乙型肝炎病毒X蛋白对血管内皮生长因子的调节通路研究

为研究NF-κB信号转导通路在乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）调节血管内皮生长因子（VEGF）表达中的作用。通过建立稳定转染HBx基因的L02细胞系（L02-HBx）,用不同浓度的NF—κB信号转导通路阻断剂吡咯二硫氢基甲醋酯（PDTC）阻断NF-κB信号转导通路,荧光双标激光扫描共聚焦显微镜观察转染前后及PDTC加入前后NF—κB信号转导通路的激活及失活情况,同时用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测转染前后及PDTC加入前后VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化。发现以L02细胞为参照,转染HBx基因后的L02-HBx细胞NF-κB信号转导通路被激活,     

解毒化瘀药对白血病K562/A02耐药细胞mdr1耐药基因、核因子κB信号影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞mdr1耐药基因、核因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号基因表达的影响。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞mdr1基因的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果:解毒化瘀药含药血清能够降低K562/A02耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα表达,降低mdr1耐药基因的表达。结论:解毒化瘀药对K562/A02细胞的耐药逆转作用可能是通过阻断NF-κB信号通路,影响mdr1耐药基因的表达起作用的。     

白细胞介素-33上调A549细胞中黏蛋白基因MUC5AC和MUC5B的表达

目的:探讨白细胞介素-33(IL-33)对A549细胞中黏蛋白基因表达的影响及其作用机制。方法:体外培养人肺腺癌细胞A549,给予IL-33刺激,通过荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测黏蛋白家族基因MUC1,MUC5AC,MUC5B和NF-κB下游基因的mRNA水平,Western Blot检测IκBα的磷酸化水平。随后在IL-33刺激的A549细胞中加入NF-κB抑制剂PDTC,将A549细胞分为对照组,IL-33刺激组,PDTC处理组以及IL-33和PDTC共同处理组,RT-PCR检测黏蛋白家族基因MUC5AC和MUC5B的mRNA水平。结果:IL-33(100ng/ml)处理24h后,A549细胞中MUC5AC和MUC5B的mRNA水平高于对照组(P<0.05),同时NF-κB下游基因(RELA,RELB,NFκB2)的表达也显著高于对照组(P<0.01)。IL33处理A549细胞5min后,IκBα的磷酸化水平显著高于对照组。随后加入NF-κB通路抑制剂PDTC可以有效抑制IL33对MUC5AC基因的激活(P<0.05),而PDTC对MUC5B基因的激活没有影响。结论:IL-33可以通过激活NF-κB信号通路来上调A549细胞中MUC5AC基因的表达,而IL-33上调MUC5B的表达则可能是通过其他信号通路。     

初步探讨乙型肝炎病毒X蛋白激活PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 利用稳定表达HBx基因的肝癌细胞模型HepG2-HBX、Huh-7-HBX,运用阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,采用Western blot方法分析HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞中p-Akt蛋白的表达水平的情况;采用CCK-8增殖实验和划痕愈合实验观测HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞的增殖和迁移能力.结果 与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞中的p-Akt蛋白的表达增多(P<0.05),运用阻断剂LY294002阻断PI3K信号通路后,稳定转染HBx基因的肝癌细胞内的p-Akt蛋白表达降低(P<0.05).CCK-8增殖实验和划痕愈合实验结果均显示,与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞的增殖能力和迁移能力增加(P<0.05).经阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,稳定转染HBX的肝癌细胞的增殖和迁移能力减弱(P<0.05).结论 HBx可通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移.     

TWEAK通过NF-κB途径促进大鼠成纤维细胞表达基质金属蛋白酶9

目的 研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)影响大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的作用机制.方法 采用胰酶消化法培养新生Wistar大鼠CFs,加入重组人TWEAK(rhTWEAK)和NF-κB抑制剂PDTC干预,qRT-PCR检测核转录因子NF-κB和金属蛋白酶9(MMP9)mRNA,Western blot检测NF-κB和MMP9蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖.结果 rhTWEAK作用后NF-κB和MMP9 mRNA表达上调,同时蛋白表达明显增加,PDTC可抑制MMP9蛋白表达和细胞增殖.结论 TWEAK可通过NF-κB途径促进大鼠心肌成纤维细胞表达MMP9.     

NF-κB信号通路对大鼠深低温缺血再灌注后肺组织水通道蛋白5表达的影响

目的:探讨大鼠深低温缺血再灌注后肺组织水通道蛋白5(AQP5)的变化及核因子kappa B(NF-κB)信号通路对大鼠肺组织AQP5表达的影响。方法:30只Wistar大鼠随机分为假手术组(sham组)、深低温缺血再灌注损伤组(I/R组)、PDTC干预组(I/R+PDTC组)。I/R组大鼠体表降温至深低温后阻断左下肺门30min后开放、复温;sham组只开胸但不降温阻断左下肺门;PDTC组于实验前2d腹腔注射PDTC,其余操作同I/R组;各组于再灌注复温后1h或相应时间段取肺组织行病理学观察、测肺湿/干重(W/D)比值,实时PCR及Western-blot检测肺组织中AQP5及NF-κB p65的表达。结果:I/R组与Sham组比较肺组织NF-κB p65表达增多(P<0.01),AQP5表达减少(P<0.01)、W/D比值增高(P<0.01),肺组织形态及结构明显受损;PDTC干预组与I/R组比较肺组织NF-κB p65表达减少(P<0.01),AQP5表达增加(P<0.01)、W/D比值减低(P<0.01),肺组织病理形态学改变轻于I/R组,与Sham组比较NF-κB p65表达增多(P<0.01),AQP5表达减少,W/D比值增高(P<0.01)。结论:NF-κB p65表达增加和AQP-5表达下降可能与深低温缺血再灌注造成的急性肺损伤有关,NF-κB信号通路可能负向调控AQP-5的表达。     

NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响

目的研究NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响。方法去脂的小牛血清白蛋白(BSA)20mg/ml分别加入到体外培养的肾小管上皮细胞和加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内,EMSA、RT-PCR检测不同时限NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达情况。结果去脂的小牛血清白蛋白可刺激肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加,骨桥蛋白mRNA表达上调,而提前加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达明显下降。结论尿白蛋白诱导小管上皮细胞损伤的机制与诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA增加有关,而且骨桥蛋白转录由NF-κB调控。     

淋巴毒素β受体活化对膀胱癌细胞NF-κB信号通路及细胞增殖的影响

目的 研究淋巴毒素β受体(LTβR)的活化对膀胱癌细胞株5637核转录因子-κB(NF-κB)信号通路及细胞增殖的影响。 方法 以膀胱癌细胞株5637为研究对象,以配体淋巴毒素α1β2(LTα1β2)诱导LTβR信号活化。qRT-PCR检测NF-κB信号通路RelA、RelB mRNA,细胞因子LTα、LTβ、LIGHT、TNFα、IL-6、IL-1β mRNA和增殖相关基因细胞周期素D1(CyclinD1)、生存素(Survivin) mRNA的表达水平;WB法检测NF-κB经典信号通路活化状态;CCK-8法检测细胞增殖水平。 结果 LTβR活化后,RelA mRNA表达上调2.5倍(P=0.003),TNFα、IL-1β、CyclinD1、Survivin mRNA出现不同程度的上调(均P<0.05),随着LTβR表达下调,以上基因mRNA表达也下降(均P<0.05);WB结果显示活化标志蛋白p-p65表达出现升高趋势(P>0.05);与对照组相比,细胞增殖活性的差异未见统计学意义(P>0.05)。 结论 活化LTβR可促进NF-κB经典信号通路主要成员RelA的表达和活化,并有可能通过上调促炎细胞因子TNFα、IL-1β的表达参与膀胱癌炎性微环境的形成;有利促增殖相关基因CyclinD1、Survivin的表达,但在细胞增殖水平上并未见明显效应。      

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对癫痫大鼠海马NF-κB及相关炎症因子表达的影响

目的 探讨癫痫大鼠海马组织核转录因子κB(NF-κB)随给药时间的变化规律及NF-κB信号传导通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)和白细胞介素1β(IL-1β)的影响.方法 应用Western blotting检测戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马核蛋白中NF-κB p65在不同时点( 14d、21d、28d、35d)及PDTC干预癫痫大鼠后的表达;应用实时定量PCR及ELISA检测TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白水平在PDTC干预前后的变化.结果 NF-κB p65在癫痫大鼠海马核蛋白中含量于14d开始增高,持续至28d,35d后恢复至14d水平;PDTC干预后,NF-κB 165在干预组不同时间点的含量分别为[(0.54±0.07)、(0.65±0.08)、(0.78±0.10)、(0.78±0.10)],低于模型组[(1.20±0.11)、(1.42±0.14)、(1.88 ±-0.16)、(1.25 ±0.10)],差异具有统计学意义(P＜0.01).癫痫发作后海马组织内TNF-α、IL-1β mRNA分别为[(1.34±0.13,0.81±0.17)、(1.64 ±0.17,1.56 ±0.20)、(2.03±0.16,1.65±0.18)、(1.40±0.10,1.30±0.13)],明显高于对照组(P＜0.01),PDTC干预后显著降低TNF-α、IL-1β mRNA的表达[分别为(0.96±0.1,0.57±0.07)、(1.36±0.15,1.09±0.18)、(1.47±0.14,1.25±0.16)、(1.12±0.12,0.85 ±0.12)],与模型组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).ELISA检测海马组织内TNF-α、IL-1β蛋白含量与上述结果相似.结论 癫痫发作可诱发海马组织NF-κB的核转位及TNF-α、IL-1β的表达,PDTC能明显抑制癫痫诱发的NF-κB核转位及TNF-α、IL-1β的表达.     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)的调控作用。方法 利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCVC蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性。RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及P50、P65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响。结果 ①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高。②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCVC蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12．8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2．6倍。③RT-PCR显示IκB mRNA在QBC939HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCVC蛋白的QBC939HCV C 细胞株的胞核中的P50、P65蛋白高水平表达,而未转染HCVC蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的P50、P65蛋白。在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达。QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论 HCVC蛋白通过增加IκB降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用。     

人核因子κBp65核定位信号缺失突变对A549细胞恶性表型的影响

目的鉴定人核因子κB(NF-κB)p65核定位信号(NLS)缺失突变质粒即pc DNA3.1(+)-NF-κBp65ΔNLS(简称NF-κBp65ΔNLS)的表达功能,以及其对低表达NF-κBp65的A549细胞株即A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移和粘附能力的影响。方法培养人A549/NF-κBp65 shRNA细胞株,分为对照组、转染pc DNA3.1(+)组、转染NF-κBp65ΔNLS组。应用间接免疫荧光、实时荧光定量-PCR和Western blot技术检测NF-κBp65的细胞内定位及mRNA、蛋白表达水平的变化;应用MTT、Transwell和细胞粘附实验分析转染NF-κBp65ΔNLS质粒对A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移、粘附能力的影响。结果成功构建人NF-κBp65ΔNLS真核表达质粒。转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,NF-κBp65 mRNA表达水平明显上调(10.63±0.84比1.04±0.21和1.23±0.22,P0.01),NF-κBp65蛋白表达水平明显升高(1.07±0.06比0.53±0.02和0.59±0.04,P0.01),且NF-κBp65蛋白主要位于细胞浆内,在肿瘤坏死因子α刺激后NF-κBp65蛋白并未明显进入细胞核。与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力均有不同程度增强。结论通过基因突变技术构建无NLS的NF-κBp65真核表达质粒,可明显增强A549/NF-κBp65shRNA细胞株内NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平,并使NF-κBp65蛋白定位于细胞浆内;同时,细胞浆内过表达NF-κBp65ΔNLS蛋白可明显增强A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力,提示滞留于细胞浆内的NF-κBp65仍可通过影响NF-κB信号通路相关蛋白参与调节肺癌细胞的生物学行为。     

BAFF-R介导的NF-κB信号通路对多发性骨髓瘤细胞增殖及存活的作用研究

目的 研究B淋巴细胞刺激因子受体(BAFF-R)介导的NF-κB信号通路在多发性骨髓瘤(MM)中的作用,并进一步研究NF-кB信号通路对MM细胞存活的影响。 方法 应用Western blot法分析BAFF-R对NF-κB信号通路相关蛋白的激活情况;同时通过RT-PCR、ELISA、WST-1检测NF-κB信号通路抑制剂(BAY11-7082)干预前后BAFF-R mRNA和蛋白表达水平以及对MM细胞增殖的影响。 结果 BAFF-R阻断性抗体(0、1、5和15μg/ml)能够减少p52和p65蛋白的入核,增加IκB-α蛋白表达量,即BAFF-R能够激活NF-κB信号通路。BAY11-7082(1、2和4μmol/L)显著降低BAFF-R mRNA、蛋白表达水平,减少MM细胞增殖和存活。 结论 BAFF-R激活NF-κB信号通路促进多发性骨髓瘤细胞的增殖及存活,进而参与多发性骨髓瘤的发生、发展。     

PDTC对膀胱癌EJ细胞Livin、Survivin mRNA表达影响

目的:探讨体外细胞培养,观察核转录因子κB通路特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平的影响。方法:采用Real-time PCR法检测以不同浓度不同时间的PDTC处理的膀胱癌EJ细胞的凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平情况。结果:PDTC可降低膀胱癌EJ细胞凋亡抑制因子Livin、Survivin mRNA表达水平,呈剂量-时间依赖性,且呈负相关(P<0.05)。结论:PDTC可使膀胱癌EJ细胞凋亡抑制蛋白Livin、Survivin mRNA表达水平减少,其机制可能与NF-κB通路被抑制相关。     

同型半胱氨酸对单核细胞NF-κB活化及巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

为探讨同型半胱氨酸对体外培养的人单核细胞株THP1核因子κB(NFκB)、抑制因子(IκBα)活性的影响及其与巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)表达上调的关系,对THP1单核细胞分别用同型半胱氨酸和NFκB抑制剂PDTC预处理后,应用Northernblot和流式细胞术分别检测MIP1αmRNA和蛋白的表达,并应用Western蛋白印迹进一步检测核蛋白NFκB蛋白含量和胞质IκBα含量。与未加任何处理因素的对照组比较,MIP1αmRNA和蛋白在0.1mmol/L同型半胱氨酸处理后明显增加,分别为对照组的3.69倍和1.16倍(P<0.01),同时NFκBP65亚基核转位亦增加。而加入…     

乙型肝炎病毒x蛋白与肝癌生物学特性的研究

观察乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)对肝癌多药耐药基因(MDR1，MRP1)和促血管生长因子(VEGF)的作用，探讨HBx影响肝癌生物学特性的分子机制。利用瞬时转染HBx基因的方法建立细胞模型，分别使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot技术检测转染前后HepG2细胞的多药耐药相关基因和VEGF的表达情况；使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测阿霉素诱导后两种细胞的存活率和凋亡率，了解HBx转染后细胞耐药性的变化。     

解毒化瘀药调控白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin通路研究

目的探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin信号基因表达的影响,逆转耐药的机制。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/adr细胞survivin的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/adr耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα信号,降低survivin基因的表达。结论解毒化瘀药能够降低HL60/adr细胞NF-κB信号通路,影响NF-κB-survivin途径,逆转耐药。     

乳酸调控大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的NF-κB信号通路

目的探讨内毒素(LPS)刺激大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)后,乳酸(LA)调控NF-κB信号通路中磷酸化IκBα和NF-κB p65蛋白表达情况,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)mRNA表达情况,阐明乳酸发挥作用的最佳时间及其调控NF-κB信号通路的部位。方法提取RIMMVECs总蛋白和总RNA,用Western blotting检测NF-κB p65、IκBα及p-IκBα蛋白表达水平,用real-time PCR对TNF-α和IL-6 mRNA进行定量检测。结果乳酸能降低LPS诱导RIMMVECs分泌的TNF-α和IL-6 mRNA表达水平,并分别于24 h和3 h下调效果最明显;乳酸能抑制IκBα磷酸化及NF-κB转录活性,并于4~8 h达到最佳效果;乳酸发挥作用部位是抑制信号通路中IκBα磷酸化。结论乳酸通过抑制IκBα磷酸化而阻断NF-κB的激活,抑制下游炎性因子表达,进而发挥出很好的预防炎症效果。     

复方贞术调脂方对游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞的作用

目的 探讨复方贞术调脂方(FTZ)对游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞NF-κB-IRS1-GLUT4通路的影响,阐明FTZ缓解胰岛素抵抗的作用机制.方法 采用FFA诱导HepG2细胞使其产生胰岛素抵抗,3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,酶联免疫法检测HepG2细胞培养液上清液中TNF-α、IL-6的含量,Western blot检测HepG2细胞中NF-κB、IRS1、GLUT4蛋白表达,采用PDTC阻断NF-κB蛋白,测定其下游靶点IRS1的蛋白表达.结果 FTZ可降低细胞上清液中葡萄糖、TNF-α、IL-6的含量,下调NF-κB的蛋白表达,上调IRS1和GLUT4的蛋白表达.阻断NF-κB之后,再加入FTZ,IRS1的蛋白表达量较未阻断时显著降低.结论 FTZ可改善FFA诱导的胰岛素抵抗,其作用机制可能是通过抑制NF-κB介导的IRS1-GLUT4通路来改善胰岛素抵抗.NF-κB是FTZ作用的关键靶点.     

吡咯二硫代氨基甲酸乙酯对戊四氮致痫大鼠海马组织TLR-4与NF-κB表达的影响

目的 观察和探讨NF-κB信号传导通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)干预后戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马Toll样受体4(TLR-4)表达和核转录因子κB(NF-κB转录)的变化,进一步研究TLR-4/NF-KB信号通路在癫痫发生发展过程中的作用机制.方法 SD大鼠45只,随机分为正常对照组(NS组)、癫痫模型组(PTZ组)和PDTC干预组(PDTC组),每组15只.PTZ组和PDTC组采用腹腔注射戊四氮制作大鼠慢性点燃模型,PDTC组在注射PTZ前60 min行腹腔注射PDTC,NS组注射等量的生理盐水,现察3组大鼠的行为学改变.28 d后断头迅速取脑,采用免疫组化方法检测海马组织CA1区NF-κB/p65表达的变化;同时用Western blotting检测海马组织TLR-4和NF-κ B/p65蛋白的变化.结果 与PTZ组相比,PDTC组癫痫发作级别明显减低,发作潜伏期延长.PTZ组大鼠NF-κB/p65阳性细胞数、NF-κB/p65蛋白表达水平均高于NS组和PDTC组,差异有显著性(P＜0.05),PTZ组大鼠NF-κB/p65阳性细胞数、NF-κB/p65蛋白表达水平均高于NS组,差异有显著性(P＜0.05).PTZ组大鼠TLR-4蛋白表达水平均高于NS组和PDTC组,差异有显著性(P＜0.05),PDTC组大鼠TLR-4蛋白表达水平均高于NS组,差异有显著性(P＜0.05).结论 NF-κB抑制剂PDTC对大鼠癫痫惊厥的干预作用可能与其抑制NF-κB/p65核转录,下调TLR-4表达有关.     

PF4通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9表达

目的观察血小板因子4(PF4)是否通过核因子κB(NF-κB)上调THP-1单核源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。方法佛玻酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。巨噬细胞分别在NF-κB抑制剂(PDTC)缺乏或存在情况下与溶媒或PF4(100μg/L)孵育一定时间,RT-PCR检测MMP-9 mRNA水平;同时,巨噬细胞与PF4(25~200μg/L)单独或结合Toll样受体4(TLR4)阻断剂(抗体HTA125,anti-TLR4)孵育,ELISA法检测NF-κB含量。结果 PF4较对照组上调巨噬细胞MMP-9 mRNA水平。而NF-κB抑制剂抑制PF4诱导的巨噬细胞MMP-9表达上调。PF4呈浓度依赖性增加巨噬细胞的NF-κB含量,最大效应浓度为100μg/L。TLR4阻断剂逆转PF4诱导的巨噬细胞NF-κB含量增加。结论 PF4可能通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9的表达。TLR4可能是PF4-NF-κB通路中NF-κB的上游信号分子。