱。CLP/M组:与CLP组比较,12h及24h心肌纤维排列紊乱减轻,炎性细胞浸润较少。结论:二甲双胍通过减少心肌细胞凋亡途径来减轻脓毒症大鼠心肌细胞的损伤。     

姜黄素抑制NLRP3炎症小体减轻早期脓毒症大鼠心肌细胞损伤的机制研究

目的探讨姜黄素对早期脓毒症大鼠心肌细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP3)炎性小体的作用及其机制。方法 24只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为3组:假手术组(Sham组, n = 8)、脓毒症组(Sepsis组, n = 8)、姜黄素干预组(Cur组, n = 8)。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型, 造模后腹腔注射姜黄素100 mg/kg, 24 h后重复给药, Sepsis组注射生理盐水。于6、24、48 h通过ELISA法检测大鼠血浆中心肌损伤特异性肌钙蛋白T(cTnT)水平;取48 h大鼠心肌组织经苏木精-伊红(HE)染色观察心肌病理损伤情况;通过TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况;Western-blot法检测Cleaved caspase-1、NLRP3、IL-1β蛋白的表达情况;透射电镜下观察心肌细胞内部超微结构改变。结果 Cur组6、24、48 h大鼠血浆cTnT水平明显低于Sepsis组, 差异有统计学意义(P<0.05);HE染色可见Sepsis组心肌炎性细胞浸润, 细胞水肿、坏死, 而Cur组仅见部分细胞水肿和坏死现象;TUNEL染...     

IL-10对细菌脂蛋白诱导乳大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨白细胞介素-10(IL-10)对细菌脂蛋白(BLP)诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用。方法 (1)体外培养大鼠乳鼠心肌细胞,以1μg/ml的BLP分别刺激心肌细胞0、12、24、36、48h。(2)以不同浓度的BLP(1μg/ml和5μg/ml)和TNF-α(20ng/ml和60ng/ml)分别刺激心肌细胞24h。(3)将细胞分为五组,正常对照组、BLP(1μg/ml)组、IL-10(20ng/ml)组、IL-10(20ng/ml)+BLP(1μg/ml)组及BLP(1μg/ml)+IL-10(20ng/ml)组,刺激细胞24h。提取细胞蛋白,Westernblot法检测心肌细胞procaspase-3、cleaved caspase-3、bcl-2及bax蛋白的表达水平。结果 (1)BLP刺激心肌细胞24h后,caspase-3被明显激活,表现为cleaved caspase-3的表达逐渐增加。(2)与正常对照组比较,不同浓度的BLP和TNF-α分别刺激心肌细胞24h后可明显促进cleaved caspase-3表达增加(P<0.01),且5μg/ml的BLP较1μg/ml的BLP刺激细胞后cleaved caspase-3的表达更高(P<0.05)。(3)与正常对照组相比,BLP组中心肌细胞cleaved caspase-3的表达明显升高(P<0.01),而bcl-2/bax的比率显著降低(P<0.01)。与BLP组相比,IL-10+BLP组和BLP+IL-10组中,心肌细胞cleaved caspase-3水平显著降低(P<0.01),而bcl-2/bax比率明显升高(P<0.05),但这两组间无统计学差异。结论 IL-10对细菌脂蛋白诱导的乳大鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用。     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与p53和Bcl-2基因表达的关系

目的 探讨脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及其与Bcl-2和p53基因mRNA表达的关系.方法 取体重190～220 g的成年雄性SD大鼠42只,随机分为三组,脓毒症组30只,正常对照组6只,假手术组6只;脓毒症组以盲肠结扎穿刺法(CLP)复制脓毒症大鼠模型,于术后3 h、9 h、12h、24 h各处死6只大鼠,假手术组麻醉满意后打开腹腔,正常对照组仅行麻醉术,均取1.0 mm3大小的心肌组织,另外余下的6只脓毒症鼠术后待其自然死亡不取心肌.采用电镜和TUNEL法检测大鼠心肌细胞的凋亡,用RT-PCR方法检测大鼠心肌细胞Bcl-2和p53基因mRNA的表达.结果 电镜下大鼠凋亡的心肌细胞胞膜皱缩,核固缩、边集、碎裂,胞膜突起、凋亡小体形成,TUNEL法检测各时间点的脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡率均较正常对照组和假手术对照组明显升高(P＜0.05),术后12h达到峰值;p53 mRNA表达明显升高(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈正相关性(r=0.976,P＜0.05);Bcl-2 mRNA表达明显降低(P＜0.05),其表达量与心肌细胞凋亡指数呈负相关性(r=-0.833,P＜0.05).结论 脓毒症大鼠心肌细胞的凋亡明显增高,p53和Bcl-2 mRNA的表达异常是其可能机制之一.     

脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子和肿瘤坏死因子-α表达的相关性及肝素对其水平的影响

目的:观察脓毒症大鼠血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其相关性;并观察小剂量肝素对两者的影响。方法:雌性Wistar大鼠49只,随机分为假手术组(7只)、脓毒症组(21只)、肝素干预组(21只),以CLP法复制大鼠脓毒症模型,于不同时间点测定大鼠血清MIF及TNF-α水平。结果:脓毒症组及肝素干预组大鼠血清MIF和TNF-α水平显著高于假手术组(均P<0.05),肝素干预组各时间点大鼠血清MIF及12、24h时间点TNF-α水平显著低于相应脓毒症组(均P<0.05),两组血清MIF与TNF-α水平变化呈正相关(脓毒症组r=0.859,肝素干预组r=0.711)。结论:脓毒症大鼠血清MIF及TNF-α水平均显著升高,早期应用小剂量肝素可减轻炎症反应,两种炎性因子的变化呈正相关。     

miR-499-5p上调对动脉粥样硬化大鼠心肌细胞凋亡的影响及作用机制

目的研究微小核糖核酸(micoroRNA,miR)-499-5p上调对动脉粥样硬化大鼠心肌细胞凋亡影响及作用机制。方法选取30只健康Wistar大鼠,经腹腔注射维生素D3和高脂饲料喂养方法建立动脉粥样硬化模型,分为模型组、竞争性短核糖核苷酸阴性对照序列(scramble-NC)组和miR-499-5p上调组各10只,另选10只健康Wistar大鼠为正常组。构建miR-499-5p表达载体,检测血清氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、髓过氧化物酶(MPO)]、炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10]水平。HE染色观察心肌细胞凋亡,Western blot法检测心肌细胞凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-xl(Bcl-xl)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达。结果模型组、scramble-NC组、miR-499-5p上调组较正常组血清CK、MDA、MPO、IL-1β、TNF-α水平和心肌细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,SOD、IL-10水平和Bcl-xl蛋白表达降低(P均<0.05);miR-499-5p上调组较模型组及scramble-NC组血清CK、MDA、MPO、IL-1β、TNF-α水平和心肌细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,SOD、IL-10水平和Bcl-xl蛋白表达升高(P均<0.05)。结论miR-499-5p上调可逆转动脉粥样硬化所致氧化应激、血管炎症反应,抑制大鼠动脉粥样硬化发展,可能通过调控Bax、Bcl-xl蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡。     

The effect of Ulinastatin on myocardial cell apoptosis and Caspase-3 channel北大核心CSCD

Objective To investigate the effect of ulinastatin on myocardial injury in rats with sepsis. Methods Thirty male SD rats were randomly (random number) divided into 3 groups: sham operation group (Sham group, n=\0), sepsis group (sepsis group, n=10) and ulinastatin group (UTI group, n=10). The sepsis model of the rats was subjected to cecal ligation and puncture (CLP). Rats of UTI group were given 200 000 U/kg ulinastatin at 6 hour after modeling, and dosing was repeated every 12 h. Blood samples were collected from inferior vena cava at 6, 12, 24, 36 h after modeling for determination of cardiac troponin-I (cTnl) and the inflammatory factor by ELISA, then the rats were sacrificed and hearts were removed for myocardial tissue stained with hematoxylin eosin (HE) staining, the expression of Bax/Bcl-2 protein level and myocardial cell apoptosis were detected by TUNEL. The level of caspase-3 protein in myocardial tissue was detected by Western-blot. Results The level of cTnl (ng/mL ) in serum in UTI group at 6, 12, 24 and 36 h after modeling were significantly lower compared with sepsis group(P<0.05). The protein expression levels of TNF-a and IL-6 (ng/mL) in group UTI were higher than those in Sham group, but was significantly lower than those in Sepsis group (PO.05). HE staining showed that inflammatory cell infiltration present in myocardial cells, edema and vacuole formation were observed in sepsis group, while those were significantly attenuated in UTI group compared with sepsis group. UTI increased the level of myocardial Bcl-2 protein in the rats (P<0.05), and reduced the level of myocardial Bax protein (P<0.05). TUNEL and HE staining showed apoptosis cells in UTI group was significantly reduced compared with sepsis group [(32.24.8)% vs. (58.45.6)%, P<0.05]; Western-blot method showed the level of Caspase-3 protein in UTI group was higher than that in group sham (0.320.048) vs. (0.12.03), P<0.05], but significantly lower than that of Sepsis group [(0.320.048) vs. (0.550.052), PO.05]. Conclusions Ulinastatin can reduce proinflammatory mediators release in the blood of sepsis rats, and inhibit the apoptosis of myocardial cells protecting myocardial cells through the regulation of the Caspase-3 pathway during sepsis. © 2018 Chinese Medical Association. All Rights Reserved.     

影响脓毒症受损肠黏膜修复的机制

目的 探讨影响脓毒症肠黏膜损害后修复的因素。方法 采用肓肠结扎穿孔(CLP)所致脓毒症模型,分别以CLP后6,24,48 h不同时间段观测肠黏膜损伤程度和修复过程,前者包括形态学观察及细胞凋亡的测定,后者包括肠黏膜修复的杯状细胞变化、黏膜肠三叶因子3(TFF3)、转化生长因子β1(TGF-β1)以及TNF-α、IL-1含量。结果 形态学观察显示肠黏膜呈持续损害状态,6h的损害积分明显小于24h,48 h组(P＜0.05),后两组之间差异无统计学意义(P＞0.05);磷酸化caspase-3蛋白在3组均高于sham组4倍以上;黏膜IL-1,TNF-α含量明显高于sham组3～4倍,其中24h及48 h组明显高于6h组。肠黏膜的修复过程不明显,损伤黏膜未见到明显的杯状细胞积聚;TFF3在6h组轻度增高,24h及48 h组表达下降;杯状细胞数量在CLP的3个组明显减少;TGF-β1在6h组增高,其他两组均接近于sham组。结论 严重脓毒症肠黏膜持续的高炎症状态、杯状细胞功能以及黏膜重建能力下降,影响了受损肠屏障的修复。     

急性颅脑损伤大鼠心肌ATP酶活性和血浆TNF-α含量的变化

目的 观察大鼠急性颅脑损伤( ACI)后心肌ATP酶活性及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化,探讨ACI后心肌损伤发生机制.方法 健康雄性SD大鼠64只随机(随机数字法)分为假手术对照组和模型组,每组分为2,6,24,72 h4个观察时相,每个时相8只大鼠.采用硬膜外自由落体打击法建立大鼠急性颅脑损伤模型,采用ELISA法测定血浆肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)和TNF-α含量及采用比色法测定心肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+ -ATP酶活性,并观察心肌HE染色的病理形态学改变.结果 大鼠急性颅脑损伤后血浆cTnⅠ及TNF-α含量均升高(P＜0.05),心肌Na+ -K+ -ATP酶、Ca2+ -ATP酶活性均降低(P＜0.05);心肌Na+ -K+ -ATP酶、Ca2+ -ATP酶活性与血浆cTnⅠ含量均呈负相关(r=0.357,r=0.557,P＜0.05),血浆TNF-α含量与cTnⅠ含量呈正相关(r =0.920,P＜0.05),HE染色可见心肌空泡变性、坏死伴有炎性细胞浸润等.结论 急性颅脑损伤可引起明显的心肌损伤,心肌ATP酶和TNF-α可能参与了急性颅脑损伤后的心肌损伤.     

天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3抑制剂对腹腔感染脓毒症急性肾损伤小鼠血清炎症细胞因子的影响

目的 观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)抑制剂Ac-DEVD-CHO对腹腔感染脓毒症急性肾损伤(AKI)小鼠血清炎症细胞因子的影响. 方法 将102只C57BL/6小鼠按随机数字表法均分成假手术组、模型组和caspase-3抑制剂组(CI组)3组.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症AKI小鼠模型;CI组在CLP术前给予Ac-DEVD-CHO 4 μg/g腹部皮下注射进行干预.各组均于术后6、12、24 h检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10)浓度;用流式细胞仪检测肾组织细胞凋亡率;用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测肾组织caspase-3 mRNA表达;并观察小鼠4 d和7 d的存活率. 结果 与假手术组比较,模型组各时间点血清BUN、TNF-α、IL-6、IL-10及肾组织细胞凋亡率、caspase-3 mRNA表达均显著升高,术后6 h Cr显著升高,4 d、7 d存活率显著下降.与模型组比较,CI组各时间点BUN显著下降;术后6 h Cr显著下降,12 h和24 h恢复至假手术组水平;各时间点血清TNF-α、IL-6水平降低,IL-10水平升高[TNF-α(μg/L)6 h:436.2±64.2比653.6±8.9,12 h:233.4±85.4比579.7±137.1,24 h:151.0±90.3比551.0±119.8;IL-6(μg/L) 6 h:1 033.2±345.8比1 595.3±159.4,12 h:366.3±68.3比1 330.7±249.8,24 h:241.2±208.4比815.3±572.7;IL-10(μg/L)6 h:33.6±10.4比26.6±4.5,12 h:37.2±5.0比24.5±4.3,24 h:38.3±5.5比18.2±1.6,均P<0.05];肾组织细胞凋亡率及caspase-3 mRNA表达显著下降[凋亡率6 h:(13.9±3.2)%比(18.3±1.4)%,12 h:(10.5±3.6)%比(15.9±3.5)%,24 h:(8.4±1.8)%比(12.5±2.1)%;caspase-3 mRNA 6 h:1.95±0.16比3.84±0.35,12 h:1.89±0.19比3.97±0.73,24 h:2.01±0.20比4.97±0.24,均P<0.05],并提高了小鼠4 d存活率(80%比20%),7 d存活率无变化(20%比20%). 结论 caspase-3抑制剂对腹腔感染脓毒症AKI小鼠血清促炎/抗炎细胞因子水平的影响可能与降低肾组织细胞凋亡有关.     

肠淋巴途径在失血-脂多糖二次打击大鼠心肌损伤中的作用

目的 探讨肠系膜淋巴管结扎干预失血-脂多糖(LPS)致大鼠心肌损伤的作用机制.方法 将雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、未结扎组、结扎组;以失血-LPS复制二次打击动物模型,结扎组于失血后行肠系膜淋巴管结扎术以阻断肠淋巴液回流.创伤后24 h处死各组大鼠制备心肌组织匀浆,检测髓过氧化物酶(MPO)、ATP酶活性以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量;制备心肌病理切片,用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率,免疫组化法检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 未结扎组大鼠心肌MPO[(0.23±0.08)U/g]、TNF-α[(9.99士2.74)pg/g]、IL-6((31.57士12.71)pg/g;～均显著高于假手术组[MPO:(0.12士0.03)U/g、TNF-α:(4.17±1.35)μ/g、IL-6:(17.86±5.17)μg/g,均P＜0.01],ATP酶活性显著低于假手术组;结扎组大鼠心肌MPO[(0.13±0.03)U/g]、TNF-α[(5.57±1.65)μg/g]、IL-6[(23.24±5.95)μg/g]均显著低于未结扎组(P＜0.05或P＜0.01),ATP酶活性显著高于未结扎组.未结扎组心肌细胞凋亡率[(22.7±6.9)%)、心肌细胞bax蛋白表达(104.5±11.4)显著高于假手术组[凋亡率:(3.8±1.2)%,bax蛋白:142.1±10.9]和结扎组[调亡率:(8.4±2.8)%,bax蛋白;128.4±9.6],bcl-2蛋白表达(196.4±19.3)显著低于假手术组(132.2±12.3)和结扎组(165.1±11.6,均P＜0.01).结论 肠系膜淋巴管结扎通过降低炎症介质TNF-α、IL-6水平,提高bcl-2蛋白表达和心肌细胞膜ATP酶活性,从而干预失血-LPS致大鼠心肌损伤.     

Effect of metoprolol on myocardial apoptosis after coronary microembolization in rats

BACKGROUND:

Coronary microembolization (CME) is a serious complication following percutaneous coronary intervention (PCI) in patients with acute coronary syndromes. The use of metoprolol before PCI can significantly protect ischemic myocardium from myocardial damage, but the function of metoprolol in the treatment of CME is not entirely clear. This study was to explore the effect and significance of metoprolol on myocardial apoptosis and caspase-3 activation after CME in rats.

METHODS:

Thirty rats were randomly divided into three groups including sham-operation (control group), CME plus saline (CME group), CME plus metoprolol (metoprolol group), 10 rats for each group. The CME group was induced by injecting 3 000 polyethylene microspheres (42 μm) into the left ventricle during a 10-second occlusion of the ascending aorta; the control group was injected with physiological saline instead of microembolization ball; the metoprolol or saline group was given three intravenous bolus injections before CME. Echocardiography, TUNEL staining, and Western blotting were used to evaluate cardiac function, proportion of apoptotic cells and activation of caspase-3 respectively at 6 hours after operation.

RESULTS:

Echocardiographic parameters displayed that the metoprolol group improved cardiac function significantly compared with the CME group (P<0.05). The myocardial apoptotic rate of the CME group as well as the contents of activated caspase-3 increased significantly (P<0.05), both of which were ameliorated significantly by metoprolol treatment (P<0.05).

CONCLUSIONS:

This study demonstrates that metoprolol can protect the myocardium during CME in rats by inhibiting apoptosis and improving cardiac function. These results suggest that the inhibition of apoptosis can be a potential therapeutic strategy for the treatment of CME.KEY WORDS: Coronary microembolization, Apoptosis, Caspase-3, Metoprolol     

褪黑素、维生素E对阿霉素所致大鼠心肌损伤的影响

目的研究褪黑素(MLT)、维生素(Vit)E对阿霉素(ADM)导致大鼠心肌损伤的影响。方法采用成年SD大鼠40只,随机分为空白对照组、ADM组、MLT+ADM组、VitE+ADM组、MLT+VitE+ADM组,每组各8只。实验30 d后Masson氏三色染色法进行左室胶原特异染色及半定量分析,计算胶原容积分数(CVF),并作HE染色,光镜下病理形态学观察,测定心肌超氧化物酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,测定Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果与正常对照组大鼠比较,阿霉素组大鼠心肌MDA含量显著升高,而SOD活性显著降低,心肌细胞Bax/Bcl-2基因的蛋白阳性表达增高,心肌损伤。给予MLT、VitE治疗可明显降低心肌组织中MDA含量,并显著增强SOD活性,抑制心肌细胞Bcl-2/Bax基因的蛋白阳性表达心肌损伤减轻。2种抗氧化剂相比,MLT在大鼠心肌组织的抗氧化能力强于VitE,两者联用则抗氧化能力强于两者单独应用。结论MLT和VitE均可通过增强阿霉素诱导的心肌损伤大鼠的抗氧化能力和抑制氧化应激反应从而对心肌具有一定的保护作用,并且MLT的抗氧化能力强于VitE,联用MLT和VitE则抗氧化能力表现更明显。